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CCK-8通过调节κB活性促进大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6转录
目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素(sCCK-8)对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6基因表达的影响及核因子NF-κB活性,以探讨CCK-8对类风湿性关节炎(RA)的调控机制.方法大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α、sC-CK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3 h,用RT-PCR检测细胞IL-6 mRNA的表达,孵育l h,用电泳迁移率检测NF-κB活性,孵育30 min,用Western blot检测胞浆I-κB蛋白表达.结果sCCK-8(10-8～10-6 mol/L)明显增加TNF-α诱导的IL-6 mRNA表达及NF-κB活性,呈剂量依赖性,降低胞浆中I-κB蛋白水平,并可被丙谷胺所拮抗.结论sCCK-8在类风湿性关节炎(RA)发病过程中可能具有调控作用.
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缩胆囊素和胰泌素对负鼠胰管压力和胰腺血流量的影响
目的:观察缩胆囊素和胰泌素对胰管压力及胰腺血流量的影响,以探讨急性胆源性胰腺炎的发病机制.方法:6只负鼠静脉灌注缩胆囊素和胰泌素5 μg/kg,分别胰管插管,并连接到压力感受器上测定胰管压力,激光多普勒测定胰腺血流量.结果:在注射缩胆囊素和胰泌素后5 min,胰管压力分别由16.2±1.8 mmHg和16.8±1.7mmHg上升到18.9±2.1 mmHg和25.6±1.9mmHg,在随后的5-15 min期间,胰管压力在此水平缓慢的下降并维持在较高的水平,分别为17.6±2.4 mmHg和21.5±2.5 mmHg(P＜0.002和P＜0.001);胰腺血流量分别由0.58±0.09mL/100g和0.55±0.04 mL/100g上升到0.75±0.11mL/100g和0.85±0.12 mL/100 g,在随后的5-15 min期间,随着胰管压力上升,胰腺血流量反而缓慢的下降并维持在较低的水平,分别为0.51±0.09 mL/100 g和0.39±0.11 mL/100 g(P＜0.001),与缩胆囊素相比,胰泌素的这种作用更为明显(P＜0.05).结论:缩胆囊素和胰泌素可增加胰管压力,并使胰腺血流量在开始增加,增加的胰管压力反而使胰腺血流量下降,提示在胰管有梗阻的情况下,这两种激素可能是急性胆源性胰腺炎发生并发展的重要始动因素之一.
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胰腺癌胆囊收缩素受体蛋白表达的研究
目的探讨胆囊收缩素受体在正常胰腺组织、胰腺癌组织、胰腺癌细胞株SW1990中的表达,以明确胆囊收缩素受体与胰腺癌的关系.方法应用免疫组织化学法和免疫细胞化学法分别检测正常胰腺组织、胰腺癌组织、胰腺癌细胞株SW1990中胆囊收缩素受体A、B亚型的表达.结果在正常胰腺组织中缺乏胆囊收缩素受体A、B亚型的表达;在胰腺癌组织、人胰腺癌细胞株SW1990中也不表达胆囊收缩素受体A亚型,但可见胆囊收缩素受体B亚型的表达;胆囊收缩素受体在癌细胞株SW1990中的表达主要位于细胞膜上,细胞质内也可见.结论胆囊收缩素受体B在胰腺癌组织、腺癌细胞株SW1990中表达;胆囊收缩素受体B亚型主要位于细胞膜上;胆囊收缩素受体B亚型在胰腺癌细胞生长中可能发挥重要作用.
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胆囊收缩素在应激时胆汁反流中的作用及其相关机制
目的 证实应激过程中胆汁反流的存在,探讨胆囊收缩素八肽(CCK-8)在应激所致胆汁反流中的作用及相关机制.方法 放免法检测大鼠血浆CCK-8和胃液胆汁酸水平,测定胃液pH值并记录胃黏膜溃疡指数;多导生理记录仪记录离体肌条收缩活动;检测Fura-2/AM标记的胃窦平滑肌细胞(SMC)内钙离子浓度([Ca2+]I)的变化;全细胞膜片钳记录L-型钙通道电流(ICa-L).结果 与正常对照相比,应激时血浆CCK-8[从(2.23±0.88)pmol/L到(10.80±3.82)pmol/L],胃液胆汁酸[从(37.93±23.76)μmol/L到(1316.00±197.36)μmol/L],pH值(从1.06±1.20到5.29±1.25)和溃疡指数(从0.62±0.23到32.01±16.11)均明显增高(P＜0.01);CCK-8S显著增强胃窦和幽门肌条收缩和胃窦SMC的[Ca2+]I]从(65.8±7.4)nmol/L升至(472.1±35.6)nmol/L,P＜0.01]及ICa-L[从(-56.42±6.57)pA增至(-88.54±5.71)pA,P＜0.01],但可被相应拮抗剂所抑制.结论 与应激时CCK-8升高所致的胃窦动力紊乱相关,胆汁反流存在于应激过程中,是应激性胃黏膜损伤的重要因素.
