世界华人消化杂志
World Chinese Journal of Digestology 세계화인소화잡지
- 主管单位: 华人消化杂志;新消化病学杂志
- 主办单位: 山西省科学技术厅
- 影响因子: 0.00
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 14-1260/R
- 国内刊号: 李军亮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失
目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃黏膜组织、38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT基因启动子的甲基化状况,用免疫组化方法检测MGMT蛋白的表达情况.结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组织存在MGMT基因启动子甲基化,正常胃黏膜组织均不存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织MGMT蛋白失表达,其中7例(70.0%)存在启动子甲基化.胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺失存在显著联系(P<0.001).结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失,可能是胃癌发生的重要途径之一.
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L-精氨酸对酒精性肝脂肪变大鼠肝组织NOS表达及氧应激的影响
目的:探讨L-精氨酸对酒精性肝脂肪变大鼠肝组织NOS表达及氧应激的影响.方法:采用在饮水中力A酒精的方法建立酒精性肝脂肪变动物模型.32只SD大鼠随机分成4组,每组8只.A,B组分别喂饲400 mL/L乙醇至16,20 wk;C组喂饲乙醇同B组,自17 wk起腹腔注射L-精氨酸;D组为正常对照组.B,D组自17 wk起腹腔注射等量的生理盐水.应用免疫组化和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测肝组织中NOS的蛋白和mRNA表达,同时测定肝组织中NO,MDA,GSH,SOD含量,并观察肝组织病理变化.结果:A,B组肝组织出现了不同程度脂肪变性,B组更为显著(t=76.5,P<0.05).与D组相比,A,B组肝组织中NO,MDA含量、iNOS表达明显增高(P<0.01);GSH,SOD含量、eNOS表达明显降低(P<0.05).与B组相比,C组肝组织脂肪变性被逆转或明显减轻(t=62.5,P<0.05),NO含量无显著改变,MDA含量、iNOS表达明显降低(P<0.05);GSH,SOD含量及eNOS表达明显升高(P<0.05).结论:L-精氨酸对酒精性肝脂肪变的治疗作用可能与iNOS表达降低、eNOS表达升高以及氧应激减轻有关.
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实验性大鼠肝纤维化TGFβ1及其受体mRNA与Smad3,7的表达
目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子pl(TGFβ1)及其Ⅰ,Ⅱ型受体(TGFR)、Smad3、Smad7的定位及表达.方法:将24只大鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组大鼠予以40%四氯化碳皮下注射8 wk后处死.RT-PCR检测肝组织TGFβ1,TGFR Ⅰ与TGFRⅡ;免疫组化技术检测TGFβ1,Smad3,Smad7在肝脏的表达及细胞内的定位;放射免疫方法检测透明质酸,肝组织病理检查.结果:与正常组大鼠比较,RT-PCR显示模型组大鼠肝内TGFβ1、TGFR Ⅰ与TGFRⅡmRNA表达明显增高;免疫组化结果显示TGFβ1与Smad3表达增加,而Smad7的表达降低,TGFβ1与Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞质,Smad7主要在肝细胞质表达(正常组与模型组大鼠TGFβ1、Smad、Smad7平均光度分别0.61±0.33与1.57±0.53,0.248±0.042与0.785±0.904,4.674±1.143与0.470±0.097,P<0.05);模型组大鼠血清透明质酸水平明显增高(正常组大鼠78.4±19.2 μg/L,模型组263.2±107.0 μg/L,P<0.01),肝组织HE染色支持肝纤维化改变.结论:肝内TGFβ1,TGFR Ⅰ,TGFRⅡ,Smad3表达增强、Smad7表达减弱,提示TGFβ1及其受体与Smad信号通道蛋白参与了肝纤维化的发生发展,可作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一.
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大鼠胃电节律失常模型胃肌间Cajal间质细胞含量的变化
目的:观察胃电节律失常大鼠模型中胃肌间Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)含量的变化,以探讨该模型病理机制,为今后的研究奠定基础.方法:采用不规则喂养法制备大鼠胃电节律失常模型,用免疫组化法检测其胃肌间c-kit阳性ICC含量的变化.结果:胃电节律失常模型大鼠的胃肌间c-kit阳性ICC含量比正常对照组明显升高(P<0.001).结论:张氏大鼠胃电节律失常模型中作为起搏细胞的ICC的增加,可能导致异常的胃电起搏点的增加,从而引发胃电节律失常.
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生长激素对短肠综合征鼠残存肠道代偿及吸收功能的影响
目的:观察在肠内营养(EN)条件下不同剂量生长激素(GH)对短肠大鼠残存肠道代偿性增生和吸收功能的影响.方法:40只SD♂鼠,切除85%以上小肠制成短肠综合征(gBS)模型,随机分成假手术组(n=8)、SBS组(n=8)、大剂量GH(H-GH)组(n=8)、中剂量GH(M-GH)组(n=8)和小剂量GH(L-GH)组(n=8).GH注射剂量:H-GH组每日7.5IU/kg,M-GH组每日3.75 IU/kg,L-GH组每日1.88 IU/kg,从术后2-15 d每日2次皮下注射GH;假手术组和SBS组注射等量生理盐水.术后16 d取残留小肠、结肠作组织学检查,测血浆血糖、氨基酸、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和免疫组化法测定肝PCNA.结果:除假手术组外,其余各组术后体质量均明显下降,H-GH组体质量下降幅度小,与SBS组相比存在显著差异(36±4.4 g vs 94±10.0 g,P<0.05).各组术后空、回肠长度无显著差异,但各组空、回肠黏膜厚度差异显著,H-GH组和M-GH组显著大于SBS组(分别为997±65.9 μm,752±79.3μm和974±67.6μm,788±75.1 μm vs 776±61.0 μm,664±64.0 μm,P<0.05),同样,各组空、回肠肠壁厚度也差异显著,H-GH组和M-GH组也显著大于SBS组(分别为1142±65.4μm,884±91.2μm和1145±78.7μm,895±95.6μm vs 848±194.7μm,776±57.5μm,P<0.05),但H-GH组和M-GH组的空、回肠黏膜和肠壁厚度均无显著差异.能全力推注1.5 h后各组血氨基酸、葡萄糖浓度无显著差异.各组血IGF-1浓度和肝PCNA无显著差异.结论:GH可减缓体质量下降幅度;能促进肠黏膜代偿性增生,但其促进增生的作用并不始终随GH的剂量增加而增加;未促进葡萄糖和氨基酸吸收.
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原代培养大鼠肝细胞的基因转染
目的:研究原代培养大鼠肝细胞的基因转染的方法.方法:采用胶原酶灌注法获取原代培养大鼠肝细胞.利用脂质体转染法将含有绿色荧光蛋白(GFP)和Neo基因的真核细胞表达载体(pEGFP-N3)转染原代培养大鼠肝细胞.用荧光显微镜观察和Neo基因原位杂交染色方法检测肝细胞内基因表达情况.结果:获取的原代大鼠肝细胞活细胞率达95%.荧光显微镜下观察可见转染基因的细胞可发出绿色荧光,原位杂交显示有Neo基因的表达.结论:pEGFP-N3基因可转入大鼠肝细胞并获得表达,可用于标记原代培养的大鼠肝细胞,有利于研究肝细胞移植后移植的肝细胞在体内的分布及功能.
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铁剂诱发大鼠肝纤维化的组织学变化
目的:探讨饮食中铁过载诱导肝组织纤维化形成的组织学变化.方法:采用♂SD大鼠,在饮食中适量添加铁,共饲喂9wk,然后处死动物,收取肝组织,分别在石蜡切片和透射电镜下观察肝组织损害、肝窦毛细血管化和窦周纤维化形成以及Ⅰ、Ⅳ型胶原和Laminin的分布情况.结果:铁剂组大鼠可见肝细胞凝固坏死,星状细胞活化,肝窦毛细血管化和轻微窦周纤维化,Ⅰ型胶原和laminin含量增多,中央静脉基底膜增厚.结论:饮食中铁过载持续一定时间可损害肝细胞,激活肝星状细胞,减少窦内皮细胞的窗孔,导致肝窦毛细血管化和窦周肝纤维化,故酒精性肝病造模可考虑配合使用.
