影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的因素

人乳头瘤病毒的基因表达与KC的增殖分化相互影响.近二十年来人们在如何体外重复两者之间的关系方面做了大量工作,但由于体外培养人乳头瘤病毒非常困难,因此有关实验多是采用体外培养的人乳头瘤病毒相关肿瘤细胞系作为研究对象.本文的内容包括(1)HPV相关细胞系体外培养的方法;(2)有关影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的细胞因子和药物,及其作用机理.

阿地福韦在慢性乙型肝炎治疗中的应用

核苷类似物在慢性乙型肝炎治疗中具有广阔的应用前景.阿地福韦(Adefovir)是核苷类似物的一种.在体外实验证实阿地福韦对体外培养的鸭肝细胞、人肝癌细胞系中的乙型肝炎病毒(HBV)的复制和表达具有显著的抑制作用.动物体内实验研究表明,阿地福韦对于体内的肝炎病毒的复制和表达也具有显著的抑制作用.I期临床试验研究表明,阿地福韦对于乙型肝炎病毒具有显著的抑制作用.在长期应用核苷类似物如拉米夫定等治疗的过程中,容易发生病毒基因的突变,从而产生抗药性.研究表明,阿地福韦不仅对于野生株具有显著的抑制作用,而且对于拉米夫定等的耐药病毒株也具有显著的抑制作用,提示阿地福韦可能是解决乙型肝炎病毒核苷类似物耐药问题的有效治疗办法.

重组蛋白及合成肽抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

由于HEV体外培养一直未获成功,以重组蛋白或人工合成肽作为抗原来检测抗-HEV已成为戊肝实验室诊断及流行病学调查的主要手段.本文从HEV抗原表位的研究、重组蛋白和合成肽在HEV感染诊断中的应用及其诊断学意义和存在的问题几个方面作一综述.

注射人绒毛膜促性腺激素与否对体外受精周期中改行未成熟卵体外培养结局的影响

目的 探讨不育患者在常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中改行未成熟卵体外培养(IVM),取卵前注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)与否对其实验室及临床结局的影响.方法 回顾分析2008年1月至2010年11月在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规IVF治疗的138个周期,在促排卵5～7d后,双侧卵泡数目≥20个,或用药8～13 d后,卵泡发育缓慢且两侧卵泡数目≥15个,大卵泡直径平均≤12 mm,根据患者意愿,停药改行IVM治疗,其中63个周期在取卵前12 h注射hCG(A组),75个周期未注射hCG(B组).比较两组的实验室及临床结局.结果 A组的卵成熟率(64.56%)显著高于B组(56.3%),但是平均获卵数(8.42±0.52)个低于B组(11.32±0.82)个,差异均有统计学意义(P<0.05).两组的受精率、卵裂率、移植率、临床妊娠率、流产率,多胎妊娠率比较均无统计学差异(P>0.05).结论 常规IVF周期改行IVM后可以获得良好的妊娠结局,取卵前注射hCG虽然可以提高卵子的成熟率,但并不能提高妊娠结局.

IVF-ET治疗中卵子体外培养不同时间受精对治疗结局的影响

目的:分析应用体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者取卵后的卵子于体外培养不同时间受精对临床结局的影响.方法:选择我院行IVF-ET治疗的84例患者为研究对象,共84个周期,常规取卵后根据卵子于体外培养时间的不同,随机分为甲(2-4h)、乙(4-6h)两组,比较不同时间受精对临床结局有何影响,并加以分析.结果:甲组患者平均获卵数(9.42±2.55)枚,乙组患者平均获卵数(9.31±2.52)枚,差异无统计学意义(P＞0.05);甲组正常受精率、正常卵裂率、临床妊娠率、流产率分别为72.97%、98.61%、57.14%、7.14%,乙组正常受精率、正常卵裂率、临床妊娠率、流产率分别为71.96%、97.54%、59.52%、4.76%,两组各观察指标数据比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IVF-ET治疗中采用短时IVF受精方案,卵子体外培养不同时间受精对受精率、正常卵裂率、临床妊娠率、流产率等方面治疗结局的影响不明显.