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人结肠癌细胞胃泌素-黏着斑激酶通路的研究
目的研究胃泌素对人结肠癌细胞信号分子黏着斑激酶(FAK)酪氨酸磷酸化和蛋白质表达的影响.方法使用胆囊收缩素2受体(CCK2R)的真核表达载体pCR3.1/CCK2R,转染人结肠癌细胞株Colo320,上调胃泌素作用;使用胃泌素拮抗剂下调胃泌素作用.使用胃泌素按浓度和时间梯度刺激细胞,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测FAK酪氨酸磷酸化和蛋白质表达情况.结果胃泌素能够引起FAK 酪氨酸磷酸化,具有时间和剂量依赖性;CCK2R表达上调可以增强此作用;胃泌素拮抗剂具有相反作用.结论 FAK是胃泌素发挥效应的下游信号分子,以酪氨酸磷酸化的形式发挥作用.胃泌素-CCK2R-FAK信号通路在胃泌素引起的肿瘤细胞增殖过程中发挥重要作用.
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胆囊收缩素对自体胰腺移植犬Oddi括约肌功能的影响
目的研究胆囊收缩素对胰腺移植后移植物Oddi括约肌功能的影响.方法对正常犬和膀胱引流式胰腺移植后犬应用胆囊收缩素前后进行Oddi括约肌测压.结果与正常犬相比,应用胆囊收缩素后Oddi括约肌的基础压、收缩频率、收缩幅度和动力指数显著降低,分别为(18.5±2.8) mm Hg与(10.2±2.2) mm Hg(P<0.01)、(9.7±1.5)次/min 与(5.0±1.2)次/min (P<0.01)、(47±6) mm Hg与(19±5) mm Hg(P<0.01)、(236±56)与(50±17)(P<0.01). 移植物Oddi括约肌基础压和收缩频率分别升高为(27.8±2.8) mm Hg和(13.1±1.9)次/min,收缩幅度降低为(8±2) mm Hg.移植犬应用胆囊收缩素后,基础压、收缩频率和动力指数分别升高为(35.5±5.1) mm Hg,(18.9±1.9)次/min和(515±42),与用药前相比,P均<0.01.结论胆囊收缩素可抑制正常犬的Oddi括约肌运动,但对移植胰腺的Oddi括约肌起激动作用.
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胆汁胆固醇对胆囊收缩素受体表达的影响
目的探讨胆汁胆固醇对胆囊收缩素受体(CCK-R)表达的影响. 方法采用放射免疫分析法和受体放射配基结合法检测对照组(n=25)、高胆固醇组(n=25)、自然恢复组(n=25)及治疗组(n=25)豚鼠门静脉血CCK水平、胆囊CCK-R的大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd),同时观察空腹胆囊体积(FV)、胆囊胆汁量(FB)和餐后胆囊体积(RV)、胆囊胆汁量(RB)及胆囊收缩率(E)、胆汁胆固醇浓度的变化. 结果与对照组比较,高胆固醇组豚鼠FV[(0.89±0.26)～(1.34±0.61) cm3]、FB[(0.68±0.20)～(1.01±0.43)cm3]、RV[(0.28±0.08)～(0.90±0.53) cm3]、RB[(0.23±0.06)～(0.83±0.32) cm3]增大,E[(65.83±7.32)%～(47.22±5.24)%]下降,胆汁胆固醇浓度[(0.44±0.11)～(0.60±0.13) mmol/L]升高,门静脉血CCK水平及CCK-R的Kd无改变,而CCK-R的Bmax[(60±27)～(32±13)fmol/mg蛋白]下降;与自然恢复组比较,治疗组上述各项指标正常. 结论胆汁中的高胆固醇通过下调胆囊CCK-R表达而导致胆囊收缩功能障碍,降低胆汁高胆固醇浓度可以促进胆囊动力功能的恢复.
