中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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玻璃化低温保存卵巢癌细胞的配方及优化降温过程参数
实验采用玻璃化低温保存方法和程序降温方法来研究COC1细胞的低温保存效果.玻璃化低温保存:采用3种玻璃化溶液,①质量浓度为400 g/L聚乙烯基吡咯烷酮+质量浓度为200 g/L蔗糖+质量浓度为100 g/L甘露醇.②VS55.③质量浓度为300 g/L聚乙烯基吡咯烷酮+质量浓度为200 g/L海藻糖.每种溶液以不同的比例与细胞悬液混合均匀,投入液氮保存.程序降温法:以甘油和二甲基亚砜为低温保护剂,分别以不同的比例添加到含有细胞悬液的冻存管中.然后采用两步降温法,投入液氮保存.结果玻璃化溶液(质量浓度为300 g/L聚乙烯基吡咯烷酮+质量浓度为200 g/L海藻糖)保存COC1细胞可以获得高细胞存活率,且玻璃化方法取得的存活率高于程序降温法.初步表明,用玻璃化方法长期保存卵巢癌细胞具有一定的可行性和前景,使COC1细胞能够大限度的保持较好的生理功能.
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烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响
背景:前期研究已证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对白细胞介素1β致椎间盘退变起到保护作用,而烟酰胺对椎间盘退变的保护机制还不很清楚.目的:观察烟酰胺对白细胞介索1 β诱导体外培养的兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.设计、时间及地点:实验于2007-11/2008-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:3-4月龄日本大白兔10只,体质量1.5-2.0kg,取L1-6脊柱节段56个椎间盘组织,用于构建兔椎间盘组织凝胶培养模型.方法:将56枚椎间盘随机分为4组,每组14枚.正常对照组:不加入药物;烟酰胺组:加入0.5 g/L烟酰胺;退变组;加入10 μg/L白细胞介素1β;治疗组加入10 μ g/L白细胞介素1β及0.5 g/L烟酰胺.培养2周后对各组标本行TUNEL染色及Fas,Caspase-3,Bcl-2,低氧诱导因子1α、葡萄糖转运体1、血管内皮细胞生长因子免疫组织化学染色.主要观察指标:各组标本TLINEL染色及免疫组织化学染色阳性细胞率.结果:TUNEL染色示加入烟酰胺后退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P=0.001).Fas染色退变组阳性细胞率较正常对照组明显上升(P＜0.01).Bcl-2染色示烟酰胺组较正常对照组阳性细胞率升高(P=0.004).Caspase-3染色示治疗组阳性细胞率较退变组下降(P=0.024),但仍高于正常对照组(P=0.006).低氧诱导因子1 α染色示烟酰胺组阳性细胞率低于正常对照组(P＜0.01);退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P＜0.01).葡萄糖转运体1染色示治疗组阳性细胞率高于正常对照组(P＜0.01).结论:烟酰胺可以抑制白细胞介素1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善白细胞介素1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
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针刺对肥胖模型大鼠下丘脑瘦素受体mRNAB的表达与针刺的影响:SYBR Green实时定量聚合酶链反应检测
背景:脂肪细胞合成的瘦素作用于下丘脑,引起食欲降低,能量消耗增加.导致降低体质量,减少体脂.但单纯性肥胖病患者由于瘦素抵抗导致肥胖.目的:观察针刺对肥胖大鼠血清瘦素含量和下丘脑瘦素受体OB-Ra和OB-Rb表达的影响,探讨针灸减肥的机制.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2006-10/2007-01在南京中医药大学动物实验中心完成.材料:刚断乳的健康清洁级雄性SD大鼠90只,体质量50-70 g.实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的<关于善待实验动物的指导性意见>.方法:随机挑选10只普通饲料喂养为正常组.另一组80只高脂致肥饲料喂养,将造模成功的肥胖大鼠30只随机分为肥胖模型组和针刺组,每组各15只.采用实时定量聚合酶链反应技术测定瘦素受体(OB-Ra,OB-Rb)基因表达水平,酶联免疫测定法测定血清中瘦素的含量.主要观察指标:针刺治疗前后肥胖大鼠体质量、血清中瘦素的含量以及下丘脑OB-Ra与OB-Rb基冈表达的变化.结果:肥胖模型组大鼠体质量、血清瘦素水平均显著高于正常大鼠,而下丘脑OB-Rb基因表达水平均明显低于正常大鼠.针刺治疗取得良好减肥疗效的同时,针刺组大鼠血清瘦索明显回降,而下丘脑OB-Rb基因表达水平却明显升高.OB-Ra表达量3组差异无著性意义.结论:针刺可改善肥胖大鼠瘦素抵抗状态以及促进下丘脑OB-Rb基因表达可能是针刺减肥的细胞分子重要机制.
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细胞黏附分子血浆E-选择素水平与下肢深静脉血栓形成
背景:研究表明,深静脉内白细胞参与的炎症反应在深静脉血栓形成中起了很重要的作用,而E-选择素的主要作用是介导炎症过程中自细胞与血管内皮细胞黏附的起始过程.目的:拟观察细胞黏附分子E-选择素水平与下肢深静脉血栓形成的关系.设计、时间及地点:配对设计,直线相关分析,于2007-09/12在重庆医科大学附属第一医院血管外科及重庆医科大学临床检验诊断学实验室完成.对象:选择发病在3 d内或病情加重的27例下肢深静脉血栓形成患者,男16例,女11例,平均年龄(57±15)岁.方法:入院时采集第1次血液标本,经过溶栓,抗凝治疗72 h后采集第2次血液标本.用ELISA法测定血浆中E-选择素的质量浓度,同时测定第1次采血样本的血小板计数及其凝血功能,包括部分激活凝血活酶时间、凝血酶原时间、血浆纤维蛋白原.主要观察指标:治疗前后患者E-选择素的水平,治疗前凝血功能、血小板计数及与E-选择素相关性分析.结果:27例下肢深静脉血栓形成患者在治疗期间均未发生急性肺栓塞,1例行Forgart导管取栓术,其余26例患者72 h后,15例患者临床症状明显好转,11例临床症状末见好转.①下肢深静脉血栓形成患者经过溶栓、抗凝治疗临床缓解者血浆E-选择素水平明显下降(P=0.001),而临床未缓解者血浆E-选择素水平则呈上升表现(P=0.003).②下肢深静脉血栓形成患者治疗前E-选择素水平与血小板计数无相关性(r=0.113,P=0.576),与纤维蛋白原含量无相关性(r=0.050,P=0.802),与部分激活凝血活酶时间无相关性(r=0.046,P=0.822),与凝血酶原时间亦无相关性(r=0.080,P=0.690).结论:血浆E-选择素水平与深静脉血栓形成症状严重程度呈正相关性.