低评分胚胎的囊胚培养和移植结局

目的 探讨IVF/ICSI-ET中第三天(D3)低评分胚胎的囊胚培养和移植结局. 方法 将受精后第3天的低评分胚胎培养至囊胚期.比较不同卵裂球数的D3低评分胚胎囊胚形成情况;分析所获得的可移植囊胚进行玻璃化冷冻-解冻-移植后的临床结局. 结果 1.低评分胚胎可移植囊胚形成率30.85％;2.其中6-9细胞的胚胎囊胚形成率及可移植囊胚形成率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05);3.2012年2月至2014年4月共解冻所形成的可移植囊胚362枚,存活314枚,囊胚复苏率86.74％;共解冻225个周期,移植206个周期,囊胚移植后胚胎着床率为27.07％,生化妊娠率41.26％,临床妊娠率36.41％,流产率为24.0％,活产率26.70％.低评分胚胎组的胚胎着床率(27.07％ vs.44.44％)、生化妊娠率(41.26％vs.66.67％)、临床妊娠率(36.41％ vs.61.90％)、活产率(26.70 vs.47.62％)均低于优质胚胎组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 卵裂期低评分胚胎仍有可能获得妊娠及活产儿.将卵裂期低评分胚胎用于囊胚培养,可提高胚胎利用率.对于无优胚移植或者移植优胚仍未受孕的患者,可选择移植来源于低评分胚胎的囊胚.

精原细胞体外培养的研究进展

精原细胞包括未分化型精原细胞和分化型精原细胞.通过体外培养精原细胞,重现精子发生过程,在发育生物学、生命起源和生育控制等领域具有重要意义；通过精原干细胞的体外培养,利用其多能性,诱导其产生多种组织类型的细胞,将是再生医学研究领域的热点,本文拟就精原细胞体外培养的影响因素作一综述,旨在为精原细胞体外培养体系的建立提供借鉴.

抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响

目的 研究抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响,为进一步优化卵母细胞体外成熟培养体系提供理论依据. 方法 对照组采用基础体外培养液,共培养101枚GV期小鼠卵母细胞;实验组采用基础体外培养液+0.6 mmol/L半胱氨酸,共培养115枚GV期小鼠卵母细胞.观察两组卵母细胞的成熟率、谷胱甘肽的含量和线粒体内膜电位. 结果 对照组和实验组卵母细胞的成熟率分别为68.3％和80.0％,差别具有统计学意义(P＜0.05)；对照组和实验组卵母细胞平均谷胱甘肽含量分别为0.48±0.6 μg/L和0.51±0.5 μg/L,实验组谷胱甘肽含量略高,但两者无统计学差异(P＞0.05).线粒体内膜电位,对照组与实验组分别为0.04±0.003 △Ψm与0.39±0.020△Ψm,实验组线粒体内膜电位明显高于对照组(P＜0.05). 结论 抗氧化剂半胱氨酸对体外培养小鼠卵母细胞成熟有一定的促进作用,并可能会提高卵母细胞的发育潜能.

褪黑素对老化卵母细胞体外发育能力的改善效果评价

目的 探讨体外培养阶段(IVC)添加褪黑素(MT)对卵母细胞老化引起发育受损的改善效果. 方法 采用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理小鼠MII期卵母细胞诱导老化,浓度分别为0(对照组)、10、50、100、150 μmol/L,体外受精(IVF)后统计各组二细胞率、囊胚形成率,检测老化卵母细胞的线粒体活性及丰度(Mitotracker Red、JC-1)、活性氧(ROS)水平、线粒体拷贝数等指标;在100 μmol/L H2O2处理条件下,老化卵母细胞在IVF后的培养阶段分别添加不同浓度褪黑素(10-5、10-7、10-9 mol/L),统计二细胞率、囊胚率,并且分别检测各组获得囊胚的细胞数及凋亡率. 结果 不同浓度H2O2诱导卵母细胞老化后,囊胚发育率随H2O2浓度的升高而降低,50 μmol/L和100 μmol/L H2O2组囊胚形成率分别为(26.27±0.06)%和(28.46±3.45)%,相比对照组的(34.90±1.77)%显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);在H2O2诱导老化卵母细胞中,100 μmol/L、150 μmol/L H2O2浓度时,ROS水平相比对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而活性线粒体的丰度及拷贝数呈现下降趋势,膜电位呈上升趋势,但相比对照组无显著性差异(P>0.05);100 μmol/L H2O2处理诱导卵母细胞老化后,在培养液中添加10-9 mol/L褪黑素组与老化对照组相比,囊胚率[(29.42±2.39)% vs. (20.87±4.12)%]、囊胚细胞数(39.36±9.78 vs. 37.91±4.25)均显著升高,凋亡率显著下降(2.57% vs. 3.18%),差异均有统计学意义(P<0.05);并且这些指标均达到与未经老化处理组的相似发育水平. 结论 老化卵母细胞体外受精后发育率和发育质量偏低的现象,可以通过在受精后体外培养阶段添加褪黑素得到改善.

