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乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状
由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.
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HIV发病机制的细胞学基础
HIV通过靶细胞上特定受体CD4、CXCR4及CCR5分子,攻击D4+T细胞、树突状细换胞、巨噬细胞及自然杀伤细胞等免疫细胞,引起细胞病变及清除,并引发受损免疫细胞定位器官相应病理改变.某些器官及细胞成为HIV潜伏期贮库,贮库病毒抗药株的出现及其持续释放成为当今HIV预防、治疗主要障碍.如何使潜伏期贮库病毒完全释放并通过有效方法清除是当今抗HIV研究热点、难点问题.从细胞学水平深入了解HIV发病机制,将为寻求有效防制策略提供理论依据.
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乙型肝炎病毒转基因小鼠
乙型肝炎病毒转基因小鼠对研究HBV基因结构和功能,基因表达的调控,HBV的复制和致肝细胞病变的关系,HBV感染和宿主免疫系统的应答以及HBV感染与肝细胞癌之间的相互关系等,都有极为重要的意义.本文对HBV转基因小鼠及其在研究HBV中的应用进用综述.
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流感病毒对两种细胞敏感性的比较
目的 比较流感病毒对Vero细胞和MDCK细胞敏感性的差异及影响敏感性的因素,寻找流感病毒灭活试验的佳细胞.方法 用测定两种细胞感染病毒后TCID50值和血凝效价值的方法,了解流感病毒对两种细胞敏感性的差异.结果 Vero细胞和MDCK细胞接种流感病毒72 h,测得血凝效价分别为1:64和1:128;MDCK细胞的病变较Vero细胞明显.终浓度为5μg/ml的胰酶可提高两种细胞增殖流感病毒的血凝效价,但对TCID50值的大小无明显的影响.随着维持液中血清浓度的升高,两种细胞增殖病毒的血凝效价逐渐降低,MDCK细胞染毒后的TCID50值也明显减小.结论 流感病毒对MDCK细胞的敏感性高于对Vero细胞的敏感性,胰酶和血清能影响病毒对细胞的敏感性.
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逆转录聚合酶链式反应检测某些动物性产品中冠状病毒初探
对于引起人类严重急性呼吸综合征的冠状病毒(SARS-associated coronavirus)[1]检验方法有免疫荧光法、ELISA法和分子生物学方法,这些方法全部针对临床标本.目前食品中检测的病毒种类仅限于甲肝病毒、轮状病毒、诺瓦克病毒、柯萨奇病毒等肠道病毒.由于环境样品不同于医学标本,样品中病毒数量极少,传统方法需要从大量样本中富集、分离病毒,再经过如组织培养等方法检测,这些方法因细胞病变不明显、重复性差、时间太长等均不适用.
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清肝化瘀方含药血清对人巨细胞病毒感染后人胚肺成纤维细胞细胞病变及增殖的影响
目的 探讨清肝化瘀方含药血清对人巨细胞病毒(HCMV)感染后人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞病变及增殖活性的影响.方法 以体外培养的HELF为靶细胞,将清肝化瘀方含药血清和更昔洛韦(GCV)含药血清分别作用于HCMVAD169株感染的HELF,采用倒置相差显微镜动态观察细胞病变,MTT检测细胞增殖活性.结果 清肝化瘀方含药血清、GCV含药血清大无毒浓度均为血清稀释度10-3.HCMV感染后24~72 h、168 h细胞病变(+);24~72 h、144 h增殖活性减低.清肝化瘀方含药血清、GCV含药血清干预后,细胞病变均消失;干预24~96 h增殖活性均逐渐升高,与病毒组比较,均以72 h时升高为主,差异有统计学意义(P<0.05).2组间细胞病变及增殖活性比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 清肝化瘀方、GCV含药血清均可通过遏制HCMV感染后细胞病变,调节HELF增殖而发挥抗病毒作用.
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栀子提取物抗病毒试验研究
目的:观察栀子提取物ZG对小鼠流感病毒性肺炎模型的影响和体外对多种病毒致细胞病变作用的影响.方法:小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型,观察肺部炎症、死亡率和生命延长率,体外抗病毒试验采用CPE法,按Reed-Muench方法计算TCO,TC5O,IG5O,TI.结果:栀子提取物ZG对流感病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制作用,可明显降低流感病毒感染后小鼠的死亡率、延长存活时间,同时降低小鼠血清中NO含量;在体外对流感病毒等6种病毒引起的细胞病变有明显抑制作用.结论:栀子提取物ZG对流感病毒等6种病毒有明显抑制作用,其对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用与降低血清中NO含量有关.
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西尼罗病毒的细胞敏感性观察
本研究选用C6/36、BHK21、Vero和Vero-E64株传代细胞进行西尼罗病毒的细胞敏感性试验,观察西尼罗病毒在各传代细胞系上细胞病变出现的时间以及病变特征.结果表明,该病毒在4种传代细胞出现CPE的时间及特征均有所不同,其中C6/36细胞对西尼罗病毒的细胞病变特征为明显,出现时间适中,更适用于西尼罗病毒的组织培养研究.
