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紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究
目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制.方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化；免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05)；紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P＜0.05).结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关.
关键词： 紫草素 Ishikawa细胞株 Bax Bcl-2 -
HOXA10基因在子宫内膜癌组织中的表达及其生物学作用
目的:探讨同源框A10(H0XA10)基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌Ishikawa细胞株凋亡、迁移及侵袭的影响.方法:收集2012年至2013年在鼓楼医院妇产科子宫内膜癌组织标本21例、正常增殖期子宫内膜组织标本25例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blotting方法检测HOXA 10在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达.将感染复数为5、10、20 MOI的ad-flag-HOXA 10腺病毒质粒及20 MOI的ad-flag-lacz腺病毒质粒(对照组)感染人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.将50 nmol/L的si-HOXA10及si-NC质粒转染Ishikawa细胞株,分别为下调组及下调对照组;将20 MOI的ad-flag-HOXA 10及20 MOI的ad-flag-lacz腺病毒质粒感染Ishikawa细胞株,分别为上调组及上调对照组;Transwell小室检测各组细胞迁移及侵袭能力.结果:在子宫内膜癌组织中HOXA10mRNA表达量比正常子宫内膜组织中显著降低[(0.56±0.14)vs (1.36±0.33),P＜0.01],其蛋白表达量同样显著降低[(1.01±0.25)vs (2.10±0.71),P＜0.0l].上调HOXA10后5、10、20 MOI组细胞的凋亡率明显升高,且大多数处于早期凋亡[(50.92±8.79)％、(55.17±4.07)％、(76.10±3.65)％ vs (7.74±0.15)％,均P＜0.01].下调HOXA10表达后迁移细胞数显著增加[(248±25)vs(135±15)个,P＜0.01],上调HOXA10表达后迁移细胞数显著减少[(50±6)vs (100±13)个,P＜0.01];下调HOXA1D表达后侵袭细胞数显著增多[(131±18)vs (66±9)个,P＜0.01],上调HOXA10表达后侵袭细胞数显著减少[(34±8)vs (60±4)个,P＜0.01].结论:HOXA1D基因在子宫内膜癌内膜中表达低于正常内膜,子宫内膜癌Ishikawa细胞株中上调HOXA10基因表达能促进细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭能力.
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Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响
目的 探讨Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响.方法 将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有巨细胞病毒启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因的表达,并采用逆转录PCR及Western blot方法鉴定.用MTT实验描绘各组细胞增殖曲线,流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果 成功转染后Tie2基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平抑制率分别为75.5℃及56.4℃,Ishikawa细胞增殖72-h抑制率为73.9℃,凋亡率为35.9℃.结论 体外下调Tie2基因的转录及表达可抑制肿瘤生长,促进细胞凋亡.
关键词： Tie2基因 子宫内膜癌 Ishikawa细胞株 小干扰RNA -
TRAIL受体在子宫内膜癌细胞株的表达
目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织和癌旁组织的表达特征.方法:采用RT-PCR技术,检测20例正常子宫内膜、20例子宫内膜癌及癌旁组织中TRAIL受体DR4、DR5和假受体DcR1、DcR2阳性表达情况.结果:TRAIL受体DR4、DR5的mRNA在人正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织和癌旁组织中均表达,诱骗受体DcR1的mRNA在子宫内膜各组织中的表达率不同,但差异无统计学意义(P＞0.05),而诱骗受体DcR2的mRNA在子宫内膜癌组织中的表达率明显低于正常子宫内膜组织和癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.005),癌旁组织细胞中DcR2表达和正常子宫内膜组织相近(P＞0.05).结论:TRAIL诱骗受体DcR1、DcR2在子宫内膜癌中的低表达可能与其发病机制有关,可能对防止子宫内膜癌变具有一定作用.