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老龄房颤犬模型静脉肌袖细胞分离及起搏电流记录
背景:电牛理改变是老化心脏表现的主要特征之一.目的:构建老龄房颤犬模型,观察静脉肌袖细胞动作电位和起搏电流的特征.设计、时间及地点:分组对照动物实验,于2005-03/2007-12在解放军总医院实验动物中心和老年心血管病研究所完成.材料:7～9岁健康杂种老龄犬12只,体质量15～20kg,雌雄兼有.台氏液成分(mmol/L):NaCl 135,KCI 5.4,CaCl2 1.8,MgCl2 1,NaH2PO40.33,HEPES 10,葡萄糖10,pH用NaOH调至7.4.方法:取老龄犬6只,快速起搏8周制备房颤模型,余6只犬未经快速起搏处理作对照.分离静脉肌袖细胞,利用全细胞膜片钳在电流钳模式下记录动作电位,在电压钳模式下记录起搏电流.主要观察指标:老龄犬肺静脉肌袖细胞动作电位的特征、起搏电流、起搏电流的,I～V曲线及起搏电流稳态激活的特征.结果:约82.6%的老龄犬静脉肌袖细胞记录到自动除极和自发性动作电位,而未经快速起搏处理犬的细胞约有40%记录到工作心肌动作电位特征.在-120mV时,房颤模型细胞起搏电流的电流密度为(-2.66±0.4)pA/pF,而对照组细胞的电流密度为(-1.24±0.21)pA/pF.从I-V曲线可见,起搏电流的电流密度具有电压依赖性特征,且病理模型犬的肺静脉肌袖细胞起搏电流电流随超极化电位增加更为明显.在-120 mV时,房颤犬静脉肌袖细胞电流的半激活电压为(-84.3±4.9)mV,激活曲线斜率为(+12.1±2.6)mV,而未处理细胞的半激活电压为(-98.0±7.2)mV,激活曲线斜率为(+9.5±1.8)mV,明显向更正的电位方向移动,提示老龄房颤犬静脉肌袖起搏电流更易激活.结论:老龄房颤犬静脉肌袖细胞更易出现自动除极电位,起搏电流的密度更高,起搏电流激活也更容易,提示起搏电流可能参与老年房颤异位起搏的发生.
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Sox-9对腰椎间盘退行性变的影响
背景:目前国内外椎间盘退行性变的治疗措施中非手术及手术治疗中存在着只能缓解症状,不可避免地会改变椎间盘的正常结构,甚或促进椎间盘退行性变的可能.目的:尝试利用Ad/CMV-Sox-9进行转染.观察转染后兔退行性变椎间盘的病理及其影像学变化.设计、时间及地点:基因水平的随机对照动物实验,于2005-10/2006-03在哈尔滨医科大学附属第一临床医院中心实验室完成.材料:Ad/CMV-Sox-9、Ad/CMV-绿色荧光蛋白由北京本元正阳基因公司提供.方法:选取已构建退行性变椎间盘模型的新西兰大白兔30只,按随机数字表法分为2组,Ad/CMV-Sox-9组20只,分离暴露椎间盘,在L2-3,L3-4,L4-5节段用0.1mL.注射器水平刺入,每节段注入Ad/CMV-Sox-920 μL;Ad/CMV-绿色荧光蛋白组10只,于相同椎间盘节段注射相同剂量的Ad/CMV-绿色荧光蛋白.主要观察指标:分别于转染Sox-9后2,4,8周3个时间段取材,检测转染后兔退行性变椎间盘组织中Ⅱ型胶原mRNA的表达,以β-actin作空白对照,观察退行性变椎间盘的病理及MRI变化.结果:成功地利用Ad/CMV-Sox-9对退行性变椎间盘进行了转染.转染后兔退行性变椎间盘组织中Ⅱ型胶原mRNA的表达显著高于空白对照(P＜0.05).病理切片示,造模后的椎间盘软骨样细胞减少或小时,基质退行性变,纤维化;注射Sox-9后6-8周,可见少量软骨细胞再生,细胞增多,渐成熟.注射Sox-9 8周后MRI检查T2加权像显示,注射Ad/CMV-Sox-9节段信号增高,自身对照未注射Sox-9的节段信号低.结论:Ad/CMV-Sox-9转染退行性变椎间盘后,促进了Ⅱ型胶原mRNA的高效表达,经组织学和影像学验证,改善了椎间盘的组织结构和功能.
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中国大学生46例足底压力分布测量
背景:人体的足底压力分布反映了有关足的结构功能及整个身体姿势控制等情况.目的:探讨大学生足底压力参数的分布规律及其足健康的影响因素.设计、时间及地点:调查分析,于2006-10/2007-03在山东理工大学大学生体质健康研究中心进行足底压力测试.对象: 随机抽取山东理工大学2005级普通专业大学生46名,男25名,女21名.方法:采用实验法和问卷调查法进行测试.测试时均脱鞋袜,以个人平常步态自然行走,一步法测量两脚各2次动态足底压力,计算足底各个区域的峰力值、达峰力值时间、各区域冲草等指标.测试同时围绕宵关足健康的相关问题随之进行问卷调查.主要观察指标:大学生足底各区域大压力分布、达峰力值时间分布及冲量分布:足内、外翻情况;足健康影响凶素分析.结果:足跟内侧平均峰力值大,其次足第2、3跖骨;第2～5趾和第5跖骨足底平均峰力值较小,男、女分布规律基本一致.足底各区域达峰力值时间按照行走过程中足底接触地血顺序呈依次递增趋势,即足跟＜足弓＜跖骨＜脚趾.行走过程中足底冲量大的区域上要分布在足跟内侧,小区域在第2～5趾.行走过程中的受力甲衡情况,左足外翻情况比较严重.并且男女生分布规律一致.动态足底压力的改变多考虑与穿鞋类型、足底的皮褶厚度、走路习惯、运动及保健按摩等冈索有关.结论:大学生足底压力分布特征与正常人分布特征基本一致,但某些区域存在着性别差异和左右足差异.其中部分学生足部健康意识淡薄,并存在着不同程度的足内、外翻现象.
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大鼠股骨开放截骨模型与闭合骨折模型制作的比较
背景:骨折动物模型无疑是研究骨折愈合的基石,其中开放截骨模型与闭合骨折模型是较成熟的两种长骨干骨折模型.就作者所查文献,未见芙于大鼠两种模型比较研究的报道.目的:比较人鼠股骨开放截骨模型与闭合骨折模型的制作过程,并通过X射线摄片比较二者的骨折愈合情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/05在苏州大学附属第二医院骨科实验室完成.材料:SPF级雄性SD大鼠40只,体质量(220±30)g,随机分为开放截骨模型组与闭合骨折模型组,每组20只.电动摆锯;自行改良设计的闭合骨折模型打击器.方法:开放组行开放截骨术造成股骨中段横行骨折,逆行克氏针固定:闭合组行逆行克氏针固后,使用造模支架致股骨中段闭合骨折.主要观察指标:比较两组的平均造模时间,造模成功率及术后2,3,4,8周骨折愈合的X射线情况.结果:开放截骨模型每只造模成功率90%,平均造摸时间为17 min,骨折畸形愈合及不愈合率40%;闭合骨折模型每只造模成功率85%,平均造模时间12 min,未见畸形愈合及不愈合.术后2,3,4周X射线评分开放组均低于闭合组(P＜0.05),8周时开放组X射线评分仍较闭合组低,但差异无显著性意义(P＞0.05).结论:开放截骨模型造模时间长,骨折畸形愈合不愈合发生率高,近中期骨折愈合明显滞后,不适于近中期骨折愈合的研究.
