首页 > 文献资料
-
LIM矿化蛋白1促进成骨的研究现状
目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种细胞内非分泌蛋白,通过调节BMPs信号通路而促进成骨分化.近年来,研究表明LMP-1作为成骨信号途径的上游信号分子级联放大下游成骨信号,增加成骨细胞对BMPs的敏感性,招募众多的成骨因子共同参与成骨,终促进细胞成骨分化和诱导骨形成.本文就LMP-1的结构特点、诱导成骨机制、LMP-1用于基因治疗的种子细胞及载体的选择等研究现状作一综述.
-
LIM 矿化蛋白1慢病毒载体转染后大鼠骨髓基质干细胞的分化
目的：探讨慢病毒转染大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）过表达LIM矿化蛋白1（LMP－1）对BMSCs分化能力的影响。方法构建LMP－1基因慢病毒载体，转染原代培养的大鼠MSCs，荧光显微镜下观察转染效果，MTT法检测转染后细胞增殖，常规方法诱导过表达LMP－1的BMSCs成骨和成软骨分化，以免疫组织化学染色观察成骨诱导后细胞分泌骨钙素的情况以及用阿利新蓝染色鉴定成软骨诱导后细胞分泌氨基多糖的情况。结果感染复数（ MOI）值为12时即可获得良好的转染效果，细胞转染后增殖正常，成骨诱导后，骨钙素染色阳性；成软骨诱导后，阿利新蓝染色阳性。结论lv－lmp－1可以有效转染大鼠BMSCs，转染后细胞的多向分化能力没有受到影响。
-
LIM矿化蛋白1在人牙髓及根尖牙乳头中的表达
目的 比较人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头及成熟恒牙牙髓组织中LIM矿化蛋白1(LIMmineralization protein-1,LMP-1)的表达,探寻LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟中的作用.方法 收集48颗因正畸拔除的健康前磨牙,其中年轻和成熟恒牙各24颗,样本来源对象的年龄分别为11 ～14岁和18 ～30岁.拔除后即刻分离获得年轻恒牙的牙髓和根尖牙乳头组织(各24个样本)以及成熟恒牙的牙髓组织(24个样本).实验分组如下:第1组为牙根形成2/3的年轻恒牙的根尖牙乳头组织；第2组为牙根形成2/3的年轻恒牙的牙髓组织；第3组为成熟恒牙的牙髓组织.每组12个样本用于反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测,另12个样本用于蛋白质印迹法检测,以β-肌动蛋白做内参.图像分析软件(Meta Morph 6.2.6)对阳性条带进行灰度值测定,目的条带与内参的灰度值比值为LMP-1的表达强度.应用SPSS13.0对数据进行统计学分析,LMP-1在年轻恒牙根尖牙乳头与牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两配对样本的t检验,年轻恒牙牙髓与成熟恒牙牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两独立样本的t检验,以双侧P＜0.05为差异有统计学意义.结果 LMP-1 mRNA在年轻恒牙的根尖牙乳头、牙髓和成熟恒牙的牙髓组织中的表达强度分别为0.25±0.09、0.46±0.24和0.31 ±0.10,经两样本t检验分析,LMP-1的基因表达在第2组年轻恒牙牙髓组织明显高于其在第1组年轻恒牙根尖牙乳头组织(t=2.92)以及第3组成熟恒牙牙髓组织的表达强度(t=2.31,P＜0.05).LMP-1蛋白在3组中的表达强度分别为0.33 ±0.08、0.82±0.10和0.52 ±0.19,LMP-1的蛋白表达在第2组显著高于第1组(t=3.33)及第3组中的表达强度(t =3.11,P＜0.05).结论 无论是在mRNA水平还是在蛋白水平,LMP-1在人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头以及成熟恒牙牙髓组织中均有不同程度的表达,提示LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟过程中可能发挥重要作用.
-
LIM矿化蛋白1/低氧诱导因子1α慢病毒载体转染脂肪源性干细胞的成骨分化
背景：LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白，可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨，联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。
目的：探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染的脂肪源性干细胞成骨分化的情况。
方法：应用反转录PCR技术克隆目的基因LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α片段，并分别克隆于慢病毒骨架质粒 pLVX-EF1α-DsRed-Hyg 和 pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1中，构建慢病毒载体主体质粒pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和 pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α，随即与辅助质粒和包装质粒共转染Lenti-X 293T细胞，包装慢病毒载体；采用组织块加酶消化法分离培养大鼠脂肪源性干细胞，使用流式细胞仪对其进行鉴定。分别在慢病毒转染脂肪源性干细胞3，7，14 d后，应用反转录PCR方法检测脂肪源性干细胞中成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白表达水平的同时检测血管内皮生长因子的表达水平。
结果与结论：pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α可有效地转染入大鼠脂肪源性干细胞；反转录 PCR结果显示成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白在 LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染后第7天都开始明显过表达，并且可持续到14 d。说明LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染脂肪源性干细胞可提高其成骨活性。 -
LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达
目的:探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达.方法:建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异.结果:在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中.结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成.
