应用SELDI-TOF-MS技术建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型

目的:建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型.方法:用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得新发肝癌、肝硬化患者和正常人血清的蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立肝癌的筛选模型.结果:肝癌患者与健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白(4477,8943,5181,8617,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,肝癌患者与肝硬化患者血清蛋白质指纹图谱之间2个标志蛋白(4477,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白(4097 Da)在肝癌患者血清中低表达.SELDI-TOF-MS技术的特异性(60/60,100%);敏感度(18/20,90%).分析系统筛选出4477,8943,13 761,4097 Da标志蛋白建立的肝癌诊断模型.结论:建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分肝癌与非肝癌患者,SELDI-TOF-MS在肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值.

肝转移介入治疗前后CT容积测量的价值

目的:比较一维、二维CT和容积测量三种方法测量肝转移介入治疗的效果.方法:22例肝转移的患者,在介入治疗前和术后3 mo行螺旋CT扫描.在CT工作站分别按一维和二维测量横断层面的全部病灶.用容积测量技术去追踪测量每个病灶,将每个病灶的总和归类于全效、部分有效、病变进展、病变稳定.结果:在22例肝转移介入治疗前后一维与二维测量符合率达95.5%(21/22),但容积测量8例与一维测量不符,6例与二例测量不符.4例一维和二维测量结果均为部分有效,而容积测量结果为病变稳定.2例一维和二维测量病变稳定者,容积测量则为部分有效.甚至有2例一维、二维测量为病变进展者,容积测量仍为病变稳定.结论:在肝转移瘤介入治疗前后,肿瘤容积测量结果在大多数患者与一维、二维测量结果不一致.若要证实容积测量的优势,还需要大样本的临床对照研究.

超细胃镜在食管金属支架置放中的作用

目的:观察超细胃镜在食管金属支架放置中的作用.方法:对13例晚期食管/贲门癌(其中1例伴食管-气管瘘)及1例贲门失弛缓并吞咽困难患者应用Fuiinon EG-270N5超细电子胃镜进行金属支架放置.术中对狭窄预扩张至9 mm,计算并控制输送器插入深度以及胃镜直视下调节输送器内支架上端位置以保证放置位置准确,全程无X线监控.观察支架放置成功率、定位准确性,扩张效果以及并发症情况.结果:全部患者支架一次性放置成功,定位准确;自膨满意,狭窄处内径由2.73±3.18 mm扩至13.65±1.66 mm,食管气管瘘被覆盖阻断.吞咽困难评级由3.15±0.68降至0.91±0.49.结论:单纯超细胃镜下食管金属支架放置术患者依从性好;方法简便、准确、安全、有效.

人骨髓来源多能成体祖细胞ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞的分化

目的:探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPCs)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性.方法:(1)间接共培养:将第4代ZHJ-MAPCs和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养.分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPCs的ALB、AFP、CK-18、CK-19等肝细胞特征性表型表达情况,并设阳性对照和阴性对照,计数阳性细胞比率;(2)直接共培养:将CFSE荧光(绿色)标记的第4代ZHJ-MAPCs与L02(密度均为1×107/L)按照各50%比例混合行直接共培养.5 d后用SABC-Cy3免疫荧光(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPCs表达ALB,AFP,CK-18的情况.同样设阳性对照和阴性对照.结果:(1)间接共培养:AFP在ZHJ-MAPCs间接共培养第1天即表现为强阳性,随后表达逐渐减弱.ALB在共培养第1天有可疑阳性,第3天出现较强的阳性,第5天达到高峰.CK-18在培养第1、3天检测均为阴性,至第5天开始出现阳性,第7天表达较前增强.CK-19在各时间点均为阴性着色.(2)直接共培养:胞质内呈黄色荧光ALB和CK18的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPCs在共培养5 d时出现较多,而AFP阳性表达则仅出现在极个别细胞,该结果与阳性对照细胞荧光表达类似.结论:人骨髓来源的ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化,且直接共培养有提前趋势.

原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响.方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2/pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定.将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-772l细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测.结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2/pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3.5%,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10.7%,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11.0%,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P＜0.05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-7721细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡.结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡.

