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人胃癌组织中PPARγ的表达及其配体对胃癌细胞生长的影响
目的探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)在人类胃癌中表达的意义及其配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对人类胃癌MGC803细胞生长的影响及机制.方法RT-PCR检测PPARγ及survivin mRNA表达;Western blot检测MGC803细胞PPARγ、survivin、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及p27蛋白表达;免疫组化检测组织PPARγ蛋白表达.MTT法检测增殖;流式细胞术检测凋亡及细胞周期;Hoechst33342染色观察细胞凋亡的形态学变化.结果PPARγ蛋白阳性表达率,胃癌75.0%(40例)明显高于癌旁胃黏膜25.0%(40例)及正常胃黏膜20.0%(40例)(P＜0.001),后两者无明显差别.PPARγmRNA及蛋白阳性表达率,肠型胃癌95.0%(20例)明显高于弥漫型胃癌55.0%(20例) (P＜0.05).15d-PGJ2作用MGC803细胞24 h后,5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L和40μmol/L组增殖抑制率(%)和凋亡率(%)均高于0 μmol/L组(P＜0.001),且随浓度的增加而升高;30μmol/L组的增殖抑制率(%)和凋亡率(%),也随时间的延长而升高;G1/G0期细胞比例,30 μmol/L组[(61.33(1.53)%]明显高于0 μmol/L组[(31.33(2.31)%](P＜0.01).随15d-PGJ2作用MGC803细胞浓度的升高,survivin mRNA和蛋白及Skp2蛋白表达均降低,p27蛋白表达升高,而PPARγ mRNA及蛋白表达却没有变化.结论PPARγ表达与胃癌组织学类型有关.15d-PGJ2可能通过诱导凋亡及将细胞阻滞在G1/G0期,抑制人类胃癌MGC803细胞的生长,survivin和Skp2表达下调及p27表达上调可能在这个过程中起重要作用,这些可能不依赖PPARγ.提示15d-PGJ2可能是治疗胃癌的有效试剂.
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15d-PGJ2对骨髓间充质干细胞培养上清中细胞因子的影响
PPARγ配体15d-PGJ2(15-deoxy-△12,14-prostaglandm J2)对细胞有抑制增殖、促进分化和凋亡的作用,但是它对骨髓间充质干细胞(BM-MSC)培养上清中细胞因子的影响还未见报道.本研究探讨15d-PGJ2对BM-MSC培养上清中细胞因子的影响.首先对正常人骨髓进行分离培养获得可传代的贴壁生长的成纤维细胞样细胞,然后应用流式细胞术检测细胞的表型,应用条件培养液诱导细胞向成脂和成骨分化以鉴定所获得细胞为BM-MSC.在BM-MSC培养体系中加入10、20、40和60 μmol/L的15d-PGJ2并培养24 h,用实时定量PCR测定PPARγ mRNA水平,共聚焦免疫荧光技术检测PPARγ的表达水平.结果发现,当15d-PGJ2的浓度达到20 μmol/L时细胞出现了凋亡并大量从培养瓶表面脱落;而10 μmol/L的15d-PGJ2刺激细胞24 h后PPARγ的mRNA表达水平增高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).然后用含有10 μmol/L 15d-PGJ2和不合15d-PGJ2体系分别培养BM-MSC 24 h并用蛋白芯片检测培养上清,发现有部分因子表达水平发生了变化.结论:TIMP-2在15d-PGJ2刺激后下调,且信号值及变化水平有意义.
