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头孢菌素类抗生素概览
头孢菌素类即头孢烯类,是由冠头孢菌培养液中分离的头孢菌素C,经改造侧链而得到的一系列半合成抗生素,包括头孢烯、氧头孢烯、碳头孢烯和7-α-甲氧基头孢烯在内的一类药物.它们的作用机制是抑制细菌细胞壁的合成,而人类和其他哺乳动物的细胞无细胞壁,因此对人应是无害的.临床应用证明它是一类抗菌谱广、抗菌活性强、疗效高、毒性低的抗生素,故深得医生和患者的欢迎,为人类战胜各种细菌感染作出极大的贡献.
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影响胚胎培养液P H及CO2平衡的因素探讨
目的 探讨胚胎培养液在CO2平衡及使用过程中pH的动态变化特性.方法 应用血气分析仪检测人输卵管液(HTF)培养液在CO2平衡过程中不同时间、CO2浓度、液量、加油厚度以及失去CO2支持后的二氧化碳分压(PCO2)和pH的变化.结果 胚胎培养液添加10%合成血清代用品(SSS)后,[HCO3-]降低2.19 mmol/L,pH降低0.022.1.0 ml培养液CO2完全平衡时间为5 h,加油后延长至15 h,培养液经5.0%CO2完全平衡的终pH为7.270~7.280.培养液液面越高平衡效果越差,≥6.0 m1培养液CO2平衡15 h后pH尚未稳定.CO2浓度由5.0%提高到6.0%,培养液pH降低0.060.培养液加油越厚其平衡效果越差,矿物油预先经过CO2平衡能明显提高平衡效果.失去CO2支持的无油培养液在静止状况下pH稳定时间为23 min,而加油培养液的pH稳定时间超过60 min.结论 胚胎培养液CO2平衡宜采用适量多管和≥15 h的过夜平衡方法;失去CO2支持的无油平衡培养液的操作时间应尽量短,而加油培养液可稍延长;应尽量减少培养液的加油厚度,使用预先CO2平衡的矿物油能明显提高平衡效果;应实测培养液pH来客观评价CO2平衡效果或CO2气体质量,选择适宜的CO2气体浓度、平衡方式和平衡时间.
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1-24 茶多酚、维生素C对石英致肺泡巨噬细胞DNA损伤的保护作用
目的探讨体外培养条件下石英粉尘对肺泡巨噬细胞DNA的损伤作用及茶多酚和维生素C的保护作用.方法将肺灌洗收获的肺泡巨噬细胞分别与石英粉尘悬液共同培养后,用单细胞凝胶电泳技术检测肺泡巨噬细胞DNA损伤的状况.结果大鼠肺泡巨噬细胞与不同浓度石英粉尘共同培养后,彗星出现率、DNA迁移长度增加,与阴性对照组比较,差异有显著性(P<0.05).随着石英粉尘与肺泡巨噬细胞作用时间的延长,彗星出现率及DNA损伤也呈增加的趋势.在培养液中加入茶多酚和维生素C能减轻石英粉尘所致肺泡巨噬细胞DNA的损伤.其中以40μg/ml的茶多酚及30μg/ml的维生素C保护效果较好.结论石英粉尘能诱导肺泡巨噬细胞DNA损伤.且随着粉尘浓度的增加以及作用时间的延长其DNA损伤程度有增加的趋势.茶多酚及维生素C对石英粉尘所致的DNA损伤有一定的保护作用.
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1-05 人支气管上皮细胞对致癌物NNK的代谢
的 4-甲基硝基胺、1-(3-吡啶)、1-丁酮(NNK)是存在于烟草和烟雾中的具有潜在致肺癌作用的化合物之一,且NNK的致癌性与机体的代谢过程有关.该实验观察原代人支气管上皮细胞(HBE cells)对致癌物NNK的代谢作用.方法以10和150 μmol/L 2种浓度的[5-3H]NNK处理HBE细胞,在37℃、5%CO2条件下培养1~24 h.从5 min到24 h定时取出一定量培养液,在带有放射性检测器的高效液相色谱仪上分析其各种代谢产物的含量.结果培养1 h后约有质量分数为10%的NNK被HBE细胞代谢,而培养24 h后约有50%的NNK被代谢.主要的代谢产物为NNAL,培养1 h和24 h后分别占全部代谢产物的40%~50%和80%~90%.其他代谢产物为keto aldehyde、hydroxy acid、keto alco-hol、keto acid和NNAL-N-oxide.结论人支气管上皮细胞对致癌物NNK有直接的代谢作用,因而可能在NNK导致的肺癌发生过程中具有重要意义.
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恒温箱/摇床维修点滴
一种封闭式摇床(如NewBrunswickScientific的恒温摇床)可振动4L的大烧瓶,这对培养1L的大肠杆菌培养液是必要的.而旋转水溶液窗(NewBrunswickR76)对小量烧瓶培养液的培养有利.
