中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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颈椎病动物模型的建立及其应用研究与进展
背景：从颈椎病的动物模型向临床转化是一项十分艰巨的工作，然而目前颈椎病的病理学研究尚不十分明确，主要原因在于缺乏理想的实验动物模型。
目的：通过查阅文献回顾颈椎病常用的建模方法以及评价不同造模方法的优劣。
方法：以“cervical spondylosis，cervical spondylotic myelopathy，cervical spondylotic radiculopathy， vertebroarterial type of cervical spondylosis, animal model”为英文检索词，以“颈椎病，脊髓型颈椎病，神经根型颈椎病，椎动脉型颈椎病，动物模型”为中文检索词，由第一作者检索Medline，CNKI 数据库1991至2015年与颈椎病动物模型构建相关的动物实验或临床研究，经过筛选终获得41篇文献进行综述。
结果与结论：现阶段对于颈椎病的建模方法虽然很多，如植入法、螺钉拧入法、球囊压迫法、机械性压迫、注射法、椎管插线法、力学平衡失调法等，各有优缺点，在研究颈椎病时，应根据研究目的来选择合适的动物模型，进一步研究和建立综合的动物模型，仍然是努力的目标。 -
正交法筛选组穴对脑缺血再灌注损伤模型大鼠细胞外信号调节激酶信号转导通路的影响
背景：既往电针治疗脑缺血再灌注损伤观察的针刺穴位搭配较少。
目的：探讨电针正交实验所选组穴对脑缺血再灌注损伤后细胞外信号调节激酶信号通路的影响。
方法：150只SD大鼠随机等分为5组，假手术组只暴露大脑中动脉；模型组及正交1，2，3号组建立脑缺血再灌注模型。正交1，2，3号组采用正交法筛选的穴位组合进行电针刺激。正交1号组为百会、曲池、足三里、尺泽，正交2号组为百会、足三里、尺泽、三阴交，正交3号组为合谷、足三里、尺泽、三阴交。
结果与结论：与模型组相比，正交1，2，3号组大鼠神经功能缺损评分降低，脑梗死面积缩小，脑缺血区微血管密度数量及缺血侧皮质和海马CA1区中磷酸化细胞外信号调节激酶表达水平增加，且正交3号组变化为显著。提示电针经正交法筛选的合谷、足三里、尺泽、三阴交能有效减少脑缺血再灌注大鼠的梗死面积，且该效应可能与其调节受损脑组织中细胞外信号调节激酶信号通路密切相关。 -
补阳还五汤对脑出血模型大鼠脑组织PI3K、Akt、Bcl-2、BAX蛋白表达的影响
背景：补阳还五汤具有出色的神经保护作用，能够高效抑制脑缺血再灌注损伤导致的神经细胞凋亡。
目的：研究补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围神经元凋亡的影响及作用机制。
方法：将72只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、银杏叶片组，除假手术组，其余3组建立大鼠脑出血模型，造模后第2天开始，补阳还五汤组、银杏叶片组分别灌胃给予补阳还五汤26 g/(kg?d)、银杏叶片3.5 mg/(kg?d)，假手术组及模型组灌胃给予等量生理盐水，连续给药14 d。末次给药后，取脑组织，TUNEL法检测神经元凋亡，免疫组织化学法检测PI3K、Akt、Bcl-2、BAX蛋白表达，干湿重法检测脑组织水含量，伊文思蓝法检测血脑屏障通透性。
结果与结论：①与假手术组比较，模型组大鼠脑组织神经元凋亡数目、脑组织水含量、伊文思蓝含量及PI3K、Akt、Bcl-2、BAX蛋白表达增加(P<0.05)；②与模型组比较，补阳还五汤组、银杏叶片组凋亡神经元数目、BAX蛋白表达、脑组织水含量、伊文思蓝含量显著降低(P<0.05)，PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)；③结果表明：补阳还五汤可能通过降低血脑屏障通透性，减轻脑水肿，激活PI3K/Akt信号转导通路，进而调控Bcl-2与BAX蛋白表达比值，起到抑制脑出血神经元凋亡、保护脑组织的作用。 -
脑出血免疫抑制大鼠模型的构建及评估
背景：研究表明，大鼠脑出血后经治疗可以有效抑制其免疫功能。已有文献研究对缺血性脑卒中后免疫抑制现象进行详细研究，但脑出血后机体免疫功能研究鲜见报道。
目的：构建脑出血后免疫抑制大鼠模型并进行稳定性评估。
方法：将60只Wistar大鼠随机分为3组，即对照组、假手术组、脑出血组，每组20只。采用自身动脉血50μL注入大鼠基底节方法建造急性脑出血模型；假手术模型注入50μL 生理盐水，手术过程同脑出血模型；对照组不做任何处理。分别于造模后24，48，72，96 h用血液分析仪检测白细胞、淋巴细胞、淋巴细胞百分数；采用ELISA测定大鼠血清中促炎细胞因子白细胞介素6和抗炎细胞因子转化生长因子β的水平；剖取大鼠脾组织进行组织学及病理学检查；通过RT-PCR及Western blotting检测转化生长因子β、白细胞介素6基因和蛋白在脾组织中的表达变化。
结果与结论：①与假手术组及对照组相比，脑出血组大鼠于造模后24，48，72，96 h白细胞数明显升高，淋巴细胞百分数逐渐降低，差异有显著性意义(P<0.05)；②与假手术组及对照组相比，脑出血组大鼠血液、脾的白细胞介素6在24 h 时高表达，72 h 达高峰，96 h时表达降低，差异有显著性意义(P<0.05)；③与假手术组及对照组相比，脑出血组大鼠血液、脾的转化生长因子β于24 h时低表达，72 h 逐渐升高，96 h时高表达，差异有显著性意义(P<0.05)；④结果提示，大鼠在脑出血后先呈现免疫功能亢奋，随即96 h后出现免疫功能抑制，说明脑出血后免疫抑制大鼠模型造模成功，并具有良好的稳定性。 -
针灸对脑性瘫痪模型幼鼠脑组织中氨基酸和神经递质的影响
背景：针灸对脑性瘫痪幼鼠有一定的治疗作用。
目的：探讨火针对脑性瘫痪幼鼠脑组织中氨基酸和神经递质表达的影响。
方法：取1周龄Wistar幼鼠50只，45只结扎左侧颈总动脉建立幼鼠脑性瘫痪模型，5只不处理作为对照组。45只模型幼鼠随机分为模型组、针刺组及阳性组，每组15只。于造模第3天开始，阳性组灌胃脑酶水解片溶液，火针组使用火针处理内关穴、涌泉穴、曲池穴、百会穴，治疗持续21 d。于末次治疗1 h后，进行悬挂实验及Y型迷宫实验，并处死大鼠分离其大脑皮质及海马区，组织匀浆后检测乙酰胆碱、去甲肾上腺素、5-羟色胺、谷氨酸和γ-氨基丁酸的表达变化，采用病理切片观察海马区组织结构变化。
结果与结论：①一般情况：21 d内治疗组大鼠活动明显多于模型组。治疗21 d，与对照组相比，模型组体质量显著下降(P<0.05)；与模型组相比，阳性组及火针组体质量均明显上升(P<0.05)，且后2组差异无显著性意义；②悬挂实验及Y型迷宫实验：与对照组相比，模型组悬挂时间显著下降，犯错次数显著性上升(P<0.05)；与模型组相比，阳性组及火针组悬挂时间显著性延长，阳性组和火针组的犯错次数显著下降(P<0.05)；③神经递质水平：与对照组相比，模型组去甲肾上腺素、5-羟色胺和γ-氨基丁酸水平下降，谷氨酸水平增加(P<0.05)；与模型组相比，阳性组和火针组的去甲肾上腺素、5-羟色胺和γ-氨基丁酸水平增加，谷氨酸水平减少(P<0.05)；④苏木精-伊红染色：模型组可见大量的神经元结构破坏变形，体积减小，细胞核固缩，且与细胞膜边界不清晰；阳性组和火针组都可以在一定程度上治疗脑缺血引起的海马区脑细胞结构异常。⑤结果证明，火针法可以有效治疗幼鼠脑性瘫痪。 -
咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护
背景：咖啡酸苯乙酯可抑制大鼠脑损伤后的脂质过氧化和脑损伤，但是在帕金森细胞模型中，5-脂氧酶和白三烯的变化规律，以及咖啡酸苯乙酯是否通过抑制鱼藤酮诱导的5-脂氧酶和白三烯变化而发挥对帕金森样损伤的保护作用，仍有待进一步研究。
