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囊胚滋养层细胞评分与移植后第7日血β-HCG和妊娠结局的关系
目的 分析囊胚滋养层细胞的分级与移植后第7日血β-HCG值和妊娠结局的关系,为将来的单囊胚移植提供理论依据. 方法 回顾性分析2005年1月至2014年12月在北京协和医院生殖中心进行复苏囊胚移植的患者资料,按照滋养层细胞的级别(A、B、C)分为三组,分析滋养层细胞级别与移植后第7日血β-HCG值的关系,并比较三组的极早期妊娠(生化妊娠而非临床妊娠)丢失率、流产率和继续妊娠率. 结果 三组患者复苏时年龄、胚胎冻存时间、内膜准备方案和移植日内膜厚度均无显著性统计学差异.移植后第7日的血清HCG值随滋养层细胞级别的降低呈明显的递减趋势,三组分别为(288.0±433.1)、(90.8±172.1)和(60.0±102.9)U/L.C组的极早期妊娠丢失率为30.2％,明显高于A组和B组(分别为11.4％和9.6％)(P＜0.05).三组的流产率无显著的统计学差异,但是A组和B组的继续妊娠率显著高于C组(P均＜0.05),而A和B组之间无统计学差异(P＞0.05).进行Logistic回归分析时,发现滋养层细胞质量对极早期妊娠丢失率和继续妊娠率有好的预测价值. 结论 囊胚的Gardner评分系统中滋养层细胞质量与移植后第7日血β-HCG值呈正相关,挑选高质量滋养层细胞的囊胚能够避免极早期妊娠丢失,能够提高继续妊娠率.
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缺氧对滋养层细胞功能的影响
在早孕期,由于胎盘绒毛发育不完善,胚胎与母体血液之间的物质交换尚未完全建立,胚胎发育及滋养层细胞侵入子宫基质的过程是在一个相对缺氧的环境下进行的.缺氧对这些过程产生着广泛的影响,而其对滋养层细胞增殖和功能的调节是这些影响的核心,并与一些妊娠疾病的病理机制有关.本文就近年来有关缺氧对滋养层细胞功能影响的研究进展进行综述.
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胎盘发育及功能评价的研究进展
胎盘对于妊娠期胎儿生长发育至关重要,胎盘功能障碍将导致胎儿生长受限,甚至引起胎儿死亡.滋养层细胞高效侵润、融合及母胎界面的血管构建有助于建立母-胎间物质交换.滋养层细胞增殖异常、滋养层细胞侵润子宫壁不完全、单核滋养层细胞融合为多核滋养层细胞功能紊乱等,将会影响胎盘发育和营养物质运输.胎盘分子标志物的早期诊断作为胎盘功能评价有助于改善妊娠结局,临床上主要以血管生成因子、胎盘激素、与胎盘功能有关的基因等作为检测指标.本文就滋养层细胞功能、胎盘分泌特异性激素、胎盘功能早期诊断标志物等新研究进展做一综述.
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整合素在着床中的作用
近年来,细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)与细胞表面受体相互作用的机制,随着研究的深入已经越来越清楚.这种受体命名为整合素(integrin),是一种完整的跨膜糖蛋白,由两种不同亚单位组成的异二聚体,包括纤粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(lamimin,LN)、胶原(collagen,COL)及玻璃粘连蛋白(vitronectin,VN)等受体.整合素和ECM相互作用促进细胞的粘附、生长、迁徙、增殖及分化[1].子宫、输卵管及早期胚胎中广泛存在整合素和ECM.在精卵识别过程中,整合素起调节作用,促使胚泡粘附于子宫内膜上皮,使滋养层细胞侵入子宫内膜,并调节随后的胚胎生长[2].本综述主要讨论整合素在着床中的作用.
