世界华人消化杂志
World Chinese Journal of Digestology 세계화인소화잡지
- 主管单位: 华人消化杂志;新消化病学杂志
- 主办单位: 山西省科学技术厅
- 影响因子: 0.00
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 14-1260/R
- 国内刊号: 李军亮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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柳州市中老年人脂肪肝538例分析
目的:了解柳州市中老年人中脂肪肝检出情况及其影响因素.方法:对柳州市3 682例中老年人进行肝脏B超检查,并测定其身高、体重、腰围及空腹血糖、血脂,然后统计分析.结果:脂肪肝的平均检出率为14.61%;女性检出率高于男性(17.14%ys 12.98%,P<0.01);超重、肥胖、腰围增大、高三酰甘油血症、低高密度脂蛋白血症、高血压的检出率,脂肪肝组均显著高于非脂肪肝组(P<0.01);多因素分析脂肪肝与女性、体质指数、腰围、空腹血糖、血清三酰甘油及总胆固醇显著正相关.结论:本组老年人中脂肪肝患病率较高,脂肪肝与超重或肥胖、脂代谢、糖代谢密切相关.
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胶囊内镜检查存在的问题及副作用的初步分析
目的:了解胶囊内镜在国人中运用时仪器故障及并发症的发生情况,评价胶囊内镜检查的安全性.方法:分析我科进行的112例次胶囊内镜检查的临床资料.结果:106例患者进行了112次胶囊内镜检查,因胶囊内镜未通过幽门而致检查失败3例,成功109次,成功率为97.3%.106例患者均耐受了检查.112例次检查共使用胶囊内镜114个,2个胶囊内镜发生故障,1个为发光二极管未工作,1个为电池失效,仪器故障率为1.75%.腹部贴电极处出现腹部皮损(红肿、水疱)2例;出现胶囊内镜排除障碍4例,诱发严重的急性肠梗阻急诊手术1例;心功能不全患者检查结束时出现了疲劳感1例.结论:胶囊内镜检查是安全的,但也存在着一些不稳定因素:仪器的稳定性有待于进一步提高;在小肠狭窄的受检者中存在胶囊排出障碍和诱发严重并发症的风险,因而每例受检者检查前均必须进行严格的评估,以降低胶囊内镜检查并发症的风险.
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幽门螺杆菌相关胃炎患者IL-8的表达研究
目的:探讨(Helicobacter pylori,H pylori)相关胃炎患者IL-8的表达及其作用.方法:用RIA法测定慢性胃炎患者Hpylori阳性(n=11)与Hplori阴性(n=10)外周血和胃窦黏膜培养上清液中IL-8含量.结果:H pylori阳性者外周血和原位胃窦黏膜的IL-8含量明显高于阴性者(P<0.01);血IL-8对H pylori阳性的诊断效率为66.7%,原位胃窦黏膜IL-8对H pylori阳性的诊断效率为81.0%.结论:血清和原位胃窦黏膜中的IL-8含量增高与H pylori感染者胃黏膜损伤有关.
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HBV感染的外周血单个核细胞在母婴传播中的载体作用
目的:探讨HBV感染的外周血单个核细胞(PBMC)在母婴传播中的载体作用.方法:选择血清HBV DNA(-)、PBMC HBV DNA(+)孕妇分娩新生儿25例作为实验组,乙肝标志物均为阴性孕妇分娩新生儿10例作为对照.采用巢式PCR检测2组新生儿血清及PBMC HBV DNA;ELISA检测血清HBsAg;SP法检测PBMC中HBsAg.结果:实验组血清HBsAg均阴性,HBV DNA(+)4例;PBMC HBsAg(+)6例,HBV DNA(+)6例,其中有2例血清和PBMCHBV DNA均为阳性,4例仅PBMCHBV DNA(+),2例仅血清HBV DNA(+).对照组血清及PBMCHBV DNA和HBsAg均阴性.结论:HBV感染的外周血单个核细胞可作为母婴传播的载体.
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胃癌腹膜转移临床病理分析76例
目的:探讨胃癌腹膜转移的临床病理特点,并评估手术治疗的效果.方法:我科1994-09/2003-09收治胃癌腹膜转移76例,对其临床病理资料和生存情况进行回顾性分析.结果:中下1/3胃癌和瘤体直径≥5 cm的胃癌易发生腹膜转移,分别占67.1%和82.9%;以低分化癌(低分化腺癌、印戒细胞、低分化黏液癌)多见,占81.6%.术中探查发现腹水31例(40.8%),浆膜侵犯75例(其中Se 26例,Si 49例),高达98.7%.行手术切除58例术后病理资料表明,发生腹膜转移者大多数属T3和T4期,共55例(94.8%).手术总切除率为76.3%.术中探查无腹水者手术切除率为86.6%(39/45),明显高于有腹水者60.6%(19/31,P<0.05).P1和P2的手术切除率显著高于P3(P<0.001).生存分析表明手术切除患者的生存时间明显长于未切除者(P<0.05).结论:胃癌腹膜转移与肿瘤部位、大小、分化程度、浸润深度和浆膜侵犯密切相关.P3和合并腹水者手术切除率明显降低.手术切除可以明显延长胃癌腹膜转移术后生存时间.
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先天性巨结肠Pax3和Cx43基因突变及表达
目的:探讨Pax3(pairedbox3)和Cx43(connexin43)基因在先天性巨结肠(Hirschsprungs disease,HD)中突变及表达的意义,分析HD与Pax3和Cx43基因异常的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和银染单链构像多态性(SSCP)方法检测Pax3和Cx43基因突变和mRNA表达情况.结果:正常人38例肠段对照组织中DNA未发现Cx43 SSCP异常泳动带,而仅有3例(7.9%)出现Pax3 PCR产物单链异常泳动带;HD38例肠管组织中17例(44.7%)出现Pax3PCR产物单链异常泳动带,11例(28.9%)出现Cx43 PCR产物单链异常泳动带.HD各段肠管组织中均有Pax3基因mRNA的表达,痉挛段、移行段和扩张段肠管组织中Pax3mRNA高表达,表达率分别为92.1%,86.8%和76.3%(mean±SD=1.63±0.37;1.42±0.41和1.25±0.17);而正常肠段组织中Pax3 mRNA无表达,有显著性差异(aP<0.05).Cx43基因mRNA在痉挛段、移行段肠管组织中低表达,表达率为23.7%和18.4%(mean±SD=0.62±0.11和0.51±0.07);而扩张段肠管组织中Cx43有较高表达,表达率为55.3%(mean±SD=1.37±0.19).38名正常人肠段对照组织中无1例Cx43 mRNA阳性表达.结论:HD组织中Pax3和Cx43基因突变及表达异常可能与HD的发生相关密切,Pax3和Cx43突变可能造成信息传递缺陷,扰乱了神经嵴细胞的迁移,从而导致HD的发生.
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SARS患者肝脾心肺组织中病毒的分离和鉴定
目的:从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离病毒并鉴定及评定中和抗体与SARS病程的关系.方法:取各组织100 g/L匀浆后的上清,接种非洲绿猴肾单层细胞,观察细胞病变;采用RT-PCR及序列分析等技术鉴定病毒并研究其生物学特性;将收集的SARS患者早期和恢复期血清做中和实验.结果:分别从SARS患者尸检肝、脾、心、肺等组织中分离到致细胞病变的病毒,用各组织的病变细胞提取的RNA为模板分别扩增出部分S区和N区的DNA片段,经DNA序列分析表明所有S区和N区的核苷酸序列均与GenBank上的SARS冠状病毒该区域的序列完全一致,中和实验显示所做10份SARS患者双份血清均有中和抗体效价的4倍升高,轻症患者中和抗体产生时间明显早于重症患者.结论:从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离到的均为SARS冠状病毒,证实SARS冠状病毒可直接侵害患者的肝、脾、心、肺脏器.所有SARS患者均可产生中和抗体,中和抗体产生时间与疾病进程有一定关系.
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原发性肝癌三期CT增强扫描
目的:本文探讨原发性肝癌三期CT扫描的检出率以及各期的增强特征.方法:原发性肝癌32例行35例次平扫和双期或三期增强扫描.肝动脉期扫描时间约为20-25 s,门静脉期约为40-50s,平衡期扫描延长至100s甚至5-10 min.以平扫、动脉期、门静脉期所检出的肿瘤为检出总数,把肝癌的增强分为7种方式,分析肿瘤增强特征.结果:本组共检出86个肿块和结节,肝动脉期检出72个(84%),门静脉期检查62个(79%),平衡期检出19个(49%).≤3.0 cm的结节动脉期检出42个(86%),门静脉期检出31个(70%),平衡期检出10个(33%),有6个结节(12%)仅动脉期检出而门静脉期未检出.>3.0 cm肿块动脉期、门静脉期检出率分别为100%,95%.≤3.0 cm结节动脉期59%呈均匀一致的高密度增强,13个表现为均匀或不均匀等密度,7个为低密度.门静脉期低密度肝癌结节28个(59%),均匀等密度结节13个,少数表现为不均匀等密度和高密度.平衡期呈等、低密度.>3.0 cm肿块动脉期16个(43%)表现为均匀或不均匀高密度,3个为不均匀等密度,6个为低密度,还有7例出现肿瘤血管,3例有假包膜,3例门静脉癌栓增强,3例门静脉瘘.门静脉期、平衡期主要表现为低密度,分别为81%,78%.结论:肝脏三期扫描特别是肝动脉期可以提高肝癌的检出率,显示肿瘤的血供特征以及门静脉累及,是肝癌和临床怀疑胆癌的重要检查技术.
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两种肝门整形胆道重建术治疗肝胆管结石的比较
目的:比较皮下通道型胆囊肝胆管成形术(STHG)与肝胆管空肠吻合术(CJ)治疗肝胆管结石的疗效.方法:1996-04/2001-03肝胆管结石患者163例分为2组,即随机分别接受上述两种术式治疗,然后进行随访观察.对比两组病例胆汁细菌培养阳性率、胆汁中胆汁酸浓度、肝内胆管气体阳性率及肝胆管结石复发率.结果:获得完整随访资料者133例,平均随访时间5 a.STHG组患者结石复发率5.3%,CJ组结石复发率16.9%(P<0.05).两组胆汁细菌培养阳性率分别是41.1%和58.4%(P<0.05);肝内胆管气体阳性率分别是7.1%及37.7%(P<0.01).胆汁酸浓度分别是57.6及21.3 mmol/l(P<0.01),差异均有显著意义.结论:对于无胆道手术史较早期肝胆管结石患者,STHG可能应为首选.
