乙型肝炎肝硬化并腹水患者肝功能评估时的部分相关因素分析

目的:分析乙型肝炎肝硬化并腹水患者肝功能评估时的相关因素,寻找对判断病情有指导意义的非创伤性指标.方法:收集在本院住院的乙型肝炎肝硬化并腹水病例共126例,排除合并其他病毒感染,按Child-Pugh肝功能评分法评分并分级,分析患者血清常用生化指标ALT、AST、ALB、GLB、TBIL、TBA与不同肝功能级别的关系结果:126例乙型肝炎肝硬化并腹水患者中A级15例、B级73例、C级38例.血清ALT、AST、ALB、GLB、TBIL、TBA的异常率依次为39.68%、84.21%、89.68%、70.16%、95.32%、91.26%,P值依次为0.25-0.5、＜0.005、＜0.005、0.1-0.25、＜0.005、＜0.005,敏感性从高到低依次为TBA、TBIL、ALB、AST、GLB、ALT.ALT、AST、ALB、GLB、TBA均值在男性和女性患者之间差异无显著性(P＞0.05);TBIL在男性和女性患者之间差异有极显著性(P=0.001).ALT均值在C级与A级之间的差异有显著性;AST、TBA、TBIL均值在A与B级、B与C级、C与A级之间的差异均有显著性(P＜0.05),其中A与B级、C与A级之间的差异有极显著性(P＜0.01);ALB均值在各级之间的差异均有极显著性(P＜0.01);GLB在各级之间的差异均无显著性(P＞0.05).结论:在乙型肝炎肝硬化并腹水患者中,按Child-Pugh肝功能评分法评分并分级后,常用生化指标敏感性从高到低依次为TBA、TBIL、ALB、AST、ALT,血清AST及TBA数值与肝功能分级有良好的相关性.

干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的:探讨α-干扰素、胸腺肽联合治疗慢性乙型肝炎的疗效.方法:将36例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎随机分为A、B两组,两组患者均隔日肌注α-1 b干扰素(赛若金)500万U,疗程1 a;A组加用胸腺肽,每日60 mg静脉滴注6 mo.治疗前检查HBV DNA和ALT;治疗开始后每2 mo检查一次HBV DNA,每1 mo检查一次ALT;治疗结束后每3 mo复查一次HBV DNA和ALT,分别随访6 mo和12 mo.结果:治疗结束后随访6 mo,A组的肝功能复常率(66.7%,P＞0.05)与B组两组间无显著差异.A组HBeAg转阴率(61.1%)显著高于B组(27.8%)P＜0.05,抗-HBe阳性率(39.0%)高于B组(22.2%),但无统计学意义.A组HBV DNA抑制(8.15×106±51.9 copies/L)显著高于B组(3.98×107±57.5 copies/L),提示干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎的疗效优于单独使用干扰素组的疗效.两组患者在乏力、体重减轻、WBC减少、血色素下降方面无显著性差异,但A组中血色素下降明显增加,是B组的3倍.结论:干扰素联合胸腺肽治疗效果较单独使用干扰素治疗效果显著,有必要进一步扩大与加强研究.