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体外受精-胚胎移植对胎盘滋养层细胞MAPK信号通路的影响研究
目的 观察IVF-ET技术对早期胎盘滋养层细胞MAPK信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响. 方法 IVF-ET周期中双胚胎移植后妊娠7～8周,经超声引导下减胎获得的胎盘绒毛组织作为研究组(IVF-ET组,28例),自然妊娠双胎7～8周人工流产中获得的胎盘绒毛组织作为对照组(8例).利用AffymetrixHG-U133 Plus 2.0基因芯片对两组胎盘绒毛组织进行芯片杂交分析.用定量反转录聚合酶链反应(qRT PCR)在两组胎盘绒毛组织中验证其中的8个差异表达基因,从基因芯片数据中选取差异表达基因进行无监督聚类分析和基因本体(GO)功能生物信息学分析. 结果 与对照组相比,IVF-ET早期胎盘MAPK信号通路有32个差异表达基因(差异倍数≥2倍),13个基因上调,19个基因下调.上调基因是PLA2G12B、JUN、RPS6KA3、ACVR1B、FGF 18、PRKACB、RASGRP3、PLA2G4A、FGFR4、PDGFRA、CACNB2、RPS6KA2和SOS1,下调基因是STK4、GNG12、MAPK9、DUSP16、IL1R2、MAP3K8、BRAF、STK3、HSPA2、HSPB1、DUSP4、EGFR、IL1R1、TGFB1、RASA1、RPS6KA5、GADD45G、PLA2G2A和DUSP5.经qRT-PCR检测,与对照组相比,IVF-ET组8个MAPK信号通路基因成员中JUN、PLA2G4A、PDGFRA和SOS1上调,MAPK9、EGFR、TGFB1和GADD45G下调,与基因芯片检测结果一致.MAPK信号通路基因定位显示,IVF-ET组胎盘绒毛组织中受到影响的基因主要位于MAPK信号通路的上游. 结论 IVF-ET来源的早期胎盘MAPK信号通路基因表达与自然妊娠早期胎盘中存在差异,差异的基因涉及MAPK信号通路的多种关键功能,进而可能影响IVF-ET胎盘早期发育和功能.
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白血病抑制因子对人早孕绒毛滋养层细胞c-jun、c-fos基因表达的调节
目的探讨重组人白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养层细胞着床相关分子原癌基因c-jun、c-fos表达的影响及其作用环节.方法将人早孕滋养层细胞培养于DMEM培养液中,加入不同浓度LIF(1、10和100ng)作用1 h后,分别提取总RNA;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测原癌基因c-jun和c-fos的表达. 结果正常培养的人早孕滋养层细胞有一定水平的c-jun、c-fos基因表达;LIF对人早孕滋养层细胞c-jun、c-fos的表达均有上调作用,c-jun、c-fos mRNA水平增加1.5～3倍,并且调节呈剂量依赖性.结论UF可能通过调节滋养层细胞原癌基因c-jun和c-fos表达而影响胚胎的植入
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miR-133a对滋养层细胞系HTR8-SVneo的粘附及侵袭功能的影响
目的 研究体外上调及下调miR-133a对滋养层细胞系HTR8-SVneo的粘附及侵袭功能的影响. 方法 将培养的HTR8-SVneo细胞根据脂质体转染因素分为对照组(转染空质粒)、上调组(转染mimics)、下调组(转染inhibitor),通过荧光定量PCR法检测各组miR-133a的表达水平,采用MTT法检测细胞粘附能力的变化,同时运用Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化. 结果 与对照组比较,miR-133a上调组细胞黏附能力显著下降,miR-133a下调组细胞黏附力显著升高(P均＜0.05);与对照组比较,miR-133a上调组细胞侵袭力显著降低,miR-133a下调组细胞侵袭力显著升高(P均＜0.01).结论 miR-133a在调控滋养层细胞粘附能力和侵袭能力方面起着重要作用.
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兔妊娠早中期滋养层细胞侵润的观察研究
目的 观察兔妊娠早、中期滋养层细胞的形成、侵润及蜕膜区变化. 方法 HE染色、碱性磷酸酶染色和过碘酸雪夫染色观察血管周变化,以细胞角蛋白7(CK7)抗体免疫组化标记滋养层细胞,观察滋养层细胞的行为. 结果 妊娠第7.5天出现着床点,第9天管周细胞发生蜕膜化,滋养层细胞开始向子宫间质侵润,第10.5天,管周蜕膜化细胞发生水肿,出现胎盘小叶,合胞体滋养层细胞增多,第12天,迷路下的子宫间质中滋养层细胞剧增,迷路下出现动脉血窦,蜕膜化细胞高度空泡化,第13天和14天动脉窦管腔扩大,第15天胎盘形成,胎盘下(连接区)全部被滋养层细胞侵润,第19天,滋养层细胞侵袭至子宫肌层和肌层动脉管壁. 结论 兔妊娠过程中,滋养层细胞以间质渗入、蜕膜细胞渗入、血管内逆行向上等多种方式并行向蜕膜区肌层血管进行侵润.
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促肾上腺皮质激素释放激素对JAR细胞凋亡相关蛋白配体表达的影响
本实验采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)对体外培养的滋养层细胞(绒毛膜上皮癌细胞系JAR细胞)凋亡相关蛋白(factor associated suicide)配体(Fas ligand, FasL)的表达及其调节作用.