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诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定
背景:猪在遗传上与人类相似,因此猪是研究人类疾病好的动物模型,而对于这方面的研究在国内外报道较少.目的:建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-05在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成.材料:DH5a菌株E.coliDH5 α,质粒pcDNA3.1(+)、PET28a(+)、pCIneo.重组质粒PMD-Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存;重组质粒pGC-FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠.方法:构建的载体包括以下元件:Mx1启动子用来启动Cre的表达,Cre的作用是工具便于以后做基因敲除,BGHpolyA是一个终止信号,FRT2NeoR中的FRT是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记,NeoR是筛选标记.通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动子和BGHpolyA.利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基冈.并从pGCFRT2NeoR上用Xhol I and Sal I酶切得到FRT2NeoR盒子.将上述4个片段利用SOE-PCR及酶连接的方法用T4 DNA连接酶连接,然后利用原核表达载体PET28a(+)构建出Cre表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR.主要观察指标:Cre重组酶表载体PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的鉴定.结果:PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR重组质粒经Nhe I和Not I双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段,载体构建成功.结论:成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR.
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胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠纤维环细胞体外增殖活性影响的量效关系
背景:近年来体外椎问盘髓核和纤维环组织细胞培养技术的建立,特别是软骨组织工程研究的不断深入及自体椎间盘细胞移植修复髓核缺损动物实验的初步成功,为退变椎间盘的形态结构与生理功能的完伞再生修复带来了希望.目的:通过对椎间盘纤维环细胞的培养,观察胰岛索样生长因子Ⅰ对大鼠纤维环细胞体外增殖活性的影响及量效和时效关系.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-01在山西医科大学寄生虫实验室完成.材料:清洁级1月龄Wistar系大鼠30只,雌雄不限.方法:体外分离培养大鼠纤维环细胞.剂量-效应实验:在培养的细胞中分别加入由含体积分数为0.01或0.1的小牛血清HAMF-12配制成的不同浓度的胰岛素样生长因子Ⅰ(0.1,1.0,10,100 μg/L).以不加生长闪子做对照,培养72 h.时间-效应实验:在培养的细胞中分别加入含有佳效应浓度胰岛素样生长因子Ⅰ体积分数为0.1的小牛血清+F12培养液,分组为对照组和100 μg/L的胰岛素样生长因子Ⅰ组,分别培养1,3,5,7d.主要观察指标:①苏木精-伊红、甲苯胺蓝、免疫细胞化学染色分析细胞的生物学特性.②噻唑蓝比色法观察胰岛素样生长因子Ⅰ在体积分数为0.01和0.1的血清浓度下对大鼠纤维环细胞体外增殖的调节作用及其剂量、时间与作用效果的关系.结果:苏木精-伊红染色细胞多为梭形,有伪足伸出,细胞核为圆形或椭圆形;甲苯胺蓝染色,胞浆为深蓝色;免疫细胞学方法检测表明纤维环细胞有Ⅰ型胶原表达:在体积分数为0.1的血清条件下,胰岛素样生长因子I能提高细胞的增殖活性,并且在有效浓度范围内呈剂量效应关系.结论:胰岛素样生长因子Ⅰ能促进大鼠纤维环细胞的体外增殖,其效应在一定范围内与剂量和时间呈正相关.
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激素性股骨头坏死早期细胞凋亡相关基因表达及阿仑磷酸钠的干预
背景:近年研究发现激素性股骨头坏死病例中凋亡的骨细胞增多,因此认为激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡所致,而并非缺血性坏死.目的:观察大鼠激素性股骨头坏死早期bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,caspase-3)的表达,以及阿仑磷酸钠的干预效果.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/2007-02在吉林大学基础医学院病理实验审完成.材料:健康Wister大鼠100只,随机分为正常对照组、激素模型组、藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组,20只,组.藻酸双酯钠片为占林东丰制药厂产品,阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司产品.方法:除正常对照组外,其余4组大鼠均给予醋酸泼尼松龙臀肌注射建立激素性股骨头坏死模型.藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组分别灌服对应药物,联合用药组灌服藻酸舣酯钠+阿仑磷酸钠.各组肌注用药1次/周,灌服药1次/d,实验持续6周.所有大鼠均强迫间断站立,4 h/d.主要观察指标:光镜观察股骨头病理变化.S-P免疫组织化学染色法检测股骨头组织bcl-2、caspase-3的表达.结果:给药第4周与正常对照组比较,激素模型组股骨头坏死现象明显,骨小梁变细甚至断裂,空骨陷窝数量明显增多(t=2.629,P＜0.01);藻酸双酯钠组骨小梁和空骨陷窝数量介于前2组之间(t=1.713,P＜0.01);阿仑磷酸钠组、联合用药组骨小梁和宅骨陷窝数量接近正常对照组(t=1.462,t=1.657,P＞0.05).与激素模型组比较,藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组股骨头组织bcl-2阳性细胞率均明显升高(t=2.146,P＜0.05t t=2.815,P＜0.01;t=2.947,P＜0.01),caspase-3阳性细胞率均明显降低(t=2.97,P＜0.01;t=2.462,P＜0.01;t=1.854,P＜0.05),其中阿仑磷酸钠组及联合用药组升高尤为明显(t=2.503,t=1.959,P＜0.05).结论:大剂量激素可能通过抑制bcl-2表达和促进caspase-3表达引起股骨头坏死.阿仑磷酸钠可能通过与其相反的途径来防止骨细胞凋亡,从而预防早期激素性股骨头坏死.
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构建四氯化碳诱导的家兔肝纤维化模型
背景:四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价,但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道.目的:建立家兔肝纤维化动物模型,并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-12/2008-04在解放军成都军区昆明总医院实验动物中心完成.材料:40 只普通级日本大耳家兔,雌雄各半,体质量1.75～2.25 kg,用于建立家兔肝纤维化动物模型.方法:40只家兔采用随机数字表法分为实验组(n=30)和对照组(n=10).实验组腹腔注射40g/L四氯化碳橄榄油溶液,对照组腹腔注射等量生理盐水.1～3周四氯化碳剂量为0.1～0.2mL/kg,根据动物的情况每周注射2次;3-6周四氯化碳剂量调整为0.3～0.4 mL/kg;6～8周为0.4～0.5 mL/kg.于注药后4,8,12周分别留取肝组织和血清标本,进行苏木精-伊红染色病理观察和生化检测.主要观察指标:实验家兔肝脏大体及病理学改变,静脉血生化指标的变化.结果:纳入日奉大耳家兔40只,造模20d时,实验组家兔死亡4只,原因丰要为急性肝坏死及对药物的耐受性差.40d时死亡1只;50d腹腔注射因药物误入血管死亡1只.①对照组家兔肝脏外观呈暗红色,病理切片示:肝小叶结构完整,肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列.实验组8周时,肝脏呈暗紫色,表面有轻微粟粒样改变,病理切片示:肝细胞点状及点灶状坏死,汇管区炎症细胞浸润,呈早期纤维化症状.12周时,肝脏呈灰褐色,有较明显粟粒样改变.病理切片示:肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,肝细胞脂肪变性,间质纤维组织增生,有炎性细胞浸润,为明显肝纤维化症状.③家兔血生化指标随着注药时间的延长,白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降,球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高,谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降.结论:长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成,并有较明显的阶段性变化.