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缩胆囊素A受体基因多态性在精神分裂症家系中的传递不平衡检验
目的探讨缩胆囊素A(CCK-A)受体基因在精神分裂症核心家系中是否存在传递不平衡,并研究基因型与临床症状之间的关系.方法收集符合国际疾病分类第10版的90例精神分裂症患者的核心家系,其中父母组180人,患者组90例,非患病同胞组44人,散发精神分裂症患者组29例.采用聚合酶链反应技术、限制性片段长度多态性的方法进行研究.用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者组.结果 (1)CCK-A受体基因在患者组、非患病同胞组均无显著性传递不平衡,χ2值分别为0.69和0.71,P>0.05;(2)按性别分组后,不同基因型患者的阴性症状严重程度的差异有显著性或非常显著性.在女性患者中,A1A2基因型患者的PANSS阴性因子总分秩次(50.90)高于A2A2基因型患者(30.60),P=0.000;在男性患者中,A1A2基因型患者的PANSS阴性因子的前两项(N1,N2)评分秩次(12.59,14.35)与A2A2基因型患者(24.45,22.95)的差异有非常显著性(P=0.01).结论CCK-A受体基因不能作为精神分裂症的功能基因,但其影响患者阴性症状的严重程度.
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关键词：
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阻断自分泌性胃泌素对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨胃癌组织中是否存在胃泌素/胆囊收缩素(CCK)-B受体自分泌环及其在胃癌的发生发展中的作用.方法 采用人胃癌细胞系SGC-7901在含10%新生小牛血清RPMI-1640培养基中培养于37℃、5%CO2的培养箱中.SGC-7901细胞中胃泌素/CCK-B受体自分泌环的检测分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学及放射免疫分析法.抗胃泌素单克隆抗体阻断自分泌环对细胞生长与凋亡的影响采用SGC-7901细胞与不同浓度的抗胃泌素单克隆抗体共同孵育72 h后,搜集细胞,分别用四甲基偶氮唑盐比色法及流式细胞术检测细胞生长率、细胞周期及凋亡细胞,以不加抗体孵育作为阴性对照.结果 SGC-7901细胞复合表达CCK-B受体和胃泌素基因,其序列已被测序证实.胃泌素蛋白主要在SGC-7901细胞的胞质中表达,且培养液中的胃泌素浓度随培养时间的延长和细胞数的增加而增加.用抗胃泌素单克隆抗体阻断此自分泌环后,细胞的生长率从正常对照的100%降至31.4%(抗体浓度为2μg/ml),而S期细胞数从正常对照的27.8%降至9.5%(抗体浓度为1.2μg/ml),且细胞凋亡率分别从正常对照的0.9%(亚G1峰法)和1.1%(膜联蛋白-V/碘化丙啶双染法)升至6.5%(亚G1峰法)和7.5%(膜联蛋白-V/碘化丙啶双染法).结论 胃癌细胞系SGC-7901中存在胃泌素/CCK-B受体自分泌环,阻断此自分泌环后能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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胃泌素受体拮抗剂与环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺与特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的调控作用.方法 MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加丙谷胺(终浓度5.0 mmol/L)和/或NS-398(10.0 μmol/L),连续培养48 h.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析检查细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹法检测凋亡抑制基因bcl-2 mRNA及蛋白表达.结果丙谷胺和NS-398协同抑制MKN-45细胞增殖;丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为24.7%± 3.2%,26.7%± 3.4%和36.1%± 4.6%,显著高于对照组的1.6%±0.6%(均P<0.01);联合用药组的细胞凋亡率明显高于单一用药组(P< 0.05).丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2 mRNA及蛋白表达(均P<0.05).结论丙谷胺、NS-398抑制MKN-45细胞增殖,通过下调bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合具有协同抗癌作用.
