脂肪干细胞诱导分化的现状及前景

背景：脂肪干细胞是由中胚层发育而来的多能干细胞，在特殊的生长因子和环境等诱导培养条件下，可以向不同的谱系分化。目的：详细阐述脂肪干细胞诱导分化的条件及鉴定方法。方法：应用计算机检索万方数据库及PubMed数据库2005至2014年10年间的文献，中文检索词为“脂肪干细胞，诱导，分化”；英文检索词为“adipose derived stem cels，differentiation”。依据纳入排除标准选择37篇文献进行归纳总结。结果与结论：脂肪干细胞在抗坏血酸、胰岛素、地塞米松、转化生长因子β作用下可向软骨细胞分化；成脂诱导液的配方包括3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素、地塞米松、吲哚美辛；成骨分化常用的诱导剂包含地塞米松或维生素 D3、抗坏血酸，β-甘油磷酸钠；碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及维生素B27可联合应用诱导脂肪干细胞成神经分化；向心肌细胞分化普遍应用的诱导因子是5-氮杂胞苷；血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子共同作用可以诱导脂肪干细胞向血管内皮细胞分化。随着分子生物学和细胞生物学的迅速发展，脂肪干细胞的分化研究也会更加深入，在目前对脂肪干细胞诱导分化现象观察的基础上，应加强对其内在的分子机制及调控脂肪干细胞可塑性的基因和蛋白的研究。

干细胞标志分子LGR5研究：肿瘤治疗新靶点

背景：近期研究表明，肿瘤干细胞在肿瘤的发生发展中起关键性作用，因此对其标记分子的研究必将对肿瘤发生发展的了解及肿瘤的临床诊断、治疗都带来深远的影响。目的：综述干细胞标志分子LGR5在干细胞和肿瘤干细胞中的研究进展。方法：由第一作者在PubMed数据库及万方数据库中检索1998年1月至2014年12月有关LGR5与干细胞/肿瘤干细胞研究的相关文献。英文检索词为“LGR5, stem cel, cancer stem cels”，中文关键词为“LGR5，干细胞，肿瘤干细胞”。计算机初检得到178篇文献，阅读标题和摘要进行初筛，排除与研究目的相关性差及内容陈旧、重复的文献123篇，纳入55篇符合标准的文献。结果与结论：LGR5是肠道、胃、毛囊等干细胞的表面标志分子，并与结直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、基底细胞癌等多种肿瘤的发生发展预后密切相关，是肿瘤干细胞的候选标志分子，有望成为肿瘤治疗的新靶点。研究发现R-spondins(RSPOs)是LGR5的高亲和力配体，二者相结合参与 Wnt信号通路，调节细胞增殖分化。

造血干细胞移植：受者的心理特点及心理支持

背景：造血干细胞移植是治疗各类白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的主要手段，移植过程存在着许多影响治疗效果的负性因素，对于患者能够顺利完成造血干细胞移植有着重要的影响。目的：分析造血干细胞移植患者心理特点，重点评价心理干预实施效果。方法：2012年1月至2013年12月造血干细胞移植中心共收治患者92例，多数患者均实施过自体外周血干细胞移植，接受异体干细胞移植55例，其中同胞48例，非血缘外周血造血干细胞移植7例，部分行骨髓抑制或复合移植。针对移植过程中不同阶段负性因素的特点，实施心理支持、并发症预防观察与处理、全环境保护方案等干预措施。结果与结论：所有患者造血干细胞移植均获得成功，遵医行为良好，未出现心理应激、情绪失控、破坏物品等不良事件，服药依从性、饮食依从性、作息依从性均良好。2012年与2013年并发症发生率、不良事件发生率、患者满意率差异无显著性意义(P >0.05)。由于造血干细胞移植具有较强的特殊性，患者需要严格的治疗路径，留置层流病房较长，行为严重受限，承受较大的心理、生理负担，应严格落实无菌标准，加强病区管理，做好患者指导、支持工作，减少移植并发症发生，使移植能够顺利完成。

碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞移植治疗肺动脉高压

背景：目前正在兴起的干细胞治疗技术及基因修饰技术有可能在肺动脉高压治疗中获得独特疗效。目的：探讨携带碱性成纤维细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植对肺动脉高压大鼠血流动力学水平的影响。方法：选择3周龄 SD雄性大鼠，于体外进行骨髓间充质干细胞培养及纯化，在腺病毒介导下实施基因转染，使碱性成纤维细胞生长因子基因成功导入骨髓间充质干细胞。将60只SD大鼠给予野百合碱腹腔注射(50 mg/kg)进行肺动脉高压模型复制，随机分成3组，其中肺动脉高压组于颈内静脉移植1 mL的L-DMEM培养基，骨髓间充质干细胞组于颈内静脉移植1 mL空腺病毒载体转染的骨髓间充质干细胞悬液，碱性成纤维细胞生长因子组于颈内静脉移植1 mL腺病毒介导下碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞悬液。结果与结论：经3周治疗后，各组大鼠动脉血压差异无显著性意义(P>0.05)；其中碱性成纤维细胞生长因子组大鼠的肺动脉收缩期压力和平均肺动脉压明显低于肺动脉高压组、骨髓间充质干细胞组，差异有显著性意义(P <0.05)；各组大鼠右心室的肥大指数比较差异无显著性意义(P>0.05)；碱性成纤维细胞生长因子组大鼠血浆内皮素1水平明显低于肺动脉高压组、骨髓间充质干细胞组，差异有显著性意义(P <0.05)。结果显示携带碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞移植，能够改善肺动脉高压大鼠肺血管的血流动力学水平，保护机体血管的内皮细胞，并拮抗血管的收缩。