重组腺病毒Ad-IкBαM在5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究重组腺病毒Ad-IκBαM对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导胃癌细胞凋亡的作用情况,进而研究胃癌细胞抵抗5-FU的机制.方法:培养胃癌SGC-7901细胞,感染重组腺病毒Ad-IκBαM的细胞为实验组,感染Ad-IκBα及非感染的空白对照为对照组,以5 mg/L5-FU加入上述各组细胞,采用EMSA法检测5-FU处理后各组细胞内NF-κB激活情况;应用MTT和TUNEL法分别检测5-FU对各组细胞诱导凋亡的情况.结果:5-FU作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad-IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制.MTT法证明,5-FU作用后,感染Ad-IκBαM细胞的凋亡(56.36%±0.60%)较感染Ad-IκBα组(47.50%±1.42%)及未感染组(42.95%±1.27%)明显,各组间比较有统计学差异(P＜0.001);TUNEL法结果与MTT相符,感染Ad-IκBαM组的凋亡率为29.7%±2.5%,明显高于感染Ad-IκBα组(20.0%±2.6%)及未感染组(12.3%±1.1%)(P＜0.01).可见,感染Ad-IκBαM可明显提高5-FU诱导的细胞凋亡.结论:感染Ad-IκBαM可通过抑制胃癌细胞NF-κB的活性增强5-FU的诱导凋亡作用.

调节性T细胞在肝脏免疫及疾病中的作用

免疫抑制是控制免疫系统稳定的一种重要机制.调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)控制着免疫系统对自身抗原的免疫耐受,具有强大的抑制免疫反应能力,广泛参与了各种免疫抑制现象.随着对Tregs研究的不断深入,人们发现Tregs参与调节了肝脏免疫耐受、肝移植、慢性肝炎和肝癌等各种肝脏病理生理现象.Tregs的功能异常也会影响肝脏多种疾病的进程.我们总结了调节性T细胞的相关进展及其在肝脏免疫及疾病中的作用.

肿瘤中胰岛素样生长因子Ⅱ基因印记及其丢失的机制

基因组印记(genomic imprinting)是目前肿瘤医学领域研究的新热点,印记基因胰岛素样生长因子Ⅱ基因(insulin-like growth factor 2,IGF2)与肿瘤相关性的研究也逐渐显现其参与肿瘤的发生、发展过程.IGF2是早发现的印记基因之一,对个体的生长发育起着重要的作用.近年发现大多数恶性肿瘤中都存在该基因的印记丢失所致的IGF2高表达现象,且IGF2印记丢失可以作为大肠癌等肿瘤发生危险性的分子标记,但肿瘤中IGF2印记形成和丢失的机制尚不清楚,本文将从等位基因差异性甲基化区域(differentially methylated region,DMR)甲基化状态、绝缘蛋白CTCF(CCCTC-binding factor)结合能力及BORIS (brother of the regulator of imprinted sites)共同参与印记形成几个方面,阐述肿瘤中IGF2印记形成及其印记丢失的可能机制.

多层螺旋CT成像技术在急腹症中的应用

影像学检查是诊断急腹症的重要手段.电子计算机断层(computed tomography,CT)对腹部解剖和病变的准确显示,越来越体现出其优越性,而多层螺旋CT具有快速螺旋扫描和三维后处理能力,显著提高了图象质量和显示细微结构的能力,尤其是其新的成像技术:多平面重建、大密度投影、曲面重组法等的出现,在急腹症的诊断上体现了巨大的优势.

Ghrelin与胃肠运动

胃肠运动障碍性疾病(功能性消化不良、肠易激综合征等)是一类临床常见病,临床上以腹胀、早饱、恶心、呕吐、腹泻、便秘等症状为主要表现,严重影响了患者的生活质量.Ghrelin为一种生长激素促分泌剂(GHSs)受体的内源性配体.目前新的研究表明,Ghrelin除在摄食与能量代谢、心血管功能等方面具有调节作用外,还具有调控胃肠分泌、运动等功能.本文就Ghrelin对胃肠运动的调节作用作一综述.

