中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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父母供者外周血单倍体移植治疗儿童难治性重型再生障碍性贫血
移植物抗宿主病：graft-versus-host disease，GVHD；人类白细胞抗原：humon leukocyte antigen，HLA
背景：在中国，儿童患者获得人类白细胞抗原相合同胞供者较困难，而以父母供者较多。
目的：回顾性分析父母供者外周血单倍体造血干细胞移植治疗儿童复发难治性重型再生障碍性贫血的疗效及安全性。
方法：纳入17例无人类白细胞抗原相合同胞及相合非血缘供者，且免疫抑制疗效不佳的复发难治性儿童重型再生障碍性贫血患者，行父母供者外周血单倍体造血干细胞移植。采用“氟达拉滨+环磷酰胺＋兔抗人胸腺细胞球蛋白抗体”预处理方案，应用环孢素+吗替麦考酚酯+甲氨蝶呤三联短程预防移植物抗宿主病。
结果与结论：①患者17例中16例(94%)获得造血重建，中性粒细胞≥0.5×109 L-1和血小板≥20×109 L-1的中位时间分别为13(11-15) d和17(12-28) d。②急性移植物抗宿主病发生率47%(8/17)，其中Ⅰ-Ⅱ度29%(5/17)，Ⅲ-Ⅳ度18%(3/17)。慢性移植物抗宿主病发生率41%(7/17)。③中位随访268(43-753) d，12例存活，总生存率为71%(12/17)，死亡5例(29%)，均为移植相关死亡，其中1例植入失败死于皮肤真菌感染，1例死于移植物抗宿主病，3例死于肺部重症感染。无患儿移植后复发。④结果显示，无人类白细胞抗原相合同胞及相合非血缘供者，且免疫抑制疗效不佳的复发难治性儿童重型再生障碍性贫血患者，父母供者外周血单倍体造血干细胞移植是一种安全有效的挽救治疗方法。 -
自体骨髓干细胞移植联合当归活血汤治疗糖尿病足
背景：近年来，糖尿病足的发病率急剧增高，常常导致足部溃疡、截肢和死亡。
目的：研究自体骨髓干细胞移植与当归活血汤合用治疗糖尿病足的疗效。
方法：选择60例伴有慢性下肢缺血的糖尿病足患者，分为3组，每组20例，其中常规治疗组38条患肢，自体骨髓干细胞移植治疗组36条患肢，自体骨髓干细胞移植与当归活血汤合用治疗组39条患肢。治疗12周，检测肢体冷感、疼痛、皮肤温度、间歇性跛行、踝臂指数等指标，同时随访观察有无相关的并发症或不良反应。
结果与结论：常规治疗组治疗前后各项指标比较差异无显著性意义(P >0.05)。自体骨髓干细胞组和联合治疗组治疗后各项指标均有明显改善(P <0.05)。治疗后的联合治疗组与自体骨髓干细胞组相比，各项指标也均明显好转(P <0.05)，且自体骨髓干细胞移植后无不良反应。试验结果说明自体骨髓干细胞移植与中药当归活血汤合用可以有效治疗糖尿病足。 -
骨髓间充质干细胞移植肝硬化大鼠肝脏超微结构、体视学参数和肝功能的变化
背景：间充质干细胞移植治疗肝硬化的疗效在学术界尚有一定的争议，对受体组织结构和功能的影响有待进一步研究。
目的：探讨骨髓间充质干细胞对肝硬化大鼠肝脏超微结构、体视学参数和肝功能的影响。
方法：构建大鼠肝硬化模型，并采用骨髓间充质干细胞移植治疗，透射电镜观察大鼠肝组织的超微结构，体视学分析软件分析模型组、治疗组、正常组大鼠肝窦的体视学参数变化，生化仪检测肝功能指标的改变。
结果与结论：①模型大鼠肝细胞缺氧严重，许多线粒体破坏，核固缩明显，肝窦呈毛细血管化；骨髓间充质干细胞治疗组肝组织超微结构明显改善，肝细胞核基本正常，线粒体肿胀显著缓解，核膜孔堵塞现象有所减轻。②模型组大鼠肝窦数目明显减少，而肝窦总面积及平均直径明显增大，与治疗组及正常组比较差异有显著性意义(P <0.05)。③与模型组比较，治疗组肝功能明显改善，白蛋白水平显著升高，谷丙转氨酶及直接胆红素水平显著下降(P <0.05)，但谷草转氨酶变化不明显(P >0.05)。④结果提示骨髓间充质干细胞移植可改善肝硬化大鼠肝功能和肝组织结构，减轻肝窦病变，对肝硬化有一定的治疗作用。 -
补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞对大脑中动脉闭塞再灌注治疗的作用机制
背景：急性脑缺血时基质金属蛋白酶通过降解细胞外基质，破坏内皮细胞间的紧密连接而增加微血管的通透性，破坏血脑屏障，导致脑水肿的发生。
目的：旨在从基质金属蛋白酶及细胞外基质方面，探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠的治疗作用机制。
方法：将96只SD大鼠随机分为模型组，组织型基质金属蛋白酶抑制剂1组，组织型基质金属蛋白酶抑制剂1+骨髓间充质干细胞组(简称骨髓间充质干细胞组)，组织型基质金属蛋白酶抑制剂1+补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞组(简称联合组，分12，24，36，48 h 4个亚组)。构建大鼠脑缺血再灌注模型，在立体定位仪下采用微量进样器脑部给予基质金属酶抑制剂及培养的骨髓间充质干细胞；联合组术前7 d开始给予补阳还五汤(10 mL/kg)灌胃，其余各组给予等剂量的生理盐水。给药10 d后采集实验动物血清和脑组织，采用ELISA法测定血清中基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9水平，明胶酶谱法分析脑组织基质金属蛋白酶9活性。