中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
糖尿病大鼠骨骼肌细胞膜葡葡糖转运蛋白4含量在不同强度运动状态下的变化
背景:运动能影响骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4含量,但不同强度的运动对骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4含量产生怎样的影响还不被人们所知.目的:拟了解不同强度运动对大鼠骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4含量的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/10在辽宁师范大学中心实验室完成.材料:健康SD大鼠60只,体质量(200±16)g,雌雄不拘.方法:制备糖尿病大鼠模型.将SD大鼠分为6组:正常对照组、糖尿病对照组和糖尿病4种不同强度运动组(包括15m/min组、20m/min组、25m/min组和30m/min组),每组10只.运动组按上述强度训练50min/d, 6d/周,共6周.主要观察指标:用Western blot免疫印迹法检测骨骼肌细胞膜表面葡萄糖转运蛋白4表达:并观察不同强度运动对各组大鼠体质量、血糖和胰岛素水平的影响.结果:①与糖尿病对照组相比,20m/min和25m/min组股四头肌葡萄糖转运蛋白4含量分别升高44.2%和48.0%(P＜0.01);15m/min和30m/min组股四头肌葡萄糖转运蛋白4含量分别升高17.3%和19.2%(P＜0.05),但各组仍没有恢复到正常对照组水平.②与糖尿病对照组相比,20m/min组大鼠体质量恢复良好(P＜0.05);不同强度运动组大鼠血糖均下降(P＜0.05或P＜0.01),以15m/min组和20m/min组下降显著;15m/min组、20m/min组和25m/min组大鼠胰岛素水平均显著升高(P＜0.01).结论:以20m/min和25m/min的强度运动对SD大鼠股四头肌葡萄糖转运蛋白4含量的升高可能具有佳的影响效果.
-
膝骨关节炎模型兔关节液中细胞因子白细胞介素1水平及复方归芪液的干预效应
目的:实验表明,白细胞介素1是关节软骨破坏中重要的细胞因子.实验拟进一步观察兔膝骨性关节炎模型关节液中白细胞介素水平的变化以及复方归芪注射液的干预作用.方法:实验于2007-04/09在大连市第二人民医院骨科实验室完成.①实验分组:健康清洁级新西兰大白兔25只,6个月龄,体质量2.14～3.20kg,随机抽签法分为正常组、模型组、生理盐水组、透明质酸组和中药治疗组.每组5只.②实验方法:采用兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成骨关节炎的病理模型,正常组、模型组正常饲养,其他3组均于术后第8天给药(右下肢关节腔注射),以后每周2次,共10次.生理盐水组:每次注射9kg/L生理盐水0.15mL;透明质酸组:生理盐水稀释成浓度2kg/L,每次注入0.15mL:中药治疗组:每次注入生理盐水稀释液1kg/L和复方归芪注射液0.15mL.③实验评估:于造模后取材,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验法分别测定各组兔膝关节液中白细胞介素水平.结果:纳入大白兔25只,均进入结果分析.正常组未检出白细胞介素1,模型组、透明质酸组、中药治疗组白细胞介素1均呈高表达,但模型组与正常组比较差异显著(P＜0.01).透明质酸组、中药治疗组与模型组比较,白细胞介素1水平均降低(P＜0.01),而透明质酸组的作用优于中药治疗组(P＜0.05).结论:白细胞介素1在骨性关节炎发病过程及复方归芪注射液治疗中起重要作用.
-
被动吸烟大鼠骨量与骨生物力学指标的相关性及淫羊藿黄酮的干预效应
目的:作者已通过实验证实,被动吸烟可以增加大鼠骨吸收,终导致骨质疏松.淫羊藿黄酮有促进骨形成防止骨丢失的作用.观察淫羊藿黄酮干预对被动吸烟大鼠骨密度与骨生物力学指标的影响,并分析骨密度占骨生物力学指标的相关性.方法:实验于2005-01/12在中南大学湘雅医学院附属湘雅医院动物实验室和中心实验室完成,对动物的处置方法符合动物伦理学要求.选择SD大鼠60只,按随机数字表法分成6组(n=10):即空白对照组、被动吸烟组、被动吸烟+钙组、淫羊藿黄酮75,150,300mg/(kg·d)组,后5组大鼠按密室熏烟法被动吸烟4个月,每天灌服钙剂及淫羊藿,给药4个月.干预完毕后测定股骨和腰椎骨密度、L4椎体力学性能指标、股骨结构力学性能指标及材料力学性能指标,并分析骨密度与骨生物力学指标的相关性.结果:60只大鼠全部进入结果分析.①与空白对照组比较,被动吸烟组大鼠的股骨和腰椎骨密度、L4椎体力学性能指标、股骨结构力学性能指标及材料力学性能指标均明显降低(P＜0.05);与被动吸烟组比较,被动吸烟+钙组、淫羊藿黄酮各剂量组上述指标均得到改善(P＜0.05).②股骨和腰椎骨密度分别与腰椎体力学性能指标中弹性模量、大载荷、大应力、变形位能、结构刚度,股骨结构力学性能指标中大载荷、破坏载荷、变形位能、结构刚度和股骨材料力学性能指标中弹性模量、大应力、大应变、破坏应力呈正相关(股骨骨密度:r=0.802～0.822,P＜0.05;腰椎骨密度:r=0.784～0.843, P＜0.05).结论:淫羊藿黄酮可改善和提高被动吸烟大鼠骨密度、椎骨力学性能、股骨结构力学性能和材料力学性能,且骨密度与骨生物力学指标之间存在明显的相关性.
-
隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1和结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响
背景:肠壁纤维化是克罗恩病的常见表现.转化生长因子β1是炎症性肠病中控制胶原合成和介导肠纤维化复杂调节机制中的重要生长因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β特异性下游效应分子.目的:实验拟观察隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/12在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室、临床免疫三级实验室完成.材料:健康雄性SD大鼠60只,48只用于制备大鼠克罗恩病模型;三硝基苯磺酸由Sigma公司提供.方法:60只大鼠随机数字表法分为5组,模型组:不作任何治疗,作与隔药灸组相同的固定.隔药灸组:取天枢(双)、气海穴,每次每穴灸2壮,每日隔药饼灸1次,连续10d.电针组:取天枢(双)、气海穴,采用LD202H型韩氏神经穴位刺激仪电针刺激,频率2/50Hz,20min/次,1次/d,连续10d.药物组:美沙拉嗪灌胃治疗,2次/d,连续10d.正常组:无任何干预措施,作与隔药灸组相同的固定.主要观察指标:苏木精-伊红染色后光镜下观察结肠病理组织学变化:免疫组织化学方法检测结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测结缔组织生长因子mRNA的表达.结果:纳入SD大鼠60只,每组各取1只用于模型鉴定.模型组4只大鼠死亡,7只进入结果分析;其他4组随机取8只进入结果分析.①苏木精-伊红染色正常组可见正常结肠壁组织,黏膜完好;模型组溃疡形成,黏膜下层可见大量纤维组织增生而明显增宽,肉芽组织增生.隔药灸组、电针组和药物组病理组织学均较模型组改善.②与正常组比较,模型组大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达以及结肠结缔组织生长因子mRNA表达均升高(P＜0.01).经治疗后,隔药灸组、电针组大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达均降低(P＜0.05或P＜0.01),但结缔组织生长因子mRNA变化不显著(P均＞0.05);隔药灸组对结缔组织生长因子蛋白的下调作用较电针组更显著(P＜0.01);药物组Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1蛋白表达也显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但结缔组织生长因子蛋白及mRNA变化不显著(P均＞0.05).结论:隔药灸和电针治疗能够下调克罗恩病大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达,隔药灸对结缔组织生长因子蛋白的调节作用优于电针.