关键词： 促肾上腺皮质激素释放激素 滋养层细胞 凋亡相关蛋白配体 -
母-胎界面交互对话介导母-胎免疫耐受
生理妊娠类似于胚胎作为移植物的同种异体移植.母-胎界面介导胚胎移植物与母体的交互作用,而这种细胞间交互作用在形成母-胎免疫耐受方面起着重要作用.胚胎通过滋养层细胞直接与母体交互对话,同时也诱导并调节蜕膜免疫细胞对于胚源性抗原的耐受,以此来维持妊娠的顺利进行.
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反复植入失败—胚胎因素的重要性
反复种植失败也许可以定义为移植形态学良好的胚胎到正常的子宫腔内3次及以上,仍未获得成功植入和临床妊娠.生殖专家们认为只有小部分的胚胎可以植入并终成为活婴,这一概念也被体外培养的胚胎绝大部分质量较低且无法发育成胎儿的临床事实所证实.植入前遗传学筛查/诊断的结果表明,造成胚胎转化为胎儿的比例如此之低的一个重要原因是与胚胎质量密切相关.因此,在本综述中,我们针对反复种植失败发生的胚胎学因素,从染色体异常、透明带硬化、体外培养条件、滋养外胚层细胞以及胚胎发育潜能预测等方面进行综合阐述.
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蔗糖预处理去核:一种可靠的无损害小鼠卵母细胞MII期核去除法
小鼠是发育生物学中为有用的实验动物模型,特别是在核移植方面.自从1983年Mc-Grath等[1]报道成功地进行小鼠的核移植以来,已采用小鼠的4-8细胞期的早期胚胎细胞[2]、桑椹胚[3]、内细胞团和滋养层细胞[4]以及体细胞[5]进行了核移植,并获得了后代.作为核移植的受体,可采用去核的合子[1],2-细胞期胚胎[6,7]和去核卵母细胞[8].其中以去核卵母细胞使用为广泛,它可接受各个时期以及不同类型的供体细胞[9].但MII期小鼠卵母细胞的核(纺锤体)不能在相差显微镜下观察到[10].
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滋养层细胞自噬与子痫前期发病机制的研究进展
子痫前期是引起围产期孕妇和胎婴儿病死率的重要原因,日前发病机制尚不明确.细胞自噬作为真核生物中基本的生命现象,广泛参与机体的多种生理和病理过程.有关研究表明,适度的细胞自噬有助于滋养层细胞存活,防止子痫前期的发生.然而,自噬过程受损或过度自噬,均会导致子痫前期甚至不良妊娠结局的发生.
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BeWo细胞模型及其在胎盘转运机制研究中的应用
妊娠期胎盘屏障调控了母儿间的物质交换,研究药物的胎盘转运机制对解析药物有效性、安全性和毒性具有重要意义.BeWo细胞来源于人绒毛膜癌细胞,可形成滋养层单层细胞,是有效评价营养物质和药物摄取、外排和转运的胎盘屏障体外模型,该文详细介绍了BeWo细胞模型的特点和建立方法,以及应用该模型在营养物质和药物转运机制的研究进展.
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寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞生物学特性的影响
目的 探讨寿胎丸含药血清对自然流产(spontaneous abortion,SA)患者滋养层细胞增殖、侵袭、分泌等生物学特性的影响.方法 体外分离培养正常妊娠人工流产及SA患者滋养层细胞,采用不同浓度(5％、10％、20％)的寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清(正常对照)及地屈孕酮含药血清(阳性对照)作为对照,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Transwell侵袭移动实验及ELISA法分别测定滋养层细胞增殖活力、周期分布、侵袭迁移能力及人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平.结果 与正常对照组比较,干预24 h后,SA组细胞增殖活性明显降低(P＜0.05),凋亡细胞(亚G0/G1期)及G2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(均P＜0.05);Transwell实验示细胞侵袭及迁移能力明显降低;干预72 h分泌β-HCG水平亦明显降低(均P＜0.05);与SA组比较,地屈孕酮组及寿胎丸各浓度组细胞增殖活性均明显升高,凋亡细胞及G2/M期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显升高,细胞侵袭及迁移能力均明显增强;干预72 h分泌β-HCG量均明显升高(均P＜0.05);滋养层细胞增殖活性、S期细胞比例、细胞侵袭及迁移能力及分泌β-HCG水平随着寿胎丸含药血清浓度增加而增强,且20％寿胎丸组对滋养层细胞的作用均优于地屈孕酮组(P＜0.05).结论 寿胎丸含药血清呈剂量依赖性地增强SA患者滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移力及分泌β-HCG能力,减少细胞凋亡,可能为寿胎丸防治SA的作用机制之一.