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Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株化疗敏感性的研究
目的：：研究Tie2表达对子宫内膜癌细胞株化疗敏感性的影响,探索子宫内膜癌辅助治疗新方法。方法：将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有CMV启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因表达,采用逆转录PCR及蛋白印迹方法鉴定。DAPI染色检测各组细胞凋亡。不同浓度卡铂处理细胞,检测各组细胞的化疗敏感性。结果：成功转染后,Ishikawa细胞中Tie2 mRNA及蛋白表达水平的抑制率分别为75.5％及56.4％,Tie2-siRNA组细胞凋亡增加,化疗敏感性增加。 Tie2-siRNA组的卡铂IC50为(29.95±0.68)μg/ml,低于空白对照组(80.55±1.05)μg/ml。结论：降调Tie2基因的转录及表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,增加子宫内膜癌细胞对化疗药物的敏感性。
关键词： Tie2 子宫内膜癌 Ishikawa细胞株 小干扰RNA -
吉非替尼对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib)对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其内在作用机制.方法:MTT法检测不同浓度吉非替尼作用后细胞的增殖抑制率.采用流式细胞术检测吉非替尼作用48h后的细胞凋亡率及细胞周期分布,并用倒置显微镜对细胞进行形态学观察.Western blot法检测不同浓度吉非替尼作用细胞48h后细胞内p-Akt、CyclinD1蛋白水平表达的变化.结果:吉非替尼能显著抑制Ishikawa细胞的增殖,促进细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性(P＜0.05),并使细胞周期中G0/G1期比例升高(P＜0.05),而对S期和G2/M期比例无明显影响(P＞0.05).吉非替尼作用48h后,Ishikawa细胞中p-Akt、CyclinD1蛋白表达随着吉非替尼浓度的增加逐渐下降(P＜0.05).结论:吉非替尼对人子宫内膜癌细胞Ishikawa的体外生长具有明显的抑制作用,并能诱导Ishikawa的凋亡,导致G0/G1期细胞阻滞,其分子机制可能与吉非替尼下调p-Akt蛋白及CyclinD1蛋白的表达有关.
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人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立
目的：建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法培养人子宫内膜癌细胞系Ishikawa，制成肿瘤细胞悬液，于裸鼠（10只）右侧肩胛背部皮下注射，每只裸鼠注射约1×107个细胞。接种后每日观察裸鼠精神、活动、饮食、排便等状况及是否有肿瘤生长、肿瘤生长速度等。以接种部位可见或触及肿瘤小结节为成瘤标准，若第一次移植失败则考虑行二次瘤细胞接种。发现肿瘤生长后每3 d计算肿瘤体积。当肿瘤长径达15 mm或出现皮肤破溃时，立即处死荷瘤裸鼠；否则于接种第49天将荷瘤裸鼠处死、剥出肿瘤，测量瘤体长径，称取瘤体质量。取肿瘤组织切片后行HE染色，观察肿瘤组织病理变化。结果有1只裸鼠第一次接种失败，在第二次接种后移植成功，一次成瘤率为9／10。在接种第40天和第46天各发现1只裸鼠瘤体表面皮肤破溃，发现后脱颈处死荷瘤裸鼠，测得肿瘤长径分别为12．2、12．6 mm，肿瘤体积分别为505．14、510．30 mm3，肿瘤质量分别为0．88、0．86 g；至接种第49天，存活的7只裸鼠移植瘤瘤体表面皮肤完整，无破溃缺损，处死裸鼠后完整剥离肿瘤，测得肿瘤长径为11．7～14．0 mm，瘤重0．86～1．23 g。取移植瘤组织进行病理检查，肿瘤组织大体表现与镜下表现符合人子宫内膜癌的特点。结论采用将Ishikawa细胞株接种于裸鼠右侧肩胛皮下的方式成功建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型，且移植瘤组织和细胞保留了人子宫内膜癌的病理特征。
关键词： 子宫内膜癌 Ishikawa细胞株 子宫内膜癌移植瘤 动物模型