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蛋白激酶C调节的1,4,5-三磷酸肌醇受体磷酸化在胆囊收缩素介导的胃窦平滑肌细胞钙动员中的作用
目的 研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对大鼠胃窦平滑肌细胞(SMC)胞内钙释放和胞外钙内流的作用及对其具体相关机制的探讨.方法 (1)多导生理记录仪记录大鼠离体胃窦肌条在不同条件下的收缩活动;(2)免疫印迹法和免疫沉淀法检测胃窦SMC的三型1,4,5-三磷酸肌醇受体(Ins P3R3)及其磷酸化水平;(3)Fura-2/AM标记胃窦SMC,观察CCK-8S对胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响;(4)全细胞膜片钳检测胃窦SMC的L-型电压门控钙通道电流(ICa-L)的变化情况.结果 (1)CCK-8S作用下胃窦肌条收缩幅值和频率改变明显[增长率分别为(62±13)%和(58±17)%,均P＜0.01],可被CCK-A受体拮抗剂和钙泵抑制剂所阻断;(2)蛋白激酶C(PKC)上调InsP3R3磷酸化水平,抑制CCK-8S介导的内钙释放;(3)CCK-8S引起的[Ca2+]i显著升高[从(69±7)mol/L升至(472±36)nmol/L,P＜0.01]分别可被CCK-A受体或胞内钙泵抑制剂和PKC激动剂所阻断;去除外钙或给予L-型钙通道阻滞剂时CCK-8S仍可引起[Ca2+]i升高;(4)CCK-8S显著增强胃窦SMC的ICa-L[从(-56±7)pA升至(-89±6)pA,P＜0.01],可分别被ICa-L阻滞剂、胞内钙泵抑制剂和钙依赖性氯通道阻滞剂所阻断.结论 CCK-8S引起的大鼠胃窦SMC的[Ca2+]i升高依赖于PKC介导的InsP3R3磷酸化作用调节下的细胞内钙离子释放.胞内钙释放可激活ICl-Ca,引起细胞膜去极化而活化Ica-L引起胞外钙内流,终引起SMC收缩效应.
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八肽胆囊收缩素对内毒素休克时海马损伤的影响及其机制初探
目的:观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素休克(ES)时海马损伤的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:将日本大耳白兔经静脉注入内毒素的主要活性成分脂多糖(LPS,8mg/kg)复制ES模型.动物(32只)随机分为对照组、LPS组、CCK-8+LPS组和非特异性CCK受体拮抗剂丙谷胺(Pro)+LPS组(n=8).监测平均动脉压(MAP)的变化,光、电镜观察海马的组织形态学改变,比色法检测海马NOS和SOD活性、NO和MDA含量的改变,用SD大鼠(12只,同上复制模型及分组)以免疫组织化学染色法观察海马iNOS和nNOS表达的变化.结果:与对照组相比,注入LPS后出现MAP显著而持续下降(P＜0.01);海马部位神经元损伤明显;iNOS和nNOS表达增强,NOS活性、NO和MDA含量显著升高(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01),SOD活性则降低(P＜0.01).预先注入CCK-8可明显减轻上述变化,预先注入Pro则加剧以上变化.结论:CCK-8可减轻ES时脑内海马部位的损伤,其机制可能与其抗氧化作用和抑制NO的过量生成有关.
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八肽胆囊收缩素对脂多糖攻击小鼠抗炎症细胞因子表达的影响
目的 观察脂多糖(LPS)攻击小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-10的动态变化规律,以及八肽胆囊收缩素(CCK-8)对其表达的影响.方法 随机将小鼠分组,每组7只.腹腔注射LPS 10 mg/kg,于攻击后0、2、4、6和12 h检测血清、肺组织IL-4和IL-6表达高峰的时间.对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml;LPS组腹腔注射LPS 10 mg/kg;LPS+CCK-8组在注射LPS前30 min腹腔注射CCK-8 60μg/kg;CCK-8组腹腔注射CCK-8 60 μg/kg.用酶联免疫吸附法(ELISA)及逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)方法检测各组小鼠血清和肺组织中IL-4、IL-10的含量及其mRNA的表达情况.结果 LPS攻击后2 h血清及肺组织IL-4、IL-6均显著升高,血清IL-4、IL-6于4 h和6 h达高峰;肺组织IL-4、IL-6则均于6 h达高峰.说明LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-10的蛋白及mRNA表达均增加;预先注入CCK-8可使IL-4和IL-10的蛋白以及mRNA表达均进一步增加(P均＜0.01);而单独注射CCK-8对血清、肺组织IL-4、IL-10的表达无明显影响.结论 CCK-8可能通过进一步增加LPS攻击小鼠IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程,从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应.