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先天性巨结肠症RET和EDNRB基因的突变
目的:了解中国人群先天性巨结肠症(HD)发病与RET基因,EDNRB基因突变的关系,及同一患者是否两个基因同时突变的状况.方法:随机将HD患者分2组,即检测RET/EDNRB组(A组)56例及EDNRB组(B组)40例,同时设二个相同数量对照组(C组).每人采集外周静脉血2-3 mL经盐析法提取DNA后,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,对RET基因20个外显子中的第6,13,15,17外显子(E6,13,15,17)和EDNRB基因7个外显子中的第4,5,6外显子(E4,5,6)进行基因突变的检测,将突变样品进行自动测序分析.结果:A组中2例散发性患者的E13,E17扩增片段在SSCP分析时有泳动变位,并经DNA自动测序仪检测为基因多态,CTG→CTT,Leu769→Leu,散发性突变频率为4%(2/48);2例家族性患者的E15扩增片段在SSCP分析有泳动变位,DNA测序1例为错义突变Lys889→Thr,另1例为两个同义突变GTGAAGAGGAGCCA→GTTAAGAGGAGTCA分别在V906和S909密码子上,家族性突变频率为25%(2/8);1例散发性短段型患者EDNRB基因E5在SSCP分析时有泳动变位未能测序;B组中1例散发性短段性患者EDNRB基因的E4在SSCP分析有泳动变位,经DNA测序证实在核苷酸位点831,密码277上G→A的置换,Leu277→Leu为司义突变,突变频率为2.7%(1/37),家族性3例患者未检测出突变.C组未检出RET,EDNRB基因的突变.家族性患者与散发性患者RET突变结果经统计学处理x2=4.95,P<0.05,OR=8,OR95CI=1.28-49.87.结论:中国人群的先天性巨结肠症发生确实与RET和EDNRB基因突变有关,家族性HD患者RET基因突变达25%,散发性HD患者主要以EDNRB基因突变为主,无1例患者有RET和EDNRB两个基因同时突变.同时显示有家族史比没有家族史发生HD的危险性大8倍,其可信限在95%.
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肝硬化大鼠门静脉高压症不同手术方式对其肝脏的影响
目的:评价门奇断流术(PAD)、肠腔分流术(MCS)、远端脾腔分流术(DSCS)对门体分流率(PSS)、肝脏功能、线粒体功能和抗氧化能力的影响,为合理选择手术方式提供理论依据.方法:用CCl4/乙醇诱导大鼠肝硬化门脉高压症模型,观察了不同术式(MCS、DSCS、PAD)的死亡率及手术前后肝功能、门体分流率(PSS)、肝细胞线粒体功能和超微结构及肝组织SOD活性、巯基水平、LPO含量的变化,并探讨了线粒体功能与抗氧化能力的内在关系.结果:肝硬化门脉高压时,PSS远高于正常,肝细胞线粒体功能、抗氧化能力均下降;肠腔分流(MCS)组术后肝细胞线粒体功能、抗氧化能力进一步下降且恢复慢;选择生远端脾腔分流术(DSCS)组和门奇断流术(PAD)组的上述指标变化小且恢复较快,其中DSCS组恢复更快且死亡率低.结论:选择生分流术(DSCS)可能是较理想的术式.
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丹参注射液对胃黏膜Na+-K+-ATPase活性和胃黏膜屏障功能的影响
目的:探讨丹参注射液对严重腹腔感染状态下大鼠胃黏膜Na+-K+-ATPase活性变化和电位差的影响.方法:利用大鼠盲肠结扎穿孔造成腹腔严重感染动物模型,应用生化法检测穿孔前和穿孔后3、6、12、2 4、48 h各时相大鼠胃黏膜Na+-K+-ATPase活性.应用电生理记录仪检测穿孔前和穿孔后3、6、12、24、48 h胃黏膜电位差(GTPD)变化.结果:盲肠穿孔后3 h Na+-K+-ATPase活性显着降低(P=0.0271<0.05),1 2 h降至低(P=0.0062<0.01),仅为对照组的48.5%,48 h仍未恢复正常;注射丹参组从12h开始Na+-K+-ATP酶活性与感染组显示出差别(P=0.0 253<0.05).GTPD穿孔后3 h即有下降,6 h显着下降(P=0.0352<0.05),12 h下降至低(P=0.0 025<0.01);丹参组从12 h开始胃黏膜电位差与感染组显示出差别(P=0.0 293<0.05).结论:严重腹腔感染状态下胃黏膜Na+-K+-ATPase活性降低可能是引起胃黏膜屏障功能受损的主要原因.早期应用丹参对有效地预防应激生溃疡的发生有重要的临床意义.
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CTLA4Ig局部转基因对小肠移植急性排斥的治疗作用
目的:研究CTLA4Ig基因在移植小肠局部表达及其表达产物对急性排斥反应的治疗作用.方法:建立SD→Wistar的大鼠异位小肠移植模型,并随机分为实验组(CTLA4Ig转基因组)和对照组(非转基因组).实验组供肠移植前经肠系膜上动脉注入脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA,术后应用免疫组织学检查移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达.移植术后3,7,10 d分别获取各组的移植小肠进行组织学检查及细胞凋亡测定.结果:经CTLA4Ig cDNA处理的小肠在移植术后可见大量的CTLA4Ig表达.对照组移植肠在术后7,10 d分别出现Ⅰ,Ⅱ度急性排斥反应,同时凋亡细胞数量显著增加.实验组移植肠术后未见排斥反应的病理学证据,凋亡细胞偶见.结论:CTLA4Ig基因可在移植小肠局部转染表达,其表达产物可防止移植术后急性排斥反应的发生.
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胰腺癌组织MGMT,hMLH1和hMSH2的表达意义
目的:研究MGMT,hMLH1和hMSH2在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中表达特征及其临床病理意义.方法:胰腺癌(n=51)和慢性胰腺炎(n=10)手术切除标本经40 g/L中性甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片,MGMT,hMLH1和hMSH2表达均采用常规ABC免疫组化法.结果:胰腺癌MGMT,hMLH1和hMSH2表达阳性率(39.2%,45.1%和50.9%)及其评分(1.8±1.4,1.7±1.6和1.9±1.7)明显低于慢生胰腺炎阳性率(100.0%,100.0%和90.0%)及其评分(3.8±0.8,3.8±1.0和3.5±0.9),均有显著或高度显著生差异(P<0.05或P<0.01);转移病例三者表达阳性率及其评分较明显低于未转移病例,但均无显著生差异(P<0.05);三者表达与胰腺癌其他临床病特征无明显关系.结论:MGMT,hMLH1或hMSH2表达与胰腺癌发生及进展密切相关,均具有抑制胰腺癌发生及进展的作用.
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HGF和FGF4体外诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞分化的研究
目的:探讨在HGF、FGF4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制.方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD 117-细胞,分别用含有FGF4,HGF,HGF+FGF4或不加生长因子的DMEM培养基进行培养,相应地分为A,B,C,D四组.分别于新分离时和培养7 d,14 d,21 d,28 d时留细胞.备作免疫细胞化学检测AFP,CK18,白蛋白,PAS染色检测糖原等肝系细胞的特征型标志,RT-PCR检测C、D组细胞c-met(HGF受体)和FGFR2(FGF4R)mRNA表达情况.结果:A,B,C三组加生长因子诱导培养后的细胞均可检测到肝系细胞的标志,D组细胞不加生长因子培养后没有检测到肝系细胞的标志.c-met和FGFR2mRNA在新分离的和D组培养7 d,14 d时的细胞均有较弱的表达,而在C组细胞诱导培养7 d,14 d时表达升高.结论:HGF和FGF4可诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞样细胞分化.生长因子诱导分化的作用可能通过与其受体之间的正反馈调节.
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胆囊癌组织hPTTG1和bFGF表达与血管生成的关系
目的:通过检测胆囊癌组织中hPTTG1、bFGF的表达和胆囊癌组织血管生成状况,探讨他们之间的相互关系及其与胆囊癌临床病理特征之间的关系.方法:用免疫组织化学SP法对41例胆囊癌和22例慢性胆囊炎组织中hPTTG1和bFGF的表达进行检测,并用抗CD34抗体检测微血管密度(MVD).用MVD反映血管生成情况.结果:原发胆囊癌组织中hPTTG1和bFGF的表达阳性率分别为82.9%和75.6%,均高于在慢性胆囊炎中的表达阳性率(P=0.002,0.006).hPTTG1的表达与临床分期和淋巴结转移有关(P=0.025,0.007),而与组织学分级无显著关系(P=0.114);bFGF的表达与组织学分级、临床分期有关(P=0.015,0.019),而与淋巴结转移无显著关系(P=0.081);hFTTG1的表达与bFGF的表达密切相关(r=0.648,P=0.000).二者的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的种类,是否伴有胆囊结石均无关.胆囊癌组织MVD值明显大于慢性旦囊炎组织(P=0.001).MVD分别与胆囊癌组织hPTTG1的表达及bFGF的表达有关(P=0.000,0.000).MVD与胆囊癌组织Nevin分期及淋巴结转移有关(P=0.007,0.024);而与患者的性别、年龄、肿瘤的种类、分化程度、是否伴有胆囊结石均无关.结论:hPTTG1的异常表达与胆囊癌的发生、发展过程及血管生成过程密切相关,可能为胆囊癌的诊治提供了一条新的途径.
