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血管生成素/Tie2信息通路在血管形成中的调节作用(文献综述)
血管生成素(Angiopoietins,AP)/Tie2是一种新发现的调节血管生成的重要信息途径.AP-1促进内皮细胞受体Tie2磷酸化,吸引血管平滑肌细胞、周细胞等血管周围细胞包围、支持内皮细胞,促进血管重塑、成熟,并维持血管的完整性和调节血管功能;AP-2竞争抑制AP-1的作用,在VEGF等促血管形成因子存在时促进血管生成;当缺乏血管形成因子时,AP-2则参与新生血管的消退过程.
关键词： 血管生成素 血管生成 受体 Tie2 -
Tie2基因RNAi慢病毒载体的构建及其干预恶性黑色素瘤细胞的体外研究
目的 构建携带酪氨酸蛋白激酶受体2-小干扰RNA(Tie2-SiRNA)慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞的干扰作用.方法 将pSilencer 1.0-U6启动子-酪氨酸蛋白激酶受体2-小干扰RNA(pSilencer 1.0-U6-Tie2-siRNA)重组质粒经Xba Ⅰ酶切电泳鉴定后,与经Xba Ⅰ酶切电泳鉴定的带有加强绿色荧光蛋白的转移质粒(pNL-EGFP)载体连接,产生加强绿色荧光蛋白的转移质粒-u6启动子-酪氨酸蛋白激酶受体2-Ⅰ(pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅰ)、pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅱ慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定.用连接成功的慢病毒转移质粒,分别与水疱性口炎病毒G蛋白(pVSVG)包膜质粒和pHelper包装质粒组成慢病毒三质粒转染系统,再共转染293T细胞,产生pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅰ、pNL-EGFP-U6-Tie2-Ⅱ慢病毒.收集病毒上清,测定病毒滴度.将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时荧光定量RT-PCR测定抑制Tie2基因表达的效率.结果 酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.8×103/ml.实时荧光定量RT-PCR结果显示:Tie2-SiRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Tie2基因的表达,其中较高者可达68.55%,并且2种慢病毒载体之间差异无统计学意义(t=0.362,P＞0.05).结论 成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体,体外研究显示其能抑制Tie2 mRNA的表达,为下一步进行抑制肿瘤生成的动物实验研究奠定了基础.
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CD44蛋白和Tie2基因在骨肿瘤异常表达意义的研究
目的 探讨CD44蛋白和Tie2 mRNA在骨肿瘤组织中的表达及其意义.方法 采用美联免疫吸附试验法和逆转录聚合酶链反应法,对正常骨组织、骨软骨瘤、尤文肉瘤组织标本各20例内CD44蛋白和Tie2 mRNA含量进行半定量检测.结果 尤文肉瘤、骨肉瘤内CD44蛋白和Tie2 mRNA较正常骨组织骨组织含量上调.结论 恶性骨肿瘤组织内CD44蛋白和Tie2 mRNA表达失衡,两者的含量均有大幅上升趋势,此项研究可以作为临床确诊肿瘤的良恶的重要理论依据.
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酪氨酸激酶受体Tie的生物学功能
酪氨酸激酶受体Tie(包含Tie1和Tie2两种类型)是一种能够同配体促血管生成素结合,并将靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化的酶联受体之一.Tie主要在血管内皮细胞和造血细胞表面表达,在生长活跃的组织如发育的胚胎、伤口愈合和肿瘤的生长迁移中表达增强.Tie1的配体目前还不清楚,Tie2的配体是血管紧张素.Tie1主要在血管生成、微血管稳定、血管重塑和衰退中发挥调节作用,而Tie2与其配体结合后,可引起血管结构的不稳定.