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肠系膜上动脉栓塞2例
目的:探讨提高肠系膜上动脉栓塞(superior mesenteric arteria embolism,SMAE)诊治水平的方法.方法:通过对本院近期2例术中发现广泛小肠、右半结肠呈紫黑色而不宜行肠切除的SAME患者的诊治体会,结合文献,对其病因、临床表现、诊断、治疗进行分析,重点探讨其治疗方法.结果:1例术后给予尿激酶溶栓、吉派林抗凝治疗2 wk,对比肠系膜上动脉造影发现治疗后肠系膜上动脉主干及主要分支再通,治愈出院,迄今随访近2mo,健康;另1例术后未给予溶栓、抗凝治疗者49 h后死亡.结论:对于SAME治疗,如果术中发现广泛肠管发绀而不宜行肠切除,术后积极溶栓、抗凝治疗可能起到奇迹般的治愈作用.
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血清肝纤维化指标酶联免疫试验和放射免疫检测的比较
目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)替代放射免疫分析(RIA)测定血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原和层粘蛋白含量的可行性.方法:分别用ELISA法和RIA法检测住院肝病患者87例的4项血清纤维化指标,并比较二者的敏感性、特异性、定量能力和临床实用性.结果:两种方法的检测结果均能反映患者从急性肝炎到肝硬化的肝纤维化逐渐加重的趋势.但与RIA法比较,ELISA法的敏感性较低,以检测Ⅲ型前胶原(76.5%)和层粘蛋白(65.1%)时更为明显,主要表现漏检早期患者.在特异性方面,ELISA法的特异性均在80%以上;在定量能力方面,ELISA法的数值范围较窄,数值偏小,低估严重患者的病情.结论:ELISA法敏感性较RIA法低,但特异性较好.
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应用改良的三腔二囊管防治昏迷患者食管反流
0引言昏迷患者尤其是高龄患者[1]出现食管反流临床上非常常见,由于昏迷患者食管反流将会带来严重后果,我们将用于食管胃底静脉破裂出血止血的三腔二囊管进行改良来防治昏迷患者食管反流9例,取得了满意的临床疗效如下.
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金双岐联合肯特令治疗小儿非细菌感染腹泻132例
目的:金双岐及肯特合联合治疗小儿非细菌感染腹泻的疗效.方法:小儿非细菌感染腹泻264例,采用微生态调节剂金双岐加黏膜屏障剂肯特令为治疗组,肯特令加纯中药制剂肠胃康颗粒为对照组.结果:治疗组132例,总有效率为87.9%;对照组132例,总有效率为86.4%.两组疗效无显著差异(P>0.05),但治疗组治愈例数100例(75.8%);多于对照组94例(71.2%).结论:采用微生态调节剂联合黏膜屏障剂是治疗小儿非细菌感染腹泻经济而有效的方法.
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重症急性胰腺炎并发神经精神障碍55例
目的:探讨重症急性胰腺炎患者并发神经精神障碍的病因.方法:回顾1990-06/2001-10收治的重症急性胰腺炎并发神经精神障碍患者55例,分析其病因及其临床特征.结果:重症急性胰腺炎并发神经精神障碍的发生率为13.8%,重症急性胰腺炎患者并发神经精神障碍的病因为:真菌感染中毒性脑病(45.6%)、细菌感染中毒性脑病(14.5%)、水、电解质紊乱(12.7%)、酶性脑病(7.3%)等.结论:重症急性胰腺炎并发神经精神障碍并非少见,急性胰腺炎并发神经精神障碍存在多种病因,真菌感染中毒性脑病是其主要原因.
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胶囊内镜检查诊断小肠疾病25例
目的:探讨胶囊内镜对诊断小肠疾病的临床意义.方法:分析25例有消化道症状者胶囊内镜检查的临床资料.结果:胶囊内镜检查(1)顺应性良好,无任何不适,未发生并发症,且在检查结束后,内镜均顺利排出体夕.(2)检出病变18例,其中小肠血管畸形3例,炎症性小肠炎7例,良性肿瘤4例,异物2例,恶性肿瘤2例,检出阳性率72%(P<0.05).(3)图片清晰,分辨率高.(4)病变定位与临床基本相符.结论:胶囊内镜检查安全,其大小犹如药物胶囊,无痛苦,能成功检出小肠病变,对明确出血部位及指导进一步治疗有重要价值.
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"胰岛代理细胞"的构建:在HepG2细胞中获得胰岛素分泌
目的:利用转基因技术将HepG2细胞改建为具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞".方法:以携葡萄糖激酶(glucokinase,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染肝母细胞瘤细胞系HepG2,G418选择培养基挑选抗性细胞集落,放免法、SDSPAGE、Western-blot及反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HepG2细胞中两个目的基因的转录及表达;选取联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.结果:在G418选择培养基中3 wk获阳性细胞克隆,采用放免法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,其中1株2个目的基因表达均较强,命名为细胞克隆"β";经RT-PCR检测证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录.在细胞"β"中,葡萄糖浓度为0.5 mmol/L和0.75 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);葡萄糖浓度为2.0 mmol/L,3.0 mmol/L,4.0 mmol/L,5.0 mmol/L,及6.0 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);其余葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌差异均有显著性意义(P<0.05).在单独表达胰岛素的HepG2细胞中,各葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌均无显著性差异(P>0.05).说明在细胞"β"中获得了葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75-2 mmol/L时出现胰岛素分泌高峰.结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.
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复方中药抗氧化剂对局部60Co照射荷瘤大鼠肝氧化损伤的保护作用
目的:研究荷瘤大鼠局部放疗引起的肝脏氧化损伤以及复合抗氧化剂的保护作用.方法:采用Walker-256肿瘤细胞株接种大鼠皮下,得到实体瘤,摘除实体瘤分割成小块植入大鼠的右后腿皮下,制成大鼠荷瘤模型,将荷瘤大鼠随机分成3组,分别为肿瘤模型组、单纯放疗组和抗氧化剂保护组,同时选取正常大鼠作为阴性对照组.抗氧化剂保护组每日给予复合抗氧化剂灌胃,分次对单纯放疗组和抗氧化剂保护组的荷瘤大鼠进行60Co γ射线局部照射4次,每次间隔1 wk,累计剂量为47Gy,后一次照射后7 d,处死大鼠,取血清和肝脏分别测定谷胱甘肽硫转移酶(GST)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、含锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化力(TAC)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性、NOS表达和总蛋白含量.结果:与阴性组相比,单纯放疗组GST活性和MDA含量显著升高(479±17 vs 427±59,50.3±1.0 vs46.8±2.3,33.7±8.8 vs 21.4±7.2,P<0.05,P<0.01,P<0.01),抗氧化剂保护组GST活性和MDA较单纯放疗组显著降低(421±36 vs 479±17,47.5±1.0 vs50.3±1.0,21.7±6.8 vs33.7±8.8,P<0.05,P<0.01,P<0.01).单纯放疗组T-SOD、Mn-SOD活性和GSH含量以及TAC显著低于非照射组(39.3±7.0 vs 48.8±2.8,18.7±6.2 vs 28.8±2.5,0.44±0.13vs0.57±0.06,20.7±5.3vs26.5±3.3,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05),而抗氧化剂保护组T-SOD、Mn-SOD活性和GSH含量以及TAC显著高于单纯放疗组(47.7±4.3vs39.3±7.0,28.2±7.7vs18.7±6.2,0.61±0.22 vs 0.44±0.13,26.3±1.7ys 20.7±5.3,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05).单纯放疗组NO含量和NOS活性显著高于对照组(1.22±0.08vs 0.98±0.15,4.92±0.94 vs 3.63±0.77,P<0.01,P<0.05),抗氧化剂保护组NO含量和NOS活性及表达显著低于单纯放疗组(0.77±0.22vs1.22±0.08,3.62±0.49vs 4.92±0.94,P<0.01,P<0.05).结论;:荷瘤动物局部照射可以引起放疗部位以外的肝脏的氧化损伤,而高效的复合抗氧化剂可以通过提高抗氧化酶活性以及降低NO含量、NOS活性及表达等起到有效的保护作用,这为临床放疗中大限度减少放疗副作用,根治肿瘤提供了一条新的研究思路.
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针刺足三里穴对大鼠冷应激性溃疡下丘脑NOS表达的影响
目的:本实验采用冷应激的方法,研究针刺足三里穴对急性胃溃疡的保护作用,以及应激大鼠下丘脑与应激有关的NOS的表达情况.方法:应用胃黏膜溃疡指数的计算和RT-PCR的方法研究针刺足三里对大鼠的冷应激性溃疡的保护和下丘脑-氧化氮合成酶(NOS)的表达情况,经图像分析系统照相并进行半定量.结果:针刺足三里穴可以明显减少冷应激造成的溃疡指数(正常对照组为0,单纯应激组为26.25±4.40,针刺预防溃疡组为9.75±1.91,针刺预防溃疡组与单纯应激组相比P<0.01).下丘脑NOS1不参与冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可以在生理范围内上调下丘脑的NOS1的表达过程(正常对照组为0.69±0.05,单纯应激组为0.77±0.09,针刺预防应激组为1.87±0.1 5,针刺预防应激组与正常对照组相比P<0.01);下丘脑NOS2参与了冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可以下调其表达(正常对照组为0.06±0.02,单纯应激组为0.24±0.05,针刺预防应激组为0.12±0.06,P<0.01),减少病理损害程度;NOS3也参与了冷应激溃疡这一病理过程,针刺可以下调其表达作用(正常对照组为0.30±0.08,单纯应激组为0.63±0.14,针刺预防应激组为0.45±0.14,针刺预防应激组与单纯应激组与正常对照组相比P<0.05,单纯应激组与正常对照组相比P<0.001).结论:针刺对冷应激溃疡具有保护作用,该种保护作用是通过对生理性上调NOS1的生理性表达,下调NOS2、NOS3的病理性表达而实现的.
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铝碳酸镁预防大鼠急性脑外伤后应激性溃疡的作用
目的:研究胆汁反流在大鼠急性脑外伤后应激性溃疡中的作用,探讨铝碳酸镁(达喜)对应激性溃疡的预防作用.方法:采用改良的Allen法建立大鼠颅脑外伤并发应激性溃疡模型,将质量220-280 g♂Wistar大鼠128只随机分为4组,各组32只,即:Ⅰ组应激组,Ⅱ组假手术组,Ⅲ组达喜预防组及Ⅳ组生理盐水对照组,每组按颅脑外伤后1,3,6,24 h时间点再分为4小组(每组8只).Ⅲ、Ⅳ两组动物手术前每日给予达喜500 mg/kg或生理盐水1.5 mL灌服3 d.测定各组大鼠胃液及血清中总胆汁酸含量、胃液pH值、胃黏膜溃疡指数,并观察胃黏膜大体及光镜下组织病理学改变.结果:Ⅰ组各时点胃液总胆汁酸浓度明显高于Ⅱ组(P<0.05,P<0.01),胃黏膜损伤严重(P<0.05),二者呈线性相关(r=0.55,P<0.01),而血清总胆汁酸浓度及胃液pH值两组之间无明显差异,组织学有相应改变.Ⅲ组各时点胃液总胆汁酸浓度明显低于Ⅳ组(P<0.01),胃液pH值1,3,6 h高于Ⅳ组(P<0.01),溃疡指数6,24 h小于Ⅳ组(P<0.01),胃液总胆汁酸浓度及pH值与溃疡指数均呈线性相关(r=0.43,r=0.52,P<0.01);组织学也观察到黏膜损伤明显减轻.结论:胆汁反流参与颅脑外伤应激性溃疡的发病;胆汁反流程度与胃黏膜损伤程度正相关;新型结合胆酸药物达喜预防应激性溃疡有良好作用.
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大鼠应激性溃疡胃黏膜nNOS/iNOS表达对细胞凋亡的影响
目的:探讨细胞间信息传递因子NO在胃黏膜遭受应激损伤时的变化及与细胞凋亡发生的关系.方法:原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠水浸-束缚应激(WRS)结束前后不同时间点细胞凋亡的发生;免疫组化的方法检测胃黏膜组织nNOS/iNOS蛋白表达的变化;检测不同剂量的NO合成抑制剂L-NAME对细胞凋亡的影响.结果:iNOS蛋白表达与细胞凋亡的变化呈显著正相关;nNOS蛋白表达与细胞凋亡变化呈负相关;与对照组比较,小剂量L-NAME(2.0 mg/kg)可降低凋亡细胞发生率34.6%(P<0.01);大剂量L-NAME(20.0 mg/kg)明显增加凋亡细胞发生率25.8%(P<0.05).结论:正常生理状态下及应激初期,胃黏膜以nNOS表达为主.若应激源持续存在,nNOS表达受抑制,iNOS表达增强,诱导合成大量NO,有明显细胞毒作用,促进细胞凋亡发生.
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TGF-β1和smad4mRNA在慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁组织的表达及意义
目的:转化生长因子TGF-β1信号转导通路具有重要的细胞调节功能,包括细胞的生长、分化、黏附、转移、细胞外基质的形成及免疫调节等.通过检测慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁病理组织TGF-β1和smad4mRNA的表达,探讨TGF-β/smad通路在肝纤维化形成、发展中的关系及作用机制.方法:应用免疫组化和原位杂交方法,对照肝组织10例,肝癌癌旁肝组织17例,慢性病毒性肝炎肝硬化肝穿组织70例的TGF-β1蛋白和smad4mRNA表达进行检测.结果:TGF-β1和smad4mRNA在慢性病毒性肝炎中度及肝硬化组织中的表达明显增强,阳性率分别为83.3%,87.0%和87.5%,87.0%,明显高于对照组(20.0%,20.0%),差异均有显著性(b3P<0.01,X2=12.3 980;t4P<0.01,X2=14.0 609;和b1p<0.01,X2=14.6 953;b2P<0.01,X2=14.0 609);而癌旁肝组织二者的表达均低下,与对照组无明显差异;随着肝纤维化的发展TGF-β1和smad4mRNA的表达呈逐渐增强趋势,S3期达高峰,S4期有所回落;二者表达呈正相关(X2=4.5 064,P=0.0 336,r=0.2 668);肝组织病理可见TGF-β1和smad4mRNA的阳性细胞在肝组织切片上的分布基本一致,大多集中于汇管区、肝窦及纤维条索周边.结论:TGF-β/smsd信号传导通路在肝纤维化的形成和发展中具有重要的促进作用,TGF-β1和smad4mRNA的组织定位检测能准确的评价肝纤维化形成状况及发展趋势.
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大鼠应激性溃疡幽门区降钙素基因相关肽及一氧化氮变化对胃内胆汁反流的影响
目的:探讨大鼠应激性溃疡时幽门区局部降钙素基因相关肽(CGRP)和一氧化氮(NO)变化对胃内胆汁反流的影响.方法:采用冷束缚应激方法复制应激性溃疡的模型,将65只大鼠分为3组,对照组10只,实验组30只,干预组25只.分别检测其胃内胆汁酸的浓度,胃黏膜的溃疡指数(用Guth评分)以及pH值.用放免试剂盒检测幽门区降钙素基因相关肽含量,用生化试剂盒检测幽门区一氧化氮的含量.结果:应激后1 h幽门区一氧化氮含量达到峰值,应激后2 h胃内胆汁酸和pH值均达到峰值,应激后4h胃内溃疡指数达到峰值.而幽门区降钙素基因相关肽也在应激后4 h降到波谷.而左旋精氨酸甲酯即L-NAME干预组的胃内胆汁酸浓度以及溃疡指数较生理盐水对照组显著降低.CGRP拮抗剂干预组胃内胆汁酸浓度较干预对照组降低,但其降低程度要弱于L-NAME干预组.而溃疡指数却没有明显变化.结论:幽门区NO含量变化与胆汁酸的反流量相关.而L-NAME干预,使幽门区含量减少,幽门松弛程度降低,胆汁酸反流量也随之减少.而幽门区CGRP含量与溃疡指数存在一定负相关.
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人类抗凋亡基因survivin的克隆及其原核表达
目的:克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV),实现SVV基因在大肠杆菌中的高效表达.方法:提取胃癌细胞系SGC-7901总RNA,RT-PCR扩增人SVV全长cDNA,克隆于载体pGEM-T,酶切、测序鉴定.将人类SVV基因全长cDNA克隆入原核表达载体pRSET,实现该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.结果:得到人SVV基因全长cDNA,经测序与SVV基因的已知序列相同,原核表达所获融合蛋白经SDS-PAGE电泳与已知SVV基因的蛋白质表达产物大小相近.结论:克隆出人SVV基因的全长cDNA,并克隆入原核表达载体pRSET,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达.
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结肠慢传输运动小鼠Cajal间质细胞的改变
目的:建立结肠慢传输运动实验动物模型,探讨结肠组织Cajal间质细胞与结肠慢传输运动病理生理学变化的关系.方法:实验组小鼠皮下注射吗啡,按吗啡给药时间分为:实验组Ⅰ(吗啡每日2.5 mg/kg×30 d,n=15)、实验组Ⅱ(吗啡每日2.5 mg/kg×45 d,n=15);设立相应的2个对照组(n=15×2)小鼠皮下注射等量生理盐水.日平均粪便重量及活性碳悬液推进试验比较实验组与对照组小鼠肠道传输功能;免疫组化标记结肠组织Cajal间质细胞,计算机图像分析系统分析各组小鼠结肠组织中Cajal细胞数量变化.结果:日平均粪便重量:实验组Ⅰ为18.8±3.2 g,对照组Ⅰ为20.6±1.8 g,有显著差异(P<0.05);实验组Ⅱ为16.8±2.0 g,对照组Ⅱ为22.0±3.2 g,有显著差异(P<0.01);两实验组相比有显著差异(P>0.05),两对照组无显著差异(P>0.05).肠道推进率:实验组Ⅰ为45.3±1.5%,对照组Ⅰ为49.2±1.8%,有显著差异(P<0.05);实验组Ⅱ为40.6±1.3%,对照组Ⅱ为50.6±3.0%,有显著差异(P<0.01);两实验组比较有显著差异(P<0.05),两对照组无显著差异(P>0.05).结肠c-kit+细胞面积:实验组Ⅰ为81.3±7.9万μm2,对照组Ⅰ为98.6±8.0万μm2,有显著差异(P<0.01),实验组Ⅱ为66.5±8.4万μm2,对照组Ⅱ为100.9±10.0万μm2,有显著差异(P<0.01),两实验组比较有显著差异(P<0.01),两对照组无显著差异(P>0.05).结论:吗啡诱导的小鼠结肠慢传输运动模型日平均粪便量、肠道推进率、结肠Cajal细胞数量较对照组均明显减少,且减少的幅度与吗啡给药时间呈正相关.
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肝纤维化发生发展过程中肝温度的变化规律
目的:研究肝纤维化发生、发展过程中肝温度变化的规律.方法:采用医用红外热像技术检测造模2,4,6,8wkCCl4肝纤维化大鼠模型及对照组大鼠肝脏温度,肝组织芯片行苏木素-伊红、天狼猩红及免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化,Ⅰ,Ⅲ型胶原及层粘蛋白的表达.结果:正常大鼠肝右叶2,4,6,8 wk平均温度为28.1±1.0℃,27.2±0.8℃,30.7±1.0℃,29.1±0.7℃.肝纤维化大鼠模型组2 wk肝平均温度较对照组明显升高(P<0.05,t=-2.518);模型组4 wk与对照组肝无明显差异,模型组6,8 wk肝平均温度较对照组明显降低(P<0.05 t=3.773,P<0.01 t=4.998);模型组2 wk病理变化以炎症及肝细胞变性为主,模型组4 wk间质成分增生明显,纤维化逐渐形成,模型组6 wk肝细胞大量坏死,中央静脉及汇管区纤维隔形成,模型组8 wk肝组织形成完整的假小叶;模型组2,4,6,8 wk大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原及层粘蛋白表达逐渐增多,2,4 wk以Ⅲ型胶原增加为主,4,8 wk以Ⅰ型胶原增加为主.结论:肝纤维化发生、发展的不同阶段,肝温度呈规律性变化.
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不同来源的人肠上皮细胞内毒素相关受体的表达
目的:研究人肠上皮细胞内毒素相关受体的表达规律,探讨其耐受内毒素的分子机制,为炎症性肠病(IBD)发病机制的阐明拓宽新的视野和思路.方法:用核糖核酸酶保护法(RPA)检测原代培养人正常肠上皮细胞(HNIEC)和人小肠上皮细胞株(HIC)内毒素相关受体CD14,Toll样受体4(TLR4)和MD-2 mRNA的表达;用免疫组化法检测人正常小肠黏膜上皮细胞和结肠黏膜上皮细胞CD14,TLR4和MD-2蛋白的表达.以表达TLR4,CD14和MD-2的人单核细胞系THP1细胞作为阳性对照.结果:HNIEC CD14、TLR4、MD-2mRNA均呈低表达,HIC CD14,TLR4,MD-2 mRNA均无表达.小肠黏膜上皮细胞和结肠黏膜上皮细胞3种内毒素受体CD14,TLR4,MD-2蛋白均无表达.结论:肠上皮细胞表面CD14、TLR4和MD-2呈低表达或不表达可能是其耐受内毒素作用的重要分子机制之一.