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BACTEC 960培养液抗酸涂片细菌形态观察在分支杆菌菌型鉴定中的意义
目的:观察分支杆菌在BACTEC960培养仪中的生长特点和涂片细菌抗酸形态,提供初步快速鉴定分支杆菌的实验室方法,从而提高分支杆菌的鉴定水平.方法:收集我院住院病人痰,脑脊液,胸水,尿液标本共计1544份,经前处理后分别接种MGIT培养基及对硝基基甲酸PNB培养基,置BACTEC960快速培养仪和37C培养箱,待培养仪出现阳性示警后,取出MGIT培养管,吸取培养物直接涂片,作抗酸染色和革兰氏染色形态学检查.结果:MGIT培养管内培养物清淅,有片状或团状沉淀物,涂片分支杆菌为长链状排列,PNB不生长.
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护士在促进合理使用抗菌药物中的作用
抗生素(antibiotics)是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物,能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质.现临床常用的抗生素有微生物培养液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物.目前已知的天然抗生素不下万种.
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台式压力蒸汽灭菌器的应用及其灭菌效果观察
目的 观察台式压力蒸汽灭菌器在特殊物品灭菌中的应用及其灭菌效果.方法 通过化学指示剂监测法,观察了小型台式压力蒸汽灭菌器对细胞培养用品和配液的灭菌效果.结果 用内源蒸汽台式压力蒸汽灭菌器,在121℃条件下对细胞培养配液灭菌25 min,对细胞培养配液达到灭菌通过;在132℃条件下灭菌12 min,对手术器械、玻璃培养器皿、胶塞等物品包达到灭菌通过.灭菌处理的细胞培养器皿和细胞配液都不影响细胞生长.结论 用台式压力蒸汽灭菌器对眼科实验室的细胞培养器皿和配液进行灭菌具有良好的适用性和有效性.
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西安市部分腹泻患儿病原检出情况分析
对我院1997年急住腹泻患儿1 510例进行分析,现报道如下.对象及方法:我院1997年1~12月住院和部分门诊急性腹泻患儿1 510例,年龄0~14岁 ,均符合1998年<中国腹泻病诊断治疗方案>的诊断标准,所有患儿均在就诊当天用无菌棉拭子沾取大便,将大便接种于SS和麦康培养液中,37℃,24 h培养,可疑菌落进行细菌鉴定与药敏试验.
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小鼠合子对常用人体外受精培养液敏感性较高
培养液的质量在体外受精(in vitro fertilization IVF)、胚胎培养过程中至关重要,检测培养液和实验用品中是否存在胚胎毒性物质是确保IVF成功的关键.小鼠2-细胞期胚胎培养实验是人类IVF实验室用于检测培养液质量的方法之一,其结果能较好地反映培养液的优劣,而单细胞期合子胚胎培养实验是对IVF使用培养液进行质量检测的一种更灵敏的方法.与2-细胞期比较,小鼠合子有更严格的生长条件.本实验分别使用小鼠2-细胞期胚胎和合子胚胎培养对IVF不同批号培养液进行质量检测,并对实验结果进行比较分析,为更好地选用实验室培养液质控方法提供参考.
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Livin在白血病耐药细胞系THP-1R的表达
Livin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关[1].为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人急性白血病细胞系THP-1与耐药细胞系THP-1R中的差异表达情况,为Livin在白血病多药耐药( multi-drug resistance,MDR)方面的意义提供实验依据.1材料与方法1.1材料主要试剂:RPMI 1640培养液(Promega公司);兔抗Livin抗体(博奥森生物技术有限公司);引物(上海生工生物工程公司);RT-PCR试剂盒(MBIFermentas公司);双链siRNA和RNAi-Mate转染试剂(上海吉玛生物技术公司).1.2方法1.2.1细胞培养:THP-1细胞为本室冻存,用含10%小牛血清的RPMI 1640培养液在37℃、5% CO2条件下培养,2~3d传代1次.采用逐渐增加药物浓度的方法[2]建立THP-1耐Ara-C的耐药系THP-1R,实验前2周撤去药物,以正常的RPM1640培养液培养,然后取对数生长期细胞用于后继实验.1.2.2 siRNA转染:参考文献[1],针对人Livin基因2个异构体的共同部分合成siRNA序列,正义链5’-GACAGUGCC AAGUGCCUGCdTdT-3’,反义链5'-GCAGGCACUUGGCACUG UCdTdT-3’.按照说明书所述比例配制siRNA/RNA-Mate复合物和完全培养基的混合液,用此混合液稀释细胞至所需浓度,再分配到培养板各孔.非转染对照组用生理盐水代替siRNA.同时转染有荧光标记的阴性对照siRNA,在荧光显微镜下观察和判断转染效果.
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硫酸腺嘌呤对培养大鼠心肌细胞的保护作用
心脏缺血预处理是抗心肌缺血再灌注损伤的有效措施,表现为缩小心梗面积、改善心功能、保存心肌细胞结构的完整性、稳定心肌酶的活性.但有关从细胞培养水平来观察心肌酶学变化知之甚少.本研究在培养心肌细胞中应用腺苷的前体-硫酸腺嘌呤培养液培养心肌细胞和拟缺血预处理模型对比观察心肌酶活性,旨在为药物预处理效应的心肌酶学变化提供实验和临床资料.