骨髓间充质干细胞移植治疗肢体缺血的机制

背景：骨髓间充质干细胞移植治疗下肢缺血疾病已取得较好的效果，但其作用机制尚无定论。目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗SD大鼠后肢缺血的机制。方法：结扎肾动脉下腹主动脉、腰动脉和髂腰动脉制备雌性SD大鼠后肢缺血模型。将扩增、纯化的雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞注射入大鼠缺血的右后肢股直肌中，对照组右后肢注射等量生理盐水。移植后2，4，6周，制备大鼠右股直肌切片行苏木精-伊红染色、血管内皮生长因子免疫组织化学染色、SRY基因免疫组织化学染色。结果与结论：移植后2，4，6周移植组右股直肌毛细血管计数、血管内皮生长因子免疫组织化学染色阳性细胞计数均明显高于对照组(P <0.01)。移植组股直肌切片中SRY免疫组织化学染色阳性细胞出现于毛细血管壁，并散在分布于肌组织中。结果表明局部注射移植骨髓间充质干细胞能促进缺血组织迅速生成大量毛细血管，改善大鼠缺血下肢的血供。骨髓间充质干细胞作为旁分泌细胞，通过增加血管内皮生长因子的分泌，促使大鼠缺血肢体的血管新生。

携带人端粒酶反转录酶基因脐血间充质干细胞移植治疗肺动脉高压

背景：保护机体肺血管的内皮细胞，是降低肺循环压力，预防肺动脉高压的重要环节。目的：观察携带人端粒酶反转录酶基因的脐血间充质干细胞移植对大鼠肺动脉高压的治疗作用。方法：体外进行脐血间充质干细胞的培养及纯化，在腺病毒介导下使人端粒酶反转录酶基因成功导入脐血间充质干细胞。将60只SD大鼠随机分成3组：肺动脉高压组、空腺病毒组、腺病毒转染组，每组20只，腹腔注射野百合碱进行肺动脉高压模型复制后，于颈内静脉分别注射1 mL的伊戈尔低糖培养基(L-DBEB)，1 mL (1.5×1010 L-1)脐血间充质干细胞悬液，1 mL(1.5×1010 L-1)腺病毒介导下人端粒酶反转录酶基因转染的脐血间充质干细胞悬液。移植21 d后检测各组大鼠血流动力学水平、血浆内皮素1水平以及右心室的肥大指数。结果与结论：各组大鼠动脉血压差异无显著性意义(P >0.05)；与肺动脉高压组及空腺病毒组比较，腺病毒转染组大鼠肺动脉收缩期压力、平均肺动脉压均降低，差异有显著性意义(P <0.05)；腺病毒转染组大鼠右心室肥大指数与肺动脉高压组及空腺病毒组相比较，差异均无显著性意义(P >0.05)；腺病毒转染组大鼠血浆内皮素1水平明显低于肺动脉高压组及空腺病毒组，差异有显著性意义(P <0.05)。结果表明携带人端粒酶反转录酶基因的脐血间充质干细胞移植后，能够改善大鼠机体血流动力学异常状态，还可以保护机体血管内皮细胞。

人端粒酶反转录酶转染的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病

背景：人端粒酶反转录酶是调控增殖及定向分化的首选生长因子之一，具有多重生物学效应。目的：观察人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病的效果。方法：体外培养 SD 大鼠骨髓间充质干细胞，经反转录病毒 PLXSN 为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染骨髓间充质干细胞，在转染前后用RT-PCR检测骨髓间充质干细胞人端粒酶反转录酶基因的表达。60只雌性SD大鼠中随机取15只作为正常对照组，一次性注射生理盐水，余45只按45 mg/kg的剂量注射链脲霉素建立糖尿病模型后，随机分为3组，分别通过大鼠尾静脉注射移植人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞0.2 mL、骨髓间充质干细胞0.2 mL、生理盐水0.2 mL。结果与结论：转染48 h后发现，骨髓间充质干细胞有人端粒酶反转录酶mRNA的表达，且重点集中于胞核内。移植后14 d，糖尿病组大鼠空腹血糖维持在较高水平，且高于正常对照组(P<0.05)；与糖尿病组相比，各移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P <0.05)；与骨髓间充质干细胞移植组相比，人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P <0.05)，接近正常对照组水平(P >0.05)。结果提示人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植能有效治疗大鼠糖尿病。

骨髓间充质干细胞移植联合髓芯减压植骨修复股骨头坏死

背景：单独使用髓芯减压治疗股骨头坏死，易造成股骨头凹陷和内部显微结构的崩溃，因而需要自体骨等材料进行填充支撑，而骨髓干细胞移植能使股骨头塌陷的发生率降低。目的：观察髓芯减压植骨联合骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头坏死的临床效果。方法：选择2012年12月至2013年5月在沈阳医学院附属中心医院骨外四科住院的33例采用股骨头髓芯减压植骨联合骨髓间充质干细胞注入髓腔内治疗股骨头坏死患者。结果与结论：股骨头髓芯减压植骨联合骨髓间充质干细胞注入髓腔内治疗股骨头坏死后患者Harris髋关节功能评分增加，疼痛消失，能从事各种劳动；X射线片或CT检查显示股骨头正常30髋，占79%；疼痛明显减轻，行走基本正常或者轻微跛行15髋，占40%；行走间距延长35髋，占92%；髋关节功能障碍明显好转24髋，占63%。提示髓芯减压植骨联合骨髓间充质干细胞移植对改善股骨头缺血性坏死局部血供，促进坏死骨质吸收和骨质修复起到积极的作用。

HLA匹配角膜缘干细胞联合羊膜移植修复翼状胬肉

背景：HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉是眼科医生治疗的新理念，该方法治疗后并发症少、康复快、复发率低，尤其是能减少移植排斥反应等已被广泛接受。目的：探讨HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉疗效。方法：选取2013年3月1日至2014年4月30日行HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗的翼状胬肉患者47例(47眼)作为试验组；回顾性分析2010年3月1日至2012年12月1日采用单纯翼状胬肉切除方法治疗的翼状胬肉患者40例(47眼)作为对照组，对两组患者治愈和复发情况进行比较。结果与结论：试验组47例，全部顺利完成治疗，无并发症，其中1例切口感染，特殊对症治疗后均已好转出院，全部患者均无移植排斥反应。试验组治愈45眼，复发2眼，复发率为4.3%。对照组47眼中治愈32眼，复发15眼，复发率31.9%。结果表明HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉并发症少、复发率低，是治疗翼状胬肉一种行之有效的方法。

异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血

背景：近年来随着造血干细胞移植技术的提高和免疫抑制剂的使用，重型再生障碍性贫血的治疗效果有了明显改善，尤其是亲缘间HLA配型全相合异基因造血干细胞移植，取得了较高的治愈率。目的：观察异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的疗效。方法：自2009至2011年采用异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血患者20例，HLA配型全相合12例，不全相合8例。移植预处理采用氟达拉滨+兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白+环磷酰胺。除1例为非血缘外周血干细胞移植外，其他患者干细胞来源为动员后的骨髓和外周血干细胞联合移植。HLA全相合移植物抗宿主病预防采用环孢素联合短程甲氨蝶呤，不全相合患者采用环孢素、短程甲氨蝶呤联合吗替麦考酚酸酯。结果与结论：移植后中性粒细胞恢复>0.5×109 L-1平均为12.5 d，血小板恢复>20×109 L-1平均为+18 d。20例患者随访24-60个月，总生存率75%(15例)，治愈率70%(14例)，死亡5例；12例全相合患者中83%治愈(10例)，8例不全相合患者治疗有效率62%(5例)，治愈率50%(4例)。20例患者中发生急性及慢性移植物抗宿主病5例，治疗中并发败血症4例，侵袭性真菌感染3例。结果可见异基因干细胞移植是治疗重型再生障碍性贫血的有效方法之一，尤以HLA全相合效果良好，移植后恢复快，移植物抗宿主病发生率低。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植后血型转换期的输血策略

背景：造血干细胞移植是目前临床治愈血液系统恶性肿瘤、先天性遗传性疾病以及自身免疫性疾病的重要手段，ABO血型不合的异基因造血干细胞移植并不影响造血干细胞的植活，但 ABO血型不合在移植后血型转换期输血时应该制定何种输血策略值得研究。目的：研究ABO血型不合的异基因造血干细胞移植后血型转换期血型抗原抗体的变化及输血时血液的选择策略。方法：应用血型鉴定、抗体检测、抗体效价测定、交叉配血等方法，对24例ABO血型不合的异基因造血干细胞移植患者，在血型转换期进行血型抗原抗体的监测和输血前相容性检测，并与同期30例血型相合的异基因造血干细胞移植患者进行比较，选择适合的血液。结果与结论：24例 ABO血型不合患者于移植后全部获得造血重建，但在红系恢复时间上，主要血型不合组和主次要均不合组的时间均有延长，差异均有显著性意义(P <0.05)。根据血型转换期监测的ABO抗原和相应抗体发生的变化，主要ABO血型不合移植者在血型转换期均输注了患者型红细胞；次要血型不合者根据抗原减弱的情况，从输患者型过渡到输供者型红细胞；主次要均不合的患者，从首先输注O型洗涤红细胞再过渡到输注供者型红细胞，24例患者均未发生任何溶血性输血反应。因此 ABO血型不合的异基因造血干细胞移植后的输血策略，应根据患者血型转变情况及抗体效价动态变化，权衡所选血型对造血重建的影响，选择合适的血液成分输血，可避免溶血性输血反应且不影响干细胞植活及血型转换时间，保证患者移植安全。

自体骨髓间充质干细胞载体复合物修复骨缺损的组织学观察

背景：在骨缺损修复过程中，从修复质量、免疫排斥和疾病传播等多方面来衡量，自体骨都是佳的选择，但来源有限且取骨区可能产生并发症，给骨缺损的修补及自体骨移植临床应用带来了很大局限。目的：以含自体骨髓间充质干细胞脱钙骨载体复合支架材料植入骨缺损的同时，向植入处微环境内添加碱性成纤维细胞生长因子等因素，从而达到增强骨修复能力，改进修复效果的目的。方法：选择3月龄新西兰大耳白兔45只，建立双侧前臂桡骨中下段骨-骨膜缺损模型，然后将实验兔等分为3组：实验组、对照组和空白组，均于左侧髂骨和股骨转子处抽取骨髓，分离培养扩增骨髓间充质干细胞后，与不同材料体外复合，植入兔桡骨干10 mm缺损处。实验组兔缺损处植入骨髓间充质干细胞、脱钙骨、藻酸钙、碱性成纤维细胞生长因子、维生素 C；对照组兔缺损处植入骨髓间充质干细胞、脱钙骨、藻酸钙；空白组兔双侧缺损处均不植入任何材料，自然愈合。结果与结论：植入后30，60，90 d各组之间组织学检查新骨生成速度、生成量差异均有显著性意义。实验组兔缺损修复部位骨痂和移植物化骨及材料降解明显快于对照组和空白组；但对照组和空白组兔缺损修复部位残存物明显多于实验组。实验组兔骨缺损以多点方式直接成骨，对照组和空白组则从两端以“爬行替代”方式成骨。空白组兔自然愈合后90 d骨缺损均无愈合。说明植入体外培养移植物的同时向该植入微环境添加碱性成纤维细胞生长因子和维生素C等有利骨修复，提高骨损伤的愈合。

小鼠胚胎干细胞移植治疗骨质疏松症

背景：骨质疏松症的药物治疗效果不佳，干细胞移植治疗成为热点。目的：探讨胚胎干细胞移植治疗雌激素缺乏致骨质疏松症的疗效。方法：雌性健康C57BL/6小鼠30只，随机分为假手术组、模型组、治疗组，每组10只。建立卵巢摘除术后骨质疏松症模型，治疗组造模后1 d通过小鼠尾静脉注射胚胎干细胞，其他两组不进行任何干预。治疗10 h采用流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡程度，治疗后3 d运用ELISA测定小鼠血清肿瘤坏死因子α水平，治疗1个月利用micro-CT扫描检测小鼠股骨骨小梁数量和骨密度。结果与结论：模型组股骨骨小梁数量及骨密度较假手术组均有一定程度的降低，血清肿瘤坏死因子α水平较假手术组升高。通过尾静脉注射胚胎干细胞后，治疗组股骨骨小梁数量及骨体积分数有一定的提高，肿瘤坏死因子α表达水平降低，T淋巴细胞凋亡数量增多，与模型组相比差异有显著性意义(P <0.05)。说明胚胎干细胞治疗骨质疏松症有一定的效果，可能是通过其免疫调控能力发挥作用的。

慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响

背景：伊马替尼耐药是慢性髓细胞白血病治疗的一个主要问题，研究证实白血病细胞可通过与骨髓基质细胞黏附而获得耐药表型，但对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言，骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。目的：体外模拟慢性髓细胞白血病患者骨髓微环境，探讨其对伊马替尼敏感性的影响及可能机制。方法：分离、培养确诊但未经治疗的慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞，与白血病细胞株 K562细胞共培养构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型。MTT法检测0.2-3.2μmol/L伊马替尼作用48 h对K562细胞的增殖抑制率；将K562细胞暴露于0.5μmol/L伊马替尼72 h，流式细胞术检测K562细胞凋亡率及CXCR4表达。将0.5μmol/L伊马替尼作用4 h并以Calcein-AM荧光标记的K562细胞接种于基质细胞层培养24 h，去除悬浮细胞，收集黏附的K452细胞通过检测荧光强度计算细胞黏附率。结果与结论：慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞与K562细胞共培养减弱了0.2-3.2μmol/L伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用；0.5μmol/L伊马替尼处理72 h，共培养组K562细胞凋亡率显著低于悬浮组(P=0.020)。悬浮组和共培养组伊马替尼作用后K562细胞CXCR4表达阳性率均显著高于作用前(P=0.001)。0.5μmol/L伊马替尼作用4 h使K562细胞与骨髓基质细胞的黏附率由(32.18±6.17)%提升至(68.97±11.08)%，差异有显著性意义(P=0.022)。结果表明慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养，能介导对伊马替尼耐药，可能与共培养及伊马替尼诱导K562细胞CXCR4的表达有关，但更多的机制还需深入研究。

骨形态发生蛋白7腺病毒基因转染对骨髓基质干细胞生物学功能的影响

背景：基因转染技术正积极地应用于组织再生治疗之中，研究表明骨形态发生蛋白7具有骨诱导特性，可以有效促进成骨细胞的发育以及新骨的形成。目的：探讨骨形态发生蛋白7腺病毒基因转染对骨髓基质干细胞生物学功能的影响。方法：分离、培养羊骨髓基质干细胞，利用重组骨形态发生蛋白7腺病毒(adenovirus bone morphogenetic protein 7，Adeno-BMP7)对第2代骨髓基质干细胞进行基因转染，透射电镜观察转染后细胞超微结构。流式细胞仪检测转染后的细胞周期，Western blot检测骨形态发生蛋白7的表达，Von Kossa染色观察钙结节形态情况。取转染后第3天及相应未转染的骨髓基质干细胞制备珊瑚-细胞复合物，于裸鼠脊柱两侧背部皮下注射4周和8周后进行大体观察和组织学检测。结果与结论：体外细胞超微结构观察可见Adeno-BMP7基因转染骨髓基质干细胞存在活跃的物质合成代谢；流式细胞仪检测发现转染不会对骨髓基质干细胞的细胞周期产生明显影响；Western blot检测转染后的骨髓基质干细胞存在骨形态发生蛋白7蛋白的表达；Von Kossa染色可见转染Adeno-BMP7后的骨髓基质干细胞形成较大的钙结节。经裸鼠皮下回植实验发现，Adeno-BMP7转染后骨髓基质干细胞的成骨能力和成骨质量明显提高。以上结果表明经Adeno-BMP7转染可以有效促进骨髓基质干细胞成骨分化。

基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞迁移及皮肤创伤修复的影响

背景：基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞具有强烈的趋化作用，且基质细胞衍生因子1与骨髓间充质干细胞均能促进组织创伤愈合，然而有关两者与皮肤创伤愈合的研究文献报道较少。目的：观察基质细胞衍生因子1在皮肤创伤修复过程中对骨髓间充质干细胞定向迁移及皮肤创面愈合的影响。方法：选取30只SD大鼠随机分为5组，各组大鼠尾静脉注射PKH26标记的骨髓间充质干细胞，注射1周后于背部制作皮肤创伤模型，造模后于皮肤创伤处多点注射不同质量浓度的基质细胞衍生因子1(1，2，10，50μg/L)。注射14 d后观察并记录大鼠皮肤愈合情况，免疫荧光染色观察创面组织骨髓间充质干细胞数量、分布情况，苏木精-伊红染色观察创面组织病理变化，Western blot检测创面组织Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原蛋白表达情况。结果与结论：当基质细胞衍生因子1质量浓度为10μg/L时，骨髓间充质干细胞在皮肤创面的数量多，创伤修复效果好。同样基质细胞衍生因子1能够调节Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原在创面的表达，基质细胞衍生因子1质量浓度为10μg/L时，Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原表达高。结果表明适宜质量浓度的基质细胞衍生因子1(10μg/L)能够更好地促进骨髓间充质干细胞迁移，从而促进皮肤创伤愈合。

定向诱导骨关节炎患者骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景：近年来有关影响软骨和软骨下骨组织再生的炎症因子、生长因子以及力学负荷已有许多报道，但对骨关节炎整体发生机制还欠缺全面地了解。目的：探讨骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展的相关性。方法：抽取股骨颈骨折患者、轻度及重度骨性关节患者股骨骨髓，贴壁法分离培养出骨髓间充质干细胞，采用CCK-8法检测各组患者骨髓间充质干细胞的增殖能力，取第3代骨髓间充质干细胞成软骨诱导培养2周后进行甲苯胺蓝染色。结果与结论：从各组患者骨髓中均培养出骨髓间充质干细胞，对照组细胞的增殖能力明显高于轻度骨性关节炎组、重度骨性关节炎组；成软骨诱导分化后骨髓间充质干细胞形态发生明显改变，由长梭形逐渐变为类圆形或多角形，核浆比例明显减小，诱导细胞甲苯胺蓝染色阳性。重度骨性关节炎组诱导出的软骨细胞的数量少于对照组，但细胞形态差异不大。结果表明骨性关节炎的发生与自身的骨髓间质干细胞的功能形态呈现负相关趋势。