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K-ras基因在胰腺癌和慢性胰腺炎中突变和表达异常及其临床意义
目的:探讨Ras蛋白过度表达与胰腺癌和慢性胰腺炎临床病理的关系,以及K-ras突变在慢性胰腺炎中的临床意义和在胰泉癌诊断中的价值.方法:应用EnVision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织(24例)、癌旁组织(77例)、手术切缘正常组织(16例)和慢性胰腺炎(24例)石蜡包埋组织中P21 ras的表达情况.应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法分别检测胰腺癌、癌旁组织、手术切缘正常组织、慢性胰腺炎石蜡包埋组织的K-ras突变并进行DNA测序确认.结果:P21 ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为58.3%(14/24),与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的P21 ras表达阳性率45.8%(11/24)相比,二者差异无显著性(P>0.05):P21 ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为36.6%(30/82),与其在正常胰腺组织中的表达阳性率(0%)相比,有显著性差异(P<0.05);P21 ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率分别为0%、36.6%和78.9%,呈渐进过程,而且增生性导管病变与不典型增生相比,P21 ras表达阳性率的差异具有显著性(P<0.05).胰腺癌K-ras12密码子突变率(79%)显著高于慢性胰腺炎(33.3%)(P<0.01),且在切缘正常组织→癌周导管增生→癌周不典型增生→胰腺癌过程中,突变率有逐渐上升的趋势.突变方式以12密码子GGT→GAT、GTT、CGT为主且同1例患者突变方式一致.结论:P21 ras过度表达和K-ras基因突变在胰腺癌发生中起到作用,但K-ras基因突变作为胰腺癌诊断的分子标志缺乏特异性.
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理肠四方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织TNF-αmRNA表达的影响
目的:观察理肠四方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织细胞因子TNF-αmRNA的表达的影响,比较四方疗效大小,并分析其作用机制.方法:应用2,4-二硝基氯苯(DNCB)免疫加醋酸局部灌肠法建立UC大鼠模型,将98只健康SD大鼠(雌雄各半),按雌雄随机分7组,分别为乌梅丸组、白头翁汤组、参苓白术散组、痛泻要方组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、模型组和正常组,分别观察治疗后大鼠结肠黏膜TNF-omRNA的表达变化,并进行统计学比较.结果:造模后细胞因子TNF-αmRNA的表达升高(模型组与正常组平均吸光度比较P<0.01,t=4.128 vs正常组),理肠四方各治疗组、SASP组与模型组比较有显著意义(P<0.01,q=12.37vs乌梅丸组,q=9.52 vs白头翁汤组,q=8.79vs参苓白术散组,q=8.54 vs痛泻要方组,q=8.92 vsSASP组),但除乌梅丸外,理肠四方之间比较无明显差异.结论:经两两比较后,乌梅丸疗效好,白头翁汤、参苓白术散、痛泻要方与SASP组疗效相当.表明理肠四方可下调促炎细胞因子TNF-α,从而使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常,达到治疗的目的.
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红霉素对糖尿病结肠运动障碍和四种胃肠激素的影响
目的:应用红霉素对糖尿病大鼠离体结肠平滑肌自发生收缩进行干预,探讨其在糖尿病结肠动力障碍中与平滑肌运动、血浆和结肠组织中生长抑素,血管活性肠肽,胃动素,P物质等的相关性.方法:建立糖尿病大鼠模型,制备糖尿病组、糖尿病红霉素治疗组和对照组大鼠离体近端结肠环行肌及纵行肌肌条,应用张力换能器测定其静息张力、平均振幅、收缩频率等运动指标;用放免法同批测定三组大鼠血浆和结肠组织中生长抑素,血管活性肠肽,胃动素及P物质含量.结果:糖尿病组结肠肌条自发性收缩多项指标均较对照组明显降低(P<0.01);红霉素治疗组结肠肌条收缩振幅和频率较糖尿病组明显增高(P<0.01).与对照组相比,糖尿病组血浆生长抑素、血管活性肠肽、胃动素增加(P<0.05),P物质降低(P<0.05),而结肠组织中生长抑素和血管活性肠肽降低(P<0.01,P<0.05),P物质增加(P<0.05),胃动素无显著差异;与糖尿病组相比,红霉素台疗组除血浆生长抑素升高(P<0.05)外,余三种激素(血浆和结肠组织中)均无显著差异.红霉素治疗组较糖尿病组血糖明显下降(P<0.01).结论:红霉素通过对结肠平滑肌直接作用而改善糖尿病结肠运动障碍;他对胃肠激素影响不大;糖尿病结肠运动障碍与血浆和结肠组织中胃肠激素变化有关.
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高脂高糖食致小鼠脂肪肝SR-B1表达
目的:探讨进高脂高糖食尿病小鼠肝脏改变、肝脏SR-B1表达及二者的关系.方法:正常C57BL/6J小鼠10只,进高脂高糖食8及16 wkC57BL/6J小鼠,分别5只及10只.测定血脂、血清胰岛素(INS)及空腹血糖,肝脏质量、肝脏脂质含量及SR-B1蛋白表达.结果:高脂高糖食16 wk的小鼠血清总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)明显高于正常小鼠(分别为2.31±0.16 mmol/L,6.9±1.8 mmol/L;及2.04±0.15,5.1±1.9 mmol/L,P<0.05,胰岛素高于正常小鼠,但是无显著性(分别为12.5±4.2 kU/L,10.8±4.0 kU/L,P>0.05).高脂高糖食的小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于正常(高脂高糖食喂养16 wk小鼠为0.92±0.14 mmol/L,喂养8 wk为0.67±0.23 mmol/L,正常小鼠为0.97±0.08 mmol/L).高脂高糖食小鼠肝脏有明显脂肪变性,16 wk重于8 wk的小鼠.进高脂高糖食小鼠肝脏的TC和TG含量显著高于正常动物,16 wk的小鼠达到正常小鼠的2倍以上.高脂高糖食小鼠肝脏SB-B1表达高于正常动物,16 wk强于8 wk的小鼠.结论:高脂高糖食可使C57BL/6J小鼠出现脂肪肝,SR-B1蛋白表达增高,SR-B1可能参与脂肪肝形成.
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RNAi研究进展
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)引发的转录后基因静默机制.RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制.目前已成功用于基因功能和信号转导系统上下游分子相互关系的研究,有可能为肿瘤基因治疗提供新策略.
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影响SARS患者血特异性IgG抗体产生的因素
目的:了解影响SARS-CovIgG抗体产生的因素方法:对临床诊断为SARS的104例患者的269份血清进行SARS-Cov IgG抗体的动态检测,分析病程、病情、年龄及激素治疗与抗体产生的关系.结果:104例SARS患者血清SARS-CovIgG抗体总阳性率为79.8%(83/104),抗体早出现时间在病日8 d,晚32 d呈阳性反应.病程0-7 d,8-14 d,22-28 d,29-35 d,36-42 d,43-56 d和57-63 d抗体的阳转率分别为0(0/7)、50%(21/42)、63.6%(42/62)、73.3%(44/60)、88.1%(37/42)、81%(17/21)、92.6%(25/27)和50%(2/4);抗体的滴度从0-7 d的0.14±0.05上升至43-56 d的0.69±0.10(P<0.05),但8 wk后抗体滴度开始下降.重度SARS患者抗体总阳性例数比为95.7%(22/23);普通患者为75.3%(61/81),P>0.05,其抗体阳转时间稍早于普通组(分别为19.1±6.8 d和22.0±8.4 d,P=0.886),滴度也稍高于普通组(分别为0.63±0.28和0.50±0.25,P=0.276).抗体阳性患者平均年龄与阴性患者的相近(分别为31.4±8.3岁和32.2±9.5岁),在19-35岁和46-53岁年龄段的SARS患者在病程的3 wk和4 wk时抗体的滴度相近似.大剂量糖皮质激素治疗组患者血清抗体阳性率及滴度高于小剂量组(P<0.05).结论:SARS患者血清SARS-CovIgG抗体总阳性率为79.8%;抗体阳性率及滴度随病程的延长而逐渐升高,但8 wk后呈下降趋势;血清SARS-CovIgG抗体的产生可能不受年龄的影响,而与病情的轻重有关,大剂量激素治疗组患者的抗体滴度仍维持较高水平.
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脾气虚证患者血浆和组织中SS、Mot、CCK的变化
目的:通过观察四君子汤对脾气虚证患者血浆和胃窦黏膜组织中胃动素(Mot)、生长抑素(SS)、胆囊收缩素(CCK)的影响,探讨脾气虚证临床辨证的客观定量指标.方法:用放射免疫分析法(RIA)动态观察服药前后脾气虚证和胃热炽盛患者血浆和胃窦黏膜组织中Mot、SS和CCK的变化.结果:(a)卑气虚证患者组织及血浆中Mot水平服药前显著低于胃热炽盛组及服药后,(胃窦组织:109.4±18.9 ng.g vs219.8±25.3 ng/g及183.0±23.9ng/g;血浆:61.7±10.6ng/Lvs 171.4±30.8 ng/L 及126.3±24.6 ng/L)(P<0.01);(b)脾气虚证患者组织和血浆中SS含量服药前显著高于胃热炽盛组及服药后,(胃窦黏膜:224.3±67.9 ng/g vs80.2±25.6 ng/g及114.2±34.5ng/g;血浆:74.5±17.2ng/L vs30.3±11.8ng/L及38.1±12.7 ng/L)(P<0.01);(c)脾气虚证患者组织和血浆中CCK含量服药前显著高于胃热炽盛组及服药后,(胃窦黏膜组织:34.1±5.2 ng/g vs 21.6±4.7 ng/g及29.8±6.8 ng/g;血浆:5.8±0.4 ng/L vs 3.7±0.6 ng/L及2.9±0.8 ng/L)(P<0.01);(d)胃热炽盛组在服药后Mot、SS和CCK在血浆和组织中的含量变化不明显(P>0.05)(数字略).结论:Mot、SS和CCK的浓度变化对脾气虚证的临床辨证施治可能有重要的参考价值.