-
生长因子抑制剂贝伐单抗玻璃体腔注射对眼组织结构的影响
目的:贝伐单抗是一种基因工程的单克隆抗体.通过抑制血管内皮生长因子阻止新生血管的产生.玻璃体腔注射生长因子抑制剂是目前治疗新生血管性眼部疾病的新手段.实验拟了解不同剂量贝伐单抗玻璃体腔注射对眼内组织结构和功能的近期影响,探讨安全剂量.方法:实验于2006-11/2007-05在山西医科大学完成.①实验材料:健康成年有色家兔32只,体质量2.0～3.0kg,雌雄不拘.②分组处理:随机分为实验组24只和对照组8只.实验组动物右眼玻璃体腔分别注射不同剂量贝伐单抗(21,2.1,0.21g/L)0.2mL,每种剂量注射8只;对照组每只动物右眼玻璃体腔分别注射等量的平衡盐溶液.③评估:所有动物在注药前和注药后的第3,6,9,12,14天行眼压计、裂隙灯、眼底镜检查并拍摄眼底相片;注药前和注药后第7,14天行视网膜电图检查;第7,14天取眼球,在光学显微镜和透射电镜下观察视网膜组织结构变化.结果:32只家兔进入结果分析.①眼部组织结构变化:注药后21g/L组1只动物出现玻璃体混浊.②眼压变化:注药后第3天和第6天与注药前及注药后9,12,14d相比,眼压差别有显著性(P＜0.01).③视网膜电图变化:有一定可逆性,21g/L组的b波下降幅度较其他组更明显.④光镜和电镜检测视网膜组织结构:具有一致性,对照组及2.1g/L组、0.21g/L组未见异常;21g/L组动物出现视网膜结构改变.结论:实验结果提示,玻璃体腔注射2.1g/L以下(含2.1g/L)贝伐单抗,在短期内对动物视网膜组织结构和神经传导功能无影响.
-
脑源性神经营养因子对缺氧神经元保护与细胞外信号调节激酶的关系
背景:有研究者发现激活细胞外信号调节激酶的上游激酶-细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase, ERK)途径并没有促神经元存活的作用,还有一些研究者发现激活该信号通路不仅不能对细胞起到保护作用,反而可促进细胞死亡.目的:实验拟观察体外培养神经元急性缺氧损伤中ERK1/2通路在脑源性神经营养因子抗缺氧损伤中的作用.设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2005-03/2006-04在华西医院移植工程及移植免疫实验室完成.材料:孕17～19d的SD雌鼠,清洁级,体质量350～400g; ERK1/2特异性阻滞剂U0126购自Calbiochem公司;脑源性神经营养因子购自R&D公司.方法:体外培养孕17～19d的胚鼠大脑皮质神经元,7d后作缺氧培养,并随机分为5组,缺氧组:单纯神经元缺氧培养;脑源性神经营养因子组:缺氧培养前30min加入脑源性神经营养因子50μg/L; U0126组:缺氧培养前1h加入10μmol/L的U0126; U0126+脑源性神经营养因子组:缺氧培养前1h加入10μmol/L的U0126,30min后加入50μg/L脑源性神经营养因子;基线对照组:不做缺氧培养也不加入任何物质.主要观察指标:采用四甲基偶氮唑盐法检测0～8h内各组之间细胞存活率的差别;蛋白免疫印迹检测.0～6h内各组神经元ERK1/2和磷酸化ERK1/2、 cAMP反应元件结合蛋白(cAMP responsive element-binding protein, CREB)和磷酸化CREB的表达变化.结果:①脑源性神经营养因子组神经元活性在缺氧后各时间点显著高于缺氧组(P＜0.01); U0126+脑源性神经营养因子组细胞活性在缺氧后各时间点显著低于脑源性神经营养因子组(P＜0.01).②外源性脑源性神经营养因子对总ERK和总CREB的表达无影响,但可显著增加磷酸化ERK和磷酸化CREB的表达;U0126对总ERK表达无影响,但可显著抑制脑源性神经营养因子作用后磷酸化ERK的上调,同时U0126也可明显抑制脑源性神经营养因子介导的磷酸化CREB的表达.结论:阻滞ERK1/2传递后脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用迅速降低,提示ERK1/2是体外培养神经元缺氧损伤中脑源性神经营养因子保护作用的重要途径.
-
pcDNA3.1-血管内皮生长因子165质粒局部注射对大鼠软组织缺损修复的影响
背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多.目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响.设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验.材料:健康SD大鼠30只.方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4 DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理.主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达.结果:30只均进入结果分析.①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功.②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05).③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低.对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟.结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合.
-
类风湿关节炎患者骨密度与生化指标的相关性
目的:类风湿关节炎患者容易发生骨密度降低,目前缺乏类风湿关节炎患者骨密度与生化指标相关关系的研究.试验拟验证类风湿关节炎患者骨密度与生化指标的相关性.方法:①试验对象:选择2004-04/2007-10在解放军南京军区南京总医院住院的类风湿关节炎患者26例,其诊断符合1987年美国风湿病学院关于类风湿关节炎分类标准,男4例,女22例,平均年龄(57±9)岁,患者对于诊治方案均知情同意,该方案经医院医学伦理委员会批准.全部患者无严重肾功能损害、甲状腺、甲状旁腺等疾病.②试验方法:应用双能骨密度仪检查患者腰椎骨密度,抽血查碱性磷酸酶、磷酸肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、谷酰转肚酶、乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、胆固醇、肌酐、尿素、氯、钾、钠、钙、总二氧化碳等生化指标.③试验评估:用直线相关分析腰椎骨密度与年龄、病程、体质量指数的关系,用多元线性回归分析腰椎骨密度与生化指标的相关关系.结果:纳入类风湿关节炎患者26例,均进入结果分析.①类风湿关节炎患者腰椎骨密度与年龄呈显著负相关(r=-0.546, P=0.004).②多元线性回归显示,碱性磷酸酶、磷酸肌酸激酶、钠对腰椎骨密度影响显著(F=9.860, P=0.001),前两者与骨密度呈负相关,后者与骨密度呈正相关.结论:类风湿关节炎患者腰椎骨密度与生化指标中碱性磷酸酶、磷酸肌酸激酶、钠的关系密切,并随年龄增长呈下降趋势.
-
构建大鼠肝纤维化模型并观察大豆磷脂的保护作用
目的:目前认为肝纤维化尚存在可逆性.实验以光镜和细胞图像胶原半定量手段进一步验证大豆磷脂干预复合病因诱导肝纤维化大鼠模型肝细胞的组织学变化特点.方法:实验于2004-10/2007-05在辽宁医学院科学实验中心完成.①实验材料及分组:健康雄性SD大鼠24只,体质量180～220g.随机分为3组,即对照组、模型组、大豆磷脂组,每组8只.②实验过程:模型组采用复合病因诱导大鼠肝纤维化(给预高脂低蛋白食物和饮乙醇,皮下注射四氯化碳),大豆磷脂组给予造模饮食水,同时给予大豆磷脂300mg/(kg·d)灌胃,正常对照组给予大鼠正常饮食水.42d后麻醉下断颈处死大鼠.③实验评估:验证模型是否成功;采用光镜观察肝组织病理学改变;并用细胞图像分析仪对肝纤维化进行半定量分析;检测各组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、单胺氧化酶活性.实验过程对动物的处置符合动物伦理学标准.结果:①造模结果:6周末验证大鼠肝纤维化模型造模成功.②光镜观察组织学变化:苏木精-伊红染色可见模型组正常肝小叶已经被破坏,坏死区中央或周围有炎性细胞浸润.肝窦多受压变窄或闭塞.门脉区有大量成纤维细胞、纤维细胞和增生的胶原纤维,纤维组织相互环绕形成大量假小叶.MASSON染色可见模型组肝组织形成了较宽的以胶原纤维为主要成分的纤维间隔(绿色),胶原纤维分隔、包绕肝小叶,多数形成假小叶.大豆磷脂组上述变化较轻.③细胞图像胶原半定量测定结果:模型组、大豆磷脂组肝组织胶原纤维面积密度显著高于正常对照组(P＜0.01),而大豆磷脂组的指标显著低于模型组(P＜0.01).④血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及单胺氧化酶活性:模型组和大豆磷脂组高于正常对照组(P＜0.01),但大豆磷脂组的指标低于模型组(P＜0.01).结论:大豆磷脂干预肝纤维化大鼠后肝模型血清酶活性比模型组明显下降,胶原积累程度半定量分析也验证了干预后胶原纤维密度低于模型组,说明干预修复了受损的肝细胞.