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PPARγ2内源性配体15d-PGJ2对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响
目的 研究不同浓度15d-PGJ2对大鼠成骨细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)及骨代谢相关基因核因子-κB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)及骨保护素(OPG)mRNA表达水平的变化,探讨PPARγ2内源性配体15d-PGJ2对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响.方法 体外培养大鼠成骨细胞,加入不同浓度15d-PGJ2(0、10、20、30μmol/L)干预24小时后,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP及OPG mRNA表达水平,比较不同浓度15d-PGJ2对成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响.结果 不同浓度15d-PGJ2呈剂量依赖性下调RANKL、ALP及OPG mRNA的表达水平,而呈剂量依赖性上调PPARγ2 mRNA 的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01). 结论 15d-PGJ2可能通过激活PPARγ2转录活性抑制成骨基因mRNA的表达,参与增龄相关的骨质疏松的发病过程.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 15d-PGJ2 成骨细胞 骨质疏松 -
15D-PGJ2对小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节氧化损伤的防护作用
目的：研究PPARγ激动剂15D-PGJ2对H2O2诱导的离体小鼠耳蜗螺旋神经节氧化损伤的防护作用。方法分离生后3-5 d的小鼠耳蜗基底膜,培养24 h后不同浓度PPARγ激动剂15D-PGJ2(10μM,30μM)预处理24h,再分别加入含有不同浓度H2O2(3mM,6mM)的培养基培养24小时。采用NF200免疫荧光染色方法行离体耳蜗基底膜螺旋神经纤维免疫荧光染色，在免疫荧光显微镜下观察各组螺旋神经纤维形态以及密度改变。结果3mM H202单独作用于原代培养的基底膜螺旋神经节24h时，螺旋神经纤维呈节断状损失改变,神经纤维逐渐变细局部断裂,染色变淡,神经纤维数量明显降低。随着H202浓度的增加，受损伤的螺旋神经微丝数目呈明显增加趋势。10μM 15D-PGJ2预处理24小时能提高H202损伤后基底膜螺旋神经纤维的数量。30μM 15D-PGJ2预处理组螺旋神经纤维数量明显增加。随着15D-PGJ2浓度提高,其保护作用加强。结论 PPARγ激动剂15D-PGJ2可减轻H2O2诱导的离体小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节氧化损伤。
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 螺旋神经节 H2O2 15d-PGJ2 -
抑制NF-κB活性对TNF-α联合IFN-γ诱导肾小管上皮细胞表达趋化因子的影响
目的:探讨抑制核转录因子-κB (nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)活性对肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor,TNF)-α联合干扰素(intefferon,IFN)-γ诱导肾小管上皮细胞表达趋化因子的影响,及过氧化小体增殖剂激活型受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma,PPAR-)激动剂15-脱氧-△(12,14)-前列腺素J2(15-deoxy-△ 12,14-prostaglandinJ2,15d-PGJ2)抑制趋化因子表达的机制.方法:将肾小管上皮细胞HK-2分为空白组、TNF-α联合IFN-γ刺激组(刺激组)、NF-κB的特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithioearbamate,PDTC)干预组及15d-PGJ2干预组.实时荧光定量PCR检测各组趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11 mRNA的相对表达量;ELISA检测各组上清液中趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的蛋白分泌量;Western blot检测空白组、刺激组及15d-PGJ2 干预组中NF-κB信号通路相关蛋白p65、IκBα及其磷酸化蛋白p-p65、p-IκBα的表达量.结果:TNF-α联合IFN-y刺激HK-2细胞后,CXCL9、CXCL10、CXCL1 1 mRNA表达量及蛋白分泌量显著增高(p＜0.05);而经PDTC预处理后,趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA相对表达量分别下降了85.44％、45.94％、45.03％(P＜0.05),蛋白分泌量分别下降了60.87％、47.59％及53.42％(P＜ 0.05);15d-PGJ2预处理后,CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA相对表达量分别下降了93.87％、92.40％、86.81％(P＜ 0.01),蛋白分泌量分别下降了49.74％、67.13％、62.39％(p＜0.01),且Western blot结果显示HK-2细胞中p65及IκBα蛋白的磷酸化水平与刺激组相比明显降低(P＜ 0.01).结论:抑制NF-κB活性使HK-2细胞分泌趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL1 l减少;15d-PGJ2通过抑制NF-κB信号通路的活化,下调趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的表达.
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15d-PGJ2对肝星状细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察15d-PGJ2上调过氧化质体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖凋亡的影响.方法 体外培养HSC-T6细胞, 取对数生长期的细胞,应用1、2、3 μmol·L-1不同浓度的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h,同时以不加药物只加无血清培养基做为对照组,24 h后应用RT-PCR的方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ mRNA表达的变化,Western blot检测相应的胞质内NF-κB抑制蛋白表达.MTT检测HSC增殖,吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期.结果 经15d-PGJ2处理的HSC细胞中PPARγ mRNA表达比例上调;胞质内NF-κB蛋白表达明显抑制.MTT结果显示不同浓度的15d-PGJ2对HSC-T6细胞的增殖均有抑制作用,以2 μmol·L-1组为明显;吖橙啶染色显示经PPARγ激动剂处理组凋亡细胞数明显增多,流式细胞仪结果显示15d-PGJ2处理组细胞产生了G1期阻滞作用.结论 15d-PGJ2能够上调PPARγ表达并抑制HSC-T6增殖及诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与抑制NF-κB活性有关.