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Der p 2基因真核表达载体构建及其在小鼠树突状细胞中的表达
背景:树突状细胞是目前已知的强大的抗原提呈细胞,已经被应用于免疫治疗的研究中.目的:构建Derp 2真核表达载体,并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞中表达.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2005-05/12在解放军第二军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所完成.材料:C57BL/6小鼠;plambd-Derp 2购自美国HESKA公司;pCI-neo质粒为解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所保存.方法:体外分离,培养小鼠骨髓来源树突状细胞.将原核表达质粒plambdDer p 2携带的Derp2全长cDNA切下,重组到真核表达质粒pCI-neo中,然后在脂质体介导下,将重组质粒转染到小鼠骨髓来源的树突状细胞,以末转染质粒和转染空白载体pCl-neo的树突状细胞为对照.主要观察指标:①pCI-neoDer p 2重组质粒结构鉴定.②并用反转录-聚合酶链反应、Western Blot检测Der p 2mRNA和蛋白表达.结果:测序证实构建的重组质粒中携带了Der p2的全长cDNA序列,且与GeneBank序列完全一致.反转录-聚合酶链反应和Western Blot检测结果提示,重组质粒转染的树突状细胞能表达Der p 2 mRNA和Derp2蛋白.结论:成功构建重组Der p 2基因真核表达载体,其转染树突状细胞后,能有效地表达于树突状细胞中.
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神经生长因子对大鼠胫骨骨折愈合的影响
背景:临床中发现失神经可导致骨折断端骨痂过度生长甚至在肌肉中出现异位骨化,这一现象提示神经因素对骨折愈合有影响.目的:探讨神经生长因子对大鼠胫骨骨折愈合的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-03在解放军第二军大学动物实验中心完成.材料:健康雄性3个月龄SD大鼠120只,体质量250-300 g,随机分为单纯左胫骨骨折组和神经生长因子治疗组,每组60只.注射用神经生长因子由厦门北大之路生物工程有限公司提供.方法:两组大鼠制备单纯胫骨骨折,神经生长因子治疗组肌注2000AU(1.4g),1次/d,分别注射两侧腓肠肌,连续肌注2周.伤后第4周对2组大鼠骨折断端行断层CT,测量骨折断端大横截面及计算骨痂灰度值,行生物力学3点折弯试验.主要观察指标:①骨组织形态计量学、骨密度测定.②骨痂组织形态学的观察.③免疫组化法测定骨痂组织骨钙素的表达.④观察2组大鼠骨痂中成骨细胞的超微结构变化.⑤Western印迹检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达.结果:神经生长因子治疗组3点折弯试验各项生物力学参数均优于单纯左胫骨骨折组(P＜0.05).形态学及超微结构观察见神经生长因子治疗组骨折愈合优于单纯左胫骨骨折组.神经生长因子治疗组Ⅰ型胶原蛋白表达明显高于单纯左胫骨骨折组(P＜0.05):而单纯左胫骨骨折组骨痂Ⅱ型胶原蛋白的表达明显高于神经生长因子治疗组(P＜0.05).结论:生物力学测试及Ⅰ型胶原蛋白表达和成骨细胞微观结构均说明神经生长因子对骨折断端的骨化有促进作用,其途径有町能在骨痂生长的不同时期通过调节Ⅰ、Ⅱ型胶原的量来调控骨折的愈合.
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正常足与扁平足的足底压力及步态特征
背景:足底压力测量可揭示人体运动过程中足的动力性特征.目的:测节扁平足患者足底压力参数的分布规律,比较扁平足与正常足的足底压力及步态特征.设计、时间及地点:分组对照的足底生物力学变化检测,于2007-12/2008-01在河北体育学院实验室完成.对象:抽取河北体育学院22～26岁在校学生自愿者,足印足弓空白区宽度与足印窄区宽度(实心)之比为2:1的正常青年30名,足印无空向区的扁平足青年30名.足底压力分布测试系统Footscan insole为比利时RSscan公司生产.方法:采用Footscan USB2平板式足底压测试系统对其进行动态足底压力测试.受试者均脱鞋袜,以个人平常步态自然行走,每人3次,记录动态足底压力.主要观察指标:足底接触面积、着地时相及冲量情况.结果:60名受试者进入结果分析.①足底接触面积:正常足后跟、前掌接触面积的比例均大于扁平足,而足弓接触面积的比例均小于扁平足,差异均具有显著性意义(P＜0.05或0.01).②着地时相:正常足前掌接触时相、整足接触时相均小于扁平足;而着地时相、离地时相均大于扁甲足,差异均具有显著性意义(P＜0.05或0.01).③冲量:正常足弓、前掌所受冲量占全掌比例均小于扁平足;而后跟所受冲量占全掌比例大于扁平足,差异均具有显著性意义(P＜0.05或0.01).结论:扁平足前掌接触时相、整足接触时相均大于正常足,着地时间长,压力中心过于密集.扁平足足弓、前掌所受冲量占全掌比例均大于正常足.
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肉毒碱复合高脂饲料喂养免血脂水平的变化
背景:肉毒碱是脂肪酸进入线粒体内进行氧化代谢的惟一转运载体,其在机体内水平对血脂代谢具有重要的影响作用.目的:观察肉毒碱对高脂饲料喂养兔血脂水平变化的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-10/2007-05在解放军南京军区南京总医院检验科及比较医学科完成.材料:普通级健康纯系雄性新西兰兔14只,体质量(1.98+0.22)kg,用于建立兔高脂血症模型.方法:14只雄件新西兰兔随机抽签法分为对照组及实验组,每组7只.对照组仅用高脂饲料喂养,实验组用高脂饲料喂养的同时每天补充肉毒碱200 mg/kg体质量.分别于实验开始后第0,2,3,4周称体质量并抽取耳动脉血,分离血清后测定血中总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及载脂蛋白B和血清游离肉毒碱水平.主要观察指标:不同时间点各组动物体质量的变化以及血中总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆崮醇、低密度脂蛋白胆固醇以及载脂蛋白B和血清游离肉毒碱水平.结果:14只新西兰兔全部进入结果分析.4周内,实验组和对照组体质差异无显著性意义(P＞0.05).自第2周开始,实验组兔血清游离肉毒碱水平高于对照组(P＜0.01);总胆固醇、载脂蛋白B水平明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01):3周后,实验组血清三酰甘油,低密度脂蚩白胆固酵水平也低于对照组(P＜0.01);两组高密度脂蛋白胆固醇水平差异无显著性意义(P＞0.05).结论:补充服用肉毒碱能够抑制高脂饮食导致的血中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇以及载脂蛋白B水平升高.
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外源性碱性成纤维细胞生长因子对鞘内肌腱愈合和粘连的影响
背景:碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)能促进体外腱细胞的增殖及胶原分泌,并促进鞘外肌腱的愈合,但其对鞘内肌腱的作用的资料较少.目的:探讨外源性bFGF对鞘内肌腱愈合和粘连形成的作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-05/2005-02在上海市第六人民医院实验动物中心实验室完成.材料:成年雄性来亨鸡90只制备鸡右爪第3趾趾深屈肌腱横断模型,随机均分为3组,每组30只.方法:对照组:肌腱横行切断后原位修复.纤维蛋白封闭剂组:在肌腱断端使用纤维蛋白封闭剂0.6 μ L后,原位修复肌腱.bFGF组:在断端使用bFGF和内含bFGF 500 ng的纤维蛋白封闭剂混合物0.6 μ L,原位修复肌腱.主要观察指标:术后1,2,4,8周,每组各取6只鸡进行大体、组织学检测:术后8周每组再取6只鸡进行生物力学测定.结果:对照组与纤维蛋白封闭剂组间各项观测指标比较均无显著性差别,与对照组和纤维蛋白封闭剂组相比,bFGF组修复部位腱鞘、腱外膜及腱实质的新生血管形成、成纤维细胞增殖较好,胶原的分泌出现早,数量也较多;肌腱滑动距离较短,屈曲功和肌腱大抗拉力较大.结论:在肌腱断端使用外源性bFGF能促进鞘内肌腱的愈合,但也加重了肌腱的粘连.