-
Fas-670位点单核苷酸多态性与胎膜早破的易感性
背景:研究表明,基因调控下胎膜细胞凋亡增加可导致胎膜早破,其根源也许是个体间某些基因的差异.因此,人群中不同的基因型有可能决定不同个体间Fas的表达与功能上的差异.目的:实验拟验证Fas基因-670位点多态性与胎膜早破遗传易感性的关系.设计、时间及地点:以病例-对照观察设计在2006-09/2007-09于温州医学院附属第三医院(瑞安市人民医院)妇产科分院实验室完成.参试者:本院收治的胎膜早破孕妇共65例,另择无胎膜早破孕妇120名作为正常对照组,两组孕妇均为单胎初产,排除急性风湿病、胶原疾病、肝病、其他感染及妊娠高血压综合征等并发症和合并症,胎膜早破诊断标准按丰有吉主编的7年制<妇产科学>中的相关标准.方法:采用聚合酶链反应-反向点杂交、DNA直接测序方法检测65例胎膜早破患者与120名正常对照的Fas基因-670多态性位点的基因型.主要观察指标:胎膜早破患者Fas基因-670多态性位点的GG、AG+AA基因型出现的频率,等位基因A、G出现的频率.结果:胎膜早破患者的G等位基因频率明显高于正常对照组(x2=4.633,P=0.031).胎膜早破患者的AG、AA基因型频率与正常对照组相比差异无显著性意义(x2值分别为0.934和1.258;P值分别为0.334和0.262),而胎膜早破患者的GG基因型频率明显高于正常对照组(x2=5.266,P=0.022).提示GG基因型者患胎膜早破的风险性明显高于AG、AA基因型者(OR=2.190,95%CI: 1.113～4.312).结论:Fas基因-670位点G等位基因及GG基因型可能是胎膜早破的易感因素.
-
构建高脂饮食肥胖大鼠模型体质量及代谢变化与天麻素的干预
背景:天麻素广泛应用于眩晕、头痛及高血压等的辅助治疗,其作为干预物质用于高脂肥胖大鼠的治疗有待评估.目的:构建不同浓度天麻素对高脂饮食性肥胖大鼠模型,观察其对体质量与血清代谢物水平的影响,分析其可能的作用机制.设计:随机对照动物实验.单位:兰州大学基础医学院生理与心理研究所.材料:实验于2007-06/2007-08在兰州大学基础医学院生理与心理研究所和甘肃省新药临床前研究重点实验室完成.选用44只生后1周雄性健康SD大鼠,体质量(99.57±2.13)g,由中科院上海斯莱克实验动物有限公司提供.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.基础饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司生产,高脂饲料由本实验室自行配制.每100克含基础饲料57.5 g、蛋黄粉11.79g、猪油10g、猪胆盐0.2g、酪蛋白7g、奶粉13g、食盐0.085g、酵母粉0.425g;其中含脂肪22.07g、蛋白质23.7g、碳水化合物39g、热量472.16千卡.纯度为98%的天麻素购自陕西旭煌植物科技开发公司.丙二醛和总抗氧化能力试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产.方法:构建天麻素干预高脂饮食性肥胖大鼠模型:①采用基础饲料适应喂养大鼠1周,随机数字表法将大鼠分为正常对照组(n=10)、高脂组(n=10)、高脂+天麻素低、中、高剂量组(每剂量组各8只).②正常对照组喂基础饲料,其它各组均喂高脂饲料.正常对照组和高脂组每天灌胃0.9%生理盐水0.3 mL,高脂+天麻素低、中、高组灌胃同等容量浓度分别为15,30,60mg/(kg·d)的天麻素溶液.③各组大鼠自由进食和饮水,共8周.主要观察指标:①每周末检测各组大鼠体质量.②每日上午定时记录大鼠摄入热量.③高脂喂养结束后,于大鼠股动脉取血测血糖值,同时检测血清丙二醛、总抗氧化能力、胰岛素、游离脂肪酸,血脂、谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平,并计算胰岛素敏感指数和抵抗指数.结果:大鼠44只均进入结果分析.①体质量:高脂喂养4～8周高脂组大鼠体质量明显高于正常对照组,差异有显著性意义(P＜0.001).天麻素各剂量组体质量均低于高脂组,差异有显著性意义(P＜0.05～0.01),高脂+天麻素低、中、高剂量组组间比较,差异无显著性意义(P＞0.05),提示天麻素抑制大鼠高脂饮食肥胖无剂量相关性.②摄入热量:高脂组大鼠高于正常对照组,差异有显著性意义(P＜0.01).高脂饮食4周后天麻素各剂量组均低于高脂组,差异有显著性意义(P＜0.05～0.01).③血清丙二醛、总抗氧化能力、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平:与正常对照组相比,高脂组的总抗氧化能力下降,丙二醛水平上升,谷丙转氨酶水平增加,差异均有显著性意义(P＜0.01).与高脂组相比,天麻素低剂量组的总抗氧化能力明显上升,丙二醛水平下降,差异均有显著性意义(P＜0.01).④胰岛素及血糖水平:与正常对照组比较,高脂组大鼠血糖浓度升高,胰岛素敏感指数下降,抵抗指数上升,差异有显著性意义(P＜0.05～0.01).与高脂组比较,天麻素低剂量组血糖浓度降低,胰岛素敏感指数升高,胰岛素抵抗指数降低,差异均有显著性意义(P＜0.05～0.01).⑤游离脂肪酸及血脂水平:与正常对照组比较,高脂组大鼠的游离脂肪酸、低密度脂蛋白胆固醇升高,高密度脂蛋白胆固醇降低,差异有显著性(P＜0.05～0.01).结论:天麻素可抑制高脂饮食性肥胖大鼠体质量增加,作用机理可能与其调节葡萄糖和游离脂肪酸代谢、改善胰岛素抵抗和提高抗氧化能力有关.
-
骨密度变化与2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病患者踝肱指数的关系
目的:研究表明,动脉硬化与骨质疏松存在着共同的病理生理机制.实验拟分析2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者踝肱指数与骨密度变化的特点.方法:①试验分组:回顾性分析2004-04/2007-04在解放军第二炮兵总医院住院的2型糖尿病患者503例,男272例,女231例;年龄25～86岁,平均(63±13)岁,病程1～600个月.均符合1997年美国糖尿病协会(ADA)的2型糖尿病诊断标准,排除卧床患者.踝肱指数＞1.4的患者.患者对治疗及试验均知情同意.所有患者以是否合并冠心病分为冠心病组和非冠心病组.②试验方法:患者入院后第1天晨起空腹行身高、体质量、血压测量,计算体质量指数,行糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、尿素氮、肌酐、尿酸、尿微量白蛋白、眼底检查,常规12导联心电图检查.③试验评估:采用ES-1000SPM多普勒血流探测仪及美国NORLAND公司生产的双能X射线骨密度仪对503例2型糖尿病患者进行踝肱指数、腰椎(L'2-4)、左侧股骨颈、大转子、华氏三角区骨密度测定.结果:纳入2型糖尿病患者503例,均进入结果分析.冠心病组231例,男106例,女125例;非冠心病组272例,男144例,女128例.两组相比.冠心病组患者年龄大,糖尿病病程长,体质量指数大,踝肱指数偏低,两组间差异显著(P＜0.05).男性经过年龄、糖尿病病程、体质量指数校正后两组间股骨颈部位骨密度差异有显著性意义(P＜0.05);女性经过年龄、糖尿病病程、体质暈指数校正后,各部位的骨密度两组间差异无显著性意义(P＜0.05).结论:①2型糖尿病合并冠心病患者较未患冠心病患者踝肱指数偏低.②男性2型糖尿病合并冠心病患者股骨颈部位骨密度偏低:女性2型糖尿病合并冠心病患者与非冠心病组比较各部位骨密度无差异.
-
重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制
背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚.目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α (Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制.设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成.材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建.方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞.主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上.②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945, P＜0.05).③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P＜0.05).结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系.②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期.