结果与结论：与模型组相比，各组血清基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9水平和脑组织基质金属蛋白酶9的活性均有不同程度的下降，其中基质金属蛋白酶9下降明显(P <0.05)；与骨髓间充质干细胞组相比，联合组36 h和联合组48 h血清基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9水平和脑组织基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶9前体活性下降为明显(P <0.01)。结果表明补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞可与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1协同作用，从而抑制因基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9所致的细胞外基质降解，修复受损的血脑屏障及防治缺血后脑水肿的形成。 -
电针刺激对神经干细胞移植治疗脊髓损伤大鼠后肢功能的影响
背景：单纯的神经干细胞移植对受损脊髓组织的修复作用并不理想，为了进一步提高移植细胞在体内的存活、增殖及定向分化为神经元的比例，必须进一步改善脊髓损伤区的微环境。
目的：观察神经干细胞移植联合电针刺激对脊髓损伤大鼠后肢功能及电生理的影响。
方法：将脊髓损伤模型SD大鼠72只按随机数字表法分为4组：对照组尾静脉注入培养液，神经干细胞组经尾静脉注入等体积神经干细胞悬液，电针刺激组自模型完成6 h起采用督脉加体穴电针1周，联合组尾静脉注射神经干细胞后，同时采用督脉加体穴电针1周。分别于造模前、造模后1，3 d、1-4周通过BBB评分、斜板试验进行运动功能评定。造模后4周取材行病理切片苏木精-伊红染色，荧光显微镜观测CM-Dil 标记的神经干细胞存活及分布情况，辣根过氧化物酶示踪观察神经纤维再生情况，运动诱发电位和体感诱发电位观察大鼠神经电生理恢复情况。
结果与结论：造模后2-4周大鼠下肢运动功能评价联合组优于神经干细胞组及电针刺激组，神经干细胞组和电针刺激组优于对照组。造模后4周，神经干细胞组和电针刺激组损伤区可见少量神经轴索样结构，脊髓空洞较小，联合组可见较多神经轴索样结构，未见脊髓空洞。造模后4周，CM-Dil 阳性细胞和辣根过氧化物酶阳性神经纤维数：联合组>神经干细胞组与电针刺激组>对照组，各组之间差异有显著性意义(P <0.05)。运动诱发电位和体感诱发电位的潜伏期：联合组<神经干细胞组与电针刺激组<对照组，各组之间差异有显著性意义(P <0.05)；运动诱发电位和体感诱发电位的波幅：联合组>神经干细胞组与电针刺激组>对照组，各组之间差异有显著性意义(P <0.05)。结果提示神经干细胞移植的同时联合电针刺激能够促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生，改善其大鼠肢体运动功能及电生理功能。 -
热休克处理骨髓Sca-1+细胞移植治疗小鼠心肌梗死
背景：近年来的研究发现，干细胞可以直接定向分化为成熟心肌细胞或促进其再生，为心肌梗死治疗提供一种全新的治疗策略，但是细胞移植率低使其向心肌细胞分化和执行心肌修复能力下降。
目的：探讨热休克Sca-1+细胞在小鼠心肌梗死治疗中的作用。
方法：磁珠分选骨髓中Sca-1+细胞，对Sca-1+细胞进行热休克处理3 h。建立心肌梗死小鼠动物模型，将其随机分为2组，分别经尾静脉注入1 mL热休克Sca-1+细胞悬液、1 mL非热休克Sca-1+细胞悬液。移植后检测细胞存活率、小鼠心脏功能恢复情况、心肌细胞凋亡数目、心肌纤维化程度以及左心室HSF、HSP70及miR-34a表达。
结果与结论：①热休克Sca-1+细胞移植组小鼠心脏sry基因表达显著高于非热休克Sca-1+细胞移植组。②热休克Sca-1+细胞移植组小鼠射血分数及左心室短轴缩短率显著高于非热休克Sca-1+细胞移植组，左心室的舒张末期内径以及收缩末期内径显著低于非热休克Sca-1+细胞移植组。③热休克Sca-1+细胞移植组小鼠的心脏纤维化程度及心肌细胞凋亡均显著低于非热休克Sca-1+细胞移植组。④热休克Sca-1+细胞移植组小鼠左心室HSF和HSP70表达明显高于非热休克Sca-1+细胞移植组，miR-34a表达明显低于非热休克Sca-1+细胞移植组。结果表明热休克Sca-1+细胞移植能够减少心肌细胞凋亡和心肌梗死面积，改善心脏功能。 -
银杏达莫注射液联合骨髓间充质干细胞移植改善脑梗死后的神经功能
背景：通过细胞移植重建损伤脑组织成为治疗脑梗死的新途径，骨髓间充质干细胞成为近年来细胞移植治疗领域的研究热点。
目的：探讨银杏达莫注射液联合骨髓间充质干细胞移植对脑梗死大鼠神经功能的改善作用及相关机制。
方法：利用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型，建模成功后60只SD大鼠随机分为对照组、细胞移植组及联合组。对照组尾静脉注射PBS、细胞移植组尾静脉注射2.5×109 L-1的骨髓间充质干细胞悬液、联合组尾静脉注射2.5×109 L-1的骨髓间充质干细胞悬液和银杏达莫2 mL/kg，1次/d，连续注射5 d。于移植后的1，3 d及1，2周进行mNSS行为学评分，以观察大鼠神经功能缺损状况。移植后2周RT-PCR检测脑组织中脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43基因表达变化，TUNEL法检测细胞凋亡情况，免疫组化法检测BrdU阳性细胞数。