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小鼠卵细胞质内显微注入单精子受精的实验研究
为了探讨提高小鼠卵细胞质内单精子注入受精率的方法,选取鼠龄12~14周的健康昆明白小鼠作为精子和卵子的供体,采用ICSI技术,以受精后二细胞卵裂的形成率为指标,了解不同采卵时间、不同微注射针参数及不同培养液对细胞质内单精子注入的影响.结果表明,hCG注射后18~19h采卵,用针尖内径为4~5 μm、斜面角度为35~40度的微注射针进行ICSI操作,受精后卵子置CZB中培养可获得较多的2细胞胚,卵裂率明显高于其余各组(28.10%),有高度显著性差异(P<0.01).结果提示:恰当的采卵时间、微注射针参数及培养液对ICSI结果有很大影响.
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神经干细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响
我们先前探讨了移植的神经干细胞在大鼠半横断损伤脊髓内存活及分化的情况,结果表明神经干细胞在损伤脊髓内可以存活、迁移并分化为神经元和星型胶质细胞.在此基础上,本研究应用神经干细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响.取SD新生大鼠海马,剪碎后,用胰酶消化,制成细胞悬液,用含B27和bFGF的DMEM/F12培养液进行培养.神经干细胞在无血清培养基中呈悬浮生长,5~6!d形成克隆球,7~9!d后进行传代.
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培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用
在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色;用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等[1].然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量.污染细胞常见的支原体包括:发醉支原体(M.fementans)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginina)、梨支原体(M.pirum)、唾液支原体(M.salivarium)和人型支原体(M.hominis)[2-3].被这些支原体污染的细胞常常不引起明显的细胞病变,也不导致培养液浑浊,难以凭肉眼发现,因此,建立一种高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要.
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血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡
一、材料与方法1.细胞培养:采用改进的Jaffe氏培养法,培养人脐带静脉内皮细胞.采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代.培养液均为含20%胎牛血清的DMEM培养液.
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人骨肉瘤细胞系OS-732与血管生成的相关作用
一、材料与方法 1.细胞株和细胞培养:人骨肉瘤细胞株OS-732, 购自北京积水潭医院骨科实验室,常规培养于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中。 2.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)制备及瘤细胞接种:选取孵育至9 d的胚蛋,参考付生法[1]的方法制备CAM,选择近胚头1 cm处的两条前卵黄静脉间的相对无血管区接种对数生长期OS-732细胞,每只5×106/100 μl,共接种10只。另10只设为空白对照组。于接种第2天至接种第9天在解剖显微镜下逐日观察接种区5 mm范围内血管数目及形态学变化。
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同时失活HtrA和ClpP对变异链球菌适应性耐酸能力的影响
变异链球菌的适应耐酸能力是它适应牙菌斑中动态变化酸性环境的关键致龋机制.本实验前期构建变异链球菌htrA-clpP双基因缺陷株(简称htrA-clpP 缺陷株),来探究HtrA和ClpP两种蛋白在变异链球菌耐酸性过程中相互作用机制.将标准株和htrA -clpP缺陷株常规复苏,收集细菌沉淀物用生理盐水适当稀释成菌液备用,用TPY液体培养液分别对两种菌液进行稀释,培养至对数中期后得到细菌沉淀物分成两份,分别加入与上清液等体积的pH5.5(预酸化处理)或7.0 TPY液体培养基中培养5h后收集4种细菌沉淀物,将其加入等体积pH3.0 TPY液体培养液中,在0、1.0、2.0、3.0h取菌液进行逐步稀释,在TPY固体培养基计数,计算生存率,实验步骤重复3次.
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肺炎衣原体转运、储存及传代条件的探讨
进行临床标本肺炎衣原体(Chlamydia Pneumoniae, CP)的分离,标本接种前转运、储存及营养液选择等,均是影响培养阳性率的重要因素。本研究选用3株CP标准毒株K6、K7、CM1模拟临床标本的转运过程,对在SPG(Sucrose-phosphate-glutamic acid buffer)、含SPG(10%FBS)、CP培养分离用营养液IMDM(10%FBS)及标准转运培养基M4中转运后的毒力进行比较,并对保存于上述培养液中已知CP含量的菌株进行复苏后毒力的比较,同时对液体因素及传代条件进行了观察。
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“克疣灵”治疗尖锐湿疣的实验研究
尖锐湿疣(CA)为难治性病毒性疾病,缺乏有效的治疗手段,为探讨中药"克疣灵"外搽剂(主要含生药苦参、黄连等)治疗CA的作用机理,我们开展(1) 兔包皮表皮细胞、CA细胞的原代与传代培养:无菌条件下剥离CA组织、雄性大白兔包皮表皮组织,修剪成1mm2大小置含20%胎牛血清的25ml无菌培养瓶,待组织块固定后翻转培养瓶,加RPMI 1640培养液1.5ml 37℃,5% CO2无菌培养箱中静置3~4 h后轻轻翻转,使组织小块浸于培养液中,14 d后待细胞贴满瓶底后传代至第5代.(2) 不同浓度的"克疣灵"对CA细胞、兔包皮表皮细胞增殖的影响: