食管鳞癌组织中线粒体和细胞核DNA的提取和鉴定

目的:研究在同一组织中同时提取线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的方法的有效性.方法:同一组织中既含有mtDNA又含有nDNA,利用试剂盒同时提取出mtDNA和nDNA,用琼脂糖凝胶电泳,聚合酶链反应(PCR)的方法,对所提取的mtDNA和nDNA进检测.结果:用同一组织从线粒体中得到mtDNA,从细胞核中得到nDNA.与用传统方法分别提取mtDNA和nDNA效果一样,并且两者相关性强,相比较更有说服力.结论:同一组织中能同时提取mtDNA和nDNA,既节省组织又节省时间和费用,为DNA的研究提供了较好的实验方法.

螺旋CT多平面重建在急性阑尾炎诊断和鉴别诊断中的临床应用

目的:探讨螺旋CT多平面重建(MPR)对无典型临床表现阑尾炎的诊断价值.方法:搜集临床首次诊断未确诊为阑尾炎,手术和病理证实为阑尾炎者19例,回顾性分析比较螺旋CT轴扫和MPR两种方法的诊断符合率.结果:单纯采用螺旋CT轴扫法图像分析,诊断符合率84.2%,8例表现为阑尾增粗、壁增厚并有明显强化,其中4例阑尾内见结石;盲肠和(或)周围炎10例;右下腹局限性脓肿5例,其中2例伴有斑点状钙化.误诊为回盲部及升结肠肿瘤2例,盆腔炎1例,误诊率15.8%.采用螺旋CT MPR图像分析,诊断符合率94.7%,误诊为回盲部及升结肠肿瘤1例,误诊率5.3%.结论:症状和体征不典型的阑尾炎临床诊断困难,易误诊,螺旋CT MPR方法简单,可从不同角度观察病变部位及其周围情况,有利于鉴别诊断,提高诊断符合率,具有较高的临床价值.

白花蛇舌草总黄酮抑制人肝癌细胞的靶基因调控

目的:研究白花蛇舌草总黄酮(flavonoids fromHedyotis diffusa willd.,FHD)中制人肝癌细胞SMMC-7721的靶基因调控.方法:分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和FHD作用后的SMMC-7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得FHD抗肝癌的靶基因,对靶基因进行生物信息学分析.结果:共找到20条FHD抑制肝癌细胞的有效靶基因,即给予FHD后,通过上调或下调,这些显著异常表达的基因被恢复至正常水平.其中,癌基因pim-1(Hs.81170)、rel(Hs.858)、ras(Hs.204354)、fos(Hs.25647)、myc(Hs.79070)、met(Hs.285754)以及编码Bcl-2相关蛋白的基因(Hs.227817)被显著下调;成纤维细胞生长因子(Hs.284244)、胰岛素样生长因子1受体(Hs.239176)、胰岛素样生长因子结合蛋白(Hs.1516)、G蛋白偶联受体(Hs.23016)、酪氨酸蛋白磷酸化酶(Hs.227777)、转录因子12(Hs.21704)、转录因子CP2(Hs.54970)等与细胞生长相关的信号转导分子被显著下调;细胞因子IL-1(Hs.1722)被显著下调;丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路成员MAP2K6(Hs.118825)和MAP3K12(Hs.21601)被显著上调;抑癌基因NF-2(Hs.902)被显著上调;编码T细胞活化共刺激信号分子的TNFSF9(Hs.1524)、TNFSF7(Hs.99899)基因被显著上调.这些基因均与肝癌的发生、发展密切相关.结论:FHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内、胞外信号转导途径协调完成.