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黄色肉芽肿性胆囊炎的超声表现及其病理学基础
目的:明确黄色肉芽肿性胆囊炎的超声表现特征,以提高影像诊断的正确性.方法:回顾性分析经手术病理证实的黄色肉芽肿性胆囊炎32例的超声表现.男17例,女15例,年龄21-88(平均55.3岁).结果:所有患者均有胆囊壁增厚,壁厚4-6 mm为15例(46.9%),7-10 mm 14例(43.8%),11-22 mm 3例(9.3%).内壁光滑20例(62.5%),内壁不光滑12例(37.5%).壁间低回声结节5例(15.6%),壁间结石1例(3.1%).合并胆石症30例(93.8%),其中单纯胆囊结石22例(68.8%),单纯胆总管结石2例(6.3%),胆囊结石合并胆总管结石6例(18.8%).浸润肝脏形成等回声或弱回声团块2例(6.3%).结论:黄色肉芽肿性胆囊炎主要表现为胆囊壁不同程度增厚,可有壁内低回声结节,常伴有胆囊结石或胆管结石.超声检查可反映黄色肉芽肿性胆囊炎的病理改变.
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脾气虚证患者胃泌酸、胃肠运动和胃肠电活动的变化
目的:观察脾气虚患者胃泌酸功能、小肠传递时间和胃、十二指肠球部电活动,探讨临床脾气虚证客观可靠、简便易行的辨证施治方法.方法:选择中医辨证符合脾气虚证、胃热证和肝火上炎证的患者,分别进行口服镁盐呼氢实验(0MBHT)、口服乳果糖呼氢实验(SBTT)及胃电图检查.结果:脾气虚组患者OMBHT测定产氢量(H2/excess)值各时间点均低于正常值(15 min,13.16±4.51;30 min,14.33±4.18;45 min,15.57±4.89 vs 20-60 ppm);与正常参考值比较(75-150 min),脾气虚组(SBTT 225.6±21.3 min)的测定值显著增大,而肝火上炎组的SBTT为60.4±34.5,且与脾气虚组比较有显著差异(P<0.01);胃肠电图检查显示:脾气虚组胃窦、胃体、胃小弯和十二指肠球部的平均峰值幅度虽在正常范围内,但较胃热组和肝火上炎组明显减低(P<0.01);脾气虚组四个部位的主频值均明显低于正常值(胃窦1.82±0.57、胃体1.65±0.36、胃小弯0.15±0.03和十二指肠球部0.15±0.05,正常2.4-3.7 cpm),且与胃热和肝火上炎组比较显著减低(P<0.05),尤其是胃小弯和十二指肠球部差距更为明显(P<0.01);此外脾气虚组胃窦部的平均过零频率低于正常值(1.73±0.49 vs 2.4-3.7 cpm),其他部位的虽在正常值范围内,但较胃热和肝火上炎组减低(P<0.05).胃热和肝火上炎两组患者上述3项指标的检测值均无明显差异性.结论:脾气虚证患者"脾失健运"的客观表现之一为胃泌酸功能减低、小肠运动功能减退和胃电活动紊乱.
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肠易激综合征患者睡眠质量特征
目的:探讨肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)患者的睡眠特征及其与精神症状的关系.方法:采用匹兹堡睡眠指数和症状自评量表-90自评量表对连续就诊的4l例符合罗马Ⅱ标准的肠易激综合征患者及同期连续就诊的35例肖化性溃疡病患者和37例匹配的正常对照进行测评,并通过回归分析探讨睡眠障碍和精神症状之间的关系.结果:与正常相比,IBS患者精神症状明显增多(40.2±4.5,t=2.63,P=0.047),抑郁(0.64±0.24,t=2.53,P=0.020)和焦虑(0.67±0.30,t=2.16,P=0.016)积分明显增高;在IBS患者中,睡眠质量和日间功能显著下降,PSQI和睡眠障碍以及安眠药用量显著增加.IBS患者的强迫症状(t=2.60,P=0.037)和精神因素(t=2.71,P=0.028)积分也明显高于消化性溃疡病患者.多元回归分析显示睡眠质量和多种精神症状呈负相关(R>0.195,P<0.05).结论:IBS患者存在与精神症状相关的睡眠障碍.
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良性与恶性胃溃疡患者红细胞免疫和T细胞亚群的变化及相关性分析
目的:探讨良性与恶性胃溃疡患者(BGU&MGU)RBC免疫功能和T细胞亚群的变化及其相关关系,为其免疫防治提供理论依据.方法:应用免疫黏附去和SAP法对55例BGU&MGU患者RBC免疫活性(RBC--C3bRR,RBC-ICR和RBC-TRR)和外周血T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+和CD4+/CD8+)进行检测.结果:25例MGU组RBC-C3bRR和RBC-TRR(16.0±3.8和23.1±5.8)明显下降,显著低于30例BGU组(19.9±4.3和34.6±6.5)和32例正常对照组(25.4±5.7,43.8±6.7,P<0.01).CD3+,CD4+和CD4+/CD8+在MGU组(0.59±0.05,0.33±0.04和1.08±0.15)显著低于BGU组(0.63±0.05,0.37±0.05和1.23±0.21)和正常对照组(0.68±0.06,0.42±0.05和1.48±0.23,P<0.05).RBC-ICR和CD8+在MGU组高(8.7±3.1和0.32±0.04),BGU组(6.9±2.6和0.31±0.05)次之,对照组(5.4±2.0和0.27±0.05)低(P<0.05).BGU,MGU组RBC-C3bRR和RBC-TRR与CD4+/CD8+呈明显正相关(P<0.01).结论:RBC免疫与T细胞亚群均参与了BGU与MGU的发生和发展.RBC免疫可能通过某种机制调控了包括T细胞亚群在内的某些免疫细胞的活性,从而共同发挥免疫防御作用.
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慢性功能性便秘肛直肠压力检测EMG生物反馈训练的疗效
目的:探讨慢性功能性便秘(CFC)患者肛直肠压力及肌电(EMG)活动特点;同时观察生物反馈训练系统对CFC患者的疗效及对上述指标的影响.方法:用BioLab动力学参数监测系统(液态式),多道胃肠功能检查仪对144例CFC患者检测,并用OrionPC/12mEMG生物反馈治疗仪进行肌电评估和训练,20名健康者作对照.结果:与健康对照组相比,CFC患者肛管静息压(AQP)稍下降(P>0.05)、大缩榨压(MSP)从15.7±1.4下降到12.7±1.4(P<0.01),直肠感知阈值(RVST)和大耐受量(MTV)均从12±6.2和29.3±6.8增高到14.9±6.6和36.0±7.3(P<0.01;P<0.01);EMG评估CFC患者盆底肌与腹前斜肌有矛盾运动100%,盆底肌静息状态下运动幅值从5.3±2.8升高到10.2±2.8(P<0.01)和腹前斜肌运动幅值从34.4±5.2降低到30.8±4.9(P<0.01);OrionPC/4EMG生物反馈训练治疗后大缩榨压(MSP)从12.7±1.4上升到19.9±1.8(P<0.01),直肠感知阈值(RVST)和大耐受量(MTV)均从14.9±6.6和36.0±7.3降低到11.5±4.9和30.9±6.4(P<0.01;P<0.01);EMG评估CFC患者盆底肌与腹前斜肌矛盾运动100%被纠正,盆底肌静息状态下运动幅值从10.2±2.8下降到5.4±1.6(P<0.01)和腹前斜肌运动幅值从30.8±4.9增高到38.2±5.4(P<0.01),生物反馈治疗CFC患者临床症状改善总有效率为84.03%,增加疗程的频次可使疗效从78.8%增加到91.7%(P<0.05)、缩短治疗间隔可使疗效从69.2%增高到92.8%(P<0.05),辅助家庭训练可以提高疗效和降低复发率.
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CD4+T细胞亚群的新认识及对炎症性肠病研究的指导
大量证据提示CD4+T淋巴细胞在炎症生肠病的发病中起重要作用.CD4+T淋巴细胞可根据表型,细胞因子表达谱和功能等方面的差异分为多个亚群,研究这些亚群的分类、极化(或分化)、功能特点及相互关系是认识T细胞致病机制的基础.目前对Th1/Th2的极化过程已积累了丰富的认识.近年来很多学者认为调节性T淋巴细胞是一个能产生明显免疫抑制作用的相对独立的T细胞亚群,并提出致病性T细胞/调节性T细胞平衡是机体调节免疫反应的主要模式,其紊乱可诱发免疫性疾病,包括炎症性肠病.本文就这些新认识作一综述并针对炎症性肠病的研究提出一些看法.