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Ang-1和Tie2在高血压患者内皮祖细胞中表达水平及临床意义研究
目的 探讨Ang-1及其受体Tie2在高血压患者循环内皮祖细胞中的表达水平并评价其临床意义.方法 选择杭州师范大学附属医院2012年1月～2013年6月高血压Ⅰ、Ⅱ级和Ⅲ级患者各15例;正常体检人群30名为对照组.RT-PCR法检测各组外周血中内皮祖细胞内Ang-1、Tie2 mRNA表达水平;Western-blot法测定Tie2酪氨酸磷酸化水平.结果 Ⅲ级高血压患者内皮祖细胞内Ang-1和Tie2 mRNA表达水平均低于Ⅱ、Ⅰ级高血压患者和对照组(P＜0.05),Ⅱ级高血压患者均低于Ⅰ级高血压患者和对照组(P＜0.05).Ⅲ级高血压患者内皮祖细胞Tie2磷酸化水平低于Ⅱ、Ⅰ级高血压患者和对照组(P＜0.05),Ⅱ级高血压患者Tie2磷酸化水平低于Ⅰ级高血压患者和对照组(P＜ 0.05).常规治疗后,内皮祖细胞Ang-1和Tie2 mRNA表达及磷酸化Tie2水平均高于治疗前(P＜0.05).结论 患者循环内皮祖细胞内Ang-1和Tie2表达随高血压分级的增加逐渐下调,治疗后水平升高,可能与高血压病血管内皮细胞修复的调控机制密切相关.
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血循环中Tie2 mRNA含量对脓毒症患者全身病情变化评价作用的研究
目的 探讨血循环中Tie2 mRNA含量是否与脓毒症全身病情变化存在相关关系.方法 选取重症监护病房(ICU)创伤患者,按是否为脓毒症分为脓毒症组(13例)和非脓毒症组(19例).患者进入ICU当日进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分;1、3、7 d采集肘静脉血检测白细胞总数(WBC)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量;采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测血中Tie2 mRNA含量;用酶联免疫吸附法检测血浆血管性血友病因子(vWF)含量.结果 脓毒症组与非脓毒症组间ALT、AST、vWF含量比较差异均无统计学意义[ALT(U/L):53.30(199.58)比80.65(202.62),AST(U/L):316.53(49.90)比66.10(285.03),vWF:(272.47±114.61)%比(246.66±128.77)%,均P＞0.05].脓毒症组WBC、BUN、Cr及血中Tie2 mRNA水平均显著高于非脓毒症组[WBC(×109/L):18.26(21.82)比10.11(4.72),BUN(mmol/L):20.70(11.20)比7.70(5.45),Cr(μmol/L):252.00(364.55)比68.00(23.20),Tie2 mRNA:1.86±0.67比0.91±0.42,均P＜0.01].所有患者APACHE Ⅱ评分与血Tie2 mRNA水平呈显著正相关(r=0.532,P＜0.01),其线形拟合方程为Y=12.66+4.922X(R2=0.283)vWF与Tie2 mRNA水平呈正相关(r=0.334,P＜0.05),其线形拟合方程为Y=180.932+57.93X(R2=0.112).结论 脓毒症患者血循环中Tie2 mRNA水平能及时反映内皮细胞损伤程度和病情轻重,可作为一个相对敏感的病情预测候选指标.
关键词： Tie2 基因表达 实时定量聚合酶链反应 脓毒症 -
血管生成素1,2/Tie2系统在心血管疾病中的研究进展
概括血管生成素1,2/Tie2系统的生物学效应,阐述该系统在动脉粥样硬化、急性心肌梗死、心源性休克及冠脉侧支循环中的作用及研究进展,旨在为进一步研究血管生成素1,2/rie2系统在心血管疾病中的作用机制,寻求其在心血管疾病中作用靶点提供方向.
