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超顺磁性氧化铁纳米粒子标记成肌细胞及其对细胞活性的影响
目的 研究超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)标记成肌细胞方法及其对成肌细胞活性的影响.方法 常规方法进行成肌细胞培养,应用不同浓度的SPIO标记成肌细胞,Prussian blue染色检测标记率,JC-1及MTT等方法检测SPIO标记对成肌细胞毒性及细胞活力的影响.结果 普鲁士蓝染色证实了每个标记细胞胞质内含有多少不等的蓝染铁颗粒,SPIO标记有效率为100%.低浓度的SPIO对成肌细胞的活性无明显影响,当SPIO浓度达89.6 μg/ml时影响成肌细胞的活性.结论 SPIO标记成肌细胞简单、高效,低浓度时对细胞的活力无明显影响,可用于磁共振对标记细胞进行活体内外无创动态示踪研究.
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磁标记内皮祖细胞移植对糖尿病大鼠肾功能改善的作用：MRI成像验证
背景：近几年的诸多研究发现，内皮祖细胞在损伤性疾病等方面有重要作用。目的：探讨磁标记内皮祖细胞移植对糖尿病大鼠肾功能的改善作用及MRI成像。方法：将60只Wistar大鼠随机分为3组，正常对照组不作任何处理；模型组、实验组腹腔注射40 mg/kg 链脲佐菌素，建立1型糖尿病模型，造模后4周，实验组尾静脉注射磁标记内皮祖细胞悬液0.15 mL(细胞浓度1×109 L-1)。细胞移植8周后，检测3组大鼠空腹血糖、血清胰岛素、血肌酐和尿素氮及24 h尿蛋白水平；采用MRI对移植细胞进行活体示踪，并与肾脏组织切片进行对照；测量大鼠体质量及肾质量变化，计算肾质量指数。结果与结论：①与正常对照组比较，模型组空腹血糖、血肌酐和尿素氮、24 h尿蛋白及肾质量指数升高(P<0.05)，胰岛素水平降低(P<0.05)；②与模型组比较，实验组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白及肾质量指数降低(P<0.05)，胰岛素水平升高(P<0.05)；③实验组可见稍长T1短T2信号，病灶边缘部位明显，梯度回波FLASH序列较T2加权RARE序列明显，其余组均未见明显低信号改变；实验组可见磁标记的阳性细胞且与组织切片结果相吻合，模型组和正常对照组未见磁标记的阳性细胞；④结果表明，磁标记内皮祖细胞移植可在一定程度上改善糖尿病大鼠的肾功能紊乱。
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DWIBS评价SPIO标记树突状细胞治疗兔VX2肝癌的疗效
目的 探讨磁共振背景信号抑制弥散加权成像( MR DWIBS)在评价磁标记负载肝癌抗原的树突状细胞疫苗活体内移植后对原发性肝癌的治疗作用.方法 用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导分化DC获得DC疫苗.并且用超顺磁性氧化铁标记.建立兔VX2肝癌模型,皮下注射磁标记的DC疫苗,观察DC疫苗的体内分布.运用DWIBS不同时间点活体检测肿瘤的大小、形态.结果 ①DC疫苗的体内分布.滏射树突状细胞疫苗后,兔肝细胞内可见较多蓝染铁颗粒沉着,而仅有少数Kupffer细胞内可见蓝染铁颗粒沉着；②肿瘤的DWIBS影像上,肝实质信号减低显著,肿瘤边界清楚；③同时间点治疗组与对照组的凋亡指数(AI)情况:治疗后1周、2周治疗组分别与相应对照组凋亡指数差异有统计学意义(P＜0.05)；④不同时间点治疗组及对照组的ADC比值情况:治疗后1周、2周治疗组分别与相应对照组ADC比值差异有统计学意义(P＜0.05).结论 磁标记负载肝癌抗原的Dc疫苗体内能诱导产生明显的抑瘤作用.而用DWIBS成像技术则为原发性肝癌的免疫基因治疗提供了重要的形态学信息.