结果与结论：移植后的1，3 d各组大鼠神经功能缺损评分差异无显著性意义(P >0.05)，在移植后1，2周，联合组神经功能缺损评分低于细胞移植组及对照组(P <0.05)；移植后2周，联合组脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43 mRNA表达明显高于细胞移植组及对照组(P<0.05)，联合组凋亡细胞数目明显少于细胞移植组及对照组(P <0.05)，联合组BrdU阳性细胞数量明显多于细胞移植组及对照组(P <0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞联合银杏达莫干预能促进脑梗死组织脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43 mRNA的表达，抑制细胞凋亡，改善大鼠神经功能。 -
神经干细胞与血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元变化的相关性
背景：血管性痴呆患者存在额叶皮质及海马胆碱能神经元受损，可能是导致患者认知功能受损的形态学基础。
目的：探讨神经干细胞与血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元变化的相关性。
方法：纳入90只SD大鼠，随机均分为3组，其中假手术组仅分离颈总动脉，模型组和神经干细胞移植组采用两血管结扎法建立血管性痴呆动物模型，神经干细胞移植组在建立血管性痴呆动物模型之后向大鼠海马CA1区注射5μL神经干细胞，另外两组按照同样的操作注射相同剂量的生理盐水。移植后第3，7，14，30，60天，分别处死各组6只大鼠，采用S-P免疫组化法检测各组脑实质BrdU阳性细胞和ChAT阳性细胞分布情况，利用Morris水迷宫系统检测大鼠学习记忆能力。
结果与结论：BrdU 阳性细胞主要分布在大脑皮质区以及海马区，尤其是血管周围。在基底核和丘脑以及室管膜区，可观察到少量 BrdU 阳性细胞存在。随着时间的推移，BrdU 阳性细胞数目不断下降，到移植后60 d，仅存在少量BrdU阳性细胞存活。移植后不同时间模型组和神经干细胞移植组的ChAT阳性细胞数均显著大于假手术组(P <0.05)；模型组ChAT阳性细胞数显著低于神经干细胞移植组(P <0.05)。模型组寻找平台时间显著长于假手术组，穿越平台次数显著少于假手术组(P <0.05)；神经干细胞移植组的寻找平台时间显著短于模型组，穿越平台次数显著大于模型组(P <0.05)。结果表明神经干细胞可以在大鼠脑内存活并发生迁移，显著改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力，相关机制可能与海马胆碱能神经元分化和生长有关。 -
灯盏细辛联合骨髓间充质干细胞移植对脑梗死的保护作用机制
背景：通过细胞移植重建损伤脑组织成为治疗脑梗死的新途径，骨髓间充质干细胞成为近年来细胞移植治疗领域的重要种子细胞之一。
目的：探讨灯盏细辛注射液联合骨髓间充质干细胞移植对急性脑梗死大鼠S100B蛋白及超氧化物歧化酶表达的影响。
方法：采用线栓法制作大鼠急性脑梗死模型，建模成功后将80只SD大鼠随机分为对照组、灯盏细辛组、骨髓间充质干细胞组及联合组。分别于治疗前后用酶联免疫法检测各组大鼠血清S100B蛋白水平，黄嘌呤氧化酶法检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶的表达；通过NIHSS神经功能评分观察模型大鼠的神经行为学变化，通过TTC染色测定脑梗死体积。
结果与结论：在治疗后第3，7，14天，灯盏细辛组、骨髓间充质干细胞组的S100B蛋白水平明显低于对照组，但高于联合组，差异有显著性意义(P <0.05)；灯盏细辛组、骨髓间充质干细胞的超氧化物歧化酶表达水平明显高于对照组，低于联合组，差异有显著性意义(P <0.05)；治疗后第1，2，3周各组的NIHSS神经功能评分比较，联合组<灯盏细辛组及骨髓间充质干细胞组<对照组，差异有显著性意义(P <0.05)；在治疗后2周联合组的脑梗死体积明显小于灯盏细辛组及骨髓间充质干细胞组，灯盏细辛组及骨髓间充质干细胞组又明显小于对照组，差异有显著性意义(P <0.05)。结果表明灯盏细辛注射液联合骨髓间充质干细胞移植能够抑制急性脑梗死大鼠S100B蛋白表达，提高超氧化物歧化酶活性，从而起到脑保护作用。 -
内源性增加单个核细胞自体移植提升血管闭塞性脉管炎调节性T细胞比例
背景：自体外周造血干细胞具有多向分化潜能的特点，可促进缺血肢体新生血管形成，改善和恢复患肢的血液供应。
目的：观察自体外周血单个核细胞自体移植对血管闭塞性脉管炎大鼠的治疗作用。
方法：将24只大鼠随机分为对照组、模型组和粒细胞集落刺激因子组。在模型组和粒细胞集落刺激因子组大鼠中股动脉注射月桂酸钠建立血管闭塞性脉管炎大鼠模型。粒细胞集落刺激因子组大鼠连续5 d以重组人粒细胞集落刺激因子动员外周血单个核细胞，第7天接受外周血单个核细胞移植，对照组和模型组大鼠仅给予生理盐水。