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重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中的表达
背景:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(human granuiococyte-maerophage colony stimulating factor,hGM-CSF)足刺激造血前体细胞分化及增殖的细胞因子,同时在机体免疫调节过程中具有重要作用.大肠杆菌表达系统所具有的低成本、高产量等优点则是其他体系无法比拟的,因此仍是目前常用的外源基因表达系统.目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中的表达.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-02/06在三峡大学生物技术研究中心实验室完成.材料:质粒pBR322hGM-CSF购自美国ATCC菌种保藏中心.hGM-CSF抗体购自Sigma公司,IPTG、X-gal和载体pMGT-18,购自上海生物工程技术公司.方法:根据hGM-CSF基因序列设计出引物,以克隆载体质粒pBR322-hGM-CSF为模板,得到hGM-CSF基因并重组入原核表达载体pGEX-4T-1中,将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH5 α,用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定并用Western bloting检测.主要观察指标:hGM-CSF在大肠杆菌中的表达.结果:SDS-PAGE显示,得到相对分子量为40 500的目的蛋白,表达量町达菌体总蛋白的17.9%.Western bloting检测表明,抗hGM-CSF单抗可与相对分子量为40 500大小的电泳条带发生特异性反应.结论:实验构建了原核表达载体pGEX-hGM-CSF,并在大肠杆菌中诱导表达,得到hGM-CSF融合蛋白.
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液氮冻存前后成骨细胞免疫原性的对比
背景:低温冻存可以降低组织和器官的抗原性,而对细胞的影响,存在较大争论.目的:探讨液氮冷冻对成骨细胞免疫原性的影响.设计:随机对照,配对设计实验.单位:实验于2003-07/2004-03在山东大学附属齐鲁医院实验中心完成.材料:4只新西兰大白兔,雌雄不限.3H-TdR由山东大学核医学教研室提供.方法:于兔胫骨骨膜取材,体外原代培养成骨细胞,传代鉴定后液氮冻存3个月,复苏.设新鲜培养细胞为未冻存组,冻存3个月后复苏细胞为冻存组.利用流式细胞仪,通过间接免疫荧光技术测定冻存前后成骨细胞主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex-I,MHC-I)抗原阳性率.同时建立成骨细胞、淋巴细胞混合培养模型,利用β液闪计数仪测定每分钟闪烁数,计算淋巴细胞刺激指数.主要观察指标:冻存前后成骨细胞MHC-I抗原刚性率及淋巴细胞刺激指数.结果:未冻存组成骨细胞MHC-I抗原阳性率和刺激指数明显高于冻存组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:液氮冻存后成骨细胞免疫原性显著降低,低温液氮冷冻是一种理想的降低成骨细胞免疫原性的方法.
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补肾方对肾虚型大鼠膝骨关节炎软骨病变基因表达谱的影响
背景:遗传学研究表明骨关节炎属于多基因、多因子遗传病.目的:从补肾中药作用后的基冈表达谱角度探讨补肾中药治疗肾虚型骨关节炎的靶向作用和分子机制.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-09/2006-03在广州中医药大学实验中心完成.材料:4月龄末孕清洁级健康雌性SD大鼠14只,体质量(220±20)g,随机不等分为切卵巢模型组6只,未切卵巢模型组4只,中药组4只.补肾方由补骨脂、骨碎补、牛膝,当归、熟地、木瓜、茯苓、白术、防风、炙甘草等10味中药组成,其提取物,按照人与大鼠体表面积折算,含牛药量837.7 g/L,由广州中医药大学附属骨伤科医院制剂室提供.方法:除未切卵巢模型组外,其余各组大鼠切除双侧卵巢.所有大鼠均切断有膝前后交叉韧带、内侧副韧带,建立肾虚型膝骨关节炎模型.术后1个半月,中药组按6 mL/kg灌中药,未切卵巢模型组灌同体积生理盐水,1次/d.切卵巢模型组大鼠分别于术后2,4,6周各取2只取血,用于确定肾虚型骨关节炎造模成功.术后18周未切卵巢模型组和中药组大鼠,取右侧膝关节股骨和胫骨干骺端的软骨组织行基因芯片检测.主要观察指标:采用基因芯片技术检测补肾中药作用后的.肾虚型骨关节炎关节软骨的基因表达.结果:补肾方治疗肾虚型骨关节炎有显著差异表达的基因有52个,其中上调的有25个,下调的有27个.结论:补肾中药能上调软骨细胞抗凋亡和增殖基因,抑制蛋白酶基因,抑制炎性因子,增强机体免疫功能,重建衰老免疫稳态,重塑基因表达良性平衡,延缓软骨退行性变.
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姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响
背景:近期研究提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂.目的:以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞,观察不同浓度姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成胶原的影响.设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-10/2007-11在解放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成.材料:瘢痕疙瘩患者的手术标本5份,患者均知情同意.治疗办案经医院医学伦理委员会批准.姜黄素为美国Sigma公司产品.方法:瘢痕疙瘩成纤维细胞体外原代培养,待细胞融合后传代,取第3-6代对数生长期的成纤维细胞用于实验.将不同浓度姜黄素(5,10,20 μmol/L)分别对瘢痕疙瘩成纤维细胞干预24～48 h,以空白组做对照.主要观察指标:蛋白免疫印迹检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后结缔组纵生长因了的表达.荧光定量聚合酶链反应检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子基因的表达.结果:①姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,结缔组织生长因子蛋白的表达减少,均低于对照组(P＜0.01).②与对照组相比,不同浓度姜黄素干颅组Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子表达均降低(P＜0.01).并且Ⅰ型前胶原表达随着?排药物浓度的增加,有逐渐降低的趋势,成明显的量效关系.姜黄素20 μmol/L组Ⅲ型前胶原表达低于姜黄素10 μmol/L组,但差异无显著性意义(P＞0.05),姜黄素10 μmol/L组结缔组织生长因子表达低于姜黄素5 μmol/L组,但差异无显著性意义(P＞0.05).结论:姜黄素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,其作用机制可能与姜黄素抑制结缔组织生长因子在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达有关.
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含有生肌液的组织工程皮肤修复免皮肤缺损
背景:在皮肤开放创面上进行缺损修复与重建是组织修复领域的研究焦点.构建含有中药的组织工程皮肤修复刨面缺损的研究并不多见.目的:将含有生肌液的皮肤支架与自体皮肤细胞复合,构建含药组织工程皮肤,修复兔皮肤缺损.设计:自体对照动物实验.单位:实验于2005-02/08在天津市天律医院骨科研究所细胞工程室完成.材料:同窝大耳白兔8只,体质量1.6-1.8kg.自行提取生肌液(1 500g/L),成分为当归、生地、龟板、象皮、血余、生石膏、炉甘石;明胶-壳聚糖支架材为料天津大学提供,分别修剪成1.3cm直径的圆片,60Co照射火菌;DR无细胞真皮基质由江苏省启动市医疗用品研究所提供.方法:分离培养兔皮肤细胞,获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞.延兔脊柱两侧制作直径1.5 cm的圆形伞层皮肤缺损创面4个.分为4组,阴性对照组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后滴加生理盐水),人工真皮组(DR无细胞真皮基质贴附于创面后接种细胞悬液),非含药组织工程皮肤组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液),含药组织工程皮肤组(生肌液-明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液).主要观察指标:①术后13 d测量剩余创面面积.②术后7 d、10d取材行组织学与免疫组织化学染色检测.结果:①术后13 d各组创面面积均有不同程度的缩小,剩余面积阴性对照组＞人工真皮组＞非含药组织工程皮肤组＞含药组织工程皮肤组,非含药组织工程皮肤组、含药组织工程皮肤组与阴性对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).②术后10 d,阴性对照组、人工真皮组、非含药组织工程皮肤组均有炎性肉芽组织增生,无表皮组织形成;含药组织工程皮肤组形成接近正常的上皮组织及幼稚的真皮组织.非含药组织工程皮肤组与人工真皮组BrdU标记弱阳性,含药组织工程皮肤组BrdU标记强阳性.结论:实验采用的方法使种子细胞在含有生肌液的明胶-壳聚糖支架上增殖,在体修复皮肤损伤,能够有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积,缩短皮肤缺损的愈合时间.
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富血小板血浆及带血管筋膜在组织工程骨血管化中的作用组织影像学观察
背景:富血小板血浆中的多种生长因子及带血管筋膜是否具有促进骨再生及血管化作用尚在争论之中.目的:拟从组织影像学角度评价富血小板血浆及带血管筋膜对骨髓基质干细胞,脱钙骨基质复合的组织工程骨血管化作用效果.设计、时间及地点:单一样本观察及动物同体对照实验,于2004-10/2007-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.材料:11-12月龄健康杂种犬12只,体质量20-25kg,雌雄各半.方法:①采用密度梯度离心法从犬骨髓中分离骨髓基质干细胞,体外贴擘培养扩增、成骨诱导培养.取杂种犬的股骨制备脱钙骨基质,并与骨髓基质干细胞复合.②将每只犬的背部分为4个区,A,B区,植入加富血小板血浆的骨髓摹质干细胞/脱钙骨基质复合体,C,D区,仅植入骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合体.A,C区植入物用背阔肌带血管肌筋膜包裹;B,D区植入物用背部不带血管的浅筋膜包裹.分别在4,8,12周各取4只,雌雄各半,麻醉后处死取标本.主要观察指标:①采用倒置相筹显微镜观察骨髓基质干细胞形态,四甲基偶氮唑盐法测定细胞生长曲线.②行改良钙钴法碱性磷酸酶染色,VonKossa法、茜索红法,钙结节染色观察诱导成骨细胞形态特征.③应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察复合体的结构.④行大体标本、X射线数字影像及组织学观察评价.结果:①诱导成骨分化的骨髓基质干细胞分泌的碱性磷酸酶及钙结节染色均呈阳性.②骨髓基质十细胞和成骨诱导细胞的生长曲线呈典型的S形.③同种异体脱钙骨摹质与骨髓基质干细胞复合培养后,细胞上架率高,生长状态好,增殖迅速,能分泌大量细胞外基质.④各时间点A,B,C区在成骨的骨量、骨光学密度、血管化程度等方面均明显优于D组(P＜0.05).结论:经组织影像学观察证实,富血小板血浆和带血管肌筋膜均能促进组织工程骨的成骨和血管化,且两者具有协同作用.
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人半月板纤维软骨细胞对人胰岛素样生长因子Ⅰ的效应反应
背景:人类半月板纤维软骨细胞可能会对有积极生物学效应的生长因子产生反应,例如人胰岛素样生长因子Ⅰ,半月板细胞也可能会成为将来临床基凶治疗的有效供体.目的:拟观察人半月板纤维软骨细胞对人胰岛素样生长因子Ⅰ的效应反应.设计、时间及地点:开放性实验,于2007-10/2008-04在青岛大学附属医院骨科实验室完成.材料:收集半月板撕裂和盘状半月板患者关节镜手术中切取的半月板组织用于人半月板纤维软骨细胞培养.方法:利用聚合酶链式反虚从人肝细胞cDNA文库中获得人胰岛素样牛长因子Ⅰ基因,将其克隆入双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP中.将关节镜手术中切取的成人半月板组织,体外进行分离培养.利用阳离子脂质体FuGene6将人胰岛素样生长闪子Ⅰ转染入人半月板纤维软骨细胞中.主要观察指标:转染人胰岛素样生长因子Ⅰ后增强型绿色荧光蛋白的表达;检测细胞上清中人胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌浓度:流式细胞仪检测细胞转染后的变化.结果:基因测序及酶切,聚合酶链反应等均证实人胰岛素样牛长因子Ⅰ基因的正确克隆,并形成正确的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1.人半月板纤维软骨细胞在接种40 h后贴擘并伸展为成纤维细胞样,三角形或多角形外观.增强型绿色荧光蛋白的表达逐渐增加,在转染后56 h达到峰值.细胞上清中人胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白质的浓度变化趋势类似增强型绿色荧光蛋白的表达,峰值町达22.68 μg/L.蛋白免疫印迹、反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学染色均证实人胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白质的存在.转染后部分细胞表犁发生变化,增殖加速.流式细胞仪检测转染后S期细胞比例增多.结论:人类半月板纤维软骨细胞町被阳离子脂质体安全有效地转染,转染的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因可分泌较高水平的生长因子并加速细胞的增殖.
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骨关节炎软骨细胞的体外分离培养
背景:由于体外分离培养骨关节炎患者软骨细胞存在难度,同时软骨组织中因富含大量的基质,且软骨细胞分布于其中的软骨陷窝中,因此与其他细胞相比,软骨细胞的分离更为困难.目的:从骨关节炎行人工膝关节置换者的关节软骨中分离软骨细胞,并改良其酶消化法分离软骨组织,观察软骨细胞的生物学特性.设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-04/2008-03在解放军第三军医大学烧伤研究所实验室完成.对象:标本取材于解放军第三军医大学西南医院关节外科中心同期收治的10例人工膝关节置换患者软骨组织(＞3 cm).方法:切取原发性骨关节炎患者关节软骨,将软骨剪成1mm×1 mm×1mm左右的碎块,以Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶消化分离关节软骨细胞,同期对比用Ⅱ型胶原酶加胰蛋白酶消化法消化软骨后的收获细胞数及细胞成活率,分离细胞进行原代和传代培养.主要观察指标:以倒置相差显微镜观察体外培养软骨细胞形态;以甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色进行软骨细胞鉴定;四甲基偶氮唑盐法测定骨关节炎细胞增殖情况.结果:改良的Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶法,对原代关节软骨细胞的分离取得了优良而稳定的效果,与传统的胰蛋白酶消化法相比,收获细胞数为3.72×106,细胞存活率为97.5%,二者相比有显著性差异(P＜0.05).体外培养观察软骨细胞贴壁和生长均较缓慢.原代和传代后细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学和甲苯胺蓝异染反应均较弱.软骨细胞增殖和生长缓慢.结论:Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶分离骨关节炎患者软骨细胞的技术简单且易操作,分离培养的软骨细胞符合骨关节炎时软骨退变的表现,可为骨关节炎的病因研究及软骨细胞移植治疗骨性关节炎提供实验基础.