-
研究两种干细胞体外矿化过程中LIM矿化蛋白1的表达
目的： LIM矿化蛋白1（ LIM mineralization protein?1， LMP?1）是一种胞内非分泌型蛋白，广泛存在于各种组织中，它不仅影响骨基质的矿化而且还是成骨细胞分化和骨形成过程中重要的调节因子。本实验通过检测LMP?1在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程中的表达情况，来研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1对牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化的作用，为LMP?1作为成骨调节因子，影响骨基质矿化方面的研究提供参考。方法酶消化法体外培养牙髓干细胞，用挑克隆细胞团的方法对牙髓干细胞进行纯化传代培养。密度梯度离心法体外培养骨髓间充质干细胞。两种细胞分别设置实验组和对照组。实验组培养液中加入矿化诱导液，对照组不加矿化诱导液。分别于培养3、5、7、14天检测碱性磷酸酶的活性。培养21天茜素红染色检测矿化结节形成。培养期间，采用荧光定量PCR方法检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白BMP?2、牙本质涎磷蛋白DSPP和Ⅰ型胶原蛋白COL?1、核心结合因子RUNX?2等成骨标志基因的表达，用SPSS 17．0对结果进行统计学分析。结果培养3、5、7、14天碱性磷酸酶的活性逐渐提高，且实验组碱性磷酸酶的活性显著高于对照组。培养21天实验组可见矿化结节形成。荧光定量PCR检测到实验组及对照组各个基因均表达，且实验组表达显著高于对照组。结论发现LIM 矿化蛋白1与牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程相关，推测LIM 矿化蛋白1可能作为检测牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化的一个指标。
-
LIM矿化蛋白1在牙髓干细胞和骨髓间充质 干细胞中的研究进展
LIM矿化蛋白1(LMP-1)是一种胞内信号转导分子,体内外研究表明它在成骨细胞分化过程中起到促进骨形成的重要作用.目前认为LMP-1是通过刺激某些诱导骨形成的因子如骨形态发生蛋白(BMP)的合成及分泌发挥作用,从而提高骨形态发生蛋白及其他成骨因子的成骨活性.该文围绕LMP-1的作用及在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化方面的研究现状作一综述.
-
胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究
目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达.方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂.培养14 d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成.培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果.结果:培养14 d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性.RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达.培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍.培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14 d时约为对照组的2.0倍.结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用.
-
LIM矿化蛋白1过表达对骨肉瘤细胞系OS-9901细胞增殖的影响
目的 探讨骨肉瘤细胞系OS-9901细胞中LIM矿化蛋白Ⅰ(LMP-1)过表达对该细胞增殖的影响.方法 构建LMP-1过表达慢病毒载体,通过脂质体转染进骨肉瘤细胞系OS-9901细胞.通过荧光定量PCR和Western blot检测LMP-1过表达情况,并通过BrdU掺入实验比较LMP-1过表达前后细胞增殖情况.结果 转染了LMP-1过表达慢病毒载体6h后细胞内LMP-1 mRNA和蛋白表达均无显著变化(P＞0.05),且DNA合成量无显著变化.而当LMP-1过表达慢病毒载体转染细胞12、24和48 h后细胞内LMP-1 mRNA和蛋白表达量均显著提高的同时,DNA合成量显著降低(P＜0.05). 结论 LMP-1过表达可抑制骨肉瘤细胞系OS-9901细胞增殖.
-
LIM矿化蛋白1对牙周膜细胞生物学特性的影响
目的 以LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)基因构建真核表达载体PET43.1a-LMP-1,转染人牙周膜细胞,观察对其生物学特性的影响.方法 采用基因工程技术构建真核表达载体pET43.1 a-LMP-1,脂质体法转染人牙周膜细胞,四唑盐比色法和酶联免疫吸附测定法测定真核表达载体pET43.1 a-LMP-1转染对牙周膜细胞活性以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的影响.结果 与空质粒转染组和空白对照组相比,pET43.1 a-LMP-1真核表达载体转染后牙周膜细胞中LMP-1mRNA和蛋白表达显著增强(P＜0.05)；细胞增殖明显增加；ALP表达明显增强,并随时间延长逐渐上升.结论 外源性LMP-1转染进人牙周膜细胞能够促进细胞的增殖和矿化能力.