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免疫组化在前列腺穿刺活检中的诊断价值
介绍常用免疫组化标记在前列腺穿刺活检诊断和鉴别诊断中的价值.基底细胞消失是诊断前列腺癌的重要形态学指标之一,高分子量CK(34βE12)是前列腺基底细胞特异性标记抗体,它用于判断有结构异常的腺体基底细胞是否已经消失,从而有助于鉴别腺癌和绝大多数良性增生性病变.但它不是鉴别腺癌和非典型性腺瘤样增生(AAH)的绝对指标,也无法鉴别基底细胞肿瘤的良恶性.前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)和雄激素受体(AR)标记用于确定肿瘤是否来源于前列腺,对于诊断特殊类型前列腺癌有重要价值,对诊断膀胱、骨骼和其他脏器内转移性前列腺癌也极有帮助.KP-1和低分子量CK合并应用,有助于将低分化前列腺癌、经放疗或激素治疗后空泡变性的残余前列腺癌与以上皮样组织细胞增生为主的良性病变相鉴别.S-100显示穿刺标本中的神经纤维,它和低分子量CK合并应用可提高神经周围癌浸润的检出率.神经内分泌标记Svn、CgA 与PSA、PAP合并应用,有助于鉴别前列腺癌与原发于前列腺或直肠的类癌和神经内分泌癌,也有助于诊断恶性度较高的伴神经内分泌分化的前列腺癌.CD34、CD117则有助于诊断前列腺特异性间质细胞起源的间质肿瘤,并可与其他梭形细胞病变相鉴别.
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抑制素对性索及滋养叶细胞病变的诊断价值
系统介绍抑制素的生化特性、组织的免疫组化表达率及在妇产科领域病理诊断中的价值,分别对子宫类似卵巢性索间质肿瘤、卵巢性索间质肿瘤、卵巢瘤样病变、预痫胎盘及滋养层细胞肿瘤及可能来源于午非管的肿瘤,测定肿瘤组织中.抑制素的表达率,阐述其对上述病变或肿瘤的病理诊断及鉴别诊断的价值.
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泰安市肾综合征出血热疫源地分型研究
我市自1984年流行肾综合征出血热(HFRS)以来,曾多次进行地理流行病学调查,根据流行季节、主要宿主动物种类确定流行类型.这种方法不够准确.为有效控制HFRS在我市发病与流行,1995~1997年应用聚合酶链反应(RT-PCR)、核苷酸序列分析、微量细胞病变中和试验(MCPENT)技术开展了疫源地分型研究.
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培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用
在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色;用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等[1].然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量.污染细胞常见的支原体包括:发醉支原体(M.fementans)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginina)、梨支原体(M.pirum)、唾液支原体(M.salivarium)和人型支原体(M.hominis)[2-3].被这些支原体污染的细胞常常不引起明显的细胞病变,也不导致培养液浑浊,难以凭肉眼发现,因此,建立一种高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要.
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剖宫产后瘢痕部位相关病变临床及病理改变
跟据WHO孕期和围生保健全球调查(2007—2008年),中国的剖宫产率为46.5%,为被调查的24个国家之首。近20年来剖宫产率呈现持续上升状况,国内文献报道,剖宫产率在40%~60%之间,个别医院甚至高达70%以上[1-3]。高剖宫产率引发的瘢痕部位病变率增加。随着我国二胎生育政策的全面放开,子宫瘢痕妊娠等剖宫产相关病变发生率也大大增加。而对相关病变病理改变的研究和认识明显滞后。我们对浙江大学医学院附属妇产科医院病理科2013年8月至2016年2月瘢痕子宫相关手术标本共118例进行了统计,其中峡部妊娠76例,非特异性病变(包括子宫峡部前壁憩室、窦道、腔隙、瘢痕、炎性结节、肉芽组织等)30例,子宫内膜异位4例,滋养细胞病变7例(包括上皮样滋养细胞肿瘤1例、绒毛膜癌1例、胎盘部位滋养细胞肿瘤1例、不典型胎盘部位结节3例、胎盘部位结节/斑块1例),子宫内膜样癌1例。我们根据日常工作经验及相关知识查阅,从子宫瘢痕部位生理和病理方面,对瘢痕部位相关病变临床及病理改变做一阐述。
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黑色素瘤的分子病理诊断和个体化治疗进展
根据美国国立癌症中心的统计数据,在2014年的新发恶性肿瘤中,黑色素瘤约占4.6%,美国目前有黑色素瘤患者约92万名,每年死亡人数超过9000名[1]。近几十年间,黑色素瘤的患病率和死亡率均有明显的增加。由于黑色素瘤的组织学形态多种多样,遇到疑难病例,即使是有经验的病理医师也难以仅凭组织学形态做出明确诊断。随着分子病理的飞速发展,分子诊断在黑色素细胞病变的诊断和治疗过程中扮演着越来越重要的角色,除了协助诊断,还能明确基因突变的位点,了解黑色素瘤的特异性遗传学改变,为黑色素瘤患者的个体化治疗提供有价值的信息[2-3]。我们总结了黑色素瘤中的特征性基因突变、分子检测方法及新的个体化治疗进展,同时重点阐述了BRAF和KIT基因突变及荧光原位杂交( FISH)检测在黑色素瘤诊治中的作用。
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逆转录-聚合酶链反应检测蚊标本乙型脑炎病毒核酸片段
蚊子是乙脑病毒的传播媒介,蚊子带毒率的调查是监测自然界乙脑流行的主要手段之一.一般用常规的生物学方法分离病毒了解蚊带毒率情况,该方法工作量大,出结果慢,费时费力.本研究试图用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测蚊标本乙脑病毒核酸片段,并与常规分离病毒方法进行比较.1997年夏季从辽宁、沈阳、长春等地采集蚊标本约1 100余只,液氮保存.将蚊标本20~30只混合为一组,常规消毒、研磨、离心后,将上清分为两份,一份接种C6/36和BHK-21,连传3代,观察细胞病变,另一份作RT-PCR检测.