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成人胰母细胞瘤并多发良性肿瘤1例
目的:归纳总结成人胰母细胞瘤的临床特征,改善治疗效果.方法:通过对1例成人胰母细胞瘤并发多发良性肿瘤病例的诊治过程进行分析并复习国外文献.结果:成人胰母细胞瘤好发于中青年,黄疸、腹块及腹痛常是患者就诊的首发症状,手术及放化疗效果好.结论:在临床上应提高对此病的认识,避免因误诊为胰腺癌而放弃治疗.
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乙肝病毒X基因真核表达载体的构建及人肝细胞株HL-7702转染
目的:构建表达乙肝病毒(HBV)X基因的人肝细胞株.方法:用PCR法扩增HBV X基因序列,将其添A后连至PUCmT载体上,用EcolI和HindⅢ双酶切PUCmT-X和PcDNA3载体,连接酶切片段PcDNA3及X片段以构建重组质粒PcDNA3-X.用脂质体转染法将PcDNA3-X及空质粒PcDNA3导入肝细胞HL-7702中,G418选择培养,RT-PCR鉴定其稳定表达.结果:已构建的PcDNA3-X经序列测定含有完整的HBV X基因片段,转入HL-7702细胞后经RT-PCR证实该细胞有稳定表达X蛋白.结论:成功构建了表达HBV X基因的肝细胞株,为进一步探讨HBV X基因在肝炎与肝癌发生中的作用提供了理想的实验模型.
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IFN治疗慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞HCV的变化
目的:应用荧光定量反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)及免疫组化技术研究慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)丙型肝炎病毒感染并评价干扰素对外周血单个核细胞中HCV的作用.方法:20例慢性丙型病毒性肝炎患者血浆、PBMC中的HCV RNA含量应用荧光定量RT-PCR检测,应用免疫组化技术检测HCV NS3在PBMC中的表达;荧光定量RT-PCR法检测8例血浆及PBMC均阳性患者接受α-2b干扰素治疗;对照组6例血浆及PBMC荧光定量RT-PCR法检测均阳性,未用干扰素治疗.比较治疗前后用药组与对照组血浆及PBMC中HCV RNA载量变化.应用双侧Wilcoxon秩和检验(wilcoxon 2-sample test),确切概率法(fisher'sexacttest)进行数据分析.结果:20例中荧光定量RT-PCR检出血浆15例、PBMC9例阳性;免疫组化法检出7例PBMC阳性.应用确切概率法分析PBMC感染HCV RNA与血浆中病毒水平无相关性(P=0.319).8例患者接受干扰素治疗后其血浆及PBMC中HCV RNA载量均下降,与治疗前相比有显著性差异(aP=0.0 017,bP=0.0 059);与对照组相比治疗后差异有显著性(cP=0.0 042,dP=0.0 155).结论:PB MC是丙型肝炎病毒肝外复制并表达的场所.PBMC感染HCV RNA病毒载量与血浆病毒水平无关.干扰素对PBMC感染的HCVRNA有清除作用.
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乙型肝炎病毒感染与血清自身抗体的相关性
目的:探讨乙型肝炎病毒感染与自身抗体的相关性.方法:采用ELISA法、荧光PCR法分别检测160例HBV感染者血清HBV标志物和HBV-DNA.采用间接免疫荧光法、金标法、放射免疫法、免疫乳胶凝集法分别检测所有研究对象的抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(Ads-DNA)、抗甲状腺球蛋白抗体及抗甲状腺微粒体抗体(TGA/TMA)、类风湿因子(RF).结果:160例HBV感染者血清中检出多种自身抗体,总检出率达61.3%,显著高于正常对照组(bP<0.01),检出的自身抗体以ANA,RF多见,滴度分布以低滴度为主.自身抗体阳性和自身抗体阴性组年龄、性别并无明显差异(P>0.05).与自身抗体阴性组相比,阳性组HBV感染者ALT,TBIL水平、HBV-DNA定量的对数值、HBV-DNA阳性检出率明显增高,HBV感染史明显增长,差异有显著性(aP<0.05).结论:HBV感染可引发自身免疫性反应,导致多种自身抗体的产生.这种自身免疫性反应与感染者的年龄、性别无关,而与HBV感染史的长短、病毒的复制水平以及肝功能损害的程度有关.
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乙型肝炎病毒P基因YMDD变异的意义
目的:了解拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV P基因YMDD变异的意义,为临床治疗提供指导.方法:用定量PCR监测40例拉米夫定治疗期间的HBV DNA动态变化,对治疗48 wk时HBV DNA仍为阳性的患者,采用uniarray技术和基因芯片检测YMDD突变.结果:拉米夫定治疗48wk时,HBV DNA转阴者23例(57.5%).HBVDNA仍为阳性者17例,其中8例在治疗过程中出现HBV DNA定量反跳.用基因芯片法与uniarray技术共检测出7例YMDD变异(5例出现于8例HBV DNA定量反跳者),变异率为17.5%(7/40).结论:拉米夫定治疗过程中,可导致部分患者的HBV YMDD发生变异.该变异使多数患者HBV DNA定量反跳.检测HBVYMDD变异对慢性乙型肝炎的台疗具有重要的指导意义.
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HLA-Ⅱ类基因与慢性乙型肝炎重型化的相关性
目的:探讨HLA-DRBl、-DQAl和-DQBl等位基因多态性与慢性乙型肝炎重型化之间的关系.方法:采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术对52例慢性乙型肝炎和32例性慢性重症乙型肝炎的HLA-DRBl、-DQAl和-DQBl等位基因多态性进行了分析.结果:HLA-DRBl*l 001在慢性重症乙型肝炎组的等位基因频率明显高于慢性乙型肝炎组(14.1%vs1.9%,x2=19.2 997,Pc=0.0281,RR=9.78).HLA-DQAl和HLA-DQBl等位基因频率在慢性重症乙型肝炎组和慢性乙型肝炎组间差异无显著性.结论:HLA-DRBl*l 001与慢性乙型肝炎的重型化有关,可能是一个对判断病情和预后有价值的实验指标.
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人CD81真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达
目的:构建含人CD81基因的真核表达载体,探讨CD81在COS-7细胞的表达,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与CD81相互作用奠定基础.方法:从我们构建的含人CD81全编码基因载体pMD18-T-CD81,应用双酶切回收基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAX1;通过脂质体介导的基因转染技术将pVAX1-CD81和空载体转入COS-7细胞;应用抗CD81单克隆抗体通过间接免疫荧光法检测COS-7细胞的表达产物.结果:重组的含CD81基因的真核表达载体pVAX1-CD81经酶切和PCR鉴定分析正确,并证明在COS-7细胞表面有效地表达CD81蛋白.结论:成功构建含CD81全编码基因的真核表达载体pVAX1-CD81,并在COS-7细胞表面有效表达CD81分子,该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供模型.
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慢性乙型肝炎患者外周血CD14+细胞的功能状态
目的:研究慢性乙型肝炎患者外周血CD14+细胞早期活化抗原分子表达、炎症因子生成和吞噬能力.方法:采用四色荧光分析方法,运用流式细胞术检测正常对照人群(10例)、慢性活动性乙型肝炎患者(11例)外周血单个核细胞(PBMC)CD14+细胞率和CD14抗原量;并行CD14设门,检测CD14+细胞前向角(FSC)、侧向角(SSC)值、细胞早期活化抗原(CD69)的表达率、TNF-α表达率、细胞内TNF-α水平、细胞吞噬率及吞噬力.结果:HB组CD14+细胞SSC值高于对照组(P<0.01);HB组和对照组间外周血CD14+细胞比例、CD14抗原水平无统计学意义差别,抗原水平与CD14+细胞率呈正相关;HB组CD14/CD69双表达细胞明显多于对照组(P<0.01);HB组CD14/TNF-α+(细胞内)双染细胞与对照组间无差别,HB组CD14+细胞TNF-α水平高于正常对照组(P<0.05);对照组TNF-α+细胞率与细胞颗粒度呈正相关,与CD14/69双表达并发生吞噬细胞率一致.HB组CD69/CD14双阳性细胞荧光球吞噬率与对照组无差别(P>0.05);HBV组CD14+细胞荧光球吞噬率显著高于对照组(P<0.01),吞噬力低于对照组(P<0.05),荧光微球吞噬率与CD14抗原表达的量负相关;CD14+细胞SSC,TNF-α+细胞率同CD14抗原表达的量也呈负相关.结论:慢性乙肝患者外周血存在过度活化CD14+单核细胞,细胞吞噬力弱、胞内TNF-α生成增多.