结果与结论：与造模前相比，模型组和粒细胞集落刺激因子组大鼠造模后足背部体温及CD4+CD25+调节性T细胞比例显著降低，下肢溃疡面积明显增加；粒细胞集落刺激因子组大鼠动员后第6天白细胞数量及CD34+细胞占单个核细胞的百分比增加，外周血单个核细胞移植之后1个月时足背部体温与建模前接近，CD4+CD25+调节性T细胞比例显著上升。提示外周血单个核细胞内源性增加后进行自体移植，可提升血管闭塞性脉管炎大鼠调节性T细胞比例，有助于迅速缓解症状、促进溃疡愈合。 -
兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及原代培养
背景：兔来源的骨髓间充质干细胞是具有较强的体外增殖和多系统分化潜能的成体干细胞，在组织工程及生物治疗领域蕴藏着巨大的潜能。
目的：体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞，观察骨髓间充质干细胞的生物学特征。
方法：无菌条件下抽取兔骨髓，分别运用全骨髓贴壁法和Percol 密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞，利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。在显微镜下观察细胞形态特征及生长规律，流式细胞技术检测细胞表面抗原标记物的表达。
结果与结论：兔骨髓间充质干细胞贴壁时间短，增殖快，经过细胞传代后能够获得进一步纯化的细胞，杂质细胞减少。原代细胞形态即呈现三角形、长梭形、纺锤形的贴壁细胞特征。第5代骨髓间充质干细胞呈典型的极性漩涡状生长，形态单一均匀，不具有表达造血前体细胞表面标志抗原 CD34和白细胞表面标志抗原CD45的表面标记物功能，但是具有能够表达出整合素家族的成员 CD29及黏附分子CD44的特点。说明经全骨髓贴壁法和Percol 密度梯度离心法体体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性，经流式细胞分析鉴定为兔骨髓间充质干细胞。 -
共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化
背景：基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段，具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。
目的：探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p，microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用，为临床软骨损伤修复提供新的策略。
方法：利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA，并利用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证；构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition ， Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞，空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况；通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。
结果与结论：构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition共转染人骨髓间充质干细胞，成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平；miRNA基因芯片与RT-qPCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低；转染组与未转染组以及空载体组相比：①细胞增殖明显受到抑制。②番红O染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。③RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p，抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。 -
骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞可异常影响骨髓瘤细胞株的趋化功能
背景：多发性骨髓瘤患者骨髓微环境中间充质干细胞有多种异常，但异常的间充质干细胞对骨髓瘤细胞的趋化功能影响目前仍不清楚。
目的：比较正常人与多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞在体外对骨髓瘤细胞株趋化迁移的影响。
方法：体外培养的正常人骨髓间充质干细胞或初诊骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞，在有或无硼替佐米条件下，分别与骨髓瘤细胞株U266细胞直接共培养，比较U266细胞的Transwel 迁移率、定量PCR检测mRNA的表达水平。同时还检测 U266细胞对正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养液上清的Transwel 迁移情况。