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乙型脑炎病毒高株部分基因序列分析
乙型脑炎病毒(JEV)高顺生株(高株)是我国学者于60年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株,其血凝活性的pH值较宽,与其他乙脑毒株不同,国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了DNA序列分析,以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同,为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。 1 材料和方法 1.1 病毒的培养将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨,离心取上清,10倍稀释后接种单层BHK细胞,数天后出现典型细胞病变(CPE)。
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艰难梭菌A毒素致细胞圆缩化和致死活性的相关性研究
艰难梭菌(Clostridium difficile)是人假膜性结肠炎和抗生素相关性腹泻的主要致病因子.其产生A、B两种与疾病有关蛋白毒素,其中由于A毒素具有肠道毒性而被认为是引起疾病的主要致病因子[1].A毒素的相对分子质量(Mr)很大,在未变性的状态下为(520~540)×103,在变性状态下降解为(220~240)×103左右,没有亚基分离.A毒素有肠道毒性、细胞毒性、小鼠致死活性、血球凝集活性、血管通透亢进等生物学活性.A毒素是一种可溶性蛋白,它通过受体介导的内吞作用进入细胞,诱导许多种哺乳动物组织和细胞发生细胞病变效应[1,2].A毒素对细胞的影响非常复杂,对A毒素的细胞毒性研究一般都是以细胞骨架变化引起的细胞形态变化即细胞圆缩化为敏感指标的,但是有报道认为细胞圆缩化后并不一定死亡[3].而国内虽然对艰难梭菌的分离、毒素精制、诊断方法及试剂方面有所研究,但还未对A毒素的细胞毒性展开工作.为此,我们采用非洲绿猴肾细胞Vero、人甲状腺乳头癌细胞TPC-1、人喉癌细胞HEP2、人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞SW1116、人肝癌细胞SMMC7721等6种细胞系,探讨了在A毒素致细胞圆缩化和细胞致死活性之间的关系.
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HCV感染树鼯句肝细胞初步探讨
为探讨HCV感染后是否能直接致细胞病变,本研究用HCV RNA阳性血清直接接种培养的树闙肝细胞,然后检测感染后HCV复制指标,并观察感染细胞形态学的变化.
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中药尾叶香茶菜对人胚脑神经细胞感染单纯疱疹病毒的细胞病变影响
单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)常潜伏在神经节内,诱发脑炎.因此,筛选有预防作用的药物十分重要.传统中医认为,尾叶香茶菜对口腔疱疹、溃疡、呼吸道急性感染有明显的抗炎作用[1],为此,将其作用于HSV-1感染后的人胚脑神经细胞,进行了药物毒性、抑毒指数、酶学测定,观察其抗病毒作用.
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彩超诊断胎盘部位滋养细胞肿瘤1例
患者女,39岁。月经淋漓不尽一年余。因停经55天,自觉腹部包块渐进性增大,前来就诊。10年前曾有“葡萄胎”病史。妇检:子宫增大如孕4月,质硬、活动,外形不规则,子宫左侧可触及约10cm×9cm×7cm包块,实性感,与子宫关系密切。血HCG 1070mIU/ml。 超声所见:子宫明显增大,形态失常,宫腔内可见2.4cm×1.8cm不规则妊囊回声,未见胚芽(图1)。近右宫角处可见一不规则,边界尚清4.0cm×3.4cm低回声区,内部光点分布不均匀。子宫左前壁可见9.0cm×7.1cm实质性肿块,有清晰包膜。宫壁及宫底部肌层可见串珠状及分隔囊状无回声,大囊区直径2.4cm(图2,左)。子宫下段肌层多处呈“蜂窝”样无回声区。CDFI:子宫内彩色血流信号异常丰富(图2,右),宫内囊状无回声均为扩张血管,呈高速低阻力血流频谱,大血流峰值速1.3m/s,RI=0.43~0.48,可测及动静脉瘘血流频谱。右宫角低回声区可见周边环绕并有分支延伸至内的彩色血流信号。左前壁肿块内部血流信号不丰富,周围见彩色血流环绕。超声诊断:1、子宫肌瘤合并妊娠(过期流产);2、子宫内滋养细胞病变;3、子宫底肌层动静脉瘘,假性动脉瘤形成。