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体内生物反应器与体内骨组织工程
近年来,骨组织工程研究在种子细胞、支架材料和构建技术3个主要方面均取得了巨大进展,但复合体外培养细胞的骨组织工程产品临床应用仍面临挑战.体内骨组织工程足以受体自身机体作为生物反应器,单纯应用生物材料而不外加细胞或生长因子,在骨或非骨环境构建形成骨移植物修复自体骨缺损的技术.有关研究显示这是一种调动机体自我再生能力的组织工程新策略,具有切实可行的应用前景.
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快速老化动物模型SAMP8小鼠及其相关研究进展
SAMP8鼠由日本京都大学竹田俊男教授开发成功,主要以学习记忆功能呈增龄性加速衰退,中枢神经系统如皮质、海马等部位发生病理改变为主,是一种比较理想的研究脑老化和痴呆的模型,亦是日前研究快速衰老的唯一哺乳类模式动物.行为学、形态学、神经生化和分子牛物学为此提供了较充足的证据.SAMP8鼠可被广泛应用于阐明年龄相关的学习记忆功能改变及认知缺陷的基本机制,研究老化相关性疾病,评价治疗老化关联疾病和改善学爿记忆机能的益智药物.但SAMP8所涉及的相关疾病主要是阿尔茨海默病,能否用于其他衰老相关性疾病如帕金森病仍需进一步研究.
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锶对成骨及破骨细胞生物学特性的影响
目前对含锶药物治疗骨质疏松症的研究越来越多,体内外研究均表明锶具有促进成骨细胞生长和抑制破骨细胞形成的作用.在细胞水平上,锶能通过破骨细胞减少骨重吸收和通过成骨细胞促进骨形成;在分子水平上,锶能活化第二信使和细胞丝裂原活化蛋白激酶信号途径,并且能抑制RANKL-RANK之间的相互作用.在剂量方面,长期高剂量锶治疗可导致实验动物佝偻病,低剂量锶治疗对于减少骨折的风险也有效,补充适度剂量的锶有助于预防和治疗骨质疏松性骨折.锶作为一种新型抗骨质疏松药物的有效成分,代表了骨质疏松症治疗的一个重要发展.
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美国言语残疾的研究现状与思考
美国言语残疾研究多侧重于言语残疾的病理学研究,大致可分为3个时期:第1个时期从19世纪70年代到20世纪初,以Wernicke和Lichteim为代表,强调语言功能定位,建立解剖关联学说,认为小同大脑局部损伤可引起语言不同方面的功能障碍,不同言语残疾类型与一定的人脑局灶病变有关.第2个时期从20 世纪初到20 世纪50年代,代表人物是Head、Goldstein,他们否定言语功能定位学说,提出语言机能整体学说,强调言语残疾分类应以患者的语言障碍为标准.从20世纪60年代至今为第3个时期,代表人物是Benson和Geschwind,他们继承和发展了Wernicke的解剖关联理论,提出皮质性失语综合征、皮质下失语综合征的基本分类,强调神经解剖和心理语言学在言语残疾研究中的重要作用.
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一个遗传性全白甲中国家系FZD5、LOC729607基因突变分析
背景:遗传性全白甲是一种少见的常染色体显性遗传病,其致病基因目前尚未发现.目的:对一个中国汉族遗传性全白甲家系的2个候选基因进行突变筛查检测,研究遗传性全白甲的分子遗传基础,设计、时间及地点:候选基因突变筛查检测,于2007-01/06在中国人类基因组北方研究中心实验室完成.材料:搜集一遗传性全白甲家系患者静脉血,制备基因组DNA.方法:采用定位候选克隆法,在已经定位的致病基因区域内,选择FZD5,LOC729607基因进行突变筛查.应用PCR扩增、PCR产物直接测序的方法检测和对比遗传性全白甲家系内3例患者和一个正常人候选基因的外显子区及邻近内含子区域碱基顺序,并将测序结果与NCBI数据库内标准系列对比.主要观察指标:检测和对比遗传性全白甲家系内患者和正常人候选基因的外显子区及邻近内含子区域碱基顺序,并将测序结果与NCBI数据库内标准系列对比,发现患者、正常人、标准系列碱基顺序的差异,分析这些差异的意义.结果:FZD5基因exon706位碱基A→G;LOC729607基因exon5 F游51661位缺T,exon6上游57257位C→T,exon7上游71187位AG杂合.所检测到的变异在家系中患者和正常人中都存在,在NCBI数据库中能查到相应的位点,是单核苷酸多态.结论:在FZD5(frizzled 5),LOC729607基因编码区域及邻近非编码区域中未发现遗传性全白甲家系的致病突变.
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兰州地区错(牙合)畸形的Bolton指数分析
背景:上下颌牙量间的协调是获得良好咬合关系的基础,Bolton指数分析是评估牙量是否协调的重要方法.目的:分析兰州地区各类错(牙合)畸形患者Bolton指数及Bolton指数小调发生率的分布情况及差异.设计:调查分析.时间及地点:调查于2007-05在西北民族大学医学院口腔实验审及兰州化学工业公司医院口腔科完成.对象:选择2004-01/2006-12正畸科就诊患者共352人,男105人,女247人,年龄11-38岁,其中安氏Ⅰ类170人,安氏Ⅱ类109人,安氏Ⅲ类73人.方法:选择352例不同类型错(牙合)畸形患者的记存模型,分别测量上、下颌前牙量和全牙量.主要观察指标:计算Bolton指数值及Bolton指数不调的发生率.结果:前牙及全牙Bolton指数性别间差异无显著性意义;安氏Ⅰ类和安氏Ⅲ类错(牙合)畸形患者前牙及全牙Bolton指数均大于安氏Ⅱ类,差异具有显著性意义;不同安氏分类错(牙合)畸形患者前牙及全牙Bolton指数均值为Ⅲ类＞Ⅰ类＞Ⅱ类.结论:不同错(牙合)畸形患者Bolton指数存在一定差异,正畸前应行Bolton指数分析.
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类风湿因子与类风湿关节炎疾病活动性及症状程度的相关性
背景:评价类风湿关节炎患者病情活动性和症状程度传统上一直使用类风湿因子参数,但在目前的临床实践中常出现类风湿因子的数值变化与患者临床改善情况不相符.目的:探讨类风湿因子与类风湿关节炎疾病的活动性及严重程度的相关性.设计、时间及地点:随机横断面调查,于2006-09/2007-09在中山大学附属第三医院风湿免疫科完成.参试者:选择76例类风湿关节炎患者,男11例,女65例,平均年龄(44±13)岁,均符合活动期类风湿关节炎的诊断.方法:对患者的关节功能、X射线分期、休息痛、晨僵、压痛关节数、压痛关节指数、肿胀关节数、肿胀关节指数、日常生活能力、血沉、C-反应蛋白、类风湿因子、血红蛋白等指标进行评估.应用Pearson相关或Spearman等级相关分析类风湿因子分别与这些因子之间的相关性,其中对于服从正态分布的数据进行Pearson相关分析,对于非正态分布的数据进行Spearman相关分析.主要观察指标:类风湿因子分别与上述因子之间的相关性.结果:类风湿因子与年龄、病程、关节功能、X射线分期、休息痛、晨僵、压痛关节数、压痛关节指数、肿胀关节数、肿胀关节指数、日常生活能力、血沉、C-反应蛋白、血红蛋白之间的相关系数均无显著性差异(P＞0.05).结论:类风湿因子与类风湿关节炎疾病活动性和症状程度无相关性.