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鼠肝炎病毒3型N蛋白Ⅰ区激活mfg12凝血酶原酶基因
目的:研究鉴定激活mfgl2凝血酶原酶基因之冠状病毒3型或A59型鼠肝炎病毒(MHV-3,MHV-A59)核心(N)蛋白的功能区域.方法:应用定点突变技术、与mfgl2启动子共转染实验明确mfgl2凝血酶原酶基因之MHV-3或MHV-A59 N蛋白的功能区域.N蛋白内含Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞、Ⅰ基因表达载体与mfgl2启动子共转染实验阐明Ⅰ蛋白在mfgl2基因激活中的作用.结果:N蛋白包含由两个可变间隔区(A,B)隔开的三个结构区(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),MHV-A59N蛋白Ⅰ区可增强mfgl2转录活性,当其基因序列突变为非嗜肝性MHV-JHM或MHV-21区序列时,则丧失激活mfgl2启动子转录活性的功能.Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞后对mfgl2的激活无显著差异,共转染实验阐明Ⅰ蛋白并非mfgl2基因激活中的必备因素,该组mfgl2启动子转录活性与对照组无显著差异,而N蛋白可激活mfgl2启动子,使其转录活性提高62倍.结论:鼠肝炎病毒N蛋白Ⅰ区为激活mfgl2凝血酶原酶基因的病毒蛋白功能区域.
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SEN病毒核酸异质性及准种现象的观察
目的:报告SEN病毒核苷酸的异质性和准种特点.方法:取深圳地区SEN病毒流行病学调查得到的SENV D型或H型阳性血清各3份进行巢式PCR扩增,阳性PCR产物克隆至T载体,每份随机挑选1-11份阳性克隆进行分别测序,并与GeneBank上的北京株、美国株、意大利株和日本株进行比较分析.结果:挑选的16株克隆中D型和H型分别为13株和3株,均属于SENV序列.来自SZ-54的11株SENVD型克隆中准种占81.8%(9/11).本地3例患者的11株SENVD型阳性克隆与GeneBank的4株异地株,共15株间的同源性为77.7-99.5%.同一宿主9个克隆间的碱基变异个数为8.5±5.2,与同一地区不同宿主的11个克隆间的28.9±3.2和不同地区不同宿主的15个克隆间的29.6±7.8比较,有显著性差异(P均<0.001).3株SENV H型阳性克隆与GeneBank的4株异地株共7株间的同源生为74.6-95.0%.进化分析表明,来自同一宿主的分离株遗传关系近,同地区不同宿主的分离株其次,与4株异地分离株的遗传距离较远.结论:SENV核酸的变异性高,个体间存在较大差异,且在同一个感染者体内也存在大量SENV准种.在检测SENV的方法选择、比较SENV的序列差异和分析SENV的临床意义时应充分考虑到SENV的这种特性.
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肝硬化和肝癌肝组织Survivin基因表达与增生的关系
目的:了解Survivin基因表达与肝硬化细胞增生活性的关系,探讨测定Survivin基因和增生细胞核抗原(PCNA)在肝硬化患者中发现肝癌高危人群的意义.方法:以RNA提取试剂获得新鲜肝癌及肝硬化组织RNA,应用RT-PCR法测定Survivin基因mRNA;应用抗-PCNA单克隆抗体,以SP免疫组织化学方法测定肝硬化和肝癌组织中的PCNA.结果:测定21例肝硬化组织,Survivin表达全部阴性,l 7例肝癌组织,Survivin基因阳性11例,阳性率为64.7%.11例Survivin阳性肝癌组织PCNA阳性计数平均值为6.8(0.5-40),显著高于6例Survivin阴性肝癌组织2.15(0.5-3.0).而21例肝硬化组织和5例正常肝组织对照PCNA计分分别为2.47和1.56.以5例正常肝组织PCNA阳性细胞计数的2倍(3.12)作为细胞高增生活性标准,测定30例肝硬化组织,有6例处于高增生状态,其平均PCNA计数为5.05±2.61,细胞增生活性介于其余肝硬化组织和肝癌组织之间.结论:Survivin基因仅在肝癌组织表达,其表达具有高度肿瘤选择性肝癌细胞增生活性较肝硬化明显升高,其升高程度与Survivin基因的表达有关,增生活性越高该基因的表达阳性率越高.PCNA可以很方便的用于肝硬化组织细胞增生活性的评价,在确定肝硬化人群肝癌发生高危患者方面PCNA的测定优于Survivin基因的测定.
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裸鼠肝内种植人肝癌组织的肿瘤特征
目的:观察裸鼠肝内种植人肝癌组织能否再现肿瘤特征,为在活体内研究肝癌的生物学特性,指导临床个体化治疗提供一种研究方式.方法:用组织学完整的新鲜人肝癌组织种植于裸鼠肝脏,观察种植瘤的存活率、生长曲线、组织细胞病理特征、转移情况以及肝癌的其他生物学特征,并与皮下、皮下-肝原位种植瘤模型比较.结果:来源于l例患者肝癌组织的第一代种植瘤存活率100%,自发性肝内转移75.0%,肺转移37.5%,骨转移37.5%;并保持分泌AFP的特性;流式细胞仪分析DI值为1.63.组织细胞病理、器官转移特征以及其他生物学特性与原肝癌相似.结论人肝癌组织裸鼠原位种植瘤的生物学特征与肝癌患者基本相似,基本模拟了人肝癌的自然过程,是目前体内研究人肝癌生物学特征、筛选有针对性敏感化疗药的较理想方法.
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鸦胆子油乳诱导肝癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响
目的:研究鸦胆子油乳体外诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡的作用及对细胞周期和凋亡相关基因p53和Bcl-2表达的影响,探讨其抗肿瘤机制.方法:MTT法检测鸦胆子油乳不同浓度和作用时间对肝癌细胞的抑制增生作用;透射电镜观察细胞形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析DNA特征;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;免疫细胞化学染色检测p53和Bcl-2的表达.结果:鸦胆子油乳对人肝癌细胞SMMC-772l具有显著的抑制增生作用,且有时间和浓度依赖性.透射电镜和凝胶电泳可观察到凋亡特征性的形态学和生化特征改变.0.10 g/L鸦胆子油乳作用12,24,48 h后,流式细胞仪分析可见典型的亚二倍体峰,细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).p53和Bcl-2在经鸦胆子油乳作用后表达水平均下降,二者呈正相关(r=0.966,P<0.05),p53下降更为明显.结论:鸦胆子油乳体外对肝癌细胞SMMC-7721有显著的抑制增生作用,能诱导凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制p53和Bcl-2的表达是其重要机制,其中p53途径起主导作用.
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AgNORs计数DNA含量及PCNA与肝硬化增生结节和肝癌的关系
目的:探讨肝硬化(LC)、增生结节与肝细胞癌(HCC)之间的关系.方法:分别应用银染色技术、图像分析技术及免疫组织化学技术检测LC、增生结节及HCC中AgNORs计数、DNA含量及增生细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:增生结节中,其AgNORs计数、DNA含量及PCNA的表达均与正常肝组织和LC组织有明显差异(P分别<0.01,0.05,0.05);其中AgNORs计数与Ⅰ级HCC相近(P>0.05),DNA含量与HCC相近(P>0.05).LC组织和正常肝组织间的AgNORs计数、DNA含量及PCNA的表达差异均无显著性(P均>0.05).结论:增生结节与LC是两种不同性质的细胞群体,前者属于活跃增生生病变,是HCC的癌前期病变,后者仍为成熟的细胞,与HCC的发生没有直接关系.
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乳果糖溶液在改善肝癌患者动脉栓塞治疗后腹部和肝性脑病症状中的作用
目的:探讨TACE后使用乳果糖溶液在改善患者腹部症状以及肝性脑病的作用.方法:100例原发性肝癌患者随机分组行经导管肝动脉化疗栓塞术,A组(n=50)术后给予杜秘克乳果糖溶液15-30 mL,3次/d,B组(n=50)不服用乳果糖.治疗后分别观察患者每日大便次数、腹胀、呕吐情况、TACE前后肝肾功能(包括TBIL,ALT,ALB,BUN)和血氨的变化情况以及两组出现肝性脑病的情况.结果:A、B两组平均大便次数分别为1.86±0.83次/d和0.48±0.41次/d,差异有显著生意义(U=309.00,P<0.0001).腹胀和呕吐方面,A组显著好于B组(x2=7.860,P=0.02).虽然两组治疗前后TBIL,ALT,ALB,BUN均没有显著差异(t均<1.660,P>0.05),但是A组血氨显著低于B组(t=3.091,P=0.003).B组肝性脑病发生率显著高于A组(x2=6.947,P=0.038).结论:肝癌TACE术后服用乳果糖可以促进肠道功能,改善腹胀和呕吐情况.同时可以预防肝性脑病的发生.
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酒石酸锑钾诱导人胃癌细胞凋亡
目的:用于治疗寄生虫病的酒石酸锑钾能抑制白血病细胞及淋巴瘤细胞生长,并诱导其凋亡.本文探讨其对人胃癌SGC-7901细胞株的作用及可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度酒石酸锑钾对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;经Hoechst 33 258染色后用荧光显微镜观察细胞核的形态变化;DNA末端原位标记染色法、双染法(annexin-V/PI)和流式细胞术检测细胞凋亡.结果:酒石酸锑钾能明显抑制胃癌细胞生长,抑制作用呈时间和剂量依赖性(方差分析,P<0.01);Hoechst 33 258染色后荧光显微镜观察细胞核固缩,呈致密的强荧光;DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪检测均检测到凋亡细胞.结论:酒石酸锑钾能诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡.有望作为一种新的凋亡诱导剂用于胃癌的治疗.