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依那普利对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用
目的:探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)依那普利(Ena)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠实验性肝纤维化的预防和治疗作用.方法:以CCl4诱导形成大鼠肝实质损伤性肝纤维化模型.大鼠分为对照组、模型组、预防组及治疗组.除对照组外,其余各组大鼠均sc400mL/LCCl4橄榄油混合液,每3/d次,共10 wk.预防组同时给予Ena灌胃.治疗组则在造模第5 wk给予Ena灌胃.实验结束后称量肝脾并收取肝组织.通过HE及Masson三色染色对肝组织炎症及纤维化程度进行评价,通过透射电镜观察肝细胞超微结构.结果:用药后,与对照组相比,模型组、Ena预防及治疗组体质量均显著下降(P<0.01).与模型组相比,Ena预防及治疗组大鼠肝脾指数均显著降低(P<0.01),Ena高剂量预防及高剂量治疗组均显著改善肝组织炎症和纤维化程度(P<0.01).通过电镜观察肝细胞,Ena高剂量预防及高剂量治疗组肝细胞损害较模型组明显减轻.结论:依那普利对CCl4诱导的大鼠实验性肝纤维化有良好的预防和治疗作用.
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孤啡肽与胃肠动力
随着分子生物学技术的不断发展,1990年代初,各类阿片受体的基因相继克隆成功,随后又发现了孤啡肽.深入的研究表明,孤啡肽除参与痛觉调制外,还广泛参与阿片耐受与成瘾机制、离子转运、进食、感知、内分泌和免疫功能的调节.并且参与到胃肠的植物性神经功能调节中.有人认为,孤啡肽是一种新的胃肠功能的神经调节剂.
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一氧化氮与坏死性小肠结肠炎
一氧化氮(NO)是具有多重效应的自由基信使分子,在炎症、免疫反应及细胞凋亡等方面起重要作用.现对一氧化氮在坏死性小肠结肠炎发病中的作用机制做一综述,为临床更好地防治坏死性小肠结肠炎,改善预后提供借鉴.
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肝性脑病患者肠道微生态改变及微生态治疗
近年来发现慢性肝病患者存在不同程度的肠道微生态系统紊乱(菌群比例失调和肠道细菌易位),与肠源性毒物升高和肝性脑病(HE)的发生、发展密切相关,旨在调节肠道菌群的微生态疗法已成为HE的重要策略.研究证实,微生态疗法安全有效,毒副反应少,后续效应强,患者依从性好,至少与HE传统经典药物乳果糖等效,乳酸菌和双岐杆菌等单菌制剂或多联微生态制剂有望成为乳果糖的理想替代物,特别用于乳果糖不耐受或无效的HE患者.
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CK20诊断大肠癌微转移的价值
微转移是一项独立的预后指标,其价值优于Dukes分期和肿瘤分级.目前用于检测的方法多使用RT-PCR方法,但此技术在临床应用中遇到很多棘手的难题.细胞角蛋白20(CK20)是新发现的一种多肽,局限在胃肠上皮细胞,具有严格的组织特异性,且几乎所有大肠癌都明显表达,优于其他标志物.1995年研制成功的荧光定量PCR技术,融会了PCR高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量等优点,同时他采用完全封闭式的操作系统,克服了传统的PCR技术易受污染,造成假阳性的缺点;定量范围宽,无需样品梯度稀释;操作快速,无需PCR后处理;技术操作简便、重复性能好、高灵敏性,高特异性,高精确性;安全,对操作人员和环境都无危害.通过荧光定量PCR技术检测CK20mRNA指示大肠癌微转移状况,提供治疗依据,目前在国外文献中罕有报道,国内尚未有报道,具有广泛的研究空间及研究价值.
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Bcl-2基因的研究进展
Bcl-2作为一种重要的凋亡调控基因,他不仅能够抑制细胞凋亡,延长细胞寿命,而且参与细胞增生的调控,他可以调控细胞由G0期向S期转换的时间,其过表达可以延长静止细胞的细胞周期进程,但不影响细胞的生长.据研究显示,Bcl-2的磷酸化亦能影响细胞周期进程,此外,Bcl-2在肿瘤的形成及肿瘤多药耐药的形成中也起着重要的作用.因此通过对Bcl-2基因不断深入的研究,可为肿瘤治疗提供新的思路和启示.
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基质金属蛋白酶和消化道肿瘤的相关性
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是一种依赖金属锌离子并以细胞外基质(extraceller matrix,ECM)成分为水解底物的蛋白水解酶,主要由肿瘤细胞和肿瘤细胞周边间质细胞产生,几乎能降解细胞外基质的所有成分,通过对细胞外基质的改造而促进肿瘤新生血管的生成,从而实现肿瘤的侵袭和转移.近年来大量研究发现:不同类型基质金属蛋白酶在人类的各种消化道肿瘤中都有表达,其表达量与肿瘤的进展程度,浸润与转移以及预后都密切相关.提示人们可以通过阻断基质金属蛋白酶的作用来抑制消化道肿瘤的侵袭和转移,从而达到控制和治疗肿瘤的目的,为将来的抗癌治疗提供新的目标与方向.
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培养猪肝细胞型生物人工肝的研究进展
生物人工肝研究的主要细胞材料是人肝细胞、肝肿瘤细胞株和猪肝细胞,但由于人肝细胞来源匮乏以及肿瘤细胞株潜在的不安全性,培养猪肝细胞型生物人工肝已经逐步成为人工肝研究和临床应用的主要对象.文章主要介绍了培养猪肝细胞型生物人工肝的动物实验、临床应用以及其生物安全性,同时探讨了该型生物人工肝存在的问题和应用前景.
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食管黏膜上皮异型增生的研究进展
食管黏膜上皮异型增生是食管癌直接的癌前病变,现从食管上皮异型增生的概念、分类、临床意义、分子生物学标志检测及其临床价值,以及其治疗和预防等方面的进展加以阐述,期望对食管癌癌前病变的发生机制及预防提供理论依据.
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胃肠富集Kruppel样因子的研究进展
胃肠富集Kruppel样因子(GKLF)是一种新发现的真核锌指蛋白转录因子.他通过调节其下游目标基因的转录表达而在细胞周期调控、细胞的增生分化中担任重要的角色,他可能与肿瘤发生、发展有着密切的联系.现就GKLF的结构、调节、功能及其与肿瘤的关系等方面的研究进展做一综述.
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肠道巨噬细胞的调控与炎症性肠病
炎症性肠病(IBD)是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病.在活动性IBD中,巨噬细胞作为一种重要的内在免疫调节者在刺激后续的适应性免疫中起着关键性的作用.研究发现活动性UC和CD患者的大肠炎症中巨噬细胞的数量明显增加,且肠黏膜巨噬细胞亚群的表型与正常黏膜的不同.肠道巨噬细胞可通过经典途径和选择途径被激活.LPS、TNF-α等可通过细胞表面的Toll样受体(TLR)和细胞质间的受体Nod2而激活NF-κB信号途径.过氧化物酶增生激活受体(PPARγ)在巨噬细胞的发展和功能上的作用也受到关注.巨噬细胞激活后产生的多种生物活性物质,如IL-1、IL-6、TNF-α等均具有重要的免疫调节功能.
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中药胃肠舒联合铝碳酸镁治疗胆汁反流性胃炎30例
目的:观察胃肠舒联合铝碳酸镁治疗胆汁反流性胃炎的效果.方法:符合诊断标准的胆汁反流性胃炎患者60例分为2组.一组口服胃肠舒,每日1剂;另一组口服贝络纳5 mg,3次/d;两组均同时服用铝碳酸镁1 g,3次/d,疗程为4 wk.于治疗前后进行临床症状疗效、胃镜下胆汁反流程度分级和胃黏膜病理积分评价.结果:应用胃肠舒和贝络纳治疗胆汁反流性胃炎患者,均能明显改善患者的临床症状,胃肠舒组显效率为43.3%,总有效率为86.7%;贝络纳组显效率为33.3%,总有效率为83.3%.胃镜下,两组均可明显改善患者的胃黏膜炎症,与治疗前比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01).胃肠舒组在改善患者的上腹痛、烧心、饱胀、恶心或呕吐等临床症状及胃黏膜炎症方面的疗效与贝络纳组的疗效相近.结论:胃肠舒联合铝碳酸镁是治疗胆汁反流性胃炎的有效药物.
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前S2抗原基因对乙型肝炎DNA疫苗免疫应答的影响
目的:探讨前S2抗原基因对乙型肝炎DNA疫苗免疫应答的影响.方法:采用常规PCR法从adr亚型全基因DNA序列中分别扩增HBV S和前S2+S基因片段,重组到VR1012载体中,转染COS-7细胞并免疫BALB/C小鼠.采用蛋白印迹、ELISA,ELISPOT等方法检测其在COS-7细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫.结果:转染的COS-7细胞表达相应的目的蛋白,且前S2+S转染的细胞表达明显高于S转染的细胞的表达;免疫接种小鼠后2 wk产生HBSAb及HBsAg特异性CTL,前S2+S抗原免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL均强于S抗原免疫.结论:前S2抗原基因可增强乙型肝炎DNA疫苗刺激的免疫应答.
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诱导型一氧化氮合酶基因启动子-969G→C多态性的功能
目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子-969G→C多态性的功能意义.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增已知的iNOS基因启动子-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子DNA序列,再采用基因重组技术将获得的启动子与PGVB-2-E荧光素酶载体质粒连接,构建新的重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,并进行酶切图谱分析和测序分析.然后将重组质粒分别在脂质体的介导下转染HepG2细胞,检测荧光素酶的表达水平,分析不同基因型启动子的活性差异.结果:成功构建iNOS基因-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子荧光素酶载体重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,发现iNOSmt启动子的活性比对照启动子的活性显著升高,升高132.1%,差异有显著性(P<0.05),iNOSwt启动子的活性比对照启动子的活性升高14.3%,差异无显著性(P>0.05).iNOSmt启动子活性升高的百分率是iNOSwt启动子的9倍.结论:iNOS基因启动子-969G→C的多态性改变导致该启动子的活性增强.