缺血再灌注损伤对大鼠肝细胞钙池操纵的钙通道电流的影响及药物拮抗

目的:研究缺血再灌注损伤对大鼠肝细胞活性和钙池操纵的钙通道电流(Isoc)的影响及钙通道阻滞剂(2-aminoethoxvdiphenvl borane,2-APB)的拮抗作用.方法:建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,应用全细胞膜片钳技术研究缺血再灌注损伤对大鼠肝细胞Isoc的影响及2-APB的拮抗作用.结果:缺血再灌注组肝细胞Isoc为-1058.0±223.3pA(n=8),假手术组为664.5±140.4pA(n=8),两组比较差异显著(P＜0.05).20、40、60、80、100μmol/L的2-APB分别使ISOC由给药前的-1 056.7±225.1pA下降至给药后的-853.7±225.1pA、-686.3±145.0pA、-534.4±120.4pA、382.6±58.0pA、-272.9±51.1pA,抑制率分别为19.2±6.2%、35.1±7.6%、49.4±9.9%、63.8±15.8%、74.2±16.5%;给药前后的Isoc比较有显著差异(n=8,P＜0.05或P＜0.01);2-APB的抑制作用呈浓度依赖性增强,其EC50为64.6±10.7μmol/L.结论:缺血再灌注损伤具有增加大鼠肝细胞的钙离子内流的作用,钙离子内流增加可能导致肝细胞钙超载,从而降低肝细胞的活性;2-APB对缺血再灌注损伤大鼠肝细胞的钙离子内流具有抑制作用,因此对缺血再灌注损伤的肝细胞起到保护作用.

大鼠颌下腺5-羟色胺及生长抑素的表达

目的:检测大鼠颌下腺5-羟色胺(5-HT)及生长抑素(SS)的表达情况.方法:SD大鼠14只,雌雄各半.取其颌下腺,用免疫组织化学SABC单染法、邻片单染双标法及图像分析方法进行研究.结果:雄性大鼠颌下腺的导管、浆液性腺泡、副交感神经节等部位均有5-HT表达,而雌性大鼠仅纹状管有5-HT存在;雄、雌性大鼠颌下腺导管上皮细胞胞质均呈SS免疫反应(immunoreactive,IR)阳性;5-HT-IR细胞与SS-IR细胞部分定位相同,主要定位于纹状管;雌性大鼠颌下腺SS-IR细胞的平均黑度明显低于雄性大鼠(88.1±7.6 vs 98.4±14.4,t=0.63,P=0.005＜0.01).结论:大鼠颌下腺表达5-HT及SS,且雌雄差异明显,推测他们的表达受雄激素影响.5-HT与SS有在纹状管上皮细胞内共存现象,提示这两种生物活性物质可能有相互作用.

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰的免疫隔离机制

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用.方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效果.D-氨基半乳糖腹腔内注射诱导大鼠急性肝衰竭,48 h后将微囊化的猪肝细胞移植于大鼠腹腔内,观察移植大鼠存活率,免疫组化法检测大鼠大网膜内CD4、CD8、IgG和IgM的表达.结果:微囊可有效保护囊内K562细胞不受NK细胞的杀伤与裸肝细胞移植组相比,微囊化乳猪肝细胞移植组大鼠存活率显著提高(1wk存活率78.6%vs 66.7%,P=0.0 046;2 wk存活率42.9% vs 25.0%,P=0.0 027,P＜0.01).大网膜CD4、CD8、IgG表达较弱(P=0.0 342、P=0.0 197及P=0.0 445,P＜0.05),而IgM表达无明显差异(P＞0.05).结论:APA微囊可有效隔离抗体及淋巴细胞介导的体液和细胞免疫反应.微囊化异种肝细胞移植可治疗大鼠急性肝衰,给予肝功能代谢支持,提高移植治疗效果.