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寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨寿胎丸防治自然流产的可能作用机制.方法 体外分离培养自然流产患者滋养层细胞,并用不同浓度(5％、10％、20％)寿胎丸含药血清干预24h(寿胎丸含药血清组),并以空白血清及地屈孕酮含药血清分别作为空白对照(空白血清组)及阳性对照(地屈孕酮含药血清组),每个浓度3个复孔.检测各组不同药物浓度血清干预后滋养层细胞总凋亡比例及细胞凋亡相关蛋白BCl-2、Bax蛋白表达水平.结果 与空白血清组比较,寿胎丸含药血清组和地屈孕酮含药血清组各浓度药物血清干预后能降低滋养层细胞总凋亡比例,上调Bcl-2蛋白水平,在浓度为10％和20％的药物血清干预后下调Bax蛋白水平(P＜0.05),并且呈一定的剂量依赖性(P＜0.05). 结论 寿胎丸含药血清呈剂量依赖性减少自然流产患者滋养层细胞凋亡,可能与上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白有关.
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胶体金试纸检测尿HCG的钩状效应及对策
胶体金免疫结合试验是在酶免疫结合试验的基础上的一种固相标记免疫分析技术,其特点是单份测定、操作简单(一步操作)、快速、准确性高和重复性好,除商品试剂外不需要任何仪器设备,几分钟即可用肉眼观察结果,目前已广泛应用于妊娠妇女与滋养层细胞肿瘤患者HCG的检测.
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Fzr1基因沉默促进滋养层细胞的侵袭与增殖
目的 观察Fzr1蛋白在胎盘发育过程中时空性表达变化及其对滋养层细胞侵袭与增殖的影响.方法 免疫印迹和免疫组化法观察Fzr1蛋白的表达量和表达部位,通过RNA干扰技术、Transwell实验和MTS法检测Fzr1对滋养层细胞侵袭和增殖.结果 1)在妊娠早期,Fzrl蛋白强烈表达于绒毛的细胞滋养层和合体滋养层细胞,阳性信号主要位于胞质.在妊娠晚期,Fzr1蛋白主要表达于合体滋养层细胞,且表达量明显下降,阳性信号主要定位于胞核.与妊娠早期相比,妊娠晚期Fzr1蛋白下降4.88倍(P＜0.01).2)与空白对照组相比,Fzr1干扰组,JAR细胞的侵袭能力明显增强(P＜0.01),而无义对照,没有明显变化.3)与空白对照组相比,Fzrl干扰组,JAR细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01),而无义对照,没有明显变化.结论 Fzr1蛋白在正常妊娠胎盘呈现时空性的表达,Fzr1基因沉默能促进滋养层细胞的侵袭和增殖能力.
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早期自然流产胎盘绒毛基质金属蛋白酶-2表达增强
早期自然流产(early spontaneous abortion)是指妊娠12周内胚胎或胎儿在宫内停止发育而排出的病理性妊娠,发生率占全部自然流产的62%以上.胎盘形成过程中,滋养层细胞对子宫蜕膜的侵入及对子宫螺旋小动脉的"血管重铸"是胎盘建成的关键步骤.基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein-ases,MMPs)是一组含有Zn2+能降解绝大多数细胞外基质(extracellular,ECM)的肽链内切酶.研究证实,MMP-2和9是恒河猴滋养层细胞侵入子宫内膜和胎盘形成的关键因子[1],但对人早期自然流产过程中的表达情况尚未见报道.本研究首次采用明胶酶谱法研究早期自然流产胎盘绒毛中MMP-2和9的活性变化,以探讨其与早期自然流产的关系.
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滋养层发育和机能分化与粘附因子及细胞因子
胚泡着床后侵入蜕膜组织形成强固粘附的同时,迅速分化成绒毛并完成胎盘的组织构成.绒毛上皮由细胞滋养层、合体细胞滋养层和绒毛外细胞滋养层(extravillous cytotrophoblast)组成.在滋养层细胞增殖与分化和绒毛膜形成的过程中与性激素、生长因子、癌基因、癌抑制基因、凋亡关联因子、细胞外基质和粘附因子等多种因子的关系密切.本文仅对细胞粘附因子(adherin)及细胞因子(cytokine)与滋养层细胞的发育与机能分化进行讨论.