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眼针运动疗法对MCAO模型大鼠缺血半暗带区域脑组织Ang-1、Tie2影响的实验研究
目的:观察眼针运动疗法对脑缺血再灌注(MCAO)模型大鼠大脑缺血半暗带区域脑组织内Ang-1、Tie2表达水平的影响,探讨眼针运动疗法对MCAO模型大鼠大脑缺血半暗带区域内新生血管影响的机制.方法:采用随机数字法,将100只SD大鼠随机分为3组:空白对照组(10只)、假手术组(10只)、模型复制组(80只).对模型复制组大鼠采用线栓法进行脑缺血再灌注模型复制,再将模型复制成功的大鼠66只(模型复制80只,失败13只,模型评价1只)随机分别为:模型对照组(17只);头针组(17只);眼针组(16只);眼针运动组(16只).分别进行头针、眼针及眼针运动进行干预治疗.头针组取穴百会、曲鬓,眼针组取穴定位参照人体取穴方法,取肝区、上焦区、下焦区、肾区.眼针运动疗法组眼针干预同时,在跑步机上进行训练.采用酶联免疫吸附(ELISA)法,检测各组大鼠血清中Ang-1含量,采用RT-PCR及western-blot法对各组大鼠脑组织中Ang-1、Tie2基因及蛋白表达水平进行检测.结果:与空白组比较,模型组、眼针组、头针组、眼针运动组大鼠缺血半暗带区域脑组织中Ang-1、Tie2表达水平显著上调(P＜0.01);与模型组比较,眼针组和眼针运动组Ang-1、Tie2表达水平显著上调(P＜0.05).与空白组比较,模型组、眼针组、头针组、眼针运动组大鼠缺血半暗带区域脑组织中Ang-1、Tie2 mRNA表达水平显著上调(P＜0.01);与模型组比较,眼针组和眼针运动组Ang-1、Tie2 mRNA表达水平显著上调(P＜0.05).结论:眼针运动疗法在一定程度上能促进血清中Ang-1含量,增加Ang-1及其mR-NA表达增加,与受体Tie-2结合,启动Ang/Tie-2信号传导系统,在时间和数量上调节缺血半暗带新生血管和侧支循环的形成,改善缺血半影区的脑血流,从而抑制神经元凋亡,恢复脑血流量,促进脑缺血后神经功能的恢复.
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动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达
背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提.目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2 启动子来启动表达的E1A 激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG) 和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP) 融合的真核表达质粒.方法:根据GenBank 中公布的TIE2 基因的启动子序列,人工合成TIE2 启动子DNA 序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1 中构建pTIE2-EGFP-N1.同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG 基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1 中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定.应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot 检测CREG 蛋白的表达.结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1 质粒正确;体外转染48 h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot 检测到CREG 蛋白的表达.说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1 重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达.
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卵巢上皮性癌中表达Tie2单核巨噬细胞的研究
目的 探讨卵巢上皮性癌(EOC,epithelial ovarian cancer)患者外周血和癌旁腹膜中表达Tie2单核巨噬细胞(Tie2-expressing moncytes/macrophages,TEMs)的分布情况.方法 2011年7月至2012年12月于同济大学附属第一妇婴保健院,分离正常成年女性、卵巢良性肿瘤及EOC患者外周血单核细胞；RT-PCR检测Tie2 mRNA的表达情况,流式细胞术检测Tie2+细胞占CD14+外周血单个核细胞的比例；免疫荧光技术分析TEMs在良性卵巢肿瘤、EOC原位灶及癌旁腹膜中的浸润情况.结果 正常成年女性、良性卵巢肿瘤及EOC患者外周血单核细胞在mRNA和蛋白水平均表达Tie2；良性卵巢肿瘤及EOC患者外周血TEMs的比例分别为(9.41±5.93)％、(1.82％ ～23.45％)和(7.99±3.90)％(1.71％～15.03％),较正常对照组(4.13±2.86)％ (1.18％ ～9.56％)比例增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；形态学研究证实EOC患者癌旁腹膜中浸润着数量丰富的TEMs(15.17±8.84)％(2.27％ ～25.81％),而良性卵巢肿瘤患者腹膜中几乎没有TEMs的浸润.结论 EOC患者外周血、原位灶及癌旁腹膜组织中存在表达Tie2的单核巨噬细胞；TEMs比例在EOC患者外周血、腹膜局部显著上升,有利于肿瘤微环境中血管的生成,从而参与调控卵巢癌的进展.
关键词： Tie2 单核细胞 表达Tie2单核巨噬细胞 卵巢肿瘤 -
表达Tie2基因的单核细胞研究进展
肿瘤血管的生成和发展在肿瘤的生长和恶化过程中起着关键作用.一类表达Tie2基因的单核细胞(TEM)通过一些生长因子和化学信号被募集到肿瘤组织中,旁分泌细胞因子促进肿瘤血管的生成和发展.TEM在促进肿瘤血管形成中起着重要作用,与血管内皮细胞祖细胞(EPC)不同的是,TEM只是在肿瘤的血管生成中起促进作用,但在肿瘤周围临近的正常组织中没有发现其存在,TEM被认为是一类肿瘤组织特异性的细胞.以TEM为载体细胞,通过TEM表达抗肿瘤药物,靶向递送的抗肿瘤药物能够有效的抑制肿瘤的生长和恶化.