大蒜素抑制体外人肝癌细胞的侵袭能力

目的:肝癌的侵袭与转移是导致其不良预后的重要因素,目前临床缺乏针对肝癌侵袭与转移的有效治疗措施.本研究通过人肝癌细胞培养,研究大蒜素对体外人肝癌细胞侵袭能力的影响,并在基因水平上探讨其机制.方法:将人肝BEL-7402细胞传代,取进入指数生长期的细胞随机分为阿霉素组Human(5 mg/L)、大蒜素低、中、高剂量组(25、50、100 mg/L),另设空白对照.处理后每30 min观察一次细胞转移相关超微结构,8 h后用流式细胞术检测肿瘤侵袭转移抑制基因nm23-H1和P21tas表达水平.数据用SAS 8.2软件进行χ2检验.结果:与阿霉素组相比,大蒜素处理后超微结构除凋亡表现外,大多数贴壁细胞胞质回缩,细胞之间的连接减少,空隙加大,细胞之间界限变清晰,表面的丝状微绒毛也明显减少.流式细胞检测显示,nm23-H1表达的荧光强度空白对照组为19.19,5 mg/L阿霉素组为119.76,25 mg/L大蒜素组为84.28,50 mg/L大蒜素组为92.64,100 mg/L大蒜素组为138.08,nm23-H1表达与大蒜素呈明显剂量效应关系,大蒜素高剂量组比阿霉素组显著增强(138.08 vs 119.76,P＜0.05).而P21ras表达的荧光强度在空白对照组、阿霉素组和低、中、高剂量组分别为2.65%、3.56%、1.55%、3.22%、3.44%,都表现为阴性低表达,各组间没有明显差别.结论:大蒜素可以抑制体外肝癌细胞的侵袭能力,其机制可能与大蒜素特异性影响BEL-7402细胞表面的微绒毛和上调肿瘤侵袭与转移抑制基因nm23-H1的表达有关.

肝细胞癌两种类型动静脉分流的多层CT表现在介入栓塞中的意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)合并的肝动脉门静脉分流(HAPVS)、肝动脉肝静脉分流(HAHVS)的多层CT(MSCT)表现,并评价在介入栓塞治疗中的意义.方法:分析经数字减影血管造影证实的86例HCC合并HAPVS和/或HAHVS的MSCT表现,包括门静脉、肝静脉、肠系膜上静脉、脾静脉、HCC病灶、肝实质及脾脏的增强表现.结果:在83例HAPVS中48例门静脉主干和/或1级分支增强早于肠系膜上或脾静脉;27例门静脉主干和/或1级分支显影密度大于肠系膜上或脾静脉;5例门静脉2级及以下分支增强早于门静脉主干,4例门静脉2级及以下分支显影密度大于门静脉主干,HCC病灶周围短暂片状或楔形强化.3例HAPVS HCC病灶内粗大迂曲引流静脉汇集至左肝静脉,左肝静脉提早增强浓密显影.77例重中度分流者肝实质强化程度增加,脾脏强化程度降低.HCC病灶强化程度均降低.49例门静脉主干和/或1级分支癌栓形成,1例左肝静脉和下腔静脉上端有癌栓.结论:HCC合并的HAPVS主要MSCT表现为门静脉提早增强和/或浓密显影;HAHVS主要为HCC病灶内粗大迂曲引流静脉汇集至肝静脉,肝静脉提早增强浓密显影.认识这些表现对于介入栓塞具有重要指导意义,提高治疗的安全性、有效性.

可溶性TGF-β1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF-β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础.方法:以RT-PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM-T-Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度.结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系.结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN,可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

丙型肝炎病毒逃避宿主免疫的机制

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起慢性病毒性肝炎的主要肝炎病毒类型,而且也是肝细胞癌(HCC)的重要病因,严重威胁人类健康并呈现日益增长的趋势.HCV通常可诱导机体产生强烈的免疫反应,但由于HCV基因组的高度变异性,使其能效逃避机体的免疫识别,破坏宿主免疫应答的能力,表现出极高频率的病毒持续性感染.阐明HCV免疫逃避和持续感染的可能机制将会为合理设计疫苗,诱导早期、持久、广泛的机体免疫提供基础,同时也为预防和控制丙型肝炎提供科学依据.