结果与结论：正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞与 U266细胞直接共培养后，两组骨髓瘤细胞的趋化特性有区别，表现为骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞组的U266细胞基础Transwel 迁移率高、CCR1的表达水平高(P均<0.05)。硼替佐米处理U266细胞后并不能消除两组的的区别。然而，U266细胞对正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养液上清的Transwel 迁移并没有明显区别。结果提示骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞本身存在一些内在缺陷，在与骨髓瘤细胞株 U266相互作用过程中，可以影响 U266的体外趋化功能，并且这一影响主要是通过骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞直接相互作用引起的。 -
let-7f对骨髓间充质干细胞增殖的影响
背景：microRNA let-7f和炎性因子白细胞介素6对骨髓间充质干细胞的具体作用及两者之间是否存在联系尚不可知。
目的：分析let-7f及白细胞介素6表达水平对骨髓间充质干细胞增殖的影响及两者的关系。
方法：①构建let-7f过表达及抑制慢病毒载体，分别转染SD大鼠骨髓间充质干细胞，实验分为4个组：转染上调组(转染LV-rno-let-7f-up)、转染下调组(转染LV-rno-let-7f-down)、阴性转染组(转染空病毒)、未转染组(不进行病毒转染)。 qRT-PCR检测各组细胞let-7f表达水平。MTT法、流式细胞术和ELISA等方法检测不同let-7f表达水平下细胞增殖情况及白细胞介素6表达水平，qRT-PCR及Western blot检测各组Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平。②预测let-7f潜在的靶基因，构建野生型/突变型白细胞介素63’UTR报告基因载体，分别与let-7f/let-7f inhibitor共转染293T细胞系，测定荧光素酶活性。
结果与结论：let-7f转染上调组较未转染组及阴性转染组细胞增殖能力及克隆能力明显增强，G 1期细胞数明显减少，S期明显增多，凋亡减少(P <0.05)；转染下调组结果与其相反。let-7f转染上调组细胞培养液中的白细胞介素6表达水平低于未转染组及阴性转染组(P <0.05)；转染下调组细胞培养液中的白细胞介素6则明显升高(P <0.05)；Western blot、定量PCR显示let-7f转染上调组Cyclin D1蛋白及mRNA表达上调(P <0.05)；转染下调组表达均下调(P <0.05)；未转染组与阴性转染组所有结果无明显差异(P >0.05)。野生型白细胞介素63’UTR报告基因载体与let-7f共转染细胞的荧光素酶活性显著减低(P <0.05)。结果表明上调let-7f表达水平可显著促进骨髓间充质干细胞增殖活性及克隆形成能力，减少凋亡，而下调let-7f表达水平则出现抑制作用。白细胞介素6过表达可抑制骨髓间充质干细胞增殖，考虑白细胞介素6是let-7f的靶基因，let-7f可能通过抑制白细胞介素6表达而促进细胞增殖。 -
成年大鼠脑膜组织中具有干细胞特性的细胞亚群体外可向神经元诱导分化
背景：神经干细胞具有多向分化潜能，可以分化为神经元和神经胶质细胞等，替代受损伤的脑细胞，达到修复神经损伤的目的。
目的：观察成年大鼠脑膜组织中具有干细胞特性细胞亚群的成神经诱导分化能力。
方法：取成年 SD 大鼠，麻醉后获取脑膜组织制备成细胞悬液，接种在培养皿中进行传代培养，进行 Nestin免疫荧光染色。取第3代细胞，用含曲古抑菌素A的完全培养基进行成神经诱导培养，诱导7 d之后采用Westen blotting检测神经细胞相关标志性蛋白NF-200和BM88蛋白的表达。
结果与结论：培养24 h，脑膜细胞中有部分球形细胞发生悬浮，部分细胞出现贴壁生长现象。另外，还可以观察到部分散在球形细胞逐渐形成克隆球，随着体积的不断增大，生长速度呈现下降趋势。免疫细胞化学染色分析干细胞标记物Nestin呈强阳性表达，细胞核使用Hoechst染色之后，荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。成神经诱导7 d时相关标志性蛋白NF-200和BM88蛋白均呈明显表达。结果表明，成年SD大鼠脑膜组织中具有干细胞特性的细胞亚群在体外诱导后能够向神经元方向发生分化。 -
转染胶质细胞源性神经营养因子诱导神经干细胞分化
背景：神经干细胞为神经系统功能重建和神经再生提供了一条新的途径，解决其定向诱导分化问题仍是目前的研究热点。
目的：探讨转染胶质细胞源性神经营养因子基因诱导大鼠胚胎神经干细胞向神经元和多巴胺能神经元分化的作用。
方法：构建PcDNA3-GDNF-GFP表达质粒，用脂质体介导该质粒转染大鼠胚胎神经干细胞并进行诱导分化，荧光显微镜观察转染情况，免疫荧光染色检测β微管蛋白Ⅲ和酪氨酸羟化酶表达。
结果与结论：胶质细胞源性神经营养因子基因转染后3 d，可观察到细胞呈绿色荧光细胞球状。诱导分化7 d，神经干细胞分化为神经元以及多巴胺神经元的比例明显增高。结果表明胶质细胞源性神经营养因子基因可以促进神经干细胞向神经元以及多巴胺能神经元分化。 -