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八肽缩胆囊素受体在血管内皮细胞中的表达及脂多糖的影响
目的 观察八肽缩胆囊素受体(CCK-R)mRNA在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的表达,并探讨内毒素脂多糖(LPS)对CCK-AR、CCK-BR mRNA表达的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,以LPS 0.01、0.1、1、10 mg/L孵育ECV-304 2 h或用1 mg/L LPS孵育ECV-304 0.5、2、6、12 h,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CCK-AR、CCK-BR的mRNA表达,并对扩增产物的特异性进行测序分析.结果 与空白对照组比较,0.01、0.1及1 mg/L LPS孵育细胞2 h可剂量依赖性引起CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达明显升高(P均<0.05),其中0.01 mg/L LPS诱导CCK-AR mRNA效应不明显,但可明显诱导CCK-BR mRNA表达;与1 mg/L LPS组比较,10 mg/L LPS孵育细胞2 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达未继续出现明显升高(P均>0.05).与空白对照组比较,1 mg/L LPS孵育细胞0.5～2 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达呈时间依赖性升高(P均<0.05);与LPS孵育2 h比较,1 mg/L LPS孵育细胞6 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达明显下降,但仍高于空白对照组(P均<0.05);与LPS孵育6 h比较,1 mg/L LPS孵育细胞12 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达进一步降低(P均<0.05),且与空白对照组比较已无显著差异(P均>0.05).结论 CCK-AR与CCK-BR的mRNA在ECV-304中均有表达;LPS可诱导CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达上调.
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CCK-8对脂多糖诱导大鼠肺组织HO-1蛋白表达的影响
我们以往的实验证明,八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)可以改善脂多糖(lipopolysacchride,LPS)引起的肺损伤,但其确切机制尚未完全明了.血红素氧化酶(hemeoxyganase,HO)是催化血红素生成胆绿素和CO的限速酶,诱导型HO(HO-1)可被引起氧化性损伤的许多因素所诱生并具有保护组织免受氧化损伤的作用.近年来研究表明,一直被看作代谢废物的内源性CO是具有重要生理和病理生理作用的物质,其在肢体缺血再灌注肺损伤中发挥细胞保护作用.但CCK-8改善LPS引起的肺损伤时肺组织中HO-1的变化及作用尚不清楚.本实验旨在观察CCK-8改善LPS引起的肺损伤过程中肺组织中HO-1蛋白表达的变化,以探讨CCK-8调控LPS诱导大鼠体内CO生成的分子机制及其可能的生物学意义.
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八肽缩胆囊素减轻大鼠局部脑缺血再灌注损伤的实验研究
缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)是脑组织中含量丰富的神经肽之一.近研究发现,急性脑血管病患者急性期血浆八肽CCK(CCK-8)水平明显增高,CCK可拮抗谷氨酸的神经毒性作用.这些现象提示,CCK在脑缺血的发病过程中可能起着重要作用,但至今有关CCK和脑缺血关系的研究鲜有报道.为此,本实验采用大鼠局部脑缺血再灌注模型,观察侧脑室注射不同浓度的硫酸化CCK-8及其非特异性受体拮抗剂丙谷胺对局部脑缺血再灌注损伤的作用,并对其可能机制作初步探讨.
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脂多糖诱导的肺动脉平滑肌细胞胆囊收缩素受体基因表达的变化
内毒素休克(endotoxic shock,ES)是临床常见的危重病症,肺脏是ES时易受损的靶器官之一.本室系列研究发现内、外源性八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)有明显抗ES的作用,可逆转ES早期的肺动脉压升高;进一步研究发现,CCK-8对ES动物的保护作用与CCK-8逆转脂多糖(lipopolysacchride,LPS)对肺动脉的内皮依赖性舒张反应的抑制有关.而使用CCK受体(receptor,CCK-R)的非特异性拮抗剂丙谷胺,导致ES大鼠肺动脉压恢复明显延迟,死亡率明显上升,提示CCK-8的作用可能由CCK-R介导.肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC)在维持肺动脉的反应性中起着重要的作用.而CCK-R基因在PASMC中是否存在及其在LPS作用下的表达变化尚不清楚,本实验的目的旨在通过培养大鼠PASMC,观察CCK-R在PASMC中的分布及LPS作用下的表达变化.
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八肽胆囊收缩素对内毒素休克时大脑皮质损伤的影响及其机制初探
内毒素休克(endotoxic shock,ES)是临床常见的危重病症,严重ES时常可发生脑功能障碍,但其机制尚未完全明了.我室系列研究表明,八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有抗ES作用,可减轻ES时的组织损伤,但CCK-8对ES时脑损伤是否有影响的报道较少.
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八肽胆囊收缩素对内毒素休克时海马损伤的影响及其机制初探
严重休克时脑组织明显缺血缺氧,可导致功能障碍和组织损伤,但其机制尚未完全明了.研究表明,八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有抗内毒素性休克(endotoxic shock,ES)的作用,可减轻休克时的组织损伤,但CCK-8对此时脑损伤是否有影响的报道较少.本实验通过光镜、电镜观察CCK-8对ES时脑组织中海马损伤的影响,检测海马诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)和神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)表达、NOS活性、NO含量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化,探讨其可能的作用机制.