BACKGROUND: Core decompression alone for osteonecrosis of femoral head easily causes fovea of femoral head and colapse of inner microstructure. Therefore, autologous bone is needed for filing and supporting. Moreover, bone marrow stem cel transplantation can decrease the incidence of femoral head colapse. OBJECTIVE:To discuss the clinical effects of core decompression and bone grafting combined with autotransplantation of bone marrow mesenchymal stem cels for osteonecrosis of femoral head. METHODS: A total of 33 patients were treated by core decompression and bone grafting combined with autotransplantation of bone marrow mesenchymal stem cels in the Fourth Department of Bone Surgery, Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical Colege in China from December 2012 to May 2013. RESULTS AND CONCLUSION:After the treatment by core decompression and bone grafting combined with autotransplantation of bone marrow mesenchymal stem cels, Harris hip function score increased and pain disappeared in patients with osteonecrosis of femoral head. They could do various labors. Radiographs or CT examination displayed normal femoral head in 30 hips, accounting for 79%. Pain significantly reduced. Normal or slight limp walking was found in 15 hips, accounting for 40%. There were 35 hips in patients, whose walking distance was extended, accounting for 92%. 24 hips dysfunction was improved markedly, accounting for 63%. Al results suggested that core decompression and bone grafting combined with autotransplantation of bone marrow mesenchymal stem cels improved the local blood supply of femoral head, and played a positive role in promoting the necrotic bone absorption and bone repairing.

P2X7受体对牙周膜干细胞成骨分化的作用

背景：研究影响牙周膜干细胞成骨分化的相关离子通道。目的：初步观察P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法：分离培养人牙周膜干细胞，分为4组，分别添加成骨诱导液和100 nmol/L三磷酸腺苷、成骨诱导液、100 nmol/L三磷酸腺苷及普通培养基培养，于成骨诱导7，14 d，利用茜素红染色检测成骨效果，qRT-PCR， Western blot检测OCN、Runx2以及P2X7受体的表达。结果与结论：茜素红染色显示成骨诱导液+三磷酸腺苷组牙周膜干细胞的成骨效果在7 d时显著好于成骨诱导液组，但在14 d时成骨诱导液组成骨效果显著好于成骨诱导液+三磷酸腺苷组(P <0.05)；在成骨诱导7 d时， qRT-PCR结果显示成骨诱导液+三磷酸腺苷组Runx2，OCN mRNA的表达达到峰值，而14 d时明显降低(P <0.05)。成骨诱导7 d时，成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体mRNA的表达量明显高于三磷酸腺苷组(P <0.05)，成骨诱导液组和对照组未见P2X7受体mRNA的表达，成骨诱导14 d时，成骨诱导液+三磷酸腺苷组表达量下降，明显低于三磷酸腺苷组，差异有显著性意义(P <0.05)。Western blot结果显示，成骨诱导7 d时，成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达达到峰值，高于三磷酸腺苷组，而成骨诱导液组表达量低，对照组几乎没有表达；成骨诱导14 d时，成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时明显下降，而三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时有所增加。结果表明外源性三磷酸腺苷可在牙周膜干细胞成骨诱导前7 d明显提高成骨效果，但在7 d后，抑制成骨诱导效果，三磷酸腺苷可以激活牙周膜干细胞P2X7受体表达，且P2X7受体的表达与牙周膜干细胞的成骨效果正相关。

人诱导性多潜能干细胞系的建立

背景：诱导性多潜能干细胞与肿瘤干细胞的发生过程极其相似，而且具有的干细胞特性极其接近人胚胎干细胞。因此，研究诱导性多潜能干细胞有利于人们进一步认识并了解人类发育以及肿瘤的发生过程。目的：掌握建立人诱导性多潜能干细胞系的技术，以便为特异性疾病细胞的重编程建立技术平台，从而利用重编程技术研究疾病的发病机制。方法：将含有Oct4、Sox2、Klf-4和c-Myc 4个转录因子的反转录病毒感染人皮肤成纤维细胞(HS27细胞)，在人胚胎干细胞培养条件下诱导产生人胚胎干细胞样的克隆。挑取并进一步扩增，通过克隆形态、碱性磷酸酶活性、免疫荧光检测是否有人胚胎干细胞标记物Oct4、Sox2、c-Myc、Klf-4的表达，悬滴法检测HS27细胞来源的克隆形成畸胎瘤的能力和验证向3个胚层的分化能力。结果与结论：经病毒感染诱导产生的胚胎干细胞样克隆呈绿色荧光蛋白阴性，克隆在细胞形态方面与人胚胎干细胞克隆相似，进一步扩增经碱性磷酸酶检测克隆呈阳性，免疫荧光检测克隆表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf-4，并且 HS27细胞来源的克隆注入免疫缺陷小鼠体内可以形成畸胎瘤并经苏木精-伊红染色显示具有向三胚层分化能力。实验成功构建了人诱导性多潜能干细胞系，为下一步开展疾病细胞特异性重编程研究奠定了良好的实验基础。

糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化及凋亡的影响

背景：缺氧作为神经系统疾病发展过程中诸多病理因素中常见的因素之一，对于内源性神经干细胞以及移植后外源性神经干细胞的存活、迁移、分化、凋亡发挥着诸多调控作用。目的：系统观察糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化、凋亡的影响。方法：从新生鼠嗅球分离培养出神经干细胞，建立糖氧剥夺模型，免疫荧光技术检测糖氧剥夺后神经干细胞分化能力，MTT法检测糖氧剥夺24，48 h后恢复正常条件培养对神经干细胞增殖能力的影响，Hochest33258荧光染色检测糖氧剥夺24，48 h后神经干细胞凋亡状况。结果与结论：第4代神经干细胞CD133免疫荧光鉴定结果呈阳性表达，MTT细胞增殖能力检测结果示：糖氧剥夺组增殖能力明显低于常氧组(P <0.05)，糖氧剥夺48 h组增殖能力低于糖氧剥夺24 h组(P <0.05)。GFAP、β-TubulinⅢ细胞免疫荧光染色结果示糖氧剥夺48 h后神经干细胞分化为星形胶质细胞、神经元总数明显低于常氧组(P<0.05)。Hochest33258染色凋亡率检测结果示糖氧剥夺组细胞凋亡率明显高于常氧组(P <0.01)，糖氧剥夺48 h组神经干细胞凋亡率显著高于糖氧剥夺24 h组(P <0.01)。上述结果表明糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化、凋亡造成不利影响，影响程度取决于缺氧浓度、缺氧时间及自身对于缺氧的耐受性。

小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及肠道归巢

背景：脂肪来源间充质干细胞因其取材安全、创伤小、易纯化、增殖快等优点而备受关注。目的：建立一种有效、快速分离培养较高纯度小鼠脂肪间充质干细胞的方法，荧光标记后探索其是否可在体内向肠道归巢。方法：取小鼠腹股沟及附睾脂肪，用0.1%Ⅰ型胶原酶消化得到单细胞，并与剩余未消化脂肪组织块一起接种，贴壁培养获得脂肪间充质干细胞，通过细胞形态、细胞表型、生长动力学、成骨成脂分化潜能4个方面进行鉴定，并将脂肪间充质干细胞用PKH67标记后经尾静脉注射移植到溃疡性结肠炎模型小鼠体内，观察其向肠道的归巢情况。结果与结论：脂肪间充质干细胞镜下呈梭形，快速增殖呈漩涡状排列，细胞高表达 CD29、CD44、CD90，不表达CD45。成骨诱导碱性磷酸酶染色显示有黑色颗粒生成，茜素红S染色呈红色结节，成脂诱导油红O染色显示有大量脂滴。细胞生长曲线显示第3-5天为对数增长期，细胞生长活力良好。结肠冰冻切片在荧光显微镜下可见绿色荧光光点，并随时间推移有增加趋势。以上结果表明采用胶原酶消化加组织块贴壁法体外分离培养的脂肪间充质干细胞增殖快、纯度高，可向成骨成脂细胞分化，在体内可向结肠归巢并增殖。

神经节苷脂对体外培养一氧化碳损伤少突胶质细胞Nogo-A的影响

背景：Nogo-A蛋白是表达于少突胶质细胞的神经元轴突生长抑制因子，推测其可能与一氧化碳中毒后迟发性脑病关系密切。单唾液酸四己糖神经节苷脂可改善一氧化碳中毒所致的神经系统损害，其作用是否与少突胶质细胞上Nogo-A蛋白有关目前尚无报道。目的：从少突胶质细胞Nogo-A的角度探讨神经节苷脂对神经细胞一氧化碳损伤后保护的机制。方法：体外培养大鼠视神经少突胶质细胞。实验分为3组：对照组、一氧化碳组、单唾液酸四己糖神经节苷脂组。后两组在含有体积分数1%一氧化碳的密室中培养，单唾液酸四己糖神经节苷脂组预先在培养液中加入5 mg/L单唾液酸四己糖神经节苷脂。采用RT-PCR及细胞免疫组织化学观察6，24，48 h少突胶质细胞Nogo-A mRNA及其蛋白质的表达。结果与结论：一氧化碳组6，24及48 h各间点Nogo-A mRNA积分吸光度比值、Nogo-A蛋白质表达的累计吸光度值均显著高于对照组(P <0.05)；一氧化碳处理后24 h，单唾液酸四己糖神经节苷脂组Nogo-A mRNA积分吸光度比值、蛋白质表达的累计吸光度值均显著高于对照组(P <0.05)，但低于一氧化碳组(P <0.05)；Nogo-A mRNA水平与蛋白质表达具有线性相关性(r=0.95)。提示一氧化碳本身可使少突胶质细胞进入活跃的功能状态，提高Nogo-A的转录和翻译水平；Nogo-A蛋白质表达的增加为其mRNA水平水平提高所致；单唾液酸四己糖神经节苷脂对神经细胞急性一氧化碳损伤的保护作用与抑制少突胶质细胞Nogo-A表达有关。