利用月经血建立的经血源性基质干细胞系
背景：经血源性基质干细胞被证实是一种新型的成体干细胞，目前国内关于其系统的建系方法报道极少。
目的：建立经血源性基质干细胞系，并鉴定其表型和多能性。
方法：收集健康成年女性的月经血，通过密度梯度离心法分离出经血源性基质干细胞进行培养，观察细胞的形态及增殖特性；采用CCK-8法检测各株细胞的增殖能力，定期收集细胞进行核型分析，采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD34，CD38，CD44，CD45，CD73，CD90，CD105，Oct-4的表达，对细胞进行体外成脂和成骨诱导分化并鉴定。
结果与结论：成功从6名健康志愿者的经血中分离获得4株经血源性基质干细胞系。细胞呈现典型的梭状结构，具有46，XX核型，能在体外稳定迅速增殖，传代后大约48 h进入对数生长期，表达CD44，CD73， CD90，CD105及Oct-4，不表达CD38，CD34，CD45；成脂诱导22 d后油红O染色阳性，成骨诱导2周后茜素红染色阳性。实验表明经血源性基质干细胞具备扩增迅速、核型稳定、多潜能性等优点，通过建立经血源性基质干细胞系，为进一步的临床治疗应用以及科学研究奠定了基础。 -
软基质力学特性对滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的干预作用
背景：课题组前期研究表明，较软的培养基质对大鼠骨髓间充质干细胞的形态及细胞骨架有明显的影响。
目的：探讨不同弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质对人滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的影响。
方法：无菌条件下获取骨关节炎患者滑膜组织，有限稀释法获得原代人滑膜间充质干细胞，流式细胞术进行细胞表面标记物鉴定，多向诱导分化实验进行功能鉴定。用丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺制备0.4，6，30 kPa 3个弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质作为培养人滑膜间充质干细胞的基底，在转化生长因子β1存在的情况下分别培养7 d和14 d，RT-PCR方法检测软骨形成相关基因COL2A1、CRTAC1 mRNA的表达，以6孔细胞培养板作为对照组。
结果与结论：在不同弹性模量上生长的人滑膜间充质干细胞表现出不同的细胞形态；软基质的弹性模量及培养时间对人滑膜间充质干细胞成软骨基因COL2A1、CRTAC1的表达有交互作用：7 d时，CRTAC1 mRNA在6 kPa弹性模量聚丙烯酰胺凝胶上表达量高(F=44.350，P=0.000)；7 d时，COL2A1 mRNA在0.4 kPa弹性模量聚丙烯酰胺软基质上的表达量高(F=6.384，P=0.005)。较低弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质比常规细胞培养板更具有促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。 -
无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞
背景：目前临床上尚未发现完全治愈脊髓损伤，使其达到结构及功能恢复的治疗方法。已有的神经营养因子治疗方法促进神经细胞再生的效果有限，而干细胞移植治疗可能是现阶段修复脊髓损伤的有效方法之一。
目的：无血清悬浮分离培养法培养胎鼠脊髓源性神经干细胞，采用形态学、免疫荧光技术和多向分化能力进行神经干细胞鉴定。
方法：应用悬浮分离培养法，培养纯化孕13.5 d C57BL/6胎鼠的脊髓源性神经干细胞。倒置显微镜观察细胞形态学变化；CCK-8法检测细胞的增殖能力。免疫荧光技术检测Nestin和Sox2表达；使用自然分化法验证第4代脊髓源性神经干细胞多向分化特性，明确其分化能力。
结果与结论：采用无血清悬浮分离培养法可以顺利获取脊髓源性神经干细胞。培养的脊髓源性神经干细胞增殖活性良好，高表达Nestin和Sox2，且两种标记物与DAPI核染高度均匀吻合，说明细胞纯度高。进一步诱导分化显示，细胞可以向GFAP和Tuj1阳性细胞分化，证明脊髓源性神经干细胞分化潜能较好。该实验可建立一套体外培养脊髓源性神经干细胞分离、培养、纯化及鉴定体系，为后续神经干细胞的应用研究奠定基础。 -
干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达
背景：神经母细胞瘤是婴幼儿和儿童常见的实体肿瘤之一，靶向肿瘤干细胞的治疗能够有望从根本上治愈肿瘤，但是肿瘤干细胞数量较少，并具有抗凋亡、抗放化疗能力等，导致其对于放疗、化疗并不敏感。
目的：探究干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义。
方法：收集2004年6月至2014年2月新疆医科大学第一附属医院小儿外二科诊治的58例神经母细胞瘤患儿临床资料，其中神经母细胞瘤患儿46例，节细胞母细胞瘤患儿12例，通过免疫组织化学分析法分析所有患儿肿瘤组织中的CD133表达水平，并研究神经母细胞瘤的病理分型、INSS分期、术后存活时长与CD133表达水平之间存在的联系。