大鼠急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡及Bax,Caspase-8的表达

目的:研究大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡情况,凋亡调控基因Bax与凋亡蛋白酶Caspase-8的表达及其同疾病严重程度的关系.方法:胆胰管逆行注入不同浓度去氧胆酸钠方法制备大鼠急性胰腺炎模型,设假手术(SO)组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组和急性坏死性胰腺炎(ANP)组.采用TUNEL技术检测胰腺腺泡细胞的凋亡,RT-PCR与免疫组化方法分别分析胰腺组织Bax,Caspase-8 mRNA及蛋白的表达,对胰腺组织进行病理学评分并测定血清淀粉酶及IL-6,TNF-α含量.结果:与SO组比较,AEP与ANP组胰腺组织显示不同程度的病理损害,血清淀粉酶(63 413±6118,1 532 134±17 654 nkat/L vs 15 736±483 nkat/L,P＜0.01)及TNF-α(1.86±0.13,2.97±0.14μg/L vs 0.95±0.08 μg/L,P＜0.01),IL-6 (47.10±7.05,170.10±7.59 ng/L vs 29.20±4.47 ng/L,P＜0.01)浓度显著升高,且ANP组显著高于AEP组(P＜0.05);AEP与ANP组腺泡细胞凋亡指数显著升高(22.09±3.71,6.50±1.58 vs 0.13±0.05,P＜0.01),但ANP组显著低于AEP组(P＜0.05).同时发现,AEP与ANP组胰腺组织Bax (mRNA:1.530±0.501,1.046±0.337;蛋白:453.7±30.5,339.4±26.7)和Caspase-8(mRNA:0.595±0.17,0.505±0.173;蛋白:3606±337,3134±231) mRNA及蛋白表达水平均显著高于SO组(Bax mRNA:0.613±0.244,Bax蛋白:245.2±30.0;Caspase-8mRNA:0.357±0.130,Caspase-8蛋白:2396±266)(P＜0.01),ANP组Bax mRNA及蛋白表达水平显著低于AEP组(1.046±0.337,339.4±26.7 vs 1.530±0.501,453.7±30.5,P＜0.05),ANP组Caspase-8 mRNA及蛋白表达水平低于AEP组,但差异不具有显著性意义.结论:急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞发生凋亡伴随凋亡调控基因Bax与凋亡蛋白酶Caspase-8表达增加,并同病情严重程度呈负相关关系.

金雀异黄素对人胃腺癌细胞中Akt及其磷酸化蛋白表达的影响

目的:研究金雀异黄素(Genistein)对人胃腺癌细胞SGC-7901中Akt及其磷酸化蛋白p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)表达的影响.方法:用浓度为0,5,10,20,40和80μmo1/L的Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测Genistein对SGC-7901增殖的抑制作用,Hoechst 33342染色观察Genistein对SGC-7901凋亡的诱导作用,Westem blot方法检测不同浓度Genistein处理后的SGC-7901细胞中Akt,p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)的表达情况.结果:5,10,20,40和80 μmol/L的Genistein对SGC-7901细胞增殖的抑制率分别为6.85%±3.71%,13.19%±1.90%,20.94%±1.83%,29.58%±1.19%和41.75%±1.92%.20-80μmo1/L的Genistein处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变.Genistein对细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响.不同浓度Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,均有两种磷酸化Akt蛋白的表达,两种磷酸化蛋白表达均随Genistein浓度的增加而逐渐减弱,80 μmo1/L Genistein处理组表达弱.结论:Genistein的抗癌活性与其抑制磷酸化Akt蛋白表达有关.

复合乳酸菌对不同营养治疗途径的重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

目的:观察复合乳酸菌对早期肠内营养(EEN)和肠外营养(PN)治疗的重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠屏障功能的影响.方法:♂ SD大鼠胰腺被膜下均匀注射38 g/L牛磺胆酸钠制作SAP模型,96只大鼠随机分为假手术早期肠内营养治疗组(Sham-EEN)、早期肠内营养治疗组(EEN)、早期肠内营养联合复合乳酸菌治疗组(EEN+Lac);假手术肠外营养治疗组(Sham-PN)、肠外营养治疗组(PN)、肠外营养联合复合乳酸菌组(PN+Lac),每组16只,分别于第4和7天随机取8只大鼠,预处理后取材,检测肝和肠系膜淋巴结(MLN)肠道菌群易位(BT)、血浆内毒素(ET)、肠转运指数,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡、BCA法测定小肠黏膜蛋白含量、ELISA法测定小肠黏液SIgA含量.结果:PN组大鼠的BT率高于EEN组和PN+Lac组(14/16 vs 9/16,10/16,均P＜0.05);4 d EEN组高于EEN+Lac组(12/16 vs 9/16,P=0.026).PN组血浆ET高于EEN组(276.83±30.81 EU/Lvs 138.52±22.56 EU/L,P＜0.05);不加用Lac组高于加用Lac组(均P＜0.05).PN+Lac组肠转运系数高于PN组(0.70±0.08 vs 0.59±0.05,P＜0.01).PN组小肠上皮细胞AI高于EEN组和PN+Lac组(22.67%±4.97% vs 15.31%±4.18%,18.40%±2.01%,P＜0.01).加用Lac组空肠黏膜蛋白含量高于不加用Lac组(均P＜0.05);EEN+Lac组高于PN+Lac组(56.91±3.73 mg/gvs 44.69±2.99 mg/g,P＜0.01).EEN+Lac组小肠黏液SIgA含量高于EEN组和PN+Lac组(82.17±6.02 μg/g vs 69.26±5.66 μg/g,59.87±5.54μg/g,P＜0.05及P＜0.01).结论:加用复合乳酸菌可改善EEN和PN治疗的SAP大鼠肠屏障功能,其中EEN+Lac的作用为显著,EEN在维护SAP大鼠肠屏障方面的作用优于PN.

热休克蛋白70系列与应激性溃疡之间的相互关系

生物细胞在受到各种理化因素刺激后,可以产生一系列的应激反应,诱导热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达.在众多的HSP中,HSP70家族是生物进化过程中为保守也是目前人们研究多的一组蛋白.应激可以诱导机体胃黏膜的损伤并可以降低胃黏膜的屏障保护作用,进而导致应激性溃疡的产生,同时加速热休克蛋白的合成,而热休克蛋白反过来又可预防应激性溃疡的发生,抑制胃黏膜细胞凋亡,促进胃溃疡的愈合.本文综述了主要的热休克蛋白分子的分类、调节以及在应激性溃疡中的表达和应用,并简要论述了通过诱导热休克蛋白表达而作为胃黏膜保护剂的几种药物.

黏膜地址素细胞黏附分子与溃疡性结肠炎

黏膜地址素细胞黏附分子(mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1)是一种选择性表达于肠道黏膜及其相关淋巴组织的血管内皮细胞表面的黏附分子,主要介导淋巴细胞向肠道黏膜部位定向归巢.在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的炎症部位MAdCAM-1表达明显增加.本文综述MAdCAM-1的分子结构、分布、生物学功能及其在UC发病中的作用,要重视其作为UC潜在治疗靶标的意义.

酒精性肝炎的治疗进展

酒精性肝炎往往导致肝硬化及肝癌,其重症患者短期死亡率相当高.迄今为止,尚无任何药物可以根治这一顽疾,现有临床治疗仅停留于对病情的缓解和营养补充层次.肝脏移植是酒精性肝炎重症患者佳的、也是无奈的选择,但他仍然面临移植手术时机和患者适应症的选择问题.近年随着酒精性肝炎发病机制的逐渐阐明,揭示了肝细胞凋亡以及各种细胞因子在其病程发展中所扮演的重要角色,由此引发了新一轮寻找酒精性肝炎特效疗法的热潮.

胰腺腺泡细胞凋亡与急性胰腺炎及其治疗策略

细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序的死亡,包含了复杂的调控机制,与细胞坏死有着本质区别,不引起炎症刺激.在实验性及临床急性胰腺炎中均观察到胰腺腺泡细胞的凋亡,研究表明其可能是机体有利的保护性反应,与病情严重程度呈负相关关系.本文总结了近年来对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究进展,并对治疗方面的相关研究和探索进行了归纳和阐述.