环氧化酶-2与食管癌

环氧化酶(COX)是催化花生四烯酸生成前列腺素G2(PGG2)和前列腺素H2(PGH2)的限速酶.其为两种:COX-1和COX-2,二者的氨基酸序列60%以上相同.COX-1在人体的绝大部分组织细胞中都有稳定的表达,主要参与黏膜细胞的保护、脏器血流的调节和凝血机制的完成等生理过程,COX-2在生理情况下几乎不表达,在许多促炎症和致突变因素的作用下,COX-2可以很快地被诱导出来,并参与病理过程.近来的研究表明,COX-2不仅在食管癌组织中高表达,而且其表达水平与病理过程的发展阳性相关,与远处转移率、局部复发率和预后好坏等临床参数也呈正相关关系.食物及饮水中的亚硝胺类化合物等可以诱导Ha-fas、Rb、p53、RAR-β等基因的突变,通过PKC途径、MAPK途径、PI-3K途径、NF-κB和AP-1途径等诱导COX-2的表达.COX-2通过多种机制影响细胞的增生凋亡、血管的生成、局部的侵润和免疫功能的抑制,从而参与食管癌的发生发展过程.特异性COX-2抑制剂对食管癌高危人群的预防作用正逐渐得到证实.

胰腺癌生物治疗进展及展望

生物治疗是肿瘤传统治疗方法的重要辅助手段.本文对基因治疗、免疫治疗、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤新生血管等方面在胰腺癌中的研究进行回顾.随着生物科学技术的发展以及对胰腺癌发生发展机制了解的深入,目前对胰腺癌生物治疗的研究和临床应用也取得了很大进展,但其临床疗效仍十分有限,如何发挥生物治疗在胰腺癌治疗中的作用尚需更多基础研究和临床资料的积累.

酒精与相关肿瘤作用机制

长期慢性饮酒是多种肿瘤的危险因素.酒精本身不是一种致癌物质.其相关致癌作用涉及多个方面.本文重点阐述酒精的局部作用和遗传因素在相关肿瘤发生中的作用.

表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染

目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylorr)尿素酶B亚单位(UreB)与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用.方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A-ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blotting进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A-ureB的SL3261组、携带pTrc99A-ureB/hlyE的SL3261组.免疫后4 wk,予Hpylori107CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4 wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况.结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的H pylori-ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42%(1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P＜0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.

来源于人胎肝干细胞的肝癌细胞系建立及初步研究

目的:研究肝癌细胞发生发展及变化规律,探讨胎肝干细胞体外长期培养的变异归宿问题.方法:原代分离培养人胎肝干细胞,从中筛选出一生长旺盛之集落,体外长期培养,并对其生物学特性进行初步鉴定.进行了细胞倍体分析;应用流式细胞仪分析了细胞周期;在Scid鼠体内接种细胞进行成瘤性验证.结果:从人胎肝组织中成功分离出一胎肝干细胞集落,在体外长期培养下可分化为肝癌细胞.其细胞增值核抗原指数高达100%;倍体分析常见多倍体细胞;流式细胞仪分析细胞周期,结果G1期细胞约占48%,G2期细胞约占18%,S期细胞约占34%.Scid鼠体内成瘤实验显示,接种细胞后2-3 wk成瘤,具有100%的成瘤性.显微镜下所见细胞大小不一,异型性明显,核仁大,核分裂活跃.结论:人胎肝中存在具有干细胞特性的原始细胞,确实可分化为肝癌细胞.从人胎肝干细胞中分离培养出肝癌细胞对于肝癌发生发展及其变化规律的深入研究奠定了基础.

富含RNA酶组织总RNA提取方法的改良

目的:简化富含RNA酶组织RNA的抽提方法.方法:健康SD大鼠10只,随机分成液氮组及改良组,每组5只,用乙醚麻醉后,分别取胰腺组织约50 mg,液氮组组织迅速放入液氮中,改良组组织放入一预装RNAguard 100 μL的1.5 mL EP管中,放入-70℃冰箱保存.液氮组将胰腺组织从液氮中取出,立即放入预装适量液氮的研钵中迅速研磨至粉末(研磨过程中始终保持研钵内有适量液氮),移入另一1.5 mL EP管中,加入1 mL Trizol,按Trizol法提取总RNA;改良组取眼科剪在酒精灯上消毒后冷却,从-70℃冰箱中取出冻存的组织,在冰盒上,加入1 mL Trizol,用眼科剪迅速剪切3 min(剪切过程组织不解冻),剧烈振荡混匀30 s,以后步骤按Trizol法.结果:改良法抽提RNA的效果与液氮研磨法无显著差异(P＞0.05),但方法简单方便.结论:改良法提取RNA简单方便,结果稳定,值得推广应用.