-
血清细胞因子与首发精神分裂症患者精神症状的相关性
目的:观察阿立哌唑治疗前后首发精神分裂症患者血清白细胞介素2、白细胞介素5和转化生长因子β的水平,探讨细胞因子与精神症状之间的相关性.方法:选择2006-03/10贵州省第二人民医院精神科门诊和住院精神分裂症患者35例,男19例,女16例;年龄18～35岁;病程4～12月;符合中国精神障碍分类与诊断标准第3版精神分裂症诊断标准,患者或监护人对治疗及实验知情同意.患者用阿立哌唑进行治疗8周.治疗前后采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素2、白细胞介素5、转化生长因子β水平,同期检测18名健康志愿者上述指标作为正常对照,精神分裂症患者与正常对照者在性别、年龄等差异均无显著性(P均＞0.05);精神症状采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估.结果:35例患者、18名健康者均进入结果分析.①患者阳性与阴性症状量表(PANSS)减分率≥75%(痊愈)21例,50%～74%(显著进步)10例,25%～49%(好转)4例.②精神分裂症患者治疗前后血清白细胞介素2水平均低于正常对照(P＜0.05);血清转化生长因子β均高于正常对照(P＜0.05).③患者白细胞介素2,5和转化生长因子β水平与精神症状无相关性(r=-0.149,0.074,0.55;P=0.349,0.674,0.75).3种细胞因子间亦均无相关性(P＞0.05).结论:首发精神分裂症患者存在白细胞介素2、白细胞介素5、转化生长因子β介导的免疫功能紊乱,细胞因子水平与精神症状严重程度无相关性.
-
氧化苦参碱对HaCaT细胞核转录因子κB表达及一氧化氮分泌的影响
目的:P物质与细胞因子之间存在互相调节的作用.实验拟验证氧化苦参碱、P物质对HaCaT细胞核转录因子κB蛋白和基因表达及一氧化氮分泌量的影响.方法:实验于2007-05/10在西安交通大学中心实验室完成.HaCat细胞株为ATCC公司产品;氧化苦参碱粉剂由中国药品检验所提供;P物质为Alexis公司产品.选择生长良好的HaCat细胞用于实验,分为空白对照组,小、中、大剂量氧化苦参碱组(分别加入10,50,100mg/L氧化苦参碱)和P物质组.氧化苦参碱各剂量药物预处理24h后加入10-5mol/L的P物质作用存量30min.采用western-blot和反转录-聚合酶链反应法分别检测HaCaT细胞核转录因子κ B蛋白和基因的表达情况;并检测一氧化氮的含量.结果:与空白对照组相比,P物质组细胞P65蛋白相对表达量、细胞核转录因子κ B的mRNA相对表达量明显增高(P＜0.05),与P物质组相比,氧化苦参碱组P65蛋白相对表达量、细胞核转录因子κ B的mRNA相对表达量明显降低(P＜0.01).P物质组一氧化氮分泌量增加,氧化苦参碱组一氧化氮分泌量减少,并呈剂量依赖关系.结论:氧化苦参碱可下调入角质细胞株HaCaT细胞核转录因子κ B的表达,并使一氧化氮的分泌量下降,且该效应呈剂量依赖关系.
-
CR钼靶X射线对应用抗骨增生胶囊治疗骨折模型大鼠骨痂密度的评价
目的:抗骨增生胶囊中含有多种补肾壮骨中药成分,在治疗骨折方面罕见报道.钼靶X射线检查是乳腺检查和疾病诊断的常用、有效方法之一.采用钼靶X射线测量大鼠骨折模型骨痂的密度值,以探讨抗骨增生胶囊对骨折愈合的促进作用.方法:实验于2005-07/2006-03在河北医科大学第二医院实验中心完成.①实验分组:清洁级Wistar大鼠60只,雌雄各半,体质量170～200g,随机数字表法分为对照组和实验组,每组30只.②实验方法:制作胫骨骨折模型,实验组给予抗骨增生胶囊,取胶囊倒出药粉称质量配成1mL悬浊液,14.00～15.75mg/只,使用鼠灌胃器,喂药1次/d:对照组喂服等量9g/L氯化钠注射液,1次/d.③实验评估:分别于术后3,10,17,24,33d分批过量麻醉处死,游标卡尺测量骨痂直径:CR钼靶X射线片通过图像分析软件计算出骨痂的密度值.结果:纳入大鼠60只,均进入结果分析.①骨痂密度:钼靶X射线照片骨纹清晰,骨与软组织对比明显,在骨折愈合过程中实验组与对照组相比骨痂区域的密度值差异有显著性意义(P＜0.05).②骨痂直径:3d时骨折端无明显骨痂形成.10,17,24,33d实验组开始形成大量骨痂,对照组有骨痂形成但数量少.两组比较差异均有显著性意义(P＜0.01).结论:钼靶X射线照片结合计算机图像分析是测量大鼠骨痂愈合程度的有效工具.
-
bulge区毛囊组织块培养结合酶消化法分离大鼠毛囊隆突部细胞的生物学特征
背景:目前毛囊隆突部细胞的分离培养方法多存在细胞分离纯度不高、活力差等缺点,采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞能否克服上述缺点?目的:本实验采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞并对其进行鉴定.设计、时间及单位:单一样本设计,体外细胞培养实验.于2007-03/08在中国医科大学组织工程学实验室完成.材料:选用15只雌性Wistar大鼠,由中国医科大学实验动物中心提供.实验用表皮生长因子、Hoechst33342购自美国Sigma公司,SABC-小鼠IgG抗体免疫组化试剂盒、SABC-Cy3免疫荧光组织化学试剂盒、DAB显色刑、SABC-FITC免疫荧光组化试剂盒均购自武汉博士德公司.方法:利用显微分离的方法将大鼠触须部皮肤分离,剪开真皮和皮下组织,将毛囊与周围组织钝性分离取出毛囊,剪开结缔组织鞘,用显微外科镊取出毛囊外根鞘bulge区,移入培养板中进行组织块培养,应用0.25%胰酶+0.02%EDTA消化分离大鼠毛囊bulge区细胞,倒置相差显微镜下观察其增殖能力,免疫荧光法检测毛囊隆突部细胞K15、β1整合素和P63的表达情况.主要观察指标:①大鼠隆突部细胞增殖能力.②毛囊隆突部细胞K15、β1整合素和P63的表达.结果:①大鼠隆突部细胞胞体积较大,胞核大,核仁明显,细胞生长迅速,活力好,3-4d即可传代,具有增殖能力强、细胞纯度高等特性.②细胞免疫荧光结果显示培养的细胞胞浆角蛋白15阳性,细胞的胞膜β1整合素阳性,细胞的胞核P63阳性.结论:组织块法结合酶消化法可成功分离培养毛囊降突部细胞,细胞可同时表达K15、β1整合素和P63,纯度高,活力好.
-
人胚心脏动脉端来自前心区
背景:对动物胚胎的活体标记试验表明鸡和小鼠胚胎心脏流出道及右心室来自心管外的咽部中胚层.人胚是否有相似情况作者经文献检索尚未见报道.目的:观察并验证人胚心脏动脉端心肌的来源.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-10/2006-10在山西医科大学组织胚胎学教研室完成.材料:山西医科大学各附属医院药物流产后绒毛膜保存完好的早期人胚标本25例.方法:体视显微镜下仔细分离出胚体.用Carnegie分期法对胚胎进行发育分期,其中C10期、C11期、C12期、C13期,C15期和C16期胚胎各3例,C14期胚胎7例.主要观察指标:应用免疫组织化学PAP法观察了α-平滑肌肌动蛋白和α-横纹肌肌节肌动蛋白在C10晚期至C16期人胚心脏及咽部中胚层的表达型,并用苏木精-伊红染色观察各期心脏及咽中胚层的形态学特征.结果:C10晚期至C12,流出道远端的脏层心包和心包腔的背侧壁为复层上皮,向壁层心包内延伸逐渐变为单层扁平上皮.背侧心包于C13至C15变为单层上皮.C10晚期至C13流出道远端α-平滑肌肌动蛋白和α-横纹肌肌节肌动蛋白表达可延伸至脏层心包及咽部间充质细胞.C14至C15,流出道逐渐延长,其远端的脏层心包细胞增生并迁至流出道,在近流出道心肌细胞处表达α-平滑肌肌动蛋白和α-横纹肌肌节肌动蛋白.结论:C10至C15,咽中胚层不断分化出心肌细胞添加至心脏的动脉端使流出道延长,为人胚的前心区;流出道远端心肌可诱导前心区细胞增殖分化为心肌细胞.人胚心脏动脉端心肌来自前心区.