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兔脂肪间充质干细胞的培养鉴定及体外磁标记MR成像
目的 研究兔脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)的培养鉴定方法,联合应用超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide particles,SPIO)和多聚赖氨酸(poly-l-lysine,PLL)行体外磁标记细胞,探讨磁标记示踪的可行性.方法 分离、纯化并培养兔ADSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD44和CD34.应用SPIO-PLL标记细胞,普鲁士蓝染色和透射电镜检测胞内铁粒子.体外3.0T MR分别对1×107个未标记ADSCs(空白对照),经25、50、75 μg/mL SPIO-PLL分别标记的1×107个细胞,经25 μ,g/mL SPIO-PLL标记的1×107个(标记1d)、1×10 7个(标记3d)和5×106个(标记1d)ADSCs进行成像,包括T1WI、T2WI及T2* WI序列,测量各组的信号强度和弛豫时间.结果 第3代ADSCs纯度高、排列规则,细胞呈漩涡状,流式细胞术检测结果示CD44和CD90阳性表达率分别为99.2％、98.7％,CD34表达阴性.普鲁士蓝染色和透射电镜示胞浆内蓝色颗粒,磁标记率近100％.MR示随着SPIO-PLL浓度增高,T2* WI和T2WI序列的信号强度变化较T1WI明显.1×10 7个ADSCs(标记1d)的信号强度变化率较1×107个(标记3d)和5×106个(标记1d)大,T2*和T2弛豫时间与T1弛豫时间相比差异均有统计学意义(F=161.47,P＜0.05),但T2*和T2弛豫时间相比差异无统计学意义(F=5.88,P＞0.05).结论 通过分离纯化培养可获得足量的ADSCs,SPIO-PLL能够有效标记ADSCs,体外可行MR细胞成像,以T2* WI和T2WI序列敏感.
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PEI-SPIO标记对关节软骨细胞生物学特性的影响
目的 研究聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)包被的超顺磁性氧化铁粒子(superparamagnetic iron oxid,SPIO)对透明软骨细胞增殖和分泌Ⅱ型胶原蛋白功能的影响,探讨其标记软骨细胞的适宜标记浓度和适宜孵育时间.方法 取1～3月龄巴马小香猪后膝关节透明软骨体外培养的第2代细胞,以2、4、6、8、10、12、14 μg/mL浓度的PEI-SPIO标记液标记的软骨细胞为实验组,没有PEI-SPIO标记的软骨细胞作为对照组,分别在37℃培养箱中培育6、12、18、24、30 h,通过普鲁士蓝染色、透射电镜、细胞内铁含量、WST-1和半定量RT-PCR法检测,筛选出PEI-SPIO的佳标记浓度和佳孵育时间.结果 6、8、10、12、14μg/mL组标记后的普鲁士蓝染色显示90％以上的细胞被铁粒子标记；细胞内铁含量的测定结果显示标记时间超过24 h,各组细胞内铁含量基本不再增加；WST-1检测磁标记的细胞毒性结果显示,对照组与实验组无统计学差异(P＞0.05).8 μg/mL标记的软骨细胞,其Ⅱ型胶原蛋白RT-PCR条带的灰度值比值与未标记软骨细胞比较有明显降低[(13.04±0.60)％ vs(18.89±1.26)％,P＜O.05]；6μg/mL标记的软骨细胞,其条带的灰度值比值与未标记软骨细胞比较无明显差异[(27.32±1.02)％ vs(28.56±1.15)％,P＞0.05].结论 PEI-SPIO可达到安全有效标记软骨细胞的要求,PEI-SPIO标记液为6μg/mL,标记24 h是PEI-SPIO标记软骨细胞的适宜标记浓度和标记时间,既可达到标记软骨细胞的目的,又不对软骨细胞的活性、增殖和Ⅱ型胶原蛋白基因的表达造成影响.