关键词： 15d-PGJ2 过氧化质体增殖物激活受体γ 肝星状细胞 凋亡 核因子κB -
PPARγ及配体对JEG-3细胞系浸润能力的影响
目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体PPARγ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ)及其配体对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3浸润能力的影响.方法:通过免疫荧光细胞化学方法检测JEG-3细胞系中PPARγ的表达,采用Transwell侵入系统检测PPARγ的天然激动配体15脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)对滋养细胞浸润能力的影响.结果:在JEG-3滋养细胞系中有PPARγ蛋白表达,PPARγ激动配体15d-PGJ2处理后浸润穿膜细胞数明显减少,与对照比较差异有统计学意义(P＜0.01),且具有剂量依赖关系.结论:PPARγ被配体15d-PGJ2激活后抑制JEG-3滋养细胞浸润能力,为今后PPARγ配体在滋养细胞浸润异常有关的妊娠并发症治疗中可能的临床应用提供理论和实验基础.
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15-脱氧前列腺素J2对胃癌生长影响及机制的体内研究
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体gamma(PPARγ)的天然配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在体内对人胃癌细胞生长的作用以及对survivin、p27、Skp2和CD44表达的影响.方法 将人胃癌MGC803细胞,注射在12只裸鼠右上肢肩背部皮下.待长出肉眼可见的肿瘤时,将12只裸鼠随机分为实验组和对照组,每组6只.实验组静脉给予15d-PGJ2,对照组静脉给予PBS.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中survivin、Skp2、p27的mRNA及蛋白的表达.应用免疫组织化学法检测瘤组织CD44的表达,并对阳性细胞进行计数.结果 (1)给予15d-PGJ2 16次后,实验组裸鼠移植瘤平均体积(573.86±242.90)mm3明显小于对照组裸鼠移植瘤平均体积(1206.46±272.22) mm3(P＜ 0.05).(2)实验组与对照组相比,瘤组织survivin和Skp2的mRNA及蛋白质低表达而p27 mRNA及蛋白质高表达.(3) CD44阳性细胞率,实验组(51.20±12.45)％明显少于对照组(85.45±15.45)％(P＜0.05).结论 15d-PGJ2能抑制人胃癌细胞的生长,调节survivin、p27、Skp2和CD44的表达,提示15d-PGJ2有可能对治疗胃癌有效.
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15d-PGJ2对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤小胶质细胞活化及神经细胞凋亡的影响
目的 观察PPAR-γ激动剂15d-PGJ2对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑缺血再灌注损伤小胶质细胞活化及神经细胞凋亡的影响.方法 成年SD大鼠80只,随机分为4组:(1)假手术组;(2)正常血糖脑缺血组;(3)糖尿病脑缺血组;(4)糖尿病脑缺血+ 15d-PGJ2干预组.采用链脲佐菌素诱导糖尿病,应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型.糖尿病脑缺血组+15d-PGJ2干预组在成功制备糖尿病大鼠模型后给予15d-PGJ2 200μg·kg-1 ·d-1腹腔注射21 d后应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,再灌注后3h腹腔注射15d-PGJ2 400μg· kg-1,以后6d每天给予15d-PGJ2 200μg·kg-1·d-1腹腔注射.每组分别于24 h、7d各处死一批大鼠,并随机分为2组:一组行免疫组化法检测小胶质细胞CD68的表达水平及ELISA检测TNF-α与IL-1β水平,另一组用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞计数.结果 正常血糖脑缺血组、糖尿病脑缺血组、糖尿病脑缺血+ 15d-PGJ2干预组与假手术组比较,再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL1β水平、神经细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05);糖尿病脑缺血组在再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL-1β水平、神经细胞凋亡率明显高于正常血糖脑缺血组(P＜0.05);糖尿病脑缺血+ 15d-PGJ2干预组再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL-1β水平、神经细胞凋亡率低于未干预组(P＜0.05).结论 糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组相比较CD68阳性面积更大、TNF-α与IL-1β水平更高及神经细胞凋亡率更高;15d-PGJ2可减少糖尿病脑缺血大鼠小胶质细胞激活、减少炎症因子分泌、降低神经细胞凋亡率.
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15-脱氧-△~(12,14)-前列腺素J2对兔耳增生性瘢痕结缔组织生长因子及胶原表达的影响
核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)作为负调节信号,在组织和器官纤维化中发挥抗纤维化作用,但在增生性瘢痕中的作用尚不清楚.我们采用兔耳增生性瘢痕模犁,观察PPAR-γ的配体15-脱氧-△~(12,14)-前列腺素J2(15d-PGJ2)对增生性瘢痕结缔组织生长因子(CTGF)及胶原表达的影响,以期为进一步的临床治疗提供理论依据和实验基础.