结果与结论：共有22例(48%)神经母细胞瘤患儿CD133表达为阳性，有4例(33%)节细胞母细胞瘤患儿CD133表达阳性，肿瘤细胞胞浆为CD133主要表达部位。肿瘤组织各临床分期的CD133阳性率差异明显，其中1，2期为21%，3，4期为64%，4S 期为36.4%，差异有显著性意义(P=0.011)；组织分型为预后良好型患儿CD133阳性率为29%，明显低于预后不良组织型患儿(57%)，差异有显著性意义(P=0.031)。CD133阴性患儿生存周期显著长于CD133阳性患儿(P <0.05)。结果表明干细胞标志物CD133的表达与神经母细胞瘤发生、发展、转归有密切联系，在评估患儿术后存活时长、改进该病的诊断和治疗等方面具有重要意义。 -
钼对食管癌细胞ECA-109化疗增敏及食管癌干细胞p75NTR的抑制
背景：食管癌化疗过程中很容易出现耐受性，无法达到令人满意的治疗效果，通过使用适当的敏感剂可以有效抑制肿瘤细胞以及肿瘤干细胞的增殖。
目的：探讨钼对食管癌细胞ECA-109化疗敏感性的影响及对食管癌干细胞p75NTR的抑制作用。
方法：取对数期食管癌细胞 ECA-109随机分为空白组、单纯顺铂组、单纯加钼组、顺铂加钼组，后3组采用不同的质量浓度进行实验。利用MTT法检测各组食管癌细胞ECA-109生长增殖情况，流式细胞仪检测各组食管癌干细胞p75NTR比例。
结果与结论：不同质量浓度顺铂对食管癌细胞ECA-109增殖有一定的抑制作用，且对食管癌干细胞具有较强的杀伤作用，随着给药质量浓度和时间的增加均呈增强趋势；单纯钼对食管癌细胞ECA-109的增殖抑制作用和对食管癌干细胞的杀伤作用均不明显；顺铂和钼联用对食管癌细胞ECA-109的抑制作用和对食管癌干细胞的杀伤作用增强，与单纯同质量浓度顺铂组及空白对照组比较差异有显著性意义(P <0.05)，且呈一定的浓度、时间依赖性。结果表明，钼可以提高顺铂的化疗敏感性，促进顺铂对食管癌细胞ECA-109以及食管癌干细胞p75NTR抑制作用的增强，可以作为一种重要的化疗增敏剂。 -
MicroRNA-17-92基因对胃癌干细胞更新和增殖的影响
背景：研究表明，miRNA 对肿瘤干细胞的更新分化有调节作用，有关 miRNA-17-92在胃癌干细胞更新及增殖中的作用尚未完全阐明。
目的：分析miRNA-17-92在胃癌干细胞自我更新及增殖中的作用。
方法：①利用细胞培养使胃癌干细胞贴壁分化并送miRNA芯片检测，寻找并验证不断缺失的miRNA。②构建并转染miRNA-17-92分子慢病毒稳定转染细胞。③通过tumorsphere实验研究miRNA-17-92与胃癌细胞更新的关系。④通过MTT、平板克隆试验检测miRNA-17-92与胃癌干细胞增殖的关系。
结果与结论：①miR-19b/20a/92a在胃癌干细胞贴壁分化过程中表达逐渐减低。②慢病毒携带的miRNA-17-19基因在MKN28细胞和CD44-/EpCAM-细胞中的表达均明显增加；瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a能使CD44-/EpCAM-和MKN28的miRNA表达增高，瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a拮抗剂能使SGC7901和CD44+/EpCAM+的miRNA表达降低；过表达lenti-miR-19b/20a/92a能显著增加胃癌细胞形成肿瘤球的能力；在化疗药的作用下，lenti-miR-19b/20a/92a感染细胞的生存时间延长；瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a 能够显著增加CD44+/EpCAM+细胞数，转染其拮抗剂可以降低CD44+/EpCAM+细胞数。③miR-19b/20a/92a稳定表达组的胃癌细胞增殖速度较对照组快。瞬间转染miR-19b/20a/92a前体组加快胃癌细胞的增殖速度，而瞬时转染其拮抗物组减慢胃癌细胞的增殖速度；瞬间转染 miR-19b/20a/92a前体组的克隆数较对照组多，而瞬时转染miR-19b/20a/92a拮抗物组的克隆数较对照组少。结果表明miR-19b/20a/92a基因在胃癌干细胞分化过程中不断缺失，miR-17-92基因能够促进胃癌干细胞的更新和增殖。 -
乳腺癌干细胞分离及耐药蛋白分析
背景：乳腺癌干细胞是人体内相对比较特殊的细胞，该细胞具有自我更新以及多向分化能力，能够促进肿瘤的形成和发展，并且长期维持肿瘤生长。因此，分析并研究乳腺癌干细胞耐药蛋白的表达具有重要的意义。目的：从人乳腺癌原代组织中分离乳腺癌干细胞，观察其分化及形态学特点，分析乳腺癌干细胞相关耐药蛋白的表达及意义。
方法：选取30例乳腺浸润性导管癌肿瘤组织标本，采用机械分离方法制作成不同的单细胞悬液，用免疫磁珠两步法分离出乳腺癌干细胞和乳腺癌分化细胞，采用免疫细胞化学二步法检测细胞耐药性蛋白的表达。
结果与结论：乳腺癌干细胞比例与患者的年龄、肿瘤的长径、淋巴结转移及组织学分级等差异不显著(P >0.05)；乳腺癌干细胞P-gp、GST-π阳性表达率显著高于乳腺癌分化细胞(P <0.05)；乳腺癌干细胞TopoⅡ、LRP阳性表达率显著低于乳腺癌分化细胞(P <0.05)，与乳腺癌分化细胞相比，乳腺癌干细胞可通过高表达P-gp，GST-π，低表达TopoⅡ，LRP而具有更强的耐药性，可能是乳腺癌化疗耐药的关键原因。 -
脂肪来源干细胞向成骨分化及褪黑素干预细胞生物学活性的变化