目的：探讨咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护作用，同时观察5-脂氧酶是否参与帕金森细胞模型的损伤。
方法：①取生长状态良好的PC12细胞，分5组培养，分别以0，0.01，0.1，1，10μmol/L鱼藤酮干预，24，48 h后，观察细胞形态及活性变化，选择佳诱导帕金森细胞模型的鱼藤酮浓度；24 h后， Western法检测5-脂氧酶表达，ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量；②取生长状态良好的PC12细胞，分6组培养，以正常培养的细胞为空白对照，其余5分别加入0，0.01，0.1，1，10μmol/L咖啡酸苯乙酯预处理30 min，之后加入1μmol/L鱼藤酮，24 h后，检测细胞活性，ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量。
结果与结论：①0.1-10μmol/L鱼藤酮可诱导PC12细胞损伤，1μmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞形态和细胞存活率变化适度明显，所以选择该条件作为鱼藤酮诱导PC12细胞帕金森样损伤的细胞模型；②鱼藤酮呈浓度依赖性增加5-脂氧酶的表达与半胱氨酰白三烯的生成释放；③1-10μmol/L 咖啡酸苯乙酯可降低鱼藤酮诱导的PC12细胞半胱氨酰白三烯生成释放量增加，呈浓度依赖性抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞存活率降低；④结果表明，5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤作用，咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤有明显保护作用。 -
脊髓损伤模型大鼠胶质细胞反应性增生的变化规律及意义
背景：脊髓损伤后神经结构重建及修复成为关注焦点。
目的：观察脊髓损伤后胶质细胞的变化规律。
方法：取42只成年雄性SD大鼠，以随机数字方法分为7组，每组6只，正常对照组不进行任何干预；假手术组仅打开椎板，不损伤脊髓；脊髓损伤后1，7，14，21，28 d组，建立脊髓损伤模型，分别于脊髓损伤后相应时间点处死。采用BBB评分法评估各组大鼠后肢运动功能，取完整脊髓组织，进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色与免疫荧光染色。
结果与结论：①BBB评分：正常对照组与假手术组运动功能正常。脊髓损伤后1 d完全瘫痪，7 d后肢运动开始恢复，14 d明显恢复，21，28 d后肢运动功能与14 d无明显差异；②苏木精-伊红染色：脊髓损伤后1 d，髓内弥漫性出血，细胞大量坏死；伤后7 d，髓内出血逐渐吸收，炎症细胞浸润，部分细胞形成空泡；伤后14 d，出血完全吸收，脊髓结构破坏，囊腔形成；伤后28 d，脊髓结构完全破坏，巨大空洞形成，局部大量瘢痕组织形成；③免疫组织化学染色：脊髓损伤后，星形细胞增生、突触增加，14 d时为明显；7 d可见轴突间隙稍增大，结构紊乱，21 d髓鞘结构破坏；④免疫荧光染色：脊髓损伤14 d，损伤局部出现大量胶质纤维酸性蛋白阳性/神经巢蛋白阳性细胞；⑤结果表明：脊髓损伤早期，损伤周围星形胶质细胞细胞突起和胞体肥大、增殖，胶质纤维酸性蛋白和神经巢蛋白表达上调，有利于脊髓损伤修复。 -
MRI-三维重建动态测量颅脑创伤模型大鼠的空腔变化
背景：目前针对颅脑创伤后空腔的研究工作大多采用尸体标本或者针对实验动物取材后进行观察，无法实现动态评估空腔变化。
目的：探讨三维重建在颅脑创伤预后评估中的应用效果。
方法：取5只雄性SD大鼠，使用电子脑皮质挫伤撞击仪制备颅脑创伤模型，分别于造模后第1天、第1个月、第2个月和第3个月获取大鼠颅脑MRI扫描数据，应用Mimics16.0软件重建颅脑创伤后空腔三维模型，在Meshmixer软件中分析颅脑创伤后空腔变化情况。