神经干细胞缺氧/复氧损伤中的低氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶

背景：在缺氧状态可诱导机体产生缺氧诱导因子，而诱导型一氧化氮合酶表达产生的一氧化氮(NO)可抑制低氧诱导因子1α的活性。目的：探索低氧诱导因子1α、诱导型一氧化氮合酶与神经干细胞的低氧/复氧损伤关系。方法：无菌条件下将出生24 h以内的Wistar大鼠处死，并分离大鼠海马组织，制作成脑组织的细胞悬液，分离培养神经干细胞后，将细胞分为常氧组、低氧组及低氧-复氧组，后两组以150μmol/L氯化钴溶液制备低氧模型，而后低氧-复氧组细胞在低氧4 h时复氧。结果与结论：低氧条件下，神经干细胞凋亡数量及细胞中低氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶 mRNA表达水平增加；而缺氧-复氧组中凋亡神经干细胞数量高于缺氧组，但低氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达水平低于缺氧组。说明这两种因子参与细胞低氧损伤过程。

新等位基因HLA-A*24：233与HLA-A*26：89的分析确认

背景：分子生物学新技术的发展和大量应用加快了中国发现HLA 新等位基因的步伐。新等位基因的发现不仅给HLA家族增加了新成员，同时也为研究民族或地区的优势基因或消失基因(不适合客观环境的基因)找到了突破点。目的：确认2个新的HLA等位基因，并分析其核苷酸序列。方法：应用PCR-SBT、GSSP测序基因分型技术对两份中华骨髓库供者样本进行HLA高分辨分型，发现2个样本HLA-A位点均为异常基因，与已知同源性高的等位基因型进行序列比对，分析核苷酸序列的差异。结果与结论：2个样本HLA-A位点与目前已知的相应HLA-A等位基因序列均不一致，样本1与其同源性高的A*24：02：01的差异表现在第3外显子区域中的第360位碱基由G > C，导致第96位密码子由谷氨酰胺变为组氨酸，样本2与其同源性高的A*26：01：01比较差异表现在第2外显子区域中第97位碱基由T>C，导致编码的第9位密码子由酪氨酸变为组氨酸。结果表明两个样本为 HLA-A 位点的新等位基因，已提交GenBank进行注册，并已被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*24：233与HLA-A*26：89。

C57BL/6小鼠骨髓单核细胞分离、培养、纯化及向破骨细胞的分化

背景：目前骨髓单核细胞的分离提取国内外文献报道，大多是利用RAW264.7细胞诱导分化为破骨细胞。目的：探讨分离、培养、纯化和鉴定C57BL/6小鼠骨髓单核细胞的方法，观察小鼠骨髓单核细胞体外生长特征，诱导其向破骨细胞分化。方法：无菌分离C57BL/6小鼠股骨和胫骨，取出骨髓细胞，提取过程中先用红细胞裂解液去除红细胞；骨髓细胞过夜培养后(大于16 h)，第2天分离出悬浮细胞，在含有巨噬细胞集落刺激因子的培养基中继续培养获得贴壁的小鼠骨髓单核细胞。通过换液对小鼠骨髓单核细胞进行纯化和扩增培养。进行形态学观察，测定生长曲线，用流式细胞仪检测原代小鼠骨髓单核细胞细胞表面抗原，加入巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配基诱导分化为破骨细胞。结果与结论：新分离的小鼠骨髓单核细胞呈小圆形，两端伸出触角，培养5 d后，细胞成椭圆形，两端的触角更明显，增殖依赖巨噬细胞集落刺激因子。流式结果显示分离的小鼠骨髓单核细胞纯度较高，能够诱导分化为破骨细胞。利用间充质干细胞与单核细胞的贴壁能力不同及巨噬细胞集落刺激因子显著促进单核细胞贴壁增殖的特性能有效分离获得稳定生长的小鼠骨髓单核细胞。培养的小鼠骨髓单核细胞性状稳定，表型稳定均一，适于做进一步研究。

鼠胎肝干细胞生物学特性与人端粒酶反转录酶基因介导的影响

背景：研究表明，感染人端粒酶反转录酶基因后的干细胞具有稳定表达高水平端粒酶活性，且能使细胞增殖旺盛，这为建立基因工程的永生化干细胞系奠定了基础。目的：探讨人端粒酶反转录酶基因感染对体外培养鼠胎肝干细胞增殖及细胞周期的影响。方法：体外培养鼠胎肝干细胞，经重组腺相关病毒作为载体介导人端粒酶反转录酶基因感染，用 RT-PCR、Western blot检测鼠胎肝干细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达，CCK-8法、细胞生长曲线检测细胞生长增殖情况，流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果与结论：与对照组、空载病毒组相比，基因感染组人端粒酶反转录酶基因和蛋白水平均有表达，细胞的生长速度明显增快，G0/G1期细胞减少，S期细胞数增多。结果表明以重组腺相关病毒作为载体介导人端粒酶反转录酶基因感染能促进体外培养的鼠胎肝干细胞增殖，对其培养有优化作用。