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血管生成素及其在肿瘤血管新生中的作用
血管生成素是新近发现的一个与血管新生密切相关的蛋白家族,其共同受体是Tie2.由于Ang1和Ang2在体内具有与VEGF共同调节生理性和病理性血管新生的功能,其研究进展受到广泛关注.本文综述了血管生成素家族中主要成员Ang1,Ang2,Ang3,Ang4等在克隆、生化性质,血管生成素受体Tie2在信号转导中的作用,血管生成素在生理发育和血管新生中的作用等方面的研究进展.
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软组织及椎体血管异常Tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA的表达及临床意义
目的 探讨Tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA在软组织及椎体血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达及其意义.方法 收集血管异常110例,运用RT-PCR和免疫组化SP法检测Tie2、Ang1和Ang2在血管瘤及血管畸形中表达的差异,并进一步了解Tie2基因突变是否影响三者mRNA的表达.结果 Tie2、Ang1和Ang2 mRNA在血管瘤中的表达显著高于血管畸形(P＜0.01);在血管瘤、软组织及椎体血管畸形中Ang2蛋白和mRNA的表达显著高于Ang1 (P ＜0.05);突变型Tie2 mRNA的表达水平显著高于野生型(P＜0.05),但伴Tie2基因突变的血管畸形Ang1和Ang2 mRNA的表达低于野生型血管畸形(P＜0.05).结论 血管瘤和血管畸形可能为基因学改变不同的两种病变;Tie2基因突变、Ang1和Ang2的表达失衡可能促进血管异常病变进展.
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血清Ang/Tie2、VEGF在糖尿病肾病病情评估中的应用价值
目的：观察血清中血管生成素-1( Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie2与血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病( DN)病情进展中的水平变化规律,探讨平衡其比率在DN中的重要性。方法选取2型糖尿病患者60例,依据尿白蛋白排泄率( UAER)分为3组：正常白蛋白尿患者20例( DM1组)、微量白蛋白尿患者22例( DM2组)、大量白蛋白尿患者18例( DM3组),另设健康对照患者22例( NC 组)。采用 ELISA 法检测受试者血清 Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平,同时检测相关生化指标。结果① DM1组血清VEGF、Ang-2水平高于NC组, DM2组、DM3组进一步升高,4组间差异均有统计学意义( P<0．05)。② DM1组血清Ang-1水平高于NC组,DM2组、DM3组逐渐下降,4组间差异无统计学意义。③ Tie2水平差异无统计学意义。④UAER与Ang-2、VEGF 呈正相关性( r =0．470、0．404, P <0．01),与Ang-1呈负相关性(r=-0．310,P<0．05)； Ang-2与VEGF、Tie2呈正相关性(r=0．450、0．725,P<0．01)；Ang-1与Tie2呈正相关性(r=0．571,P<0．01),与Ang-2、VEGF呈负相关性(r=-0．497、-0．396,P<0．01,P<0．05)。⑤以UAER为应变量行多元线性逐步回归分析显示：Ang-1、Ang-2、VEGF、肌酐进入回归方程,是影响UAER的独立相关因子。结论血清中 Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF 水平与 DN密切相关,可能参与了DN的发生发展,并影响DN病情的进程。检测血清Ang/Tie2及VEGF可作为评估DN病情的重要指标。
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Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株化疗敏感性的研究
目的：：研究Tie2表达对子宫内膜癌细胞株化疗敏感性的影响,探索子宫内膜癌辅助治疗新方法。方法：将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有CMV启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因表达,采用逆转录PCR及蛋白印迹方法鉴定。DAPI染色检测各组细胞凋亡。不同浓度卡铂处理细胞,检测各组细胞的化疗敏感性。结果：成功转染后,Ishikawa细胞中Tie2 mRNA及蛋白表达水平的抑制率分别为75.5％及56.4％,Tie2-siRNA组细胞凋亡增加,化疗敏感性增加。 Tie2-siRNA组的卡铂IC50为(29.95±0.68)μg/ml,低于空白对照组(80.55±1.05)μg/ml。结论：降调Tie2基因的转录及表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,增加子宫内膜癌细胞对化疗药物的敏感性。
关键词： Tie2 子宫内膜癌 Ishikawa细胞株 小干扰RNA -
血管生成素-2及其受体Tie2在肾癌中的表达及与微血管密度的关系
目的:探讨血管生成素-2及其受体Tie2在肾透明细胞癌中的表达及与肿瘤血管生成、肿瘤组织发生、发展之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法,分别检测80例肾透明细胞癌组织及10例癌旁组织中血管生成素-2,Tie2及CD34的表达,根据CD34染色结果计算微血管密度.结果:肾透明细胞癌组织中血管生成素-2、Tie2阳性表达率分别为61.25%,58.75%,均明显高于癌旁组织(P＜0.05);血管生成素-2和Tit2的表达与肾透明细胞癌患者血尿、临床分期以及淋巴结转移密切相关(P＜0.05);血管生成素-2和Tie2阳性表达组微血管密度均高于阴性表达组(P＜0.05).结论:血管生成素-2和Tie2在肾透明细胞癌发生和转移过程中起重要作用,并与肿瘤血管生成关系密切.