枳实消痞颗粒对糖尿病大鼠血浆和胃组织中胃肠激素的影响

目的:探讨枳实消痞颗粒对糖尿病大鼠胃肠激素的影响.方法:SD雄性大鼠60只,随机选9只为正常组,不造模,其余大鼠禁食不禁水16 h,用四氧嘧啶进行腹腔注射,72 h后大鼠血糖大于11.1 mmol/L的为糖尿病模型成立.糖尿病大鼠随机分枳实消痞颗粒治疗组、多潘力酮混悬液对照组、模型组,各17只.每日相应灌枳实消痞颗粒溶液、多潘力酮混悬液和蒸馏水.实验4 wk后测定各大鼠血浆和胃组织中胃泌素、胃动素、胰高糖素、P物质.结果:模型组、治疗组大鼠血浆胃泌素水平均低于正常组大鼠(t=3.03,P=0.01;t=2.29,P=0.04).模型组大鼠血浆胃动素水平低于正常组大鼠(t=2.17,P=0.04).治疗组、对照组大鼠胃动素水平均上升(t=2.26,P=0.04;t=2.66,P=0.02).模型组、对照组大鼠胰高糖素水平均高于正常组(t=2.41,P=0.03;t=2.61,P=0.02).P物质在各大鼠中表达无显著差异.模型组大鼠胃组织中胃泌素、胃动素水平比正常偏低,而枳实消痞颗粒能显著提高他们的水平(t=2.43,P=0.03;t=2.25,P=0.04).与模型组相比,对照组胃动素水平也显著上升(t=2.22,P=0.04).在大鼠胃组织中没有测出胰高糖素和P物质.结论:枳实消痞颗粒能通过提高糖尿病大鼠血浆胃动素水平、胃组织中胃泌素和胃动素水平而改善其胃肠功能.

丹芍化纤方对体外大鼠肝细胞增生、Caspase-3mRNA及白蛋白合成的影响

目的:探讨丹芍化纤方抗肝纤维化的作用机制.方法:采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法,分离、培养大鼠肝细胞,加入5%、10%、20%药物血清干预体外培养的肝细胞,用MTT法测定肝细胞的增生,荧光实时定量PT-PCR(Real Time RT-PCR)法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达,并检测培养上清中的白蛋白.结果:丹芍化纤方药物血清对肝细胞的增生及白蛋白合成有促进作用,能显著下调肝细胞内caspase-3mRNA的表达,其表达水平与正常大鼠血清组比较有显著性差异,呈明显的浓度依赖关系.结论:丹芍化纤方发挥抗肝纤维化作用与其促进肝细胞增生、蛋白合成功能,抑制肝细胞凋亡有关.

进展期胃癌HSP90α、CD44v6表达与其临床生物学行为关系的研究

目的:探讨HSP90α、CD44v6在进展期胃癌中的表达特点及其生物学行为,为进展期胃癌的临床治疗提供理论依据.方法:对9 3例进展期胃癌及其5 6例淋巴结转移癌中HSP90α、CD44v6的表达,应用免疫组化方法进行检测.结果:HSP90α在胃癌及淋巴结转移癌中的阳性率分别为54.84%(51/93)、66.07%(37/56).HSP90α在胃癌中表达分别与癌细胞浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.0.5);CD44v6在胃癌及淋巴结转移癌中的阳性率分别为50.54%(47/93)、73.21%(41/56),二者之间的差异显著(P＜0.01).CD44v6在胃癌中的表达分别与癌细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05).结论:进展期胃癌中HSP90α、CD44v6阳性表达与其临床生物学行为尤其是淋巴结转移密切相关,患者可能预后较差,应采取积极的综合治疗措施.