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肠内营养对胃癌术后近期的免疫和营养状况的影响
目的:比较早期肠内与肠外营养对胃癌术后免疫和营养状况的影响.方法:胃癌72例分为肠内营养(EN)组26例,肠外营养(PN)组26例及对照组(常规补液)组20例.术后24 h开始肠内或肠外营养,检测术前和术后9 d营养和免疫指标,并观察术后严重并发症及肠功能的恢复.结果:EN和PN组术后BW,PA,Alb,IgG,IgM及IgA均显著高于对照组(t=2.14-9.33,P=0.000-0.038,<0.05),而EN组与PN组间差异无显著性;EN和PN组术后CD3+,CD4+,CD4+/CD8+均显著高于对照组(t=3.07-8.60,P=0.000-0.004<0.01),且EN组术后CD4+,CD4+/CD8+亦显著高于PN组(t=2.04-2.58,P=0.013-0.046<0.05);EN组胃肠功能恢复时间明显短于PN组和对照组(t=13.03-13.30,P=0.000<0.001).结论:早期肠内营养可明显改善胃癌术后近期的营养和免疫状况,在术后细胞免疫和肠功能恢复方面明显优于肠外营养.
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结直肠癌组织中转化生长因子β表达的意义
目的:探讨结直肠癌组织中转化生长因子(Transforming growth factor,TGF)-β1,2和3的表达及其与临床生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学技术SP法检测67例结直肠癌组织和10例正常黏膜中TGF-β1,2和3的表达.结果:TGF-β1和TGF-β2在结直肠癌组织中的表达明显高于正常黏膜(P<0.05);结直肠癌中TGF-β1的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期呈正相关(P<0.05),TGFβ-2仅与肿瘤的Dukes分期有关(P<0.05),而与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移无关(P>0.05),TGF-β3与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期无相关性(P>0.05).结论:TGF-β1和TGF-β2可能在结直肠癌的发生中起着重要作用,可反映为结直肠癌的临床生物学行为.
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三叶因子1在胃黏膜中的表达及存在的分子形式
目的:研究三叶因子1在人胃黏膜中的表达及存在的分子形式,探讨其胃黏膜保护作用的分子生物学机制.方法:采用western-b1ot方法观察三叶因子1在人胃黏膜中的存在形式,并采用免疫组化方法了解三叶因子1在胃黏膜中的定位,比较其在胃溃疡周边及距周边5 cm外胃黏膜中的表达改变.结果:(1)三叶因子1在人胃黏膜中以三种形式存在:单聚体、二聚体及一种分子量约为21 kDa的TFF1与某种分子结合而成的复合物,其中,TFF1复合物的含量高.(2)三叶因子1主要在人胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞胞质中表达,核周聚集较明显,越靠近腔面的细胞表达越强.(3)三叶因子1在胃溃疡周边黏膜的表达明显高于距溃疡周边5 cm外的黏膜(P<0.001).结论:三叶因子1主要在人胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞胞质中表达,其与某种分子结合形成的复合物是TFF1在胃黏膜中存在的主要形式,这种TFF1复合物可能比TFF1单聚体及二聚体有更强的生物活性.TFF1在胃溃疡周边黏膜表达高于距溃疡周边5 cm外的黏膜,说明其在胃黏膜保护及修护方面具有重要的作用.
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食管癌前病变和癌组织P53和Rb蛋白表达与年龄的关系
目的:探讨河南省食管癌高发区青年(≤40岁)与中老年(≥50岁)食管癌患者的P53和Rb蛋白表达变化特征及其意义.方法:采用免疫组化卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法和组织病理学方法,分析72例青年和73例中老年患者食管鳞癌组织中P53和Rb蛋白的表达及其与病变程度和年龄之间的关系.结果:青年组和中老年组患者从正常食管上皮→基底细胞过度增生→间变→鳞状细胞癌演变过程中,随着病变程度的加重,P53和Rb蛋白阳性表达率呈上升趋势,青年组P53免疫阳性反应的百分率在正常上皮和各级病变组织中均低于中老年组(13%ys 47%,X2=19.162,21%ys 60%,X2=19.380,43%ys 93%,X2=16.512,36%vs 85%,X2=36.213,以上P值均<0.01),青年组Rb蛋白阳性表达率在正常上皮和各级病变组织中也均低于中老年组,但二者无统计学差异(P>0.05).青年组P53和Rb表达共阳性率为25%,共阴性率为49%,二者表达具有明显的一致性(Kappa值=0.442,P<0.01).结论:P53和Rb可能共同参与青年患者食管上皮的癌变过程,并在食管癌发生中发挥相互协同的作用;该地区不同年龄组食管癌变过程中P53蛋白表达变化差异可能与其接触环境致癌原时间长短有关.
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供体不成熟树突状细胞联合环孢素A调节肝移植免疫排斥
目的:探讨应用体外培养的不成熟树突状细胞调节肝脏移植免疫反应的方法及机制.方法:建立大鼠同种异体原位肝移植模型,LWE大鼠和SD大鼠随机分为3组:(1)对照组:术后不予免疫抑制剂;(2)CsA组:术后2 d起隔日腹腔内按10mg/Kg注射CsA,共:3次:(3)CsA+DC组:除术后按CsA组腹腔注射CsA外,8 d阴茎背静脉注射106个供体骨髓体外培养的DCim.术后观察各组的生存时限及5,10,15,25 d分别取标本行肝脏免疫病理、肝功能及腹腔淋巴结中IL-2 mRNA,IL-4mRNA含量的检测.结果:CsA+DC组的平均生存时限为27.0 d,较对照组及CsA组显著延长(P<0.05):CsA+DC组受体腹腔淋巴结中的IL-2 mRNA含量较对照组及CsA组低(P<0.05),而IL-4mRNA含量则较前两组升高(P<0.05).结论:联合应用CsA和体外培养的供体特异不成熟树突状细胞可降低大鼠同种异体肝移植术后免疫排斥反应;通过调节受体内Th1/Th2淋巴细胞比例是其降低大鼠肝移植术后免疫排斥反应的机制之一.
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时间剂量因子评价内照射治疗肝癌皮下瘤的局部剂量
目的:估算131Ⅰ-碘化油β-内照射治疗肝癌的局部剂量,并比较内照射剂量大小.方法:SPECT断层重建连续扫描监测10只SD大鼠的SMMC-7721肝癌皮下瘤模型接受131Ⅰ-碘化油局部注射的内照射剂量,以时间剂量因子把内照射剂量换算成相当于常规外照射的次数.结果:10只肝癌皮下瘤模型131Ⅰ-碘化油局部注射在4个有效半减期内照射剂量在761-3891Gy间,其TDF值在3667-18754间.相互间的数学关系有的变大,有的变小.结论:SPECT断层重建连续扫描可以监测131Ⅰ-碘化油内照射剂量,时间剂量因子有助于比较和确定内照射剂量.
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燃煤型砷中毒患者血清细胞因子改变及意义
目的:明确燃煤型砷中毒患者血清细胞因子的改变及意义方法:取128例燃煤型砷中毒患者,分为对照组、轻度中毒组、中度中毒组、重度中毒组四组,检测各血清中血小板活化因子(PAF)、肿瘤坏死因子(TNF)、内皮素(ET)细胞因子及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)结果:砷中毒患者血中PAF(分别为1.53±0.42 μg/L,3.94±0.78μg/L,5.73±0.96μg/L,6.92±1.43 μg/L)、TNF(分别为0.68±0.18 pmol/L,1.87±0.51 pmol/L,3.74±0.95 pmol/L,5.89±1.23 pmol/L)、ET(分别为145.7±26.9 ng/L,165.7±28.2 ng/L,178.4±36.7 ng/L,195.1±40.6 ng/L)显著升高(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显升高(P<0.05或0.01).砷中毒患者MDA(分别为63±11 μkat/L,98±21μkat/L,111±21μkat/L,141±48μkat/L)显著升高(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显升高(P<0.01),GSH-Px(分别为47.9±4.9μkat/L,25.8±4.6μkat/L,24.0±3.9μkat/L,20.6±4.2 μkat/L)和SOD(分别为2 504±652μkat/L,2 025±565 μkat/L,1 984±478μkat/L,1787±427μkat/L)显著降低(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显降低(P<0.05或0.01).结论:砷中毒肝损害除了已明确砷-巯基反应外,还有细胞因子参与肝损害及氧化和抗氧化系统平衡紊乱.
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TNBS诱发大鼠结肠炎中三叶因子3的表达
目的:研究三叶因子3(trefoilfactor 3,TFF3)基因在三硝基苯磺酸(TNBS)诱发的大鼠结肠炎肠黏膜表达的变化,探讨其在结肠炎发生发展中的作用.方法:采用TNBS/乙醇灌肠制作大鼠结肠炎模型(n=15),观察大鼠腹泻、便血情况,评价疾病活动性指数(DAI)并记录体重改变,分别于制模后1,7及14 d处死大鼠.生理盐水灌肠作为正常对照组.大体及镜下观察肠黏膜损伤及组织学变化,并进行评分.生化法检测MPO活性.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TFF3基因表达.结果:结肠炎组1,7及14 d时间点DAI(3.8±0.5 ys 0,3.3±0.5 vs 0,2.3±0.5 vs 0)、体质量(-3.2±0.7 vs 4.7±2.2,-7.2±2.0 ys 10.9±0.2,2.9±0.4 vs30.5±2.9)、大体评分(7.2±0.9 vs 0,6.2±1.3 vs0,4.6±0.5 vs 0)和组织学评分(8.2±1.2 vs 0,10.4±0.5vs0,8.4±0.5 vs0)以及MPO活性(1 745±55 vs 303±21,1 789±77 vs315±20,1 736±127vs313±35)较正常对照组均存在显著差异(P<0.05).TFF3在结肠组织炎症的各个时间点均有表达,致炎后1 d组较正常对照组减少,7和14 d组明显升高(0.63±0.05vs0.72±0.02,0.94±0.19 vs0.72±0.02,1.25±0.74 vs0.72±0.02,P<0.05).结论:TNBS诱发的大鼠结肠炎有TFF3基因的表达,提示TFF3在结肠炎黏膜损伤修复中发挥作用.