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伏案4小时健康青年男性脑血流图的变化
背景:正常人脑所需的氧占全身需要量的1/4,脑力劳动者更高.由于久坐头处于前屈位,颈部血管轻度屈曲或受压,会使流向脑部的血流受到限制,脑血流量减少,从而造成大脑的氧和营养物质供应不足,出现头晕、眼花、心悸、乏力、手足麻木等不适症状.目的:调查健康青年男性4 h伏案工作中基底动脉、左右椎动脉、左右大脑中动脉收缩期峰速度、平均速度、舒张期末峰速度的变化.设计、时间及地点:横断面调查,于2007-11/2008-01在南京体育学院运动人体科学实验室完成.对象:随机抽取健康青年男性40名,均无明显头、颈、肩、腰、腿部症状,实验前24h未从事剧烈运动,无肌肉疲劳症状.方法:受试者连续不间断伏案电脑操作4 h,属于中低工作强度.测试工作前及工作中每间隔1.0 h的脑血流指标,共5个观察点.主要观察指标:使用kJ-2系列超声经颅多普勒血流分析仪检测基底动脉、左右椎动脉、左右大脑中动脉的收缩期峰速度、平均速度及舒张期末峰速度.对脑血流各指标进行回归分析.结果:所测5条动脉的收缩期峰速度、平均速度和舒张期末峰速度随着疲劳的发展逐渐呈线性降低,终止值明显低于初始值.基底动脉的收缩期峰速度、舒张期末峰速度,左椎动脉的收缩期峰速度、平均速度、舒张期末峰速度,右大脑中动脉的平均速度的回归系数差异具有显著性意义(P≤0.05),右椎动脉收缩期峰速度和右大脑中动脉收缩期峰速度差异具有极其显著性意义(P＜0.01),而左大脑中动脉未出现显著性差异.结论:长时间伏案工作会导致脑血流量下降,从而影响脑部供血.
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保守疗法治疗脊髓型颈椎病效果的系统评价
背景:脊髓型颈椎病保守疗法很多,每一种治疗方案目前尚未统一,有必要将各疗法的相关研究予以总结评价.目的:运用Cochrane评价系统的方法评价当前国内保守疗法对脊髓型颈椎病的有效性与安全性.设计、时间及地点:随机对照试验(RCT)和半随机对照试验(CCT),于2008-03/06在四川大学华西医院中国循证中心完成.对象:来源于1978-01/2008-04CCBM、CNKI、VIP3个数据库及辅以手工检索相关文献,选择其中4篇542例,年龄30-71岁,采用随机分组的文章.方法:计算机检索CCBM、CNKI、VIP数据库.电话访问标称随机对照试验作者证实是否真正RCT;纳入保守疗法治疗脊髓型颈椎病的随机对照试验并对其进行质量评价.由于纳入研究的干预手段不统一,未能进行合并分析.只能进行单个研究的MeTa分析.采用随机方法-选择性偏倚评估、隐蔽分组-选择性偏倚评估、盲法-实施偏倚与测量偏倚、剔除、失访、退出-损耗性偏倚评价.主要观察指标:①针灸、电针、拔罐与氯唑沙宗、心痛定,胞二磷胆碱相比较其有效率.②针灸、推拿、中药与扶他林(双氯芬酸)相比较其有效率.③角度选掸性牵引与0°牵引相比较其有效率.④中药与弥可保相比较其有效率.⑤不良反应.结果:所有研究均有选择性偏倚、实施测量性偏倚、损耗性偏倚的高度可能性,质量等级均为"C"级.且只有1个研究证明实验组的有效率优于对照组.研究1表明,针灸、电针、拔罐治疗脊髓型颈椎病的显效率及有效率优于氯唑沙宗、心痛定,胞二磷胆碱.研究2表明,针灸、推拿、中药治疗脊髓型颈椎病的显效率及自效率优于扶他林(双氯芬酸).研究3表明,角度选择性牵引治疗脊髓型颈椎病的显效率优于及好转率略于0°牵引,而无足够证据证明有效率优0°牵引.研究4表明,无足够证据证明中药治疗脊髓型颈椎病优于弥可保.4个研究均末出现不良反应而终止试验.结论:所纳入的4个研究中,由于目前保守疗法的不统一,质量不高,诊断标准、随访时间、结果测量标准不一致,因此需要开展大样本、多中心,方法学规范的高质量随机对照试验进一步验证.
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跟骨骨密度及骨强度与运动的关系
背景:对跟骨骨密度和骨强度进行全面评价,为骨质疏松症的预防和治疗提供新的思路.目的:了解苏州市20-65岁人群跟骨骨密度及骨强度与纵跳高度、闭目单足站立时间的相关性.设计、时间及地点:随机整群分层抽样调查,于2007年在苏州市体育科学研究所完成.对象:每5岁为一个年龄段,随机抽取20～65岁成年人,男性104人,年龄(34.1±9.7)岁,身高(172.54±4.94)cm,体质量(69.50±8.82)kg:女性54人,年龄(39.5±13.6)岁,身高(160.14±10.61)cm,体质量(53.70±8.15)kg.方法:按照国家体育总局群体司颁发的<国民体质测定标准手册>的要求测试闭目单足站立时间和纵跳高度.采用超声骨密度仪测试跟骨超声参数.即反映骨密度的超卢波衰减系数和反映骨强度的跟骨骨质量指数.在跟骨超卢参数测试之前,对受试者进行运动方式和运动年限的调查.主要观察指标:①单足闭目平衡站立时间和纵跳高度对跟骨超声参数的影响.②不同的运动方式和运动年限对跟骨超声参数的影响.结果:①纵跳高度与超声波衰减系数和跟骨骨质量指数之间有显著相关性(P＜0.01).即纵跳高度越高,骨密度和骨强度越大,骨折危险性降低.②单足闭目平衡站寺时间与超声波衰减系数不存在相关性;而与跟骨骨质量指数存在显著相关性(P＜0.05).③力量和跳跃等运动项目的超声波衰减系数和跟骨骨质量指数耍高于游泳和散步等有氧运动项目,差异存在显著性(P＜0.05).④运动年限在3年以上成年人的超声波衰减系数和跟骨骨质量指数高于运动年限在1年以下的成年人,差异存在显著性(P＜0.05).结论:苏州市20～65岁人群纵跳高度与跟骨的骨密度和骨强度存在线性关系,单足闭目平衡站立时间仅与骨强度存在相关性.经常进行力量和跳跃项日锻炼且锻炼年限越长,骨密度和骨强度越高.
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运动疗法治疗椎管内硬膜下出血疼痛患者1例
患者女48岁,无明原因脊髓出血致双下肢不完全性的瘫痪,出现颈、肩、腰疼痛,二便不同程度功能障碍.MRI显示胸段经椎管内硬膜下出血,DSA未发现异常.神经外科讨论无手术指征,以保守治疗及康复训练治疗.患者疼痛评定分别采用45区体表面积图和简化MeGill疼痛问卷,运动和感觉采用美国脊柱损伤协会(ASIS)于2000年修订的第5版中运动与感觉检查项且与评分的方法,结果3者改善均明显.