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胃癌组织VEGF,Flt1,bFGF,P53表达与胃癌预后的关系
目的:探讨胃癌中VEGF,Flt1,bFGF,P53的表达及意义.方法:应用SABC免疫组化法,研究VEGF,Flt1,bFGF,P53在胃癌中表达及与胃癌生长转移、临床病理特征、预后的关系.结果:胃癌VEGF表达与肿瘤浸润深度有关(浆膜、浆膜外vs肌层和黏膜层,P<0.01).P53表达与淋巴结转移相关(P53阳性淋巴结转移组vs P53阴性淋巴结无转移组,P<0.05).VEGF与Flt1表达呈正相关(VEGF表达在Fltl阳性组vs在Flt1阴性组,P<0.01);影响胃癌预后的因素有临床病理分期、VEGF表达、肿瘤浸润深度、手术方式.Kaplan-Meier 研究显示VEGF表达与胃癌生存预后相关(P<0.05).Flt1,bFGF,P53表达与生存预后无关(P>0.05).结论:P53表达与淋巴结转移相关.VEGF表达与肿瘤浸润深度和胃癌生存预后相关,VEGF表达可作为预测胃癌预后一项很好的指标.
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丝裂霉素联合舒林酸对胃癌SGC7901细胞诱导凋亡的研究
目的:研究丝裂霉素与舒林酸合用对人胃腺癌SGC7901细胞的生长抑制、诱导凋亡及凋亡相关基因bcl-2和COX-2基因表达的影响.方法:SGC7901胃癌细胞被分为三个实验组,舒林酸组、丝裂霉素组和舒林酸与丝裂霉素联合组.应用光镜、激光共焦显微镜、MTT法、流式细胞仪和免疫组化技术研究三组药物作用后,胃癌细胞的形态学变化、生长抑制、诱导凋亡和对凋亡相关基因Bcl-2和COX-2表达的影响.结果:药物作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等.药物干预24h,联合组和MMC组对胃癌SGC7901细胞诱导的凋亡率分别为12.0%和7.20%.对细胞的增生抑制以联合组强,MMC次之,舒林酸弱.经MMC作用24 h后,COX-2和Bcl-2蛋白表达增强,而联合组出现COX-2蛋白表达减弱,Bcl-2蛋白亦未出现明显升高.结论:人胃癌SGC7901细胞体外实验中,MMC联合舒林酸使用,可使增生抑制加强.MMC可能由于上调COX-2、Bcl-2蛋白,减弱了自身对SGC7901胃癌细胞的诱导凋亡,MMC联合舒林酸可抑制COX-2、Bcl-2表达,从而提高MMC的抗癌效果.
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胃黏膜异型增生组织中微卫星不稳定性的检测及其意义的探讨
目的:胃黏膜异型增生是胃癌的癌前病变,胃癌的发生可能是胃黏膜异型增生过程中的一系列基因变异累积引起胃黏膜细胞发生恶性转化所致.微卫星不稳定性(MSI)是DNA基因组不稳定的重要标志,研究胃癌和癌前病变组织MSI的存在情况,有助于从基因组不稳定的角度探讨胃癌可能的发生机制以及MSI在胃癌发生过程中的可能作用.方法:胃癌30例、异型增生组织30例分别提取病变组织及相应正常组织的DNA,应用银染PCR-SSCP技术检测5个微卫星位点不稳定性的存在状况.结果:胃癌组织MSI的发生率23.3%,胃窦癌MSI的发生率显著高于贲门癌(10% vs 3.3%,P=0.044).胃黏膜异型增生组织的MSI发生率30%,MSI与异型增生的程度无明显关系.结论:MSI是胃癌多步骤发生过程中的早期分子事件,对胃癌的发生和发展可能具有重要作用.
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塞莱西布体外对人类肝胃癌细胞生长的抑制作用
目的:研究塞莱西布在体外对人类肝癌7721细胞以及胃癌7901细胞的生长抑制作用.方法:两种肿瘤细胞用含不同浓度(0,20,40,80,160和320 pmol/L)的塞莱西布的培养液培养.应用MTT测定法来测定生长抑制率,电镜技术来观察细胞凋亡情况,免疫组化技术来检测细胞内Cox-2蛋白含量.结果:塞莱西布对两种肿瘤细胞均具有生长抑制作用(塞莱西布320 pmol/L时两种肿瘤细胞抑制率分别为49.1%和42.9%),并呈现量-效关系.电镜下可观察到凋亡细胞.免疫组化发现细胞内环氧化酶的含量在处理前后有明显变化.结论:在体外,塞莱西布抑制人类肝癌及胃癌细胞生长,诱导他们产生凋亡,并且该作用与细胞内环氧化酶含量有密切关系.
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TGIF反义寡核苷酸对胃癌细胞增生和凋亡的影响
目的:TGIF(TGinteractingfactor)是TGF-β和视黄醛信号传导通路的抑制分子,且MAPK通路的活化能延长其半衰期,但他在肿瘤发生中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨TGIF反义寡核苷酸对胃癌细胞增生和凋亡的影响.方法:将TGIF反义寡核酸瞬时转染胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测转染效率,MTT法检测胃癌细胞的增生速度,流式细胞术分析转染细胞的细胞周期和凋亡率的变化.结果:SGC-7901细胞转染TGIF反义寡核苷酸后,细胞增生受到部分抑制,72h后,他的抑制率达20.4%,但细胞的凋亡和细胞周期分布无明显改变.TGF-β1处理后,与突变寡核苷酸转染组细胞和未转染组细胞相比,TGIF反义寡核苷酸转染的SGC-7901细胞的增生受到明显抑制(30%),G1期细胞含量增加更明显.结论:TGIF能抑制TGF-β1对细胞生长和细胞周期的负调控作用,多数肿瘤细胞和间质细胞能分泌TGF-β1,这些肿瘤细胞有可能利用TGIF甚至少量TGIF,抑制TGF-β对自身的生长抑制作用,从而促进肿瘤的发生、发展与转移.
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长春新碱诱导人胃癌耐药细胞表达P-糖蛋白由核因子-κB活化调控
目的:研究核因子-Kappa B(NF-κB)在胃癌长春新碱耐药细胞中的活化情况,及其对细胞膜P-糖蛋白(P-gp)表达的调控作用.方法:以胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象.采用凝胶电泳迁移率分析检测NF-κB DNA结合活性,细胞-ELISA法检测细胞内IκB-α蛋白和细胞膜P-糖蛋白(P-gp)的表达,免疫细胞化学法观测细胞内P65核转位.结果:SGC7901/VCR耐药细胞中NF-kB的基础活性比敏感细胞高1.4倍.不同浓度VCR(5,10,20,50 μg/L)均可引起耐药细胞NF-κB DNA结合活性增强、Iκ3-α蛋白表达下降和P-gp表达增强,而亲本敏感细胞产生的上述效应均不及耐药细胞明显;SGC7901/VCR耐药细胞中,NF-κB活性与P-gp的表达呈正相关(r=0.977,P<0.01),且NF-κB活化的同时伴有P65核转位.NF-κB抑制剂MG-132可抑制VCR诱导的NF-κB活化及IкB-α降解,同时还能抑制P-gp高表达.结论:胃癌长春新碱耐药细胞中NF-кB活性增强,可能参与调控VCR诱导的细胞膜P-gp高表达.
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胃癌Fhit蛋白表达缺失的临床病理意义
目的:探讨76例胃癌Fhit蛋白表达与临床病理的关系.方法:采用免疫组化方法,检测76例胃癌、58例紧邻癌旁的异常增生和10例正常胃黏膜的Fhit表达并分析其与组织学分级、临床分期以及预后的关系.结果:癌组织Fhit表达缺失为48/76例(63.2%),紧邻癌旁的异常增生黏膜缺失为36/58例(62.1%),而正常胃黏膜为0/10,相差有非常显著性(P=0.000)Fhit蛋白缺失癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ-Ⅱ级癌35.7%(10/28),Ⅲ级癌79.2%(38/48),相差有非常显著性(P=0.000).Fhit蛋白缺失癌在临床分期中的分布为Ⅰ~Ⅱ期癌为43.8%(14/32),Ⅲ-Ⅳ期癌77.3%(34/44),相差有非常显著性(P=0.004).Fhit蛋白缺失癌在转移状况组的分布为转移癌74.1%(40/54),未转移癌为36.4%(8/22),相差有非常显著性(P=0.003).随访资料显示Fhit蛋白缺失癌的中位生存时间为33 mo,而Fhit蛋白表达癌者为71 mo,相差有非常显著性(Logrank=20.78;P=0.000).结论:Fhit蛋白为一种重要的抑癌蛋白,其表达缺失状况可能与胃癌的发生、侵犯、转移以及患者的预后相关.