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直肠癌旁移行黏膜中Survivin基因表达的意义
目的:探讨凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况,为保肛手术的选择提供理论依据.方法:应用黏液组化方法确定各种组织类型直肠癌旁移行黏膜的分布规律,应用免疫组织化学方法检测凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况.结果:直肠癌旁移行黏膜范围,在黏液癌(平均7.83 cm)明显大于乳头状癌及管状腺癌(P<0.01),在Dukes C期(平均5.61 cm)明显大于DukesA、B期(P<0.05).正常黏膜(NM)、移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达,由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加,四组间差别有显著意义(P<0.05).结论:在移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中就存在survivin基因表达上调:在黏液癌及Dukes C期直肠癌旁移行黏膜范围明显增宽,提示对低位黏液癌及Dukes C期直肠癌保肛手术应慎重.
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人大肠癌组织肝细胞生长因子及其受体c-met的表达
目的:评价人大肠癌组织肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-met的mRNA表达水平.方法:应用RT-PCR法检测人大肠癌组织中肝细胞生长因子及其受体c-met mRNA表达水平,以正常大肠组织为对照.结果:大肠癌组织中肝细胞生长因子及其受体c-met mRNA过度表达(其中HGFmRNA表达1.063±0.179,c-metmRNA表达1.128±0.173,对照组表达0.576±0.052),c-met表达与大肠癌分化程度(P<0.05)、有无淋巴结转移(P<0.05)有关.结论:肝细胞生长因子及其受体c-met mRNA表达与大肠癌有关,高表达c-met组分化程度差,淋巴结转移多,更具浸润、转移潜能.
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三叶因子1在胃癌及癌前病变胃黏膜中的表达改变
目的:测定三叶因子l在正常、胃癌、不典型增生及肠化胃黏膜中的表达情况,探讨TFFl在胃癌的发生、发展中的作用及意义.方法:应用免疫组化方法测定各种条件下胃黏膜中TFF1的表达情况,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况.结果:胃腺癌患者癌旁组织表达(0.5l±0.07)明显高于正常胃黏膜(0.44±0.06,P<0.001),而腺癌组织的表达强度则与癌组织的分化程度呈正比,分化程度愈低,表达愈弱,低分化腺癌无阳性表达,中、高分化腺癌表达(0.4l±0.07)略低于正常黏膜(P>0.05);不典型增生胃黏膜TFF1表达(0.57±0.03)明显高于正常胃黏膜(P<0.001);肠化胃黏膜无TFFl阳性表达,但肠上皮化生周围的胃黏膜TFF1表达(0.45±0.07)与正常胃黏膜相比无统计学差异(P>0.05).结论:TFFl在癌旁组织及不典型增生胃黏膜中表达增强提示其可能与肿瘤抑制及分化机制有关,而在癌组织中表达减弱,且分化程度越低表达越弱可能与癌组织腺体及细胞破坏、TFFl的分泌减少有关.
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大鼠重症急性胰腺炎对免疫机制及TAI的影响
目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)时细胞免疫功能的变化并通过给予外源性胸腺素α1(TA1),观察能否减轻SAP的严重程度并初步探讨其作用机制.方法:♂SD大鼠54只随机分为对照组、SAP组和TA1治疗组.SAP模型采用50 g/L牛黄胆酸钠1 mL/kg胰胆管逆行穿刺注射建立,治疗组造模成功后立即皮下注射TA1(100μg/kg),对照组仅给予开腹手术.三组大鼠分别在造模后3,6,12 h处死,收集外周血与胰腺标本.观察TA1对血清淀粉酶、TNF-α及胰腺组织炎症评分的影响;同时应用流式细胞术观察外周血CD3,CD4+,CD8+T细胞的变化.结果:SAP组与治疗组各时间点血清淀粉酶、TNF-α水平及胰腺组织炎症评分均显著高于对照组(P<0.01);12 h治疗组与SAP组相比,TNF-α水平明显下降,胰腺组织炎症评分显著改善(P<0.01).SAP组3,6 h外周血CD3,CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P<0.01);但在12 h则明显低于对照组(P<0.01);治疗组3 h外周血CD3,CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P<0.01),但6,1 2 h与对照组没有明显的差异.结论:SAP时存在细胞免疫功能的低下,外源性TA1可能通过调节CD3,CD4T细胞分化从而减轻胰腺炎症.
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幽门螺杆菌相关性胃炎活动性与TNF-α,EGF的相关性
目的:研究肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)水平与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hpylori)相关性胃炎炎症活动性的关系.方法:通过快速尿素酶试验和血清HpIgG抗体水平判断H pylori感染;组织学方法评定胃窦炎症活动性;放射免疫法测定胃窦黏膜中TNF-α,EGF的含量.结果:Hpylori阳性的慢性胃炎组胃窦黏膜炎性活动性显著重于Hpylori阴性组;胃窦黏膜中TNF-α水平在H pylori阳性组显著高于H pylori阴性组(0.103±0.034vs 0.062±0.022;P<0.05),且随黏膜炎症活动加剧而增高;胃窦黏膜中EGF水平在Hpylori阳性组显著低于Hpylori阴性组(0.215±0.102 vs 0.319±0.187;P<0.05),与黏膜炎症活动性无明显相关性.结论:TNF-α在Hpylori致炎过程中起重要作用,且与炎症活动性成正相关;EGF水平在Hpylori感染中下降,可能减弱了对组织细胞损伤的保护作用,与炎症活动性无关.
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食管鳞癌组织Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白表达的临床意义
目的:食管癌的发生、发展和预后虽与多种因素有关,但未定论.癌间质是影响癌临床行为的重要因素,Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白(FN)是肿瘤基质的主要成分.我们研究了Ⅲ型胶原和FN在食管癌组织的表达及其临床意义.方法:食管鳞癌手术切除存档蜡块标本102例,用免疫组化方法观察FN和Ⅲ型胶原在食管鳞癌组织中的分布特征,并和食管鳞癌临床特征诸如淋巴结转移、肿瘤浸润深度、癌分化程度、临床TNM分期作对比分析.结果:食管鳞癌组织中Ⅲ型胶原主要分布于癌细胞质,阳性率71.6%,其次分布于间质,呈纤维状.FN分布于癌间质呈纤维状包绕癌巢,阳性率73%;淋巴结转移组FN阳性率63%,而无淋巴结转移组阳性率83%(P<0.05),表明FN阳性的食管鳞癌不易发生淋巴结转移.结论:食管鳞癌细胞具有产生Ⅲ型胶原的能力.FN对癌的扩散可能有限制作用.
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13C-美沙西丁呼气试验判断肝硬化患者肝功能
目的:探讨肝硬化患者13C-美沙西丁肝功能呼气试验检测的特点.方法:肝硬化患者42例和正常人31名进行13C-美沙西丁呼气试验.口服13C-美沙西丁75 mg,收集检测并比较研究对象服药前、服药后l0,20,30,40,50,60,80,100,120 min等10个时间段呼出气体中13CO2丰度(DOB)、代谢速率(MV)以及累积丰度(CD)等.结果:正常人呼出气体中13CO2丰度有明显的峰值(20.3±3.5%),出现在服用13C-美沙西丁后20 min左右;Child A级患者为低平双峰峰值,分别出现在20 min和80 min(7.5±1.8%和6.5±3.3%);Child B级患者峰值后移至40 min(4.6±1.3%);各组间峰值差别均有显著统计学意义(P<0.05),Child C级患者无峰值.正常人和Child A级患者代谢速率高峰出现在20 min(28.8±5.3%和9.4±2.4%),差别有统计学意义(P<0.05),而Child B级患者代谢速率普遍降低且无峰值,Child C级患者代谢速率极低.正常人、Child A级、Child B级、Child C级患者120 min13CO2累积呼出丰度依次分别为31.2±4.5%,13.8±3.7%,8.2±2.2%,2.4±0.8%,各组间差异显著(P<0.05).结论:13C-美沙西丁呼气试验检测能准确、直观地反映肝硬化患者肝功能状况.
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腹腔镜胆囊切除术前应用磁共振成像胆道造影技术评价胆总管结石的价值
目的:评价在腹腔镜胆囊切除(laparoscopic cholecystectomy,LC)术前应用磁共振成像胆道造影(magnetic resonance cholangiography,MRC)技术诊断胆总管结石的临床价值.方法:1999-03/2001-05可疑有胆总管结石而要求择期行LC的267例患者通过同时行内窥镜逆行性胆管造影(endoscopic retrograde cholangiography,ERC)或术中胆道造影(intraoperative cholangiography,IOC)检查来评价MRC对胆总管结石诊断的可靠性.可疑患者的选择以临床表现、B超所见以及实验室检查为依据,即:既往有黄疸或胆源性胰腺炎病史、入院后肝功能(尤其是胆红素)检查异常以及B超提示胆总管扩张(即:大于8 mm)者.结果:MRC检出所有78例胆总管内存在有结石的患者,另有假阳性7例.MRC检查胆总管结石的敏感性为100.0%,特异性为96.3%,阳性判断价值91.8%,阴性判断价值100.0%.共有17例发生与ERC操作有关的并发症(7.1%).采用MRC筛选,本组有68.2%病例可省去ERC检查,从而可以有效减少术前检查过程中并发症的发生.结论:ERC是一项有创技术,并有一定并发症发生率.MRC无创,是高危患者LC术前诊断胆总管结石的一个准确方法,MRC的使用可以为ERC的筛选提供帮助.