-
实验犬浅静脉内皮细胞原位获取及体外培养
背景:自体血管内皮细胞数量有限且体外长期培养传代后存在功能老化,是目前制约组织工程血管发展的问题.目的:实验拟验证通过体外分离和大规模培养方式为组织工程动脉支架体外内皮化提供血管内皮细胞的可行性.设计、时间及地点:重复测量设计,实验于2007-03/12在复旦大学附属中山医院中心实验室完成.材料:健康杂种犬6只,雌雄不拘,体质量35～40kg,用于获取血管内皮细胞.方法:将犬麻醉后前肢隐静脉原位插管,采用Ⅰ型胶原酶消化法获取血管内皮细胞,体外培养、传代并大规模扩增.采用微格法每日计数培养的细胞总数.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞生长情况,透射电镜和细胞免疫化学进行细胞鉴定,检测原代和传代细胞的条件培养液中6-酮-前列腺素F1°和Ⅷ因子相关抗原的含量.结果:倒置显微镜下观察静脉内皮细胞呈典型的"纺锤样"梭形细胞,单层细胞贴壁生长至融合时呈铺路石样排列.透射电镜下见内皮细胞胞浆中特征性Weibel-Palade小体.细胞免疫化学显示血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原抗体染色阳性.原代及传代细胞培养上清液中6-酮-前列腺素F1°和Ⅷ因子相关抗原的含量差异无显著性意义(P＞0.05).结论:实验成功培养、传代并大规模扩增静脉血管内皮细胞.所培养的静脉内皮细胞可以为组织工程动脉支架体外内皮化提供足够数量和功能良好的细胞.
-
理想肌桥桥接神经缺损构型个性化差异对神经再生的影响
背景:发展修复周围神经系统的技术已成为生物学家、生化工程师及材料学家多学科共同参与的重要研究课题.目的:实验拟观察理想肌桥桥接神经缺损构型个性化差异对神经再生的影响.设计、时间及地点:对比观察,于2004-06/2005-09在沈阳医学院完成.材料:10只普通家犬,体质量20～30kg.方法:在静脉麻醉下,将犬右侧缝匠肌尾侧部和指浅屈肌中段肌条分别切成两段,一段置于体视镜下剥离观察;另一段常规苏木精-伊红染色后用图像分析其远、近端横断面的肌纤维截面积.取两种肌肉肌条分别缝接于自体左、右肢股神经缺损2cm处,常规锇酸染色后测定有髓神经纤维的数量.主要观察指标:① 肌桥的形态差异,肌条远、近端横断面的肌纤维截面积.②桥接左、右肢股神经缺损处有髓神经纤维的数量.结果:① 缝匠肌肌条内的肌纤维与肌条长轴基本平行;指浅屈肌肌条内的肌纤维走向与肌条长轴夹角较大.缝匠肌肌条内80%的肌纤维与肌条等长;指浅屈肌肌条内肌纤维则均短于肌条长度.指浅屈肌肌条内的肌纤维较粗,缝匠肌肌条内的肌纤维较细,两种肌桥内肌纤维的截面积有较大差异(P＜0.01).② 在锇酸染色标本上,有髓神经纤维的髓鞘呈粗细不等的黑色圆圈状.用缝匠肌尾侧部桥接的左侧股神经远段的有髓神经纤维明显比用指浅屈肌桥接的右侧股神经远段的有髓神经纤维多.结论:由相对长度较大的肌纤维为主要构成的肌桥桥接缺损神经的再生效果较好.
-
桃核承气改良方对兔血管内膜剥脱术后内皮素和一氧化氮及一氧化氮合酶的影响
背景:大量的研究结果已证实,内皮细胞如能够早期覆盖受损的血管内膜层,则可避免血管内再狭窄的发生.目的:通过与西药作用对比,观察中药桃核承气改良方对兔血管损伤后内皮细胞生长及功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-04/11在辽宁中医药大学和中国医科大学完成.材料:健康新西兰大耳白兔40只,体质量2.0～2.5kg,高酯饲料喂养4周行腹主动脉内膜剥脱造模,制备动脉粥样硬化模型.桃核承气改良方为辽宁中医药大学附属第一医院制剂产品;舒降之为杭州默沙东制药有限公司产品:阿司匹林为拜尔药业集团有限公司产品.方法:40只兔随机数字表法分为4组.造模后模型组、中药组、西药组正常饲料喂养,中药组予桃核承气改良方13.5mL/kg灌胃4周,西药组予舒降之、阿司匹林混合液13.5mL/kg灌胃4周,模型组、空白组予生理盐水13.5mL/kg灌胃4周.主要观察指标:①造模后1,28d采用硝酸还原法法和比色法测定血浆内皮素1、血清一氧化氮含量.②免疫组织化学法测定血管中内皮素1、内皮型一氧化氮合酶蛋白表达.结果:32只新两兰大耳白兔进入结果分析,模型组(n=8)、中药组(n=10)、西药组(n=8)和空白组(n=6).①与空白组相比,其他3组造模后1d血浆内皮素1升高,血清一氧化氮含量下降(P＜0.05).造模后28d兔中药组、西药组血浆内皮素1较模型组明显降低,血清一氧化氮明显升高(P＜0.05).②血管中内皮素1表达模型组明显高于其他3组(P＜0.05);中药组、西药组较模型组显著减弱(P＜0.05).模型组内皮型一氧化氮合酶表达明显低于其他3组(P＜0.05);中药组、西药组较模型组显著增强(P＜0.05).结论:桃核承气改良方能够促进内皮素与一氧化氮之间的平衡协调,有利于血管内皮细胞的修复.
-
构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体
背景:腺病毒虽可携带骨诱导形成蛋白2基因转染靶细胞促进其分泌诱导形成蛋白2,但容易出现一些免疫应答反应,以质粒为载体的转染实验应具有良好的前景.目的:验证构建绿色荧光蛋白标记的人骨诱导形成蛋白2真核表达载体的可行性.设计:单一样本观察.单位:天津医院.材料:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室(国家级)完成.含完整hBMP2基因片段的pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2质粒由李曦铭博士惠赠.双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS为Invivogen公司产品,Zeo购自Invivogen公司.pTA2(R)-T Easy为鼎国生物技术有限公司产品,限制性内切酶BamHI和NheI、T4 DNA连接酶(晶美生物工程有限公司),PCR上下游引物合成及测序(北京奧科生物技术有限责任公司).方法:以重组质粒pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法亚克隆出人骨诱导形成蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-人骨诱导形成蛋白2.主要观察指标:采用PCR法鉴定人骨诱导形成蛋白2序列,同时进行酶切及测序鉴定人骨诱导形成蛋白2是否克隆入pTA2-人骨诱导形成蛋白2重组质粒及真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS中.结果:PCR获得长度约1216bp的目的片段,经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的BMP2cDNA序列(NM-001200)100%匹配.结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体.
-
兔尿道上皮细胞的体外连续培养
背景:尿道损伤后的瘢痕挛缩或缺损可导致狭窄,寻找理想的修复替代材料已成为研究热点.目的:探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-04/2007-02在解放军总医院泌尿外科完成.材料:健康成年雄性新西兰雄兔6只,体质量3.0～3.5kg;实验用Dispase Ⅱ为美国Gibco公司产品.方法:取雄性新西兰兔尿道黏膜组织,分离上皮采用Dispase Ⅱ工作液,上皮细胞间的分离采用混合消化酶(1.25g/L胰蛋白酶与0.2g/L乙二胺四乙酸等体积混合)消化,以差速贴壁法排除成纤维细胞.使用DMEM与F123:1混合培养液加体积分数为0.1的胎牛血清,对上皮细胞进行原代单纯培养和传代培养;取第2～6代细胞进行上皮细胞的免疫组织化学染色,以正常尿道黏膜组织石蜡切片为阳性对照组,以成纤维细胞铺片为阴性对照组.主要观察指标:①利用倒置相差显微镜动态观察细胞形态、生长、增殖情况.②采用活细胞荧光染色法观察细胞存活状态.③以扫描电镜观察细胞超微结构.④采用免疫组织化学染色行细胞鉴定.结果:①原代培养3-5d细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传9-10代.②第4～6代细胞在免疫荧光染色和超微结构观察中显示良好形态.③免疫组织化学证实角蛋白染色阳性.结论:应用组织工程技术,成功培养尿道上皮种子细胞.结果表明,细胞生长状态良好,增殖较快.经特异性免疫组织化学及形态学鉴定为纯化的尿道上皮细胞.