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Ang-1、Ang-2/Tie2信号通路在血管生成中的研究进展
促血管生成素-1、-2及其受体Tie2(Angiopoietin-1、Angiopoietin-2/tyrosine Kinase Receptors 2,Ang-1、Ang-2/Tie2)是近年来发现的一种除血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)之外的一条新的血管生成信号转导通路[1],这条新的信号通路在人类生理性血管形成中发挥重要作用,另有研究表明,Ang-1、Ang-2/Tie2信号通路在肿瘤、创伤、炎症等多种病变中也起一定作用.
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Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管瘤和血管畸形中的表达及临床意义
目的 探讨Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达.方法 收集新疆医科大学附属肿瘤医院2005年至2012年血管畸形50例,皮肤增殖期血管瘤30例,正常组织20例,采用免疫组化SP法检测Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常中的表达.结果 Tie2在血管异常中的阳性表达率较高,而Ang1在血管异常中的阳性表达率较低,Tie2在血管瘤和血管畸形中的表达显著高于正常组织,Ang1在血管瘤和血管畸形中的表达显著低于正常组织,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);Tie2和Ang2在血管异常中的表达呈正相关关系(P＜0.05).结论 Ang1蛋白表达降低可能破坏了血管的稳定性,有助于病变的发展,Tie2蛋白表达增高,其与Ang2结合对病变血管生成可能具有促进作用,Tie2、Ang1和Ang2表达失衡在血管异常的发病过程中可能起重要的调节作用.
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Angiopoietin/Tie2系统在大鼠高动力型肺动脉高压形成中的作用
目的 研究angiopoietin家族成员在高动力型肺动脉高压形成中的作用.方法 通过左颈总动脉和左颈外静脉分流手术建立大鼠高动力型肺动脉高压模型.术后第1、2、4、8和12周检测肺组织内Ang-1、Ang-2、Ang-3、Tie2和激活型caspase-3的变化.结果 高动力引起肺动脉高压,出现肺动脉内皮细胞增生肥大.在肺动脉高压形成的过程中,肺组织内Ang-1和Tie2的表达显著增高,而Ang-3的表达明显降低.肺微小动脉内皮细胞Tie2的磷酸化水平逐渐升高但激活型caspase-3却降低.Ang-2的表达未见明显变化.结论 内皮细胞凋亡减少可能是高动力型肺动脉高压形成的一个重要的病理机制.Ang-1/Tie2可能通过抑制内皮细胞凋亡来促进高动力型肺动脉高压的形成.Ang-3的表达量下降可能也促进了这一过程.在高动力型肺动脉高压的形成过程中Ang-2可能不发挥作用.
关键词： angiopoietin Tie2 肺动脉高压 -
Ang1、Ang2及Tie2在脐静脉内皮细胞的体外三维培养中的表达及意义
目的 探讨促血管生成素1、2及其受体(Ang1、Ang2及Tie2)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外三维培养的血管生成中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测10例体内HVUECs、体外二维培养的HVUECs和三维培养的血管样结构中Ang1、Ang2及Tie2的mRNA表达水平.结果 体外三维培养的血管样结构中Ang2、Tie2的mRNA表达水平均高于体内HVUECs和体外二维培养的HVUECs,差异有显著性(P<0.05);各组中Ang1的mRNA表达水平相比差异无显著性(P>0.05).结论 Ang/Tie2体系在体外血管生成中可能起重要的作用.