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2000-2003年世界华人消化杂志省部级以上科技奖励项目统计
随着世界华人消化杂志的发展和论文质量的不断提高,本刊发表的论文越来越多地得到社会的关注,论文的学术价值得到各机关部门的认可.通过论文作者积极的反馈信息,我们发现,不少优秀论文已经获得或正在申请省部级科技奖项.根据我们的统计,从2000-2003年,本刊发表后的论文获得省部级以上科技奖励项目共14项,其中一等奖3项,二等奖7项,三等奖4项;获得国家专利1项.各奖励项目按年次排序如下:
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1998-2003年世界胃肠病学杂志省部级以上科技奖励项目统计
随着世界胃肠病学杂志的快速发展和论文质量的不断提高,本刊发表的论文越来越多地得到社会的关注,论文的学术价值得到各机关部门的认可.通过论文作者积极的反馈信息,我们发现,不少优秀论文已经获得或正在申请省部级科技奖项.根据我们的统计,从1998-2003年,本刊发表后的论文获得国家级二等奖1项;省部级科技奖励项目50项,其中特等奖1项,一等奖7项,二等奖24项,三等奖18项.各奖励项目按发表时间排序如下:
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TNF-α基因启动子多态性与HBV感染转归的关系
目的:探讨中国汉族人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)基因启动子单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染结果之间的关系.方法:慢性乙型肝炎患者131例,HBV感染自愈者165组应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,检测HBV感染自愈者和慢性乙型肝炎患者TNF-α基因启动子-238G/A,-308G/A,-857C/T和-863C/A单核苷酸多态性位点基因型.结果:对慢性乙型肝炎组和HBV感染自愈组人群TNF-α基因启动子区域的-238G/A,-308G/A,-857C/T和-863C/A 4个SNP位点进行基因型分析,共发现12种启动子基因型,以GG·GG·CC·CC,GG·GG·CC·CA,GG·GG·CT·CC和GG·GA·CC·CC基因型多见,约占85%.通过对慢性乙型肝炎患者和HBV感染自愈者TNF-α基因启动子4个位点基因型联合分析发现,GG·GG·CC·CC,GG·GG·CC·CA和GG·GA·CC·CC基因型在慢性乙型肝炎组和HBV感染自愈组分布差异有显著性,其中携带GG·GG·CC·CC基因型的个体患慢性乙型肝炎的机会比(odds ratio,OR)为2.15,95%可信区间为1.34-3.45;而携带GG·GG·CC·CA或GG·GA·CC·CC基因型的个体患慢性乙型肝炎的OR分别为0.48(95%可信区间为0.27-0.86)和0.35(95%可信区间为0.14-0.89).HBV感染的清除可能与GG·GG·CC·CA(X2=6.14,P=0.013<0.05)和/或GG·GA·CC·CC(X2=5.18,P=0.023<0.05)基因型有关.进一步对各位点单核苷酸多态性分析发现,慢性乙型肝炎患者和HBV感染自愈者TNF-α基因启动子-238G/A、-857C/T位点基因型分布频率差异无显著性,而-308G/A,-863C/A位点基因型分布频率差异有显著性(-308G/A位点,X2=6.53,P=0.011<0.05,OR=3.05;-863C/A位点,X2=4.33,P=0.037<0.05,OR=1.69).结论:TNF-α基因启动子-308G/A、-863C/A位点多态性与中国汉族人HBV感染后的结果有关,其中TNF0-α308G/A和/或-863C/A位点A等位基因的存在可能有利于HBV感染的清除.
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乙型肝炎病毒蛋白表型定义初探
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分型方式,并根据病毒蛋白结构提出新的病毒蛋白分型方式.方法:自GenBank中按基因型搜索符合要求的HBV基因组序列,并应用Vector NTI suite 8.0版软件进行基因组核苷酸及各基因编码蛋白质序列比较,并利用软件分析前前-S基因、前-X基因和前-C基因的存在状态.结果:在GenBank中根据HBV基因型分型搜索出119个病毒株全基因组,比较后发现选择病毒株基因组核苷酸序列总阳性率和总一致率分别为95.7%和147.7%;选择病毒株编码的全C蛋白、全S蛋白、全X蛋白和多聚酶的总阳性率分别为98.6%、87.3%、57.2%和95.2%,总一致率分别为37.4%、24.1%、27.7%和43.5%.在病毒群中,33.61%的病毒株编码前前-S多肽,14.3%的病毒株编码前-X多肽,26.1%的病毒株不编码前-C多肽,94.1%编码前-X多肽的病毒株同时编码前前-S多肽.基因组1-700 nt一致率30.6%,1 103-1 653 nt一致率20.8%,为高变区;基因组1 654-1 950 nt的一致率为74.2%,为高保守区.4种病毒蛋白各有其相应的高变区和高保守区根据病毒蛋白前导性序列的变异情况提出新的分型方法,命名为蛋白表型.蛋白表型分7型,Ⅳ型为主要流行表型,占39.5%,V型和VⅦ型各占19.3%.亚洲HBV蛋白分型分布分散,Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅶ型所占比例均大于20%;欧洲Ⅳ型占58.3%,Ⅶ型占25.0%,Ⅴ型占13.9%.结论:在综合分析HBV基因组的基础上,初步划分出HBV基因组和病毒蛋白内部存在的高变区和高保守区提出蛋白表型的新概念,并综合展示基因核苷酸突变所导致的病毒蛋白的结构差异.
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两种启动子调控下PNP基因载体的构建和差异性表达
目的:分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用启动子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体并检测、分析二者的差异表达.方法:将[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3.0,构建肝癌细胞特异表达载体p[HRE]AF;将PNP基因分别插入pcDNA3.0和p[HRE]AF,构建两种启动子调控的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和p[HRE]AF/PNP;经酶切、PCR及测序鉴定各重组体.用脂质体介导法将两PNP基因载体转染不同细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达,分析二者表达的特点.结果:各目的片段均成功插入相应载体中,CMV启动子调控的PNP基因在各株细胞中均实现了表达,而[HRE]AF启动子调控的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.结论:两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体,p[HRE]AF/PNP还实现了在AFP阳性,尤其是AFP阴性肝癌细胞中的靶向性表达.
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HAb18Gedomab1单抗的制备及功能研究
目的:制备抗人HAb18G/CD147胞外区蛋白(HAb18Ged)的单抗HAb18Gedomab1,并对其理化性质和生物学功能进行分析鉴定.方法:用HAb18Ged免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术,融合并筛选分泌抗人HAb18Ged蛋白单抗的杂交瘤细胞株,制备腹水,采用离子交换层析法纯化该抗体.采用流式细胞术、免疫组化等方法对其特异性进行鉴定,并通过明胶酶谱、Ⅰ型胶原酶谱、重组基底膜降解实验研究该抗体的体外生物学功能.结果:获得一株稳定分泌抗人HAb18G/CD147胞外区蛋白单抗的杂交瘤细胞株HAb18Gedomab1,滴度为:1:106,纯化后HAb18Gedomab1单抗的纯度大于90%,抗体亚型属IgG1型.流式细胞术及免疫组化结果证明,该抗体与FHCC-98细胞膜抗原及肝癌组织均呈特异性结合.生物学功能研究表明,HAb1 8Gedomab1可刺激鼠成纤维细胞(3T3)分泌明胶酶MMP-2,MMP-9及胶原酶MMP-1,MMP-8,并具有促进基底膜降解的作用.结论:HAb18Gedomab1单抗可特异识别HAb18Ged,刺激MMPs分泌,促进基底膜降解.
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抑癌基因p27Kip1及其Ser10突变体对HepG2细胞周期和增生的影响
目的:p27kip1氨基端第10号位置的丝氨酸(Ser10)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点丝氨酸为丙氨酸(S10A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增生的影响.同时比较野生型p27kip1和Ser10突变型p27kip1基因转染对肝癌细胞株HepG2细胞周期和增生的影响.方法:应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1质粒DNA瞬时转染HepG2细胞,免疫细胞化学检测p27kip1蛋白的表达和细胞内分布,流式细胞计数仪分析细胞周期变化.结果:野生型和突变p27kip1蛋白转基因后HepG2细胞均可以G0期阻滞,且突变型的阻滞作用强于野生型(P<0.05),细胞生长受到抑制.无血清培养96 h同步化于G0期,野生型和突变型p27kip1均分布于细胞核;而在20 mL/L血清继续培养8 h后野生型向细胞质转运而主要分布于细胞质,突变型仍然滞留于细胞核.结论:p27kip1的过度表达可明显抑制HepG2细胞的增生,p27kip1 Ser10酸化可能介导其细胞核外转运的重要分子机制.
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2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导肝癌细胞凋亡的形态学变化
目的:探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的可能性.方法:选用不同浓度的2-(3-羧基-l-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖与肝癌细胞株共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜对细胞生长状况及药物作用后细胞的形态进行观察.结果:经2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖作用24-72 h后,HepG2肝癌细胞株出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色.染色质固缩,并凝结成块,聚集在核膜周边呈新月状或肾状,胞质浓缩,内质网疏松并与胞膜融合形成-个个空泡.且凋亡细胞含量呈一定的浓度、时间相关性.结论:2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用.
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内毒素联合精氨酸对人肝癌细胞Bel-7402增生及凋亡的影响
目的:通过内毒素联合精氨酸诱导自分泌的一氧化氮(No)及其限速酶的表达,观察人肝癌细胞Bel-7402自分泌的一氧化氮的改变对其增生及凋亡的影响.方法:Bel-7402细胞中NO产生的限速酶为诱生型合酶(iNOS),其底物为精氨酸(L-Arg).采用MTT法观察不同浓度的L-Arg及内毒素(LPS)对细胞增生的影响.采用细胞免疫组化的方法对iNOS在细胞中的表达进行观察.Tunel法观察NO对细胞凋亡的影响.结果:在iNOS的表达不受影响的情况下,0.625 mmol/L的L-Arg产生低浓度的NO,对细胞的增生有促进作用(对照组0.86±0.01,处理组0.87±0.02 P>0.05),2.5 mmol/L-Arg产生高浓度的NO,对细胞的增生有抑制作用(对照组0.86±0.01,0.83±0.01 P<0.05).100 ng/L LPS使iNOS的表达增强,使单位时间内NO的生成增多,细胞增生受抑.与L-Arg有协同作用.高浓度的NO能够促进细胞的凋亡.结论:LPS可能通过促进iNOS的产生,在精氨酸的协同作用下,促进细胞凋亡,抑制细胞增生.
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肝细胞癌DNA修复酶hMTH1基因mRNA及其蛋白的表达
目的:通过检测DNA修复酶hMTH1 mRNA及其蛋白在肝细胞癌组织及细胞株中的表达,探讨hMTH1在肝细胞癌发生、发展及防御机制中的作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究肝癌(HT,n=33)、癌旁组织(HST,n=33)和正常肝细胞株(L-02)、肝癌细胞株(SMMC7721,HepG2)中hMTH1mRNA的表达,同时采用免疫组织化学方法原位检测了上述的肝癌组织(n=17)及癌旁组织(n=17)中hMTH1蛋白的表达.结果:绝大部分检测对象中均有不同程度hMTH1 mRNA及其蛋白的表达.肝癌组织中hMTH1 mRNA的表达较癌旁组织显著升高(t=2.424,P=0.021<0.05);SMMC7721,HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达显著高于L-02细胞(F=6.810,P=0.009<0.01).SMMC7721与HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达没有显著差异(P=0.395>0.05).hMTH1蛋白主要在肝细胞胞质中表达,肝癌组织中hMTH1蛋白水平明显高于癌旁组织(t=2.618,P=0.019<0.05).结论:hMTH1mRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞株中表达升高.