-
家兔离体主动脉血管对天麻水煎剂干预的反应
背景:现代医学研究发现天麻(Gastrodiaelata B1)具有明显地心肌保护和血管扩张作用,可用于冠心病、高血压的治疗,但其作用机制仍需明确.目的:观察天麻水煎剂对去甲肾上腺素、KCl预收缩血管反应的舒张作用,并分析其作用途径.设计:分组设计、离体动物组织对照实验.单位:川北医学院生理学教研室.材料:选用健康家兔12只,兔龄七、八个月,雌雄不拘,由川北医学院实验动物中心提供.实验所用药品天麻水煎剂由慧仁堂药店鉴定提取,将其配制成10%,20%.40%和80%浓度备用.β肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔为北京第二制药厂产品:一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸为Sigma公司产品:甲烯蓝、环氧酶抑制剂吲哚美辛为江苏太仓制药厂产品.方法:实验于2006-01/2007-01在川北医学院药物研究所完成.采用家兔离体主动脉平滑肌标本,以去甲肾上腺素(1×10-6mol/L)预收缩主动脉后给予1.0,2.0,4.0,8.0和16.0g/L天麻水煎剂观察其张力变化,并观察去除血管内皮、给予1×10-4mol/L左旋硝基精氨酸、1×10-5mol/L甲烯蓝、1×10-5mol/L吲哚美辛和1×10-5mol/L普萘洛尔对血管张力的影响:血管张力经张力换能器输入BL-410智能型生物信号处理系统进行处理.另外观察8g/L天麻水煎剂对无内皮细胞血管环NA和KCl的量效收缩反应.主要观察指标:离体血管张力.结果:天麻对血管环静息张力无明显影响.但不同剂量的天麻可使1×10-6mol/L去甲肾上腺素预收缩血管产生明显舒张(r=0.85,t=18.45,P＜0.01).去除血管内皮、1×10-4mol/L左旋硝基精氨酸或1×10-5mol/L甲烯蓝可减弱天麻的舒张作用,但吲哚美辛和普萘洛尔对其无影响.另外,8g/L天麻水煎剂对无内皮细胞血管环去甲肾上腺素和KCI的量效收缩反应明显降低,且去甲肾上腺素和KCl的PD2(-log游离药物半数有效浓度)分别由温育前(6.90±0.93)mol/L和(1.53±0.55)mmol/L,降低为(5.61±0.70)mol/L和(1.10±0.25)mmol/L,(t=2.41,3.82,P＜0.05).结论:天麻水煎剂对主动脉的舒张是内皮依赖性的,并与内皮一氧化氮的释放有关;也可通过拮抗ROC和PDC通道,抑制Ca2+的内流和释放等机制有关.
-
内皮前体细胞与平滑肌细胞联合培养构建组织工程血管:适比例验证
目的:由内皮前体细胞分化的内皮细胞与成熟平滑肌细胞联合培养可以为组织工程血管的形成提供更接近天然的条件.实验拟进一步证明两种细胞联合培养可促进血管内皮细胞生长,以及两种细胞的适比例.方法:实验于2006-01/2007-05在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.①实验材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意.②实验方法及评估:从人脐动脉中用组织块培养法分离并原代培养血管平滑肌细胞,免疫荧光方法鉴定其平滑肌肌动蛋白表达情况;采用密度梯度离心法分离脐血中的内皮前体细胞,经体外定向诱导分化和免疫荧光方法鉴定其表型;无菌条件下制作Ⅰ型胶原凝胶,在其上以3:1～4:1的比例混匀联合培养内皮前体细胞与平滑肌细胞,并观察两种细胞联合培养时的形态,分析两种细胞合适的种植比例;免疫荧光方法观察在Ⅰ型胶原凝胶联合培养中CD31、vWF的表达以及内皮细胞的生长情况.结果:①原代培养的平滑肌细胞呈典型"波峰谷"形态,荧光染色平滑肌肌动蛋白呈阳性.②脐血来源的内皮前体细胞定向诱导分化为内皮细胞后,呈现出"铺路石"样形态,表达CD31、vWF,结合荆豆凝集素,提示具备成熟内皮细胞特性.③在Ⅰ型胶原凝胶上两种细胞增殖力均旺盛,与平滑肌细胞以3:1～4:1的比例种植在I型胶原凝胶培养一段时间后,内皮前体细胞可从平滑肌细胞处得到支持,形成血管样网络结构.④共培养1周后,CD31与vWF阳性细胞即内皮前体细胞分化而来的内皮细胞互相连接,形成环形结构.结论:内皮前体细胞和平滑肌细胞以3:1～4:1共培养的模式可以促进微血管样结构的形成.
-
人脐静脉内皮细胞损伤过程中核转录因子κB及单核细胞趋化蛋白1mRNA的变化
背景:既往实验表明,炎性因子与内皮细胞的功能有密切的关系,观察保护和损伤因素对体外培养人血管内皮细胞炎性因子作用的报道较少.目的:实验拟观察姜黄素和肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞分泌核因子κB以及单核细胞趋化蛋白1mRNA的影响.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2006-12/2007-08在解放军第四军医大学组织工程实验室完成.材料:健康人脐带由解放车第四军医大学唐都医院提供.内皮细胞培养采用M199完全培养基.方法:实验分为3组,正常对照组为无血清M199培养基;肿瘤坏死因子α组:在正常细胞培养液中加入浓度为10μg/L的肿瘤坏死因子α诱导损伤1.5h;姜黄素组:先在培养液中加入10μg/L的肿瘤坏死因子α30min诱导损伤,再分别加入终浓度为6.25,12.5,25,50,100mg/L的姜黄素孵育1h.主要观察指标:①四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度姜黄素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响.②免疫细胞化学染色法观察胞核内核转录因子κB的表达.③反转录-聚合酶链反应检测单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达.结果:姜黄素可以提高肿瘤坏死因子α诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性(P＜0.01),并呈一定剂量依赖性.肿瘤坏死因子α可刺激核因子κBp65表达的强度,姜黄素可以减少核因子κBp65的表达.与正常对照组相比,肿瘤坏死因子α作用30min后,单核细胞趋化蛋白1mRNA相对表达量明显增高(p＜0.01);加入不同浓度的姜黄素作用1h后,单核细胞化蛋白1mRNA相对表达量明显减低(P＜0.05, P＜0.01).结论:姜黄素对损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用途径可能通过抑制核转录因子κB活性,并下调单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达,从而阻滞了单核细胞的聚集.
-
异丙肾上腺素对大鼠骨髓单核细胞向破骨细胞转化的影响
背景:交感神经系统在骨量的调控中发挥关键的作用,假设体外交感神经分泌的神经递质能够促进破骨细胞形成,无疑为破骨细胞诱导培养增加了新方法.目的:实验拟观察异丙肾上腺素对大鼠骨髓单核细胞向破骨细胞转化的影响.设计、时间及地点:横断面设计实验,于2007-03/06在沈阳医学院实验中心完成.材料:新生24h Wistar大鼠,体质量5.0～6.0g,雌雄不拘,用于分离培养大鼠成熟破骨细胞.异丙肾上腺素由武汉福鑫化工有限公司提供.方法:分离培养大鼠成熟破骨细胞为原代组,以异丙肾上腺素作用于骨髓单核细胞为肾上腺素组,无异丙肾上腺索为对照组,用苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色加以鉴定.主要观察指标:倒置显微镜观察第3,6,9天3组细胞的计数,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上的嗜骨能力.结果:肾上腺素组破骨细胞数目为原代组数目的3倍.其形态与原代组消化获得的细胞形态相同,抗酒石酸酸性磷酸酶染色均阳性.扫描电镜显示肾上腺素组破骨样细胞在骨片上培养时产生骨陷凹.结论:在体外异丙肾上腺素对破骨样细胞形成有促进作用,形成的破骨样细胞在形态、特异酶及噬骨能力方面与经典分离培养的破骨细胞无差异.