促肝细胞生长素对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响

目的:观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factors,pHGF)对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响,探讨肝细胞再生的规律.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)组和D-GalN+pHGF组,以D-GalN 1.2 g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型,2 h后D-GalN+pHGF组大鼠每24 h腹腔注射pHGF 2 mg/kg,并分别于第1、3、5、7、9、11、13、15 d处死各组大鼠6只.如果该时间点前每组有濒死大鼠则提前处死,使每组各时间点处死大鼠总数为6只.采用S-P免疫组织化学法检测肝组织中Ki-67的表达.结果:D-GalN组大鼠肝组织Ki-67标记指数(Ki-67 labeling index,Ki-67-LI)在模型建立成功后第5 d达峰值,以后急剧下降,在第15 d时达到正常对照组水平,但DGalN+pHGF组大鼠Ki-67-LI峰值于第3 d出现,比D-GalN组早,持续时间长,且各时间点的Ki-67-LI均明显高于D-GalN组,在第15 d时仍未降至正常对照组水平,与之相比,明显升高(P＜0.01).D-GalN组及D-GalN+pHGF组肝细胞数量逐渐增多,但除第1 d外,D-GalN+pHGF组各时间点肝细胞数量明显高于D-GalN组(P＜0.01).结论:急性肝功能衰竭时,残存的肝细胞仍有再生能力,但其再生过程受到抑制.pHGF可以提高急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67的表达,从而促进肝细胞的再生,但其再生程度同样受到一定程度的抑制.

Survivin-值得关注的抗癌治疗靶

肿瘤发生发展的研究虽然进入了复杂和多样的癌基因蛋白网络时代,但这些基因的功能效应终汇聚到一个共同的环节-细胞增生失控和凋亡受阻.Survivin是近年来发现的抗凋亡分子,参与了上述过程,常过表达于肿瘤组织中.因此,Survivin信号通路的开发和利用有助于肿瘤的早期诊断及判断预后,同时为肿瘤生物学治疗提供新的靶位.

内镜下十二指肠乳头切开术后排出猪带绦虫1例

目的:通过报道内镜下十二指肠乳头切开术后排出猪带绦虫这一少见病例,分析其可能的发生原因.方法:全面汇报该例患者病历资料及其诊疗过程.结果:内镜下乳头括约肌切开术后排出猪带绦虫1条.结论:内镜下十二指肠乳头切开术时冲入十二指肠的空气使猪带绦虫使绦虫麻痹,失去吸附能力,而排出体外死亡

HBV感染对人T细胞免疫及细胞因子TNF-α、GF-β2的影响

目的:检测HBV感染后外周血及感染肝组织内CD4+T和CD8+T细胞的数量及功能,以及肝组织内TNF-α及TGF-β2表达,探讨HBV对人体T细胞免疫的影响及其可能机制.方法:用流式细胞仪检测HBV感染者36例和正常人20例外周血中T细胞亚群的数量.用免疫组化法HBV感染肝组织50例中CD4,CD8,CD25和TNF-α,TGF-β2的表达,并作相应比较.结果:HBV感染组外周血,CD4+和CD4+/CD8+比值明显低于对照组(P＜0.05);CD8+细胞升高,明显高于对照组(P＜0.05).肝组织内浸润的淋巴细胞主要聚集在汇管区和小叶坏死区,免疫组化结果显示HBV感染组肝组织内的CD8+和CD4+细胞数量多于非HBV感染组(P＜0.01).HBV感染组肝组织内CD25+细胞数量减少,但统计学上无显著意义.HBV感染组肝组织TNF-α表达明显增强,与非HBV感染组相比有显著差异(P＜0.05);而TGF-β2在HBV感染组肝组织的表达与非HBV感染组相比无显著差异.TGF-β2及TNF-α在肝硬化、癌旁肝硬化、肝细胞癌中均较强表达,且与慢性乙肝组和正常对照组比较有非常显著差异(P＜0.01).结论:HBV感染者外周血和肝内的T细胞亚群紊乱,活性下降,功能受损.TNF-α表达与HBV感染和免疫损伤密切相关,而HBV对TGF-β2的影响微弱.