小鼠致密化前胚胎卵裂球体外培养体系的研究

目的 探索改善小鼠致密化前胚胎卵裂球体外发育能力.方法 用酶消化与机械法结合分离小鼠2-、4-、8-细胞胚胎卵裂球为单个卵裂球及2/4、4/8多卵裂球胚胎,并将其装入空透明带后于兽用人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后138 h,观察透明带包裹、胚胎密度及胰岛素(Ins)、葡萄糖(Glu)添加对各卵裂球、囊胚形成率及囊胚细胞数目的影响.结果 透明带包裹提高了2-细胞胚胎卵裂球来源的单腔囊胚的发育率.25/50μl胚胎密度及培养基添加Ins、Glu能显著提高2-细胞胚胎卵裂球囊胚发育率和囊胚细胞数;且对4-和8-细胞胚胎卵裂球发育具有同样的促进作用.结论 采用透明带包裹、卵裂球密集培养、培养基添加Ins、Glu的方法成功建立了一种维持致密化前胚胎卵裂球体外高效发育的培养体系.其中,透明带在卵裂球发育中具维持囊胚正常形态作用,避免了多腔囊胚的形成;卵裂球密集培养和培养基添加Ins、Glu均提高囊胚形成率和(或)囊胚细胞数目.该体系有效改善了致密化前胚胎卵裂球体外发育质量.

小鼠慢性连续取卵及孤雌激活后发育

小鼠是生命科学研究中为重要的实验动物之一.许多模型首先在小鼠中建立或只在小鼠中获得成功.例如胚胎干细胞系的建立[1,2],生长素转基因模型[3]以及体细胞克隆治疗模型[4].通常情况下,经过超促排卵处理或未经处理的雌鼠仅在处死后取1次卵.至今还未见到有关在小鼠活体取卵的报道.本研究旨在建立一种可重复从同一个体小鼠收集卵母细胞或受精卵的方法.

体外培养人卵母细胞不同发育阶段原癌基因c-mos的表达

成熟促进因子(MPF)和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是调节卵母细胞细胞周期的关键分子,二者的激活和失活导致了减数分裂的恢复、阻滞和完成.许多蛋白激酶通过调节MPF和MAPK活性来影响减数分裂.其中,c-mos激活脊椎动物卵母细胞的MAPK,从而启动成熟分裂并维持中期阻滞[1].

激素替代治疗解冻移植周期中体外培养时间对卵裂期胚胎移植临床结局的影响

目的 研究体外培养时间对激素替代治疗-冻融胚胎移植(HRT-FET)周期中解冻优质卵裂期胚胎临床结局的影响. 方法 回顾性分析2016年1月1日至2017年12月31日期间在我院生殖中心实施HRT-FET助孕治疗的270个周期的临床资料.根据解冻后不同的体外培养时间分为两组:正常解冻组(168个周期):移植当天早上解冻,解冻后体外培养2～3 h移植;提前解冻组(102个周期):移植前1d解冻,体外培养17～18 h后移植.比较两组患者的临床妊娠率、种植率、早期流产率. 结果 两组患者的女方年龄、不孕年限、体重指数(BMI)及子宫内膜厚度等一般资料比较均无显著性差异(P＞0.05).提前解冻组与正常解冻组的临床妊娠率(58.82％vs.58.33％)、胚胎种植率(38.73％ vs.39.58％)、早期流产率(11.67％ vs.9.18％)比较均无显著性差异(P＞0.05). 结论 HRT-FET周期中,延长解冻后优质卵裂期胚胎的体外培养时间不能显著改善临床结局.