-
转化生长因子β1与椎间盘退变的相关研究
学术背景:转化生长因子β1是蛋白多糖及胶原代谢等椎间盘细胞外基质的重要调节物质之一,有可能在腰椎间盘退变的病理过程及基因治疗中发挥作用.目的:分析转化生长因子β1的基因结构特点及其对椎间盘细胞的作用,认识转化生长因子β1在椎间盘退变的病理过程及基因治疗方面的作用.检索策略:应用计算机检索维普中文科技期刊数据库(VIP)、清华同方中文系列等数据库1995-01/2007-10的相关文章,并限定文章语言种类为中文和"English",检索词"间盘退变,转化生长因子β1,中医药"同时检索Medline数据库1995-01/2007-10期间的相关文章,检索词"ntervertebral disc degeneration, TGF-β1, Traditional Chinise Medicine"纳入标准:① 转化生长因子β1基因结构等特点文章.② 椎间盘退变、转化生长因子β1与中医药三者关联研究.排除标准:综述文献、重复研究、Meta分析类文章.文献评价:初检得到398篇文献,纳入37篇符合标准的文献.主要介绍转化生长因子β1基因的特点、转化生长因子β1对椎间盘细胞的影响、转化生长因子β1与椎间盘退变的生物治疗及中医药对转化生长因子β1表达的影响.资料综合:目前认为转化生长因子β1可通过改善退变的椎间盘细胞活性,刺激胶原基因表达来延缓椎间盘组织的退变,对退变早期的椎间盘尤其是髓核具有修复功能,可逆转椎间盘的退变.部分中药可促进椎间盘细胞转化生长因子β1的表达但机制未明.运用转基因疗法发挥转化生长因子β1对椎间盘退变性疾病的治疗在理论上可行,但现有技术还不能把转化生长因子β1安全、有效地注入人的椎间盘.结论:转化生长因子β1的结构及基因定位已明确,转化生长因子β1是转基因疗法治疗椎间盘疾病比较理想的目的基因,但真正应用于临床仍有待组织工程学等相关领域的深入研究.在中医药领域寻找促进转化生长因子β1表达的特异性效应物,有可能为椎间盘退变性疾病的治疗提供新的途径.
-
内皮祖细胞与动脉粥样硬化及他汀类药物的干预
学术背景:内皮损伤是动脉粥样硬化的始动因子,内皮祖细胞作为血管内皮的前体细胞,在内皮修复和血管新生中起重要作用.他汀类药物通过内皮祖细胞对动脉粥样硬化的影响是新的研究热点.目的:总结他汀类药物通过内皮祖细胞对动脉粥样硬化影响的研究进展.检索策略:应用计算机检索Pubmed、 OVID数据库2000-01/2006-12的相关文献,检索词"endothelial progenitor cells, statins, atherosclerosis",限定文章语言种类为English,同时计算机检索CNKI,维普数据库2000-01/2006-12期间的相关文章,检索词"内皮祖细胞:动脉粥样硬化;他汀类药物",限定文章语言种类为中文.共检索到62篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与他汀类药物通过内皮祖细胞对动脉粥样硬化的影响密切相关.②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:重复性研究.文献评价:文献的来源主要是他汀类药物通过内皮祖细胞对动脉粥样硬化的影响.所选用的28篇文献均为临床或基础实验研究,2篇为综述.资料综合:①在生理情况下,内皮的完整性可以有临近内皮细胞的再生米维持,然而在氧化应激情况下,内皮祖细胞的归巢可以保护损伤的内皮完整性.②他汀类药物通过动员内皮祖细胞修复损伤的血管内皮,从而延缓动脉粥样硬化的进一步发展.③他汀类药物通过PI3K/Akt途径动员骨髓中的内皮祖细胞和抑制内皮祖细胞凋亡,使血液循环中的内皮粗细胞的数量增多,促使内皮祖细胞归巢至心肌缺血部位,促进新生血管的生成,改善缺血心肌的血液供应,从而改善心室收缩功能.结论:他汀类药物通过动员内皮祖细胞增加血液循环中内皮祖细胞的数量和抑制内皮祖细胞凋亡从而延缓动脉粥样硬化的进展,减少动脉粥样硬化患者的死亡率和改善其愈后,具有广泛的研究前景.
-
膝骨关节炎关节液蛋白多糖的变化与中医辨证施治影响:随机分组对照
目的:关节液中蛋白多糖的含量变化,反映了软骨的不同病变时期,采用中医辩证治疗,观察其对膝骨关节炎关节液中蛋白多糖的影响.方法:①对象和分组:2006-12/2007-03中国中医科学院望京医院骨科门诊就诊的膝骨关节炎患者60例,随机分为对照组28例,平均年龄为48.7岁:实验组32例,平均年龄为47.1岁.又将实验组又分肝肾不足、筋脉瘀滞证组11例,脾肾两虚、湿注骨节证组13例,肝肾亏虚、痰瘀交阻证组8例.②干预:实验组予中药颗粒剂口服,1剂/d,服用3个月.肝肾不足、筋脉瘀滞证组服用六味地黄汤(熟地、淮山药、茯苓等);脾肾两虚、湿注骨节证组服用除湿通痹汤(威灵仙、鸡血藤、薏仁等);肝肾亏虚、痰瘀交阻证组服用左归汤(熟地、淮山药、山臾肉等).对照组予盐酸氨基葡萄糖和塞来昔布口服治疗.③评估:两组随访3个月,分别于第1次及后1次治疗时抽取关节液,行蛋白多糖检测,并行膝骨性关节炎严重性指数(ISOA)评分.结果:60例患者进入结果分析.①实验组和对照组蛋白多糖:治疗前差异无显著性(P＞0.05),治疗后实验组蛋白多糖降低(P＜0.05).②实验组中医3个证型蛋白多糖:治疗前后对比差异有显著性(P＜0.05),而各证型之间差异无显著性(P＜0.05).③膝骨性关节炎严重性指数评分:两种治疗方案均能显著缓解临床症状(P＜0.05),但实验组改善程度及疗效明显优于对照组(P＜0.05).结论:中医辨证治疗膝骨关节炎是一种有效方法,其疗效明显优于非甾体抗炎药和氨基单糖药物治疗,而关节液中蛋白多糖是一项灵敏而客观的临床检验指标.
-
大强度运动后联合应用抗氧化剂机体总抗氧化能力的变化
目的:大强度运动会引起脂质过氧化损伤,采用适宜的干预措施能够提高机体抗氧化能力.实验旨在探讨联合抗氧化剂干预对一次性大强度离心运动后机体总抗氧化能力的影响.方法:①对象和分组:选取2005-10成都体育学院高水平运动队志愿受试运动员16名,年龄18-20岁.随机均衡的分为对照组、实验组,每组8人.星鲨维生素E胶丸为厦门鱼肝油厂生产;维生素C泡腾片为西安利君制药股份有限公司生产;硒维尔片为牡丹江灵泰药业股份有限公司生产;安慰剂由糊精填充入空胶囊制成.②干预:从运动前2周到运动后2d,对照组每天口服安慰剂;实验组每天口服由维生素E(600mg/d)、维生素C(500mg/d)、硒(200μg/d)组成的联合抗氧化剂.两组服药2周后,进行一次性大强度离心跑台运动.③评估:于服药前、运动前、运动后即刻、24h、 48h测定受试者血清总抗氧化能力.结果:实验组服药后总抗氧化能力水平即开始升高,高于服药前水平(P＜0.01),运动后实验组各时相均高于对照组(P＜0.01～0.05).结论:大强度运动后应用联合抗氧化剂能有效提高后机体总抗氧化能力.