结果与结论：①重建模型图像轮廓清晰，均能从不同侧面和视角进行颅脑创伤空腔的观察和测量；②颅脑创伤后不同时间点的空腔体积及空腔表面积，除了第2个月与第3个月差异无显著性意义外(P>0.05)，其他各个时间点之间两两比较差异均有显著性意义；③空腔变化结果提示，颅脑创伤后第3个月空腔形状逐渐规则；④基于MRI扫描数据，结合三维重建软件Mimics与模型分析软件Meshmixer，可方便、快捷地获取空腔模型，为动态评估颅脑创伤后空腔变化提供一种直观的方法。 -
急性马尾神经压迫模型的脊髓组织病理变化
背景：动物实验发现，压迫马尾神经可导致腰骶段脊髓前角运动神经元发生凋亡。
目的：观察急性马尾神经压迫后家犬相应脊髓节段组织的病理变化。
方法：将27只犬随机分为9组，每组3组，其中1组为正常对照，7个实验组在L6椎板下硬膜外脂肪上方置入空水囊，进行注水压迫，压迫时间分别设置为4，8，12，24，48，72，168 h；假手术组只置入空水囊，不进行注水压迫。达到压迫时间后，取马尾神经发出段脊髓及相邻头端脊髓，进行组织病理学检查。
结果与结论：①光镜观察结果：压迫4-48 h，脊髓前角前运动神经元未见明显改变；压迫72 h后，观察到运动神经元体积减小，细胞膜皱缩，与周围组织分离，细胞均质浓染；压迫168 h可见运动神经元消失，但相邻头端脊髓切片未见脊髓前角运动神经元形态异常；②电镜观察结果：压迫12 h，脊髓组织开始肿胀，随压迫时间的延长，脊髓组织肿胀加重，胶质细胞肿胀明显，至168 h时髓鞘板层结构溶解，轴突空泡化，轴浆外溢，有炎性损伤特征样改变；③前角运动神经元凋亡检测结果：压迫12 h开始出现凋亡，随后逐渐增多，至168 h仍呈增高趋势。 -
舒芬太尼预处理对脊髓损伤模型小鼠的神经保护
背景：舒芬太尼具有组织保护作用，但对神经系统损伤的修复作用及可能机制的报道甚少。
目的：探讨舒芬太尼预处理对脊髓损伤的保护作用及可能机制。
方法：通过脊髓钳夹损伤法建立脊髓损伤模型小鼠，腹腔注射舒芬太尼6，3μg/kg预处理干预。
结果与结论：①Western blot、酶联免疫吸附法、TUNEL检测结果：舒芬太尼6μg/kg预处理可以显著抑制小鼠脊髓组织TLR4、核因子κBp65以及cleaved-caspase-3蛋白的表达(P<0.05)，并显著抑制脊髓组织炎性因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β蛋白的表达(P<0.05)，显著减轻脊髓组织中神经元的凋亡(P<0.05)；②神经功能：舒芬太尼6μg/kg预处理可以显著改善脊髓损伤后第14天的神经功能评分(P<0.05)。③结果证实：舒芬太尼6μg/kg预处理对脊髓损伤小鼠可以发挥显著的神经保护作用，其机制可能与抑制TLR4/核因子κB信号通路相关。 -
羰基硫对肢体缺血再灌注致急性肺损伤大鼠模型的作用
背景：前期研究发现，内源性气体信号分子如NO、CO、H2S及二氧化硫在急性肺损伤中发挥着重要作用，还有其他的气体参与，如羰基硫。
目的：探讨外源性小剂量羰基硫对肢体缺血再灌注所致大鼠急性肺损伤的作用及其机制。
方法：将64只SD大鼠随机分为8组，对照组不做处理；模型组制作肢体缺血4 h再灌注2 h损伤模型；低、中、高剂量羰基硫组分别于制作肢体缺血4 h再灌注2 h损伤模型前20 min腹腔注射0.2，0.5，1 mL羰基硫；低、中、高剂量空气组分别于制作肢体缺血4 h再灌注2 h损伤模型前20 min腹腔注射0.4，1，2 mL空气。再灌注2 h后，观察肺组织形态学及肺系数改变，应用ELISA技术检测肺组织和血清中肿瘤坏死因子α、自细胞介素1β、自细胞介素6表达，应用TUNEL技术检测细胞凋亡。
