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人骨髓间充质干细胞促进乳腺癌细胞系MCF7上皮间质转化
目的 探讨在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)与乳腺癌细胞系MCF-7共培养后,MCF-7细胞上皮间质转化(MET)能力是否受到影响,并检测共培养条件下上皮间质转化是否是通过旁分泌因素影响MCF-7细胞的增殖及迁移能力的.方法 体外成功分离hBMSCs,利用Transwell小室共培养hBMSCs与乳腺癌细胞系MCF-7,光镜观察MCF-7细胞的形态结构,是否发生上皮间质转化的特征性改变.利用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光检测上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、vimentin、α-SMA及 β-catenin的表达.收集共培养体系中的条件培养液,作用MCF-7细胞,Western blot鉴定MCF-7细胞上皮间质转化的分子标志物的水平;CCK8法检测MCF-7细胞的增殖活力;流式细胞计量术检测细胞增殖周期的变化;Transwell小室法检测MCF-7细胞侵袭及转移能力.结果 与对照组相比,与hBMSCs共培养之后的MCF-7细胞表现出明显增强的上皮间质转化能力(P<0.05).培养体系中的条件培养液刺激MCF-7细胞,其上皮间质转化特征及增殖和迁移能力增强(P<0.01).结论 人骨髓间充质干细胞可诱导乳腺癌细胞系发生上皮间质转化.骨髓间充质干细胞与乳腺癌细胞系可以通过旁分泌信号促进乳腺癌上皮间质转化,进一步增强其增殖及转移能力.
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内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的相关机制进展
本文介绍内皮祖细胞的定义,并对内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的四种机制:血管发生(vasculogenesis)、血管生成(angiogenesis)、动脉形成(arteriogenesis)和旁分泌(paracrine mechanisms)等相关机制做一阐述.
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干细胞修复肾脏的旁分泌/内分泌机制
干细胞在肾损伤之后的修复中发挥着重要作用[1].肾脏损伤的动物模型表明,坏死细胞的更替依赖于残存的已分化细胞再次进入细胞周期[2-3],或依赖于骨髓来源的[4-5]或肾脏器官特异性干/祖细胞[6-7]的修复作用.只有很少的骨髓细胞归巢到肾脏并替换受损的上皮细胞,因此,旁分泌或内分泌可能对肾脏修复有更大的帮助[8-9].本文主要对于细胞修复肾脏的旁分泌/内分泌机制综述如下.
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骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制
背景:骨髓间充质干细胞已用于肾缺血再灌注损伤修复的实验动物研究.目的:探讨骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制.方法:体外培养、纯化并体外DAPI标记大鼠骨髓间充质干细胞,经下腔静脉移植入肾缺血再灌注损伤模型大鼠体内,观察骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤肾功能的保护作用以及在受体鼠体内的迁移情况,并应用免疫组织化学法检测骨髓间充质干细胞治疗后第2天缺血肾脏组织中血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子α细胞因子的表达.结果与结论:与注射生理盐水的对照组比较,细胞移植组大鼠血清肌酐和尿素氮水平在移植后第1、2天明显降低(P<0.05),但细胞移植组移植后第1、2天肾组织中均未见DAPI阳性细胞;第3、4天则逐渐可见DAPI阳性细胞.免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,移植后第2天肾组织中可见较多血管内皮生长因子阳性细胞,而肾组织中肿瘤坏死因子α阳性细胞明显减少.结果显示旁分泌机制参与了骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤.
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高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢
背景：趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子，加速血管新生的重要作用。目的：观察高糖环境下，趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响，并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法：①细胞体外实验：在细胞高糖环境模型下，将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组，预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min，再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组，高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞，其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwel 细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响；②动物体内实验：建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型，分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理，验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论：①体外实验结果：与高糖对照条件培养基相比，高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率，并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01)，高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01)；与高糖CXCL-8组相比，高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01)；②体内实验结果：与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比，CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01)；③结果提示，在高糖环境下，CXCL-8能够通过Shh通路，刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子，提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。
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基于脱细胞真皮基质支架的脂肪源性干细胞移植对糖尿病大鼠创面愈合的影响
目的 探讨脱细胞真皮基质(ADM)支架作为载体递送脂肪源性干细胞(ASCs)于糖尿病创面的作用.方法 体外分离、培养ASCs并且鉴定干细胞多向分化潜能.制备ASCs-ADM移植物并且检测其生物学特征.建立糖尿病大鼠创伤模型,体内分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)、ASCs或ASCs-ADM处理,从大体观察和病理学分析创面愈合情况.此外,免疫荧光染色检测创面新生血管密度.Western blot 分析在不同处理组中创面的血管源性生长因子表达水平.结果 ASCs成功的分离、培养并且具有增殖及分化潜能.ADM支架可以提供良好的三维立体结构供ASCs在体外生长及增殖.在体内研究中,ASCs-ADM移植后显著促进了创面肉芽组织形成及表皮再生.与对照组或ASCs处理组比较,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫荧光染色分析ASCs-ADM治疗组与对照组比较明显增加创面新生血管密度(P＜0.05).ASCs-ADM处理组创面VEGF和HGF蛋白水平显著增加.结论 ASCs-ADM移植物通过旁分泌机制加速肉芽组织形成,上皮再生和新生血管化,促进糖尿病创面愈合.