-
中国部分汉族人群E-选择素+G98T和+A561C基因多态性与冠心病以及血脂水平的相关性
背景:研究表明血管紧张素转换酶基因、血管紧张素受体基因等多种基因多态性与冠心病的发病及血脂水平相关.目的:实验拟观察中国部分汉族人群E-选择素基因多态性与冠心病的相关性以及对血脂水平的影响.设计、时间及地点:病例-对照观察,于2006-06/2007-08在珠海市第二人民医院和中山大学附属第五医院心内科完成.参试者:选择珠海市内几家大型医院心内科住院的冠心病患者220例,男136例,女84例,平均年龄(65±11)岁,其中心肌梗死患者48例,心绞痛患者172例,均符合1979年WHO冠心病诊断标准,排除高血压病、糖尿病及肝、肾、甲状腺疾病等.另选同期健康体检者190名作为对照组,男118例,女72例,平均年龄(63±13)岁,无心血管疾病病史,体检及心电图检查均正常.试验对象均为本地区汉族成人,无血缘关系,所有受试者均对试验知情同意.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测220例冠心病患者和190例健康对照者的E-选择素+G98T和+A561C基因多态性并进行统计学比较.主要观察指标:E-选择素+G98T位点及+A561C位点各基因型GG、GT、TT和AA、AC、CC的分布.结果:E-选择素+G98T、+A561C基因型和等位基因频率在冠心病组和对照组差异均有显著性意义(P＜0.05);+G98T基因GT型者罹患冠心病的风险是GG型者的1.919倍,+A561C基因AC/CC型者罹患冠心病的风险是AA型者的2.786倍.AC/CC基因、GT基因型较AA基因、GG基因型者血脂水平有增高趋势,但差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:E-选择素+G98T、+A561C基因多态性与中国部分汉族人群冠心病的发病相关,T等位基因及C等位基因可能是冠心病发病的遗传易感基因之一;E-选择素基因多态性与血脂水平的关系有待进一步研究.
-
不同运动项目的运动员月经状况调查
目的:不同运动项目对运动员的初潮年龄、月经失调类型会产生影响.实验拟以调查方式分析其相关影响因素.方法:调查于2006-05在广东省体育运动技术学院完成.采用问卷调查法,对11个项目的13～26岁队员共131人进行抽样调查.问卷内容包括:①运动员个人资料及月经史:运动员年龄、初潮年龄、月经周期时间、是否规律、行经天数、经血量、颜色、有无痛经及其程度、经前期感觉、行经期感觉、有无闭经史及其治疗情况、有无骨折史等.②运动员运动史:运动项目、运动级别、运动训练开始的年龄、专项训练年限、运动负荷量(用每日和每周训练的时间表示)、行经期的训练情况等.结果:运动员平均初潮年龄与普通人群相似.项目特点、运动水平及训练起始年龄对月经初潮有影响;运动员月经失调比例较高,以痛经显著;继发性闭经主要集中在表现难美性的项目中;初潮前开始训练的队员,其月经失调的发生率明显高于初潮后开始训练的队员;89.83%运动员经期症状是正常的.结论:运动员月经情况与其训练开始年龄、运动专项、运动水平等有关.
-
以呼吸生理为导向呼吸运动锻炼对慢性阻塞性肺疾病呼吸肌功能及运动耐力的影响
背景:以往报道证实缩唇呼吸可以改善慢性阻塞性肺疾病患者气促症状和运动耐力的非药物治疗方法.目的:试验以缩唇呼吸为对照,拟观察呼吸生理为导向呼吸运动训练对慢性阻塞性肺疾病患者呼吸肌功能及运动耐力的影响.设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2006-10/2007-12在湖南省怀化市第二人民医院完成.参试者:按2006年慢性阻塞性肺疾病全球倡议标准选择60例慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者,男51例,女9例.方法:采用前瞻、随机、对照的方法将60例患者分为3组,实验组患者给予以呼吸生理为导向的呼吸运动训练8周,3次/d,15min/次;阳性对照组患者给予缩唇呼吸运动训练8周,3次/d,15min/次;阴性对照组患者不给予呼吸运动训练,每组20例.主要观察指标:呼吸困难MRC评分、日常生活活动能力、生存质量、6min步行距离、大呼气口腔压和大吸气口腔压.结果:实验组、阳性对照组和阴性对照组在呼吸运动训练过程中退出试验的分别有3,5,5例.①实验组和阳性对照组呼吸运动训练后的MRC评分均比各自呼吸运动训练前下降(P＜0.01);日常生活活动能力评分、6min步行距离、大呼气口腔压和大吸气口腔压均比各自呼吸运动训练前增加(P＜0.01, P＜0.05),其中实验组呼吸运动训练后的日常生活活动能力评分、6min步行距离、大呼气口腔压和大吸气口腔压比阳性对照组增加(P＜0.05).②实验组和阳性对照组呼吸运动训练前、后各项生存质量评分差异均有非常显著性意义(P＜0.01,P＜0.05).结论:以呼吸生理为导向的呼吸运动训练能明显改善重度至极重度慢性阻塞性肺疾病患者的呼吸困难、提高生活活动能力和生存质量、增加运动耐力和呼吸肌功能.
-
湖南侗族学生Heath-Carter体型发育特征分析
背景:研究青少年体型的方法有很多,其中Heath-Carter体型法是一种综合评价体质的方法,它通过3种不同的体型因子来分别反映体脂、骨骼肌及身体线性度的发育情况.目的:分析湖南侗族学生装体型发育特征及其规律.设计、时间和地点:横断面调查,于2006-05在湖南怀化学院生物工程系完成实验.对象:选择来自湖南通道侗族自治县中小学的989名学生为调查对象,将对象按性别以每一周岁为单位分为11个组.方法:按Heath-Carter体型法活体测量10项体质指标,每项指标测2次取其平均值.将各数据输入计算机建立数据库,计算出体型3因子、体型图上的X与Y值、平均体型点间距和体型差异等.主要观察指标:身高;体质量:肱三头肌位、肩胛下位、髂前上棘位、小腿中部四处皮褶厚度、肱骨远端宽、股骨远端宽、上臂围、小腿围.结果:① 侗族男女学生体型3因子平均值变异范围分别是内因子为1.2～1.9和1.3～4.1、中因子为4.2～5.1和1.9～3.0、外因子为2.8～3.7和2.6～3.9.中因子平均值在7～17岁各年龄段均存在明显的性别差异(P＜0.05～0.01);内因子均值12～17岁各年龄组的女生大于男生,差异有非常显著性意义(P＜0.01);外因子13岁以前女生大于男生,9,11和15～17岁男生大于女生,差异有显著性意义(P＜0.05～0.01).7～17岁年龄组男女体型差异有显著性意义(P＜0.05～0.01).② 侗族女生平均体型发育存在一个动态变化过程,其增龄变化趋势为中胚层-外胚层均衡型→均衡外胚层型→偏内胚层的外胚层型→内胚层-外胚层均衡型→均衡内胚层型,但男生的相对较稳定,其各年龄组的平均体型均为中胚层体型.③ 侗族青少年学生先天性体型与其他群体明显不同,有其独特的特征.但进入青春期后,侗族男生体型与朝鲜族接近(SAD=0.37),与城市汉族远(SAD=2.15);侗族女生的体型与壮族相近(SAD=0.71),与朝鲜族(SAD=2.35)及苗族(SAD=2.10)远.结论:侗族学生的先天性体型有其独特的特征,男女学生的体型特征存在明显的差异.
-
CRTER给阳明先生"知行合一"的答案(1)
"知行合一"的观点在中国哲学史上早由明代大哲学家王阳明先生提出.阳明先生构建了"心理"--"知行合一"--"致良知"的基本理论框架,并被后人赞誉为中国儒家的后一个高峰.
-
胫骨近端伴血管肉瘤去分化的脂肪肉瘤1例
报告1例胫骨近端伴有血管肉瘤去分化的脂肪肉瘤,并通过分析其影像学、临床、病理等方面特点,进一步认识去分化脂肪肉瘤.2007-05在本院诊治的1例患者,男,51岁,因"发现左胫骨近端占位6d,骨肿瘤可能"收入院.回顾性分析其各项临床特点,包括起病特点、体格检查、血常规、影像学改变、病理特点、手术方式、随访时间.行肿瘤刮除灭活,髂骨植骨,骨水泥填充,胫骨平台T型钢板螺钉内固定+肿瘤组织活检术,术后40d肿瘤复发.再次入院行患肢截肢术,术后2周患者出现咯血,多脏器功能衰竭死亡.血管肉瘤去分化的脂肪肉瘤在影像学、临床表现、实验室检查等方面无明显特点,诊断有一定困难.肿瘤恶性程度高,起病快,病程短,预后不良.