结果与结论：①与对照组比较，模型组肺组织出现明显损伤性变化，肺系数明显增大(P<0.05)，肺组织及血浆中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6含量增加(P<0.05)，凋亡率增加；②与模型组比较，低、中、高剂量羰基硫可减轻肺组织损伤程度，降低肺系数及凋亡率，以低剂量效果明显；低、中剂量羰基硫可显著降低肺组织及血浆中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6含量(P<0.05)；③低、中、高剂量空气组各指标与模型组相比均无明显变化；④结果表明，外源性小剂量羰基硫可通过抗炎、抗氧化发挥其改善肢体缺血再灌注损伤所致急性肺损伤的作用。 -
运动性心肌缺血损伤模型大鼠的制备
背景：运动性心肌缺血动物模型的建立没有统一的标准，导致研究结果的不可比性，影响了运动医学特别是运动心血管领域研究的推进，所以建立统一的运动性心肌缺血动物模型势在必行。
目的：探索建立跑台运动性心肌缺血损伤大鼠模型的方法。
方法：96只SD雌性大鼠被随机分为安静对照组、异丙肾上腺素药物模型组和10个运动组(中强度力竭运动1，3次组、中强度力竭运动1，2，3周组、高强度力竭运动1，3次组、高强度力竭运动1，2，3周组)，取各组心肌组织进行苏木精-伊红染色病理分析，检测血清心肌酶指标和肌钙蛋白I水平， RT-PCR检测bcl-2和bax基因表达。
结果与结论：①心肌苏木精-伊红染色检测结果：随着运动时间的延长损伤程度越来越严重，且高强度运动组比中强度运动组损伤程度更严重；②血清心肌酶指标和肌钙蛋白I水平：中强度力竭运动自1周开始，血清谷草转氨酶与乳酸脱氢酶活性出现显著性升高(P<0.05或P<0.01)，高强度力竭性运动训练3次开始，谷草转氨酶与乳酸脱氢酶活性显著性升高(P<0.05或P<0.01)。各组肌钙蛋白I含量的变化趋势与谷草转氨酶、乳酸脱氢酶活性变化基本相同，但中强度力竭运动需2周肌钙蛋白I含量才比安静对照组显著升高；③细胞凋亡调控基因表达：各运动组bcl-2/bax比值均显著性低于安静对照组(P<0.05或P<0.01)，高强度1次组(P<0.01)和3次组(P<0.05)明显高于异丙肾上腺素药物模型组，中强度各组均高于异丙肾上腺素药物模型组(P<0.05或P<0.01)；④结果表明，中强度跑台力竭运动3周开始、高强度跑台力竭运动2周开始的运动模型都可作为运动性心肌缺血损伤模型，病理分析、心肌血清酶谱、肌钙蛋白I可作为建立运动性心肌缺血损伤模型的评估指标，细胞凋亡调控基因只可作为参考指标。 -
短时高强度间歇运动训练心肌梗死模型大鼠心室重构及线粒体变化
背景：短期高强度间歇运动训练是否能改善心肌梗死后心脏功能及其相关作用机制尚不清楚。
目的：观察高强度间歇运动训练对心肌梗死后心脏功能及线粒体含量的影响，并探讨线粒体自噬和生物合成在其中的生物效应。
方法：选取雄性SD大鼠制备急性心肌梗死模型，术后1周进行高强度间歇运动训练，训练方案为：以80%大摄氧量快速跑4 min，间歇以40%大摄氧量慢速跑3 min，重复7个循环，5 d/周，共4周。
结果与结论：4周高强度间歇运动训练显著提高急性心肌梗死后左心室泵功能和线粒体含量，增加线粒体膜电位和ATP合成活力，抑制线粒体活性氧产生，上调PGC-1α/Tfam介导的线粒体生物合成和Bnip3/Beclin-1介导线粒体自噬。结果表明短期高强度间歇运动训练即可提高急性心肌梗死后心肌健康线粒体含量，从而改善心肌能量代谢和舒缩功能，是一种时效性较强的心脏康复手段。 -
实验性猕猴2型糖尿病模型的建立及评价
背景：目前国内外关于2型糖尿病的非人灵长类动物模型研究报道很少，缺乏标准化制作方法和评价标准。
目的：建立一种安全、有效的猕猴2型糖尿病模型及评价方法。
方法：将12只猕猴随机分为实验组(n=9)与对照组(n=3)，实验组高糖高脂饮食喂养4周后，一次性腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素，建立2型糖尿病模型；对照组注射等量生理盐水。注射第12周，采集外周血血清，测定空腹血糖、血脂、胰岛素、C-肽水平，通过静脉葡萄糖耐量试验、C-肽释放试验检测胰腺胰岛功能，取胰腺、肾脏、肝脏组织行病理组织学检查。