抗HBc-ScFv基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及其体外表达

目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因.方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasv-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd-ScFv,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒Ad-ScFv,体外转染HepG2细胞,PCR和ELISA法检测目的基因及其表达.结果:构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1015PFU/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因.结论:成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础.

干扰素作用下乙型肝炎病毒的变异机制

目的:体外研究干扰素-α2b(IFN-α2b)作用下乙肝病毒(HBV)突变机制.方法:以不同浓度IFN-α2b反复作用于HBV分泌型HepG2.2.15细胞,Western blot方法检测培养细胞上清中AFP,提取培养细胞上清中HBV基因组DNA,以聚合酶联反应扩增HBV C基因,克隆入pGEM-T easy载体,鉴定后行测序分析.结果:Western blot方法检测各组培养细胞上清中AFP,实验组AFP未见明显减少;序列分析表明,对照组前C/C基因克隆有两种类型,同源性93%,有10个氨基酸的差别,其中6个氨基酸相比,氨基酸的性质相同;实验组同样具有这两种克隆,其中优势株所占比例分别为12/15、14/14和9/15,高剂量组与对照组相比优势株所占比例差异有统计学意义(P＜0.05);实验组高剂量IFN组出现了四个插入/缺失突变克隆,造成前C/C基因移框突变,其中C31-2插入突变发生在前C区,另外3个突变均发生在C区,与优势株相比平均同源性97%以上.结论:在rhIFN-α高剂量条件选择下,能检测到HepG2.2.15 HBV前C/C基因插入或缺失突变株,突变株与优势株相比基因序列同源性平均在97%以上.

胃癌组织caspase-3,Bcl-XL和Cox-2表达与临床病理行为的关系

目的:观察caspase-3,Bcl-XL及Cox2在胃癌和癌旁组织中的表达,并探讨三者与胃癌生物学行为及与临床病理行为的关系.方法:中国医科大学第二临床学院2000/2003年存档的胃癌及癌旁组织石蜡切片标本54例,采用免疫组织化学方法观察caspase-3,Bcl-XL及Cox-2在胃癌和癌旁组织中的表达,采用SPSS11.5分析软件进行统计学处理,应用X2检验分析caspase-3,Bcl-XL,Cox-2表达与临床病理行为的关系,同时分析三者表达的相关性.结果:胃癌组织中caspase-3,Bcl-XL,Cox-2表达的阳性率分别为22.2%,53.7%,62.9%.caspase3表达在不同组织学分级、淋巴结转移组与非转移组、TNM分期间有显著差异(P=0.022,P=0.010,P=0.007).Bcl-XL表达在不同组织学分级、Laurren分型、淋巴结转移组与非转移组、TNM分期间有显著差异(P=0.033,P=0.005,P=0.016,P=0.009).Cox-2表达在不同组织学分级、淋巴结转移组与非转移组间、在不同TNM分期间有显著差异(P=0.013,P=0.019,P=0.008).caspase-3和Bcl-XL表达呈负相关(r=-0.308,P=0.024),Bcl-XL和Cox-2表达呈正相关(r=0.442,P=0.001),caspase-3与Cox-2表达无明显相关性(r=-0.051,P=0.713).结论:人胃癌组织caspase-3表达较低,而Bcl-XL及Cox-2表达较高.人胃癌组织caspase-3,Bcl-XL,Cox-2表达与胃癌组织学分级、Laurren分型、淋巴结转移、TNM分期密切相关,对判断胃癌预后可能具有重要价值.人胃癌组织caspase-3与Bcl-XL表达呈负相关,而Bcl-XL与Cox-2表达呈正相关.