噪音避水应激中心理因素对大鼠免疫功能的影响

目的:探讨噪音联合避水应激中的心理因素对大鼠免疫功能的影响.方法:成年♂ SD大鼠32只,随机分为实验A,B,C组和对照组.A组大鼠接受避水应激,B组接受噪音应激,C组接受噪音避水复合应激.应激结束后,检测所有大鼠肠系膜淋巴细胞增殖反应和外周血NK细胞杀伤功能.结果:以B淋巴细胞为主的淋巴细胞增殖实验及以T淋巴细胞为主的淋巴细胞增殖实验结果均显示,避水组与对照组淋巴细胞刺激指数无明显差异(P＞0.05);噪声组的增殖指数低于对照组(LPS:0.71±0.11 vs 1.00±0.00,P＜0.05;PHA:0.68±0.08 vs 1.00±0.00,P＜0.05);复合应激组刺激指数明显低于对照组(LPS:0.4±0.05 vs 1.00±0.00,P＜0.01;PHA:0.46±0.06 vs 1.00±0.00,P＜0.01),且与噪声组也存在差异(LPS:0.4±0.05 vs 0.71±0.11,P＜0.05;PHA:0.4±0.05 vs 0.68±0.08,P＜0.05).避水组与对照组的NK细胞杀伤活性无明显差异(P＞0.05);而噪声组NK细胞杀伤活性低于对照组(1/10:24.6±11.6 vs 39.5±13.1,P＜0.05;1/20:21.8±9.6 vs 34.6±10.4,P＜0.05;1/40:17.8±7.9 vs 30.2±10.6,P＜0.05);复合刺激组NK细胞杀伤活性明显低于对照组(1/10:17.6±8.3 vs 39.5±13.1,P＜0.01;1/20:14.9±5.8 vs 34.6±10.4,P＜0.01;1/40:10.2±4.3 vs 30.2±10.6,P＜0.01),且与噪声组也存在差异(1/10:17.6±8.3 vs 24.6±11.6,P＜0.05;1/20:14.9±5.8 vs 21.8±9.6,P＜0.05;1/40:10.2±4.3 vs 17.8±7.9,P＜0.05).结论:应激导致大鼠免疫功能下降,噪音联合避水应激中的心理因素对大鼠免疫系统抑制起一种潜在的作用.

lactulose和glutamine对梗阻性黄疸大鼠空肠黏膜的影响

目的:研究梗阻性黄疸时空肠黏膜的变化及lactulose和glutamine对梗阻性黄疸大鼠空肠黏膜的影响.方法:Wistar大鼠84只,随机分为4组.通过手术结扎切断大鼠胆总管得到梗阻性黄疸模型.对梗阻性黄疸大鼠分别经胃灌注lactulose和glutamine药物,比较给药前及给药后5,10 d各组大鼠空肠黏膜绒毛高度变化,同时与未行胆管结扎的假手术对照组进行比较.结果:无论胆总管结扎与否,给药前各组空肠黏膜的绒毛高度无明显差异.胆总管结扎后大鼠空肠黏膜高度减低(5 d:q=4.32,P＜0.01;10d:q=11.03,P＜0.01);应用生理盐水组大鼠的空肠黏膜绒毛高度明显低于应用lactulose和glutamine组大鼠的空肠黏膜绒毛高度,且应用glutamine组与胆总管未结扎组相近(5 d:q=3.62,P＞0.05;10 d:q=3.83,P＞0.05);而应用lactulose和glutamine的2组大鼠空肠黏膜绒毛高度无明显差异(P＞0.05).结论:结扎大鼠胆总管可导致其空肠黏膜萎缩.经胃肠道应用lactulose或glutamine对胆道梗阻所致的大鼠空肠黏膜萎缩均具有保护作用,且二者对肠黏膜的保护作用无明显差异.

GABA对胰腺癌细胞株SW1990生长的影响

目的:观察γ-氨基丁酸(GABA)对胰腺癌SW1990细胞生长的影响.方法:采用MTT法和流式细胞术检测GABA对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量.结果:不同浓度的GABA(20-320μmol/L)促进胰腺癌SW1990细胞的生长,促进细胞周期比例的分布,使G0/G1细胞减少,S期和G2/M细胞增多,同时促进胰腺癌SW1990细胞内cAMP含量的增加,且呈剂量依赖性(P＜0.01).显著抑制细胞凋亡,凋亡率由27.4%降低到5.4%(x2=10.19,P＜0.01).结论:GABA促进胰腺癌SW1990细胞生长,可能通过受体后信息介导.

山东省胃癌高发区人群胃黏膜肠化的预后与标记物表达

目的:在山东胃癌高发区人群中观察增生型和普通型肠化的预后转归,结合分子标记物的检测比较其进展为异型增生或胃癌的危险性.方法:采用前瞻性研究方法,分析增生型和普通型肠化进展为异型增生或胃癌的危险性.进展组(n=27)的肠化病变选自1992-2001年对山东胃癌高发区的随访研究,对照病例(n=60)随机选自无进展的肠化病变.根据Padova国际分型,将所选肠化病变重新分为增生型和普通型.用免疫组化法检测pS2,MUC5AC,MUC6,Ki-67在不同肠化病变中的表达.结果:增生型肠化进展为异型增生或癌的危险性为普通型肠化的7.23倍(95%CI2.59-20.20).MUC5AC,pS2与肠化进展为异型增生或胃癌的危险性呈负相关,OR值分别为0.27(95%CI 0.10-0.73),0.33(95%CI0.12-0.90).Ki-67标记指数在进展组中明显高于未进展组(28.5%±14.3% vs 16.4%±9.8%,P＜0.01).MUC5AC表达阴性的增生型肠化进展为异型增生或胃癌的危险性上升为10.40倍(95%CI 2.99-36.21).MUC6的表达在进展组中略高于未进展组(OR=1.56,95%CI 0.53-4.60),但差异无统计学意义.结论:增生型肠化进展为异型增生或胃癌的风险明显高于普通型肠化.肠化病变的病理分型如同时结合Ki-67,MUC5AC,pS2等分子标记物的检测,将有助于评估其预后转归.