结果与结论：①注射第12周时，实验组空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇均显著高于对照组(P<0.05)， C-肽及胰岛素显著低于对照组(P<0.05)；②实验组静脉葡萄糖耐量试验曲线下面积较对照组增大(P<0.05)，C-肽释放试验曲线下面积明显减小(P<0.05)；③实验组胰腺、肝脏、肾脏组织切片显示均发生了典型糖尿病病理改变；④因此认为高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素诱导猕猴2型糖尿病模型成功，是一种简单安全、有效的方法。 -
犬脊柱化脓性感染模型的建立
背景：脊柱感染模型在文献中鲜有报道，对脊柱感染动物模型的影像学及组织学观察报道就更少。
目的：建立一种新型的犬脊柱化脓性感染模型。
方法：取中国杂种家犬12只。动物取右侧卧位，手术入路选择腹膜后入路，手术暴露动物脊柱T12/L1椎间隙，将暴露椎间隙的椎间盘部分切除，用刮匙破坏椎间隙相邻的上下节段椎体终板，然后将含有不同浓度的金黄色葡萄球菌的悬浮液和硬化剂鱼肝油酸钠注射入犬的脊柱椎间隙。切除部分椎间盘并破坏椎体终板的目的是使椎体骨组织更好的与细菌相接触。对动物脊柱L5/6间隙完成同样操作。动物在术后14 d处死，感染的椎间盘及其相邻椎体取出，对取出标本的细菌含量进行定量测定。处死时取部分肝脏组织和抽血进行细菌培养，观测是否有全身系统性感染的发生。
结果与结论：①成功的应用金黄色葡萄球菌浓度为102 CFU/mL的细菌悬浮液在90%(9/10)的接种部位中诱导出脊柱感染。肝脏组织及血液培养结果均呈阴性，排除了全身系统性感染的可能；②接种细菌浓度高于103 CFU/mL的4只动物中有2只在术后3 d内死亡；③结果提示，成功建立了一种新型犬脊柱化脓性感染模型，这种模型可以广泛地应用于验证不同抗感染治疗方法的疗效。 -
2型糖尿病大鼠骨质疏松模型的建立
背景：目前认为长期高血糖、降糖药物的使用、饮食控制、雌激素、胰岛素样生长因子、瘦素、体质量、性别、年龄等因素可能在糖尿病发生骨质疏松的病理生理过程中起着重要作用。
目的：建立2型糖尿病骨质疏松模型，探讨2型糖尿病对骨代谢的影响。
方法：雄性SD大鼠采用高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型为糖尿病组；对照组予相同剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液一次性左下腹腔注射作为正常对照组。成模4周后，糖尿病组7只，正常对照组13只进入结果分析。采用双能X射线检测大鼠骨密度，检测血清空腹血糖、胆固醇、三酰甘油、血钙、血磷、碱性磷酸酶、空腹胰岛素、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C末端肽，观察骨形态学变化。
结果与结论：与正常对照组比较，①糖尿病组大鼠体质量下降、空腹血糖明显升高(P<0.05)，并呈持续状态；②糖尿病组大鼠血胆固醇、三酰甘油、空腹胰岛素、碱性磷酸酶、胰岛素抵抗指数明显升高，而胰岛素敏感指数下降(P<0.05)；③糖尿病组血清磷、血钙、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C末端肽，差异无显著性意义(P>0.05)；④苏木精-伊红染色显示糖尿病组大鼠骨小梁稀疏，数量减少，间隙增大，小梁变细，连续性破坏，常见游离断增多；⑤糖尿病组全身骨密度、腰椎+双股骨+盆骨骨密度，胸腰椎骨密度均明显下降(P<0.05)。⑥结果说明，高糖高脂喂养5周基础上联合小剂量链脲佐菌素(35 mg/kg)可以诱导2型糖尿病大鼠模型。该模型具有高糖、高脂、胰岛素抵抗及骨密度下降，骨形态学检查呈骨吸收增加改变的特点。 -