胃癌组织血管内皮生长因子表达对胃癌生物学行为的影响

目的:研究胃癌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与胃癌生物学指征之间的关系以及对预后的影响.同时研究细胞增生核抗原标记指数(Ki67-LI)在胃癌中的意义.方法:选择有预后资料的胃癌术后患者77例,用免疫组织化学方法(二步法)检测胃癌组织中VEGF、Ki67的表达,综合分析上述指标的相关性以及与胃癌生物学行为和预后的关系.结果:胃癌细胞VEGF的表达与肿瘤大直径(P=0.011)、浸润深度(P=0.014)、淋巴结转移(P=0.017)、临床分期(P=0.001)相关,VEGF阳性组与阴性组Ki67-LI均值分别为562.8±118.3,436.82±142.2(P=0.0 005),具有显著差异.VEGF对预后有影响,阳性组预后较差.Ki-67-LI与淋巴结转移(P=0.027)、临床分期(P=0.020)以及预后(P=0.036)相关,Ki-67-LI高的胃癌容易发生淋巴结转移,进展快,恶性度高,预后差.结论:VEGF可以促进肿瘤血管生成,进而促进肿瘤细胞增生,对预后产生不利影响.Ki-67-LI与肿瘤临床生物学行为以及预后相关,反映了肿瘤的恶性进程.

D-氨基葡萄糖衍生物对人胃癌细胞系SGC-7901增生的影响

目的:观察D-氨基葡萄糖衍生物体外对人胃癌SGC-7901细胞增生的影响,探讨其可能作用机制.方法:采用MTT法,筛选药物作用佳浓度.用流式细胞仪分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构.免疫组化测定CD44表达.结果:D-氨基葡萄糖衍生物能明显抑制胃癌细胞的增长(P＜0.01),MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系,统计组间比较差异有显著性(P＜0.01);流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰;电镜观察到凋亡细胞的典型变化,免疫组化及光密度检测示CD44表达下降(216.5±7.0 vs 190.0±14.2,P=0.000).结论:D-氨基葡萄糖衍生物通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制人胃癌SGC-7901细胞增生,同时还有下调CD44的作用.

胃癌组织中uPA系统及VEGF表达与侵袭转移的关系

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活系统uPA,uPAR,PAI-1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法:采用免疫组化S-P法检测67例胃癌及癌旁组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白表达情况,同时结合临床生物学特征进行分析.结果:癌和癌周比较uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白阳性表达率明显升高(P＜0.01),阳性产物主要分布在癌细胞胞质中.侵及浆膜组阳性率明显高于未及浆膜组(P=0.000,0.014,0.016,0.000).uPA,uPAR蛋白在淋巴结转移组中的阳性率明显高于无淋巴结转移组(P=0.002,0.008).PAI-1蛋白在低分化组中的阳性率明显低于中分化和高分化组(P＜0.05).uPA,uPAR及VEGF蛋白阳性率在胃癌组织不同分化程度间差异无显著性.在胃癌组织中uPA,uPAR蛋白的表达呈显著正相关(r=0.653,P＜0.001).在uPA,uPAR蛋白同时阳性的41例病例中,有28例发生淋巴结转移,与阴性组(4/15)相比,转移发生率明显增高(P＜0.01).胃癌组织中uPA蛋白表达与VEGF表达显著正相关(r=0.300,P＜0.05).PAI-1蛋白表达与VEGF表达具有极显著正相关性(r=0.413,P＜0.01).应用COX回归模型进行多变量分析并采用向前逐步回归法,仅浸润深度、uPA表达和病理类型对淋巴结转移有影响.结论:uPA、uPAR、PAI-1及VEGF蛋白在胃癌组织中表达增强,uPA,uPAR与胃癌浸润转移密切相关.

世界华人消化杂志投稿细则(2005-03-01修订)