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奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的影响
目的:研究生长抑素类似物奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的作用.方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后以处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的奥曲肽,以MTT法进行细胞增生试验,并以不含药物的培养液为阴性对照;通过HE染色和电子显微镜观察细胞形态,通过流式细胞仪测定SGC-7901细胞周期和凋亡率.结果:奥曲肽在一定浓度范围内(160-480 mg/L)对sGC-7901细胞的生长具有抑制作用(与对照组比较,均P<0.001),并存在量效关系和饱和性,大抑制率为25.4%(奥曲肽浓度400 mg/L).奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡,HE染色见奥曲肽作用48 h,细胞开始出现凋亡的形态学改变,72 h凋亡细胞明显增多,电镜下见有典型的凋亡小体出现.流式细胞仪分析可见Gl峰前出现亚二倍体峰,凋亡率为9.42±5.29%(P<0.05).结论:奥曲肽在体外能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞的生长,其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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中药复方胃康宁对人胃癌细胞VEGF及其受体表达的作用
目的:研究胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR的表达与中药胃康宁的调控作用.方法:以不同剂量的中药复方胃康宁制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果:与对照组(VEGF162.78±0.58,Flt:172.65±0.65)相比,VEGF及其受体Flt在用药组胃癌细胞中的表达减弱,染色变浅(VEGF:186.82±0.22,195.35±0.45,1 72.62±0.52,Flt:198.44±0.44,188.66±0.46,197.01±0.91,P<0.05),并且与用药剂量有一定的关系;VEGF mRNA及其受体Flt mRNA、KDR mRNA在用药组胃癌细胞中的表达也受到抑制.结论:中药胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用.
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抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞HT-29生长的影响
目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用.方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重组体转染低表达NGX6的人结肠癌细胞HT-29,Dot blot及RT-PCR方法检测外源性NGX6基因的表达,借助生长曲线、MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、裸鼠成瘤实验对NGX6转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组细胞生长速度比pcDNA3.1(+)/HT-29和HT-29组明显减慢(P<0.05),其倍曾时间为345 h比pcDNA3.1(+)/HT-29(27.1 h)和HT-29(23.0 h)延长;pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组软琼脂集落形成率较对照组明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测NGX6高表达能延缓HT-29细胞周期由G0/G1期→S期的进程;裸鼠成瘤实验表明pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组成瘤受抑.结论:NGX6的重表达可逆转人结肠癌细胞HT-29的恶性表型;NGX6是极具前途的结肠癌相关抑瘤基因侯选者.
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DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响
目的:研究DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响.方法:利用脂质体介导转染技术建立表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620(PcDNA-DPC4转染的SW620细胞)细胞模型;Western blot检测细胞中Smad4的表达;利用ELISA法检测细胞上清中VEGF蛋白的表达;利用RT-PCR检测细胞内VEGF mRNA的表达;利用皮下注射法建立裸鼠结肠癌移植瘤模型;利用免疫组织化学S-P法检测裸鼠肿瘤组织中VEGF的表达及微血管密度.结果:建立了表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620细胞系;DPC4+-SW620细胞,其Smad4蛋白表达于细胞质及细胞核,以胞质为主;DPC4+-SW620细胞其Smad4蛋白表达水平明显高于SW620细胞及PcDNA-SW620细胞(PcDNA3.1转染的SW620细胞);DPC4+-SW620细胞其VEGF蛋白、VEGFmRNA水平明显低于SW620细胞及PcDNA-SW620细胞(P<0.05);成功地建立了裸鼠结肠癌移植瘤模型;DPC4+-SW620组裸鼠肿瘤生长速度慢于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P<0.05);DPC4+-SW620组裸鼠肿瘤重量低于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P<0.05);DPC4+-Sw620组裸鼠肿瘤组织VEGF蛋白、肿瘤组织微血管密度均低于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P<0.05).结论:DPC4能够抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长.
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大肠腺癌组织leptin受体的表达意义
目的:研究leptin受体在人大肠癌细胞系及大肠腺癌组织中的表达,探讨与肿瘤血管生成、细胞增生之间的关系.方法:免疫组织化学方法+图像分析检测leptin受体,CD34及Ki67的表达,并计算肿瘤微血管密度及细胞增生指数.结果:leptin受体在SW480,HT29细胞以及大肠癌组织均有表达,大肠腺癌组织的平均染色吸光度比正常大肠组织高(0.153±0.011 vs 0.115±0.071,P<0.05),与Ki67指数呈正相关(r=0.388,P<0.05);血管内皮细胞表达leptin受体的大肠腺癌,其MVD较高(45.100±10.000 vs37.400±10.200,P<0.05),二者之间正相关(r=0.569,P<0.05);大肠腺癌MVD、Ki67指数比正常组织高(41.500±10.700 vs 31.300±11.100,P<0.01;0.458±0.108 vs0.312±0.097,P<0.01);leptin受体的表达与大肠腺癌临床病理参数之间未见相关.结论:leptin与大肠腺癌上的leptin受体结合后,在促进肿瘤细胞增生及肿瘤组织的血管增生方面具有一定的作用.
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直肠癌细胞系膜内淋巴结转移的解剖病理学研究
目的:研究直肠癌系膜淋巴结(LN)大小、分布、转移及微转移规律.方法:对全直肠系膜切除的直肠癌标本用LN显示液处理,切取的LN以常规病理结合免疫组化染色检测.结果:本组31例548枚LN,27例(87.1%)153枚(27.9%)LN发现转移.其中,直径小于0.5 cm LN 366枚(66.8%),转移91枚(59.5%).转移病例中,后壁直肠癌15例,78枚LN转移,75枚沿直肠上动脉分布.侧壁直肠癌12例,75枚LN转移,同侧直肠上动脉分支、直肠中动脉旁转移37和8枚,对侧分别为9和0枚.结论:直肠癌大部分转移LN直径小于0.5 cm,主要分布于直肠上动脉旁.LN转移与肿瘤方位有关,后壁癌可同时沿肿瘤两侧系膜扩散,侧壁癌以同侧LN受累为主.
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幽门螺杆菌对胃上皮细胞Cox-2表达与凋亡的影响
目的:研究Cox-2在胃癌细胞中及胃黏膜组织中表达的意义,探讨其表达与胃上皮细胞凋亡的关系.方法:将粗制H pylori总蛋白与胃上皮细胞株MKN28,AGS共同孵育,用RT-PCR及免疫组化染色法测定孵育前后细胞Cox-2表达的情况,同时检测了40例患者胃镜活检胃黏膜病变标本的Cox-2蛋白的表达及Hpylori感染情况.用流式细胞术观察H pylori、选择性Cox-2抑制剂NS-398及二者共同诱导细胞凋亡的情况.结果:与Hpylori孵育后的MKN28细胞株中Cox-2表达增加;Cox-2蛋白在与Hpylori共同孵育前后的MKN28细胞株中表达强度分别为0.26和0.40(P<0.05),AGS细胞中为0.29和0.31(P>0.05);Cox-2在胃癌中的表达明显高于浅表性胃炎(CSG)、萎缩性胃炎(CAG)组(P<0.05).流式显示,与Hpylori孵育24,48 h MKN28细胞凋亡率分别为1.0%和5.7%(P<0.01);与10,100,200 μmol/L NS-398孵育24 h及48 h的MKN28细胞凋亡率分别为1.2%,14.0%,27.5%及1.5%,31.2%,51.8%,具有浓度、时间依赖性(P<0.01).与Hpylori,NS-398共同孵育24,48h的MKN28细胞凋亡率分别为12.2%,25.0%,其凋亡率低于单用NS-398(P<0.01).结论:H pylori感染上调MKN28细胞中Cox-2的表达;Cox-2基因可抑制细胞凋亡,在胃癌发生发展过程中起重要作用,可能为胃癌形成的机制之一.
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小鼠H pylori长期感染模型研究
目的:用H pylori SSl(Sydney strainl)感染C57BL/6小鼠及Balb/c小鼠,建立稳定的Hpylori感染的小鼠实验动物模型.方法:通过灌胃的方式用H pylori SSl菌株感染二级C57BL/6小鼠和Balb/c小鼠,灌胃后4、12及24 wk分三次处死动物,用胃黏膜匀浆液进行细菌培养试验、尿素酶试验、胃病理组织学检查以及血清学抗体检测试验.结果:灌胃4 wk后,处死的7只Balb/c小鼠经胃组织细菌培养发现有6只显示阳性结果;处死的7只C57BL/6小鼠中有5只显示阳性结果.12和24wk后的实验组7只Balb/c小鼠胃组织细菌培养均为阳性,而7只C57BL/6小鼠中有6只显示阳性结果.在不同阶段尿素酶检测的阳性结果与细菌培养法结果一致.实验组动物胃窦部及胃体部均出现了轻度至中度慢性活动性胃炎变化;血清学IgG检查表明,各实验组的实验动物产生了抗H pylori血清抗体;而对照组动物的胃黏膜匀浆液经各项检测均为阴性.结论:成功地建立了H pylori感染的小鼠实验动物模型.