过表达Brahma-相关基因1腺病毒载体对氧化应激诱导心肌细胞凋亡的影响
背景：Brahma-相关基因1是调节染色质重构的重要核蛋白，在糖尿病心肌病中表达降低。
目的：构建大鼠Brahma-相关基因1重组腺病毒载体，评价其在氧化应激诱导原代心肌细胞凋亡中的保护作用。
方法：构建Brahma-相关基因1重组腺病毒载体质粒，经人胚肾293T细胞包装、扩增、计算滴度后，将Brahma-相关基因1重组腺病毒转染入SD乳鼠原代培养心肌细胞，以空载体EGFP转染细胞及正常细胞作为对照，24 h后，荧光显微镜观察转染效率；荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞Brahma-相关基因1mRNA、蛋白表达；24 h后，分别加入100μmol/L H2O2处理12 h，免疫印迹法检测Brahma-相关基因1蛋白表达、凋亡标志物cleaved-Caspase3表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
结果与结论：①构建的重组腺病毒成功转染至心肌细胞，转染效率达90%以上，被转染细胞的Brahma-相关基因1 mRNA、蛋白表达明显增高；②H2O2可显著抑制心肌细胞Brahma-相关基因1表达，诱导心肌细胞凋亡，刺激心肌细胞cleaved-Caspase3表达；Brahma-相关基因1重组腺病毒可减轻由H2O2导致的上述心肌细胞损伤；③结果表明，氧化应激能直接抑制心肌细胞Brahma-相关基因1表达， Brahma-相关基因1在氧化应激诱导的心肌细胞凋亡中发挥保护作用。 -
阳离子化牛血清白蛋白诱导膜性肾病模型大鼠足细胞相关蛋白的表达
背景：膜性肾病动物模型可模拟人类膜性肾病的发病机制，对疾病的研究具有重要意义。
目的：观察膜性肾病模型大鼠足细胞相关蛋白nephrin、podocin的表达，以探讨其与膜性肾病发病的关系。
方法：将40只SD大鼠随机分为模型组和对照组，每组20只。模型组取阳离子化牛血清白蛋白1 mg溶解于0.5 mL生理盐水中与等量不完全弗氏佐剂充分乳化后在颈背部皮下多点注射预免疫1周后正式免疫，尾静脉给予阳离子化牛血清白蛋白16 mg/kg，隔日1次，持续4周。对照组尾静脉注射等体积生理盐水。造模后第2，4周进行生化指标检测和病理学检查，RT-PCR法检测肾组织中nephrin和podocin mRNA的表达。
结果与结论：①模型组24 h尿液总量明显减少，且出现了明显的蛋白尿，血清肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油水平显著升高，血清白蛋白水平显著降低，与对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)，且随着病变继续发展，病情加重；②病理检测发现模型组有不同程度肾小管扩张，肾小球基底膜增厚，系膜细胞及基质增生，呈典型的膜性肾炎改变；③模型组大鼠肾组织nephrin和podocin mRNA表达量低于对照组；④结果表明，nephrin、podocin表达减少可能使足细胞裂孔膜结构的完整性受损，肾小球滤过屏障破坏，导致蛋白尿。 -
胡椒碱对牙周炎模型牙槽骨和胶原的保护
背景：胡椒碱在胰腺炎模型、痛风模型、大脑中动脉梗死模型中具有抗炎、抗氧化以及免疫调节作用，但其对牙周炎模型的作用效果目前尚未清楚。
目的：观察胡椒碱对实验性大鼠牙周炎模型骨吸收和胶原降解的保护作用。
方法：采用3-0的手术丝线结扎大鼠下颌第一磨牙牙颈部建立牙周炎模型，在建模前1d分别灌胃胡椒碱50，100 mg/kg，并设健康对照组和模型组作对比，建模后8周进行相关检测。