硫酸镍对体外培养小鼠精原细胞的损伤作用

目的 初步探讨硫酸镍(NiSO4)对小鼠精原细胞的毒作用.方法 采用MTT、分光光度法和透射电子显微镜分别检测NiSO4,浓度为0、25、50、100、200、400和800μmol/L,染毒6、12、24和36 h对体外培养小鼠精原细胞的增殖、乳酸脱氢酶(LDH)活力及其超微结构的影响.结果 NiSO4显著抑制体外培养小鼠精原细胞的增殖,且存在剂量/时间依赖性(r=1,P＜0.01).50 μmol/L NiSO4染毒24和36 h,100、200、400和800 μmol/L NiSO4染毒6、12、24和36 h时,精原细胞悬液LDH活力显著低于对照组(P＜0.05),并呈剂量/时间依赖性(r=-1,P＜0.01).此外,NiSO4还可引起小鼠精原细胞超微结构改变,主要表现为细胞皱缩、胞内出现空泡,细胞膜和核膜破裂,细胞器模糊不清等现象,特别是NiSO4浓度在200μmol/L以上变化更明显.结论 NiSO4对体外培养的小鼠精原细胞具有明显毒作用.

两种镍化合物在体外对免疫细胞功能作用的研究

多年来,关于镍作业人员癌症流行病学调查及实验致癌研究结果证实,镍及某些化合物可诱发多种癌症[1～3].这一结果早已被人们所重视,并且通过进一步对镍的诱癌机理的研究,多数认为镍可使细胞核DNA损伤,从而引起细胞突变.关于镍对机体免疫功能的影响,Smialowicz[4]通过实验研究表明,镍可使小鼠的天然杀伤(NK)细胞功能降低.我们从机体免疫系统特有的抗肿瘤功能角度,观察了两种镍化合物对体外培养的免疫细胞功能的影响,以探讨镍化合物的免疫毒性,并为镍致癌机理的研究提供必要的依据.

锌缺乏和锌过量对小鼠胚胎长骨发育的影响

锌是维持人和动物正常生命活动不可缺乏的必需微量元素之一,许多实验证明锌缺乏可引起骨骼的生长迟缓,但锌过量对骨的毒性作用报道较少[1～4].采用小鼠胚胎长骨体外培养,研究锌缺乏和锌过量对骨发育的影响,为阐明锌影响骨发育的机理积累资料,为合理指导使用锌强化食品以及发挥锌的合理营养作用提供依据.

胚胎移植法在生殖发育毒理学中的应用

随着环境致畸物种类、数量的增多,使生殖毒性检测技术迅速发展起来[1].在研究内容上,由单纯致畸实验发展到其他雌、雄性生殖毒性实验[2];在研究手段上,由整体动物实验扩大至离体器官、细胞培养[3];在研究水平上由细胞水平发展到分子水平[4,5].胚胎移植技术的建立和成熟使生殖毒理学检测技术又上了一个新的台阶.

大鼠卵巢颗粒细胞培养及分泌产物测定条件的研究

女性生殖系统具有复杂的解剖结构和生殖周期,卵巢是外源性化学物一个特有的靶器官.许多内分泌干扰物通过损害卵巢功能导致女性生殖器官和功能异常,给人类造成极大的健康危害.

评价前庭功能的整体动物模型/壬基酚对体外培养大鼠Setoli细胞的毒性作用/影响阿片催促戒断反应的实验条件

小鼠腔前卵泡体外培养方法的建立

目的 建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法.方法 采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将体外卵母细胞的成熟情况(IVG)与体内卵母细胞的生长情况(IVM)进行比较,以判断体外培养方法是否成功.结果 分离完整卵泡率为89.74%(376/419);培养12天卵泡存活率为96.81%(364/376),有腔形成率为48.94%(184/376);卵泡和卵母细胞直径显著增加.诱导排卵后卵丘细胞-卵母细胞复合体排出率为56.38%(212/376);培养卵泡经历从腔前卵泡到卵母细胞成熟和极体排出的形态学变化,也有部分卵泡不发生腔样结构改变.体外培养卵泡分泌E2和P激素与体内分泌特征一致.IVG组4.61%(10/217)卵母细胞不能恢复成熟[停止在生发泡期(GV期)],76.50%(166/217)停止减数分裂在生发泡破裂期(GVBD期),18.89%(41/217)卵母细胞停止在第2次减数分裂(MII期)(PB);而IVM组1.24%(3/241)的卵母细胞不能恢复成熟(停止在GV期),45.23%(109/241)停止减数分裂在GVBD,53.53%(41/241)卵母细胞停止在MII期(PB);卵母细胞染色体核型完整,无染色体数目和结构异常.结论 本研究建立的小鼠腔前卵泡体外培养方法基本成功,可作为卵泡发育生理研究和毒理学研究的模型.