背景：研究表明褪黑素能促进脂肪来源干细胞向神经元转化，但对脂肪来源干细胞成骨分化后细胞的作用报道较少。
目的：观察脂肪来源干细胞向成骨分化及褪黑素对成骨分化后细胞生物学活性的影响。
方法：①取昆明种小鼠附睾处脂肪利用Ⅰ型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪来源干细胞，应用CD44免疫组化染色对细胞进行鉴定。②取第2代脂肪来源干细胞，加入成骨诱导培养基培养，行碱性磷酸酶染色和von Kossa法检测细胞分化情况。③取成骨诱导后的细胞，加入不同浓度的褪黑素，利用MTT法检测24，48 h时细胞增殖情况。④取成骨诱导后的细胞，加入佳浓度的褪黑素，分别检测加入药物3，6 d时的碱性磷酸酶活性。
结果与结论：①接种48 h后大多数细胞贴壁，接种后4 d细胞呈现多种细胞形态，并形成大小不一的细胞集落，传代后的细胞形态趋于稳定，均称长梭型，培养细胞CD44呈阳性表达，阳性颗粒位于胞膜，呈棕黄色。②成骨诱导后的细胞应用von Kossa法染色呈阳性，黑色沉积物在细胞外的基质中呈网格状分布；碱性磷酸酶染色呈阳性，细胞内可见棕黑色颗粒。③在24 h和48 h时间点，1，10，100μmol/L组的吸光度值明显大于空白组(P <0.05)，选择这3个浓度作为佳的褪黑素浓度。④各组成骨诱导后细胞内碱性磷酸酶活性随时间延长明显增加，差异有显著性意义(P<0.05)。褪黑素组(1，10，100μmol/L)在3 d时的碱性磷酸酶活性与空白组相比无明显差异(P >0.05)，在6 d时较空白组明显增加(P <0.05)。提示褪黑素可以增强脂肪来源干细胞成骨分化后细胞增殖，并提高细胞内碱性磷酸酶活性。 -
不同局部肿胀麻醉液对体外培养人脂肪干细胞增殖与成脂分化的影响
背景：获取脂肪术中需要应用不同的局部肿胀麻醉液，其可能会对细胞生物特性产生一定的影响。目的：探讨体外培养条件下不同局部肿胀麻醉液对人脂肪干细胞增殖与成脂分化的影响。
方法：取第3代人脂肪干细胞分别用布比卡因、罗哌卡因、利多卡因局部肿胀麻醉液进行培养，对照组用低糖DMEM培养基进行培养，检测各组干预不同时间人脂肪干细胞增殖活性、细胞上清乳酸脱氢酶活性和成脂分化比例。
结果与结论：不同局部肿胀麻醉液干预后1，2，3，4，5 d细胞上清乳酸脱氢酶活性值显著高于对照组(P <0.05)，布比卡因组显著高于罗哌卡因组、利多卡因组(P<0.05)。各局部肿胀麻醉液组细胞生长吸光度值均低于对照组(P <0.05)，且布比卡因组显著低于罗哌卡因组、利多卡因组(P <0.05)。各组人脂肪干细胞成脂分化比例差异无显著性意义(P >0.05)。结果表明，局部肿胀麻醉液(布比卡因、罗哌卡因、利多卡因)均能够抑制人脂肪干细胞增殖，但不会对细胞成脂分化产生明显的影响。 -
人胎盘来源间充质干细胞对妊娠期高血压病细胞滋养细胞凋亡的影响：随机对照实验方案
背景：细胞滋养细胞凋亡增加、浸润能力下降是妊娠期高血压病发病的重要环节之一。人胎盘来源间充质干细胞已经在许多研究中显示出了对损伤的修复作用，而且胎盘间充质干细胞还具有一定的内分泌功能，可通过自分泌或旁分泌细胞因子的方式作用于近、远处的组织。因此，尝试移植人胎盘来源间充质干细胞修复损伤的滋养细胞功能，进而治疗妊娠期高血压病，有一定可行性。
方法/设计：随机对照细胞学实验。收集人胎盘来源间充质干细胞培养液，过滤后即为人胎盘来源间充质干细胞条件培养基。培养人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞，随机分为3组，对照组在培养液中加入体积分数15%正常孕妇血清；妊娠期高血压病模型组在培养液中加入体积分数15%子痫前期重度患者的血清；人胎盘来源间充质干细胞条件培养组在培养液中加入体积分数15%子痫前期重度患者血清培养24 h后，更换为体积分数15%子痫前期重度患者血清+人胎盘来源间充质干细胞条件培养基。采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。讨论：实验从人胎盘来源间充质干细胞对妊娠期高血压病细胞滋养细胞功能的影响入手，可能为妊娠期高血压疾病的治疗找到一条细胞移植之路。
伦理批准：研究方案取得沈阳医学院附属中心医院临床研究伦理委员会的书面批准。正常及子痫前期孕妇签署知情同意书。 -
血小板CD36新等位基因1142T>G序列分析及确认
背景：作为血小板上的主要抗原之一，CD36抗原又被称为血小板糖蛋白Ⅳ，其基因变异会导致 CD36抗原缺失。
目的：序列分析并确认1例CD36抗原新等位基因。
方法：提取外周血样本DNA，应用聚合酶链式反应扩增CD36基因的12个编码区序列片段，应用直接测序法对目的片段的序列进行检测。所得序列与基因库中编号为 NG_008192的标准序列进行比对分析，以确定新的基因突变。
结果与结论：被检样本在第12外显子的1142位发生T>G的碱基突变，其他外显子序列与标准序列一致。检索国际基因数据库GenBank和美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)，均未发现关于1142 T>G突变的数据和报道，因此为国际上首次确认，上报GenBank获得登录号：KM275213。1142 T>G突变导致第381位氨基酸由亮氨酸(Leu，L)改变为丝氨酸(Ser，S)，两者在亲/疏水性和极性上差异较大，且381位氨基酸所在区域为高度保守区域，因此推测该突变会使蛋白活性降低甚至消失。