结果与结论：①CT定量分析结果：与健康对照组相比，模型组的第一磨牙釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离明显降低(P<0.05)，胡椒碱50，100 mg/kg组牙槽骨破坏程度较模型组明显改善(P<0.05)；②相关因子蛋白表达：与模型组相比，胡椒碱100 mg/kg组基质金属蛋白酶8，13和白细胞介素1β蛋白表达明显下调(P<0.05)，胡椒碱50 mg/kg组基质金属蛋白酶8蛋白表达明显下调(P<0.05)；③胶原纤维染色形态：与模型组相比，胡椒碱50，100 mg/kg组的胶原纤维排列较为整齐，胶原纤维面积明显增加(P<0.05)；④结果证实：胡椒碱能降低牙周炎模型牙槽骨吸收程度，减轻胶原纤维的降解，保护牙周组织，其机制与抑制基质金属蛋白酶8，13和白细胞介素1β蛋白表达有关。 -
人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建
背景：多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量，进而影响多巴胺能神经递质的作用，导致相关疾病的发生。
目的：通过克隆人DRD1基因的启动子区，构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性，为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。
方法：以人静脉血基因组DNA为模板，通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pGM-T载体，测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic，构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体，采用阳离子脂质体法与内对照质粒pGL3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pGL3-Basic载体与内对照质粒pGL3-TK共转染作为阴性对照组，化学发光仪检测相对荧光强度。
结果与结论：①通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确；②与阴性对照组相比，该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性；③成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体，为研究该基因的转录调控提供了基础工具。 -
非酒精性脂肪肝C57BL/6小鼠模型的建立
背景：建立安全可靠、容易重复的非酒精性脂肪肝小鼠模型是研究该病诊治方案的前提条件。
目的：建立C57BL/6非酒精性脂肪性肝病小鼠模型并观察其生化指标的变化特点，为其发病机制及药物治疗提供理论依据。
方法选用健康雄性C57BL/6小鼠60只，随机分组，对照组30只采用普通饲料喂养，模型组30只采用高脂饲料喂养，建立非酒精性脂肪肝模型。在第8周进行体质量、肝指数、肝组织匀浆超氧化物歧化酶活性检测，观察血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇等生化指标变化，并进行病理学检查。
结果与结论：①病理切片示，模型组小鼠肝组织见大油滴和微小脂滴，并散布全肝，肝细胞肿胀，胞质易见脂肪空泡，肝细胞明显炎性改变；②模型组小鼠体质量和肝指数明显高于对照组小鼠，差异有显著性意义(P<0.05)；但肝组织匀浆超氧化物歧化酶活性明显降低，差异有显著性意义(P<0.05)；③与对照组小鼠相比，模型组小鼠血脂指标中三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均有明显增高，但高密度脂蛋白胆固醇明显减低，差异有显著性意义(P<0.05)；④结果提示通过高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠模型是理想的动物模型，方法简单，重复性强，可为非酒精性脂肪肝的机制研究及药物治疗提供稳定的动物模型。