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短发夹RNA抑制外源荧光素酶在肝癌细胞中的表达
目的:构建含荧光素酶(1uciferase,luc)基因的短发夹状RNA(shorr hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其在肝癌细胞Bel-7402中抑制外源荧光素酶的表达.方法:设计的两条反向重复的多聚核苷酸序列,退火形成双链DNA,再与双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-luc重组质粒,与荧光素酶基因表达质粒pCMV-luc共转染肝癌细胞株BEL-7402,检测其对荧光素酶表达的影响.结果:PCR和DNA序列分析证实了重组质粒构建成功.pshRNA-luc对共转染的pCMV-luc中的荧光素酶具有明显的抑制作用,抑制率可达86%(P<0.01).结论:构建的pshRNA-luc表达质粒能有效地抑制荧光素酶在肝癌细胞中的表达,为RNA干扰用于肿瘤的基因治疗打下基础.
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EB病毒相关胃癌细胞凋亡与Bcl-2的表达
目的:探讨EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC)病毒基因表达、Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡的相互关系,明确其在EBVaGC发生发展中的作用.方法:选取EBVaGC和相应癌旁组织13例,与之匹配的EBVnGC 45例,采用TUNEL法及免疫组化技术检测其细胞凋亡指数(AI)和bcl-2蛋白的表达;RT-PCR-Southern杂交技术检测EBV相关基因表达.结果:EBVaGC、EBVnGC及EBVaGC癌旁组织中AI分别为0.97±0.4l,2.03±0.60和3.25±0.46,统计学分析表明:EBVaGC和EBVnGC以及EBVaGC癌组织和相应癌旁组织细胞凋亡指数均有显著性差异(t=5.9795,P=0;f=13.2 229,P=0).EBVaGC组和EBVnGC组Bcl-2阳性率分别为53.8%和48.9%,两组间无显著性差异(x2=0.0991,P=0.7 529).EBVaGC 13例EBNAl mRNA均阳性,而EBNA2和LMPlmRNA均阴性;EBV早期基因BARFl表达阳性6例,BHRFl表达阳性2例.结论:EBVaGC癌组织Bcl-2表达与EBV感染无明显相关性,EBV感染抑制细胞凋亡不是上调Bcl-2表达而实现,EBV早期基因BARFl和BHRFl可通过抑制细胞凋亡和细胞转化作用参与EBVaGC的发生.
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脂肪酸合成酶抑制剂抑制人胃癌细胞增生并诱导凋亡
目的:研究脂肪酸合成酶(FAS)抑制剂cerulenin对人胃癌细胞株增生的影响及诱导凋亡的作用.方法:MTT法观察终浓度2.5,5,10,20和40mg/Lcerulenin分别作用于无血清培养及含血清培养MKN28,SGC7901和MKN45细胞株24 h后,检测其对细胞增生的抑制作用.40 mg/L cerulenin作用于无血清培养的三种细胞12 h后,用流式细胞仪(FCM)、DNA凝胶电泳对其凋亡和细胞周期进行检测.结果:Cerulenin对人MKN28,SGC7901,MKN45细胞株的增生有显著的抑制作用并呈剂量依赖性,对无血清培养细胞株的抑制作用高于有血清组.2.5,5,10,20和40mg/Lcerulenin作用于有血清培养及无血清培养MKN28细胞24 h的抑制率分别为3.2±0.6%,7.3±0.5%,11.3±0.7%,17.7±1.2%,41.7±1.0%和5.1±1.3%,11.1±1.7%,20.9±1.3%,31.3±2.3%,60.2±3.9%,分别与其对照组比较有显著差异(1.4±1.3%,3.3±2.0%,6.2±3.2%,8.1±1.1%,10.1±1.7%,P<0.05和2.8±1.1%,6.1±0.8%,8.5±1.3%,11.5±0.9%,17.2±2.2%,P<0.05).2.5,5,10,20和40 mg/L cerulenin作用于有血清培养及无血清培养SGC7901细胞24 h的抑制率分别为3.4±0.8%,9.5±1.2%,23.3±1.7%,38.5±1.8%,65.2±2.1%和6.6±0.9%,14.3±2.1%,33.0±1.8%,56.9±2.2%,78.2±1.4%,与对照组比较有显著差异(2.3±1.0%,5.0±1.2%,7.3±1.0%,9.7±1.9%,13.4±1.3%,P<0.05和3.9±1.2%,8.7±1.5%,10.5±1.9%,13.8±1.6%,19.5±1.7%,P<0.05).2.5,5,10,20和40 mg/Lcerulenin作用于有血清培养及无血清培养MKN45细胞24h的抑制率分别为5.9±1.1%,13.5±0.9%,30.5±1.9%,49.1±1.5%,71.7±2.0%和8.4±1.1%,19.6±1.4%,40.4±1.4%,67.0±1.3%,83.8±2.0%,与对照组比较有显著差异(2.7±1.4%,7.4±1.1%,9.6±1.3%,12.6±1.1%,16.7±2.2%,P<0.05和4.4±1.6%,9.5±0.9%,13.7±0.7%,18.4±1.6%,26.6±2.1%,P<.05).Cerulenin作用无血清培养MKN28,SGC7901,MKN45细胞株24 h的IC50值分别为13.3 mg/L,16.7 mg/L,32.3 mg/L显著低于含血清组(20.1 mg/L,26.6 mg/L,46.3 mg/L,P<0.01).MKN28,SGC7901,MKN45细胞在Cerulenin(40 mg/L,12 h)作用下,凋亡率分别为10.1±0.7%,12.5±0.4%,14.9±0.8%,与对照组比较有显著差异(1.0±0.2%,0.9±0.5%,0.9±0.7%,P<0.01),并引起胃癌细胞发生G2/M期阻滞.DNA凝胶电泳出现梯状条带.结论Cerulenin显著地阻遏人胃癌细胞的增生并诱导人胃癌细胞凋亡,是胃癌治疗的新靶点.
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胃癌微转移基因检测的临床应用
目的:探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)扩增P53基因作为检测胃癌血行微小转移方法的可行性及其表达的临床意义.方法:应用对胃癌患者转移(n=12)和无转移组(n=18)的外周血的基因进行检测,分析这两组基因的表达与胃癌转移复发之间的关系,并将FQ-PCR与普通PCR的敏感性进行比较.结果:胃癌患者30例,在转移组中P53基因表达检出为58.3%(7/12);而无转移组中为11.1%(2/18).两组比较,具有显著性差异(P<0.01),表明外周血癌基因表达与转移复发是相关的,其他病种患者外周血中无阳性表达,而28名健康献血员中均为阴性.结论:P53基因可作为胃癌微小转移的重要指标,FQ-PCR是检测微小转移的敏感方法,对胃癌的早期诊断和预测微小转移有一定的临床价值.
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大肠癌细胞功能性Fas配体的表达度与肿瘤免疫逃逸的关系
目的:表达Fas配体(fasligand,FasL)的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加.肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致.观察Fas与FasL在结肠癌细胞株的表达,在体外验证结肠癌细胞SW620是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡.方法:用免疫组织化学SABC法观察结肠癌细胞系和Jurkat T淋巴细胞系Fas与FasL的表达,为癌细胞的Fas和FasL的功能提供形态学依据.采用非放射性细胞毒分析,测定SW620结肠癌细胞与Jurkat靶细胞共培养后LDH释放值检测效应细胞的杀伤效应.结果:结肠癌SW620细胞FasL染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜及核周区,而Fas染色几乎呈阴性反应.Jurkat细胞系Fas,FasL免疫组化染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜.CytoTox96非放射性细胞毒分析显示大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,诱导对Fas介导的凋亡敏感的T淋巴细胞(Jurkat T细胞)明显凋亡,并随着SW620接种浓度增加和共培养时间的延长,Jurkat T细胞凋亡的比例显著增加.用含有乙酸肉豆佛波醇(phorbol 12-myristatel3-ac-etate,PMA)加离子霉素(ionomycin)的DMEM培养基孵育48 h的大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,Jurkat T细胞凋亡的比例也明显增加.结论:结肠癌细胞SW620表达功能性FasL,能杀伤Fas阳性Jurkat T淋巴细胞,形成免疫逃逸.
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大肠上皮恶性转化不同阶段中Fas,p53表达及其与凋亡的关系
目的:研究大肠腺癌、腺瘤恶变、管状绒毛状腺瘤、管状腺瘤中Fas及p53的表达,探讨Fas在大肠癌发生发展中的作用.方法:收集石蜡包埋的大肠腺癌组织37例,腺瘤恶变组织26例,管状绒毛状腺瘤30例,管状腺瘤24例,以6例非肿瘤大肠黏膜作为对照.通过原位杂交,免疫组化及TUNEL等技术,原位观察不同病变组织大肠上皮中的Fas mRNA和p53蛋白表达及细胞凋亡的状况及相互关系.结果:Fas mRNA阳性细胞密度:非肿瘤黏膜39.60±6.51,管状腺瘤50.93±21.64,管状绒毛状腺瘤45.91±24.15,腺瘤非恶变区25.47±14.76,腺瘤恶变区11.92±9.47,腺癌5.88±5.10;Fas mRNA在腺瘤中有较高表达,而在恶性病变中表达明显下降(P<0.001).大肠非肿瘤黏膜、管状腺瘤、管状绒毛状腺瘤、腺瘤非恶变区、腺瘤恶变区和腺癌中p53蛋白阳性细胞密度分别为8.40±2.67,13.19±8.95,13.50±7.29,12.24±7.16,73.31±28.57和80.99±44.54;p53蛋白在非肿瘤黏膜中表达低,腺瘤中略增加,在恶性病变中明显增加(P<0.001).上皮凋亡细胞密度:非肿瘤黏膜15.02±11.14,管状腺瘤46.31±18.86,管状绒毛状腺瘤29.43±16.66,腺瘤非恶变区68.42±19.61,腺瘤恶变区22.01±12.07,腺癌18.64±12.88;上皮凋亡细胞密度在腺瘤中明显升高,在恶性病变中较低(P<0.001).p53蛋白阳性表达细胞密度与上皮凋亡细胞密度呈负相关(r=-0.389,P<0.001),Fas mRNA阳性表达细胞密度与上皮凋亡细胞密度呈正相关(r=0.190,P<0.05).结论:本文证实大肠腺癌可通过下调Fas表达,上调p53表达,抑制细胞凋亡,形成"Fas抵抗".
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致谢世界华人消化杂志审稿人
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World Journal of Gastroenterology与Elsevier合作国际发行的签字仪式在北京展览馆举行