食管鳞癌癌细胞Survivin蛋白及其体视学参数的测定

目的:探讨凋亡抑制因子Survivin在食管鳞癌(ESC)组织中的表达及其肿瘤细胞进行体视学分析.方法:应用免疫组织化学SP法检测52例不同分化食管鳞癌Survivin蛋白的表达,运用图像分析系统在显微镜下测量Survivin阳性肿瘤细胞的体视学参数,依据有关体视学公式计算出参数核的体密度(Vvn)、核的表面积密度(Svn)、核的平均体积(V)、核的平均表面积(S)、核的平均自由程(λ)、核的数密度(Nv)、核的平均曲度密度(Kv),比较这些参数在不同分化肿瘤的差异.结果:Survivin蛋白在ESC组织中阳性表达率为57.7%,其表达越强,组织分化程度越低(χ2=6.1099,P=0.0471).参数Vvn,Svn,V,S的大小是依高、中、低分化的顺序增加,而Kv,Nv,λ依高、中、低分化的顺序减小,其中Vvn(F=3.8368,P=0.0342),Svn(F=3.7143,P=0.0376)参数有显著性差异(P＜0.05).结论:ESC组织Survivin蛋白的表达与其分化程度有密切关系,肿瘤细胞Vvn,Svn参数是肿瘤细胞分化重要指标,且为临床形态学诊断提供了依据.

DNA损伤修复基因hOGG1的遗传多态与乙肝相关性HCC的风险

目的:探讨DNA损伤修复基因hOGG1的遗传多态Ser326Cys与肝细胞癌(HCC)易感性的关系.方法:应用基因测序分型方法,分析96例HCC患者和96例健康对照hOGG1的遗传多态及与HBV感染的交互作用.结果:HCC病例组的Cys/Cys,Cys/Ser和Ser/Ser基因型分别为20.9%,44.2%和34.9%.Ser/Cys杂合子个体的OR值为1.5,Cys/Cys纯合子个体的OR值为1.9,明显高于Ser/Ser个体,表现出剂量效应.HBV感染者发生HCC的相对风险度是非HBV感染者的9倍(OR=9.2;95%CI0.99-5.9).对于HCC,hOGG1-Ser326Cys变异或HBV感染单一因素的OR值分别为5.5(95%CI 0.7-240.1)和10.9(95%CI1.6-453.3),但携带变异基因者如果感染HBV,OR值则高达27.8(95%CI4.7-970.2).结论:DNA修复基因hOGG1的Cys等位基因可能增加HCC的遗传易感性,他与HBV协同在乙肝相关性HCC的发生中起着重要作用.

世界华人消化杂志现状及未来发展的目标

0 引言<世界华人消化杂志>创刊于1993-01-15,原刊名<新消化病学杂志>,1999-03-25经国家科学技术部和国家新闻出版总署批准更名为<世界华人消化杂志>.<世界华人消化杂志>综合介绍消化病学前沿基础与临床研究的发现,覆盖消化病学领域中经临床实验证明的技术进展.经历了近14 a的发展,本刊在以下几个方面取得了长足的进步.

肝纤维化的发生机制与治疗进展

肝纤维化是各种致病原因引起细胞外基质(ECM)在肝内过多沉积的病理过程.在细胞和分子发病机制方面的研究显示,细胞因子作用于窦周间隙静止的肝星状细胞(HSC)使其转变为激活状态,继而增殖,合成ECM.因此认为激活的HSC是产生ECM的主要细胞,其他如肝静脉区成纤维细胞和骨髓源性肌成纤维细胞也是某些肝纤维化初期的主要纤维原性细胞.目前认为,进展性肝纤维化具有可逆性.药物旨在通过抑制HSC的激活、诱导其凋亡和防止ECM沉积的干预性治疗在实验性肝纤维化已取得疗效,但人类抗肝纤维化的有效性和安全性有待于进一步研究和论证.

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