SCID-hu小鼠在HBV感染研究中的应用

乙型肝炎病毒由于其特殊的嗜肝性,不易在其他动物模型重现其感染过程.SCID小鼠作为一种先天性T,B细胞双重缺陷动物,为异种移植研究提供了极大的帮助.随着SCID-hu模型的出现,人们通过移植人肝细胞、人外周血淋巴细胞等各种方法建立人鼠嵌合模型,让其感染乙型肝炎病毒,来研究乙型肝炎的发病机制.嵌合模型模拟了疾病在人体内的过程,据此所得的研究结果具有更强的说服力.

Hedgehog-GLI信号通路在胰腺癌发生中的作用

近年来研究发现Hedgehog-GLI信号转导通路的异常激活参予胰腺癌的发生及恶性生物学特性的维持.GLI锌指转录因子作为该信号通路末端的靶基因直接调控子,在这一过程中起着非常重要的作用.本文就Hedgehog-GLI信号通路在胰腺癌发生中的作用、GLI转录活性的调控及致瘤作用、Hedgehog-GLI通路的靶向治疗价值等方面的研究进展作一综述.

析因实验法建立规范化小鼠暴发性肝衰竭模型

目的:建立稳定有效的小鼠D-氨基半乳糖(D-GalN)和内毒素(LPS)致暴发性肝衰竭(FHF)模型.方法:采用析因实验法,选择两个影响模型成功率的因素:D-GalN和LPS的攻击剂量.两者各选取三个水平,以小鼠24 h病死率为评价指标,观察实验鼠的血清肝功能和肝组织病理学改变.结果:优选出两种较理想的给药方案:D-Ga1N600 mg/kg联合LPS 0.5 mg/kg和D-GalN 800mg/kg联合LPS 0.04 mg/kg腹腔注射.不同剂量的D-GalN和LPS对模型的病死率均有影响(F=36.878,P=0.000;F=32.386,P=0.000),均存在量效关系;而且D-Ga1N和LPS间存在交互作用(F=5.226,P=0.005),两种试剂合用可以明显提高模型的病死率.结论:建立了D-GalN和LPS致小鼠FHF的规范化模型.

多重耐药蛋白-1在胃癌中的表达及意义

目的:研究胃癌组织中多重耐药蛋白(MRP)-1的表达规律.方法:用免疫组织化学染色(SP法)检测30例慢性浅表性胃炎(CSG)、30例胃黏膜肠上皮化生(IM)、45例异型增生(Dys)和65例胃癌(GC)组织标本中MRP-1阳性表达情况,RTPCR技术检测MRP-1 mRNA的表达情况.均数的比较采用t检验,样本率的比较采用χ2检验,两因素的相关分析用直线相关分析.结果:在CSG→IM→Dys→GC的过程中,MRP-1的表达呈逐步递增趋势,MRP-1的阳性表达率GC组与Dys,IM组,均具有显著性差异(43/65 vs 19/45,6/30,P＜0.05),GC组MRP-1以及MRP-1 mRNA阳性表达率均高于相应癌旁组,差异具有非常显著性(66.2% vs 33.3%,63.1% vs 28.9%,P＜0.01);MRP-1与MRP-1mRNA表达强度呈正相关(r=0.598,P＜0.05).结论:胃癌形成过程中,MRP-1与MRP-1mRNA表达逐渐上调.

胃癌组织中MTA1,PTEN,E-cadherin的表达及其相互关系

目的:观察MTA1,PTEN,E-cadherin蛋白在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达,探讨其与胃癌浸润、转移和生物学行为的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测54例胃癌手术切除标本和15例正常胃黏膜组织中MTA1,PTEN,E-cadherin的表达.各指标之间相关因素的差异性比较采用χ2检验,相关性研究采用Spearman相关分析:结果:与正常胃组织相比,MTA1蛋白在胃癌组织中高表达(46.3% vs 6.7%,P＜0.01),PTEN和E-cadherin蛋白在胃癌组织中表达下调或缺失(51.9% vs 100%,42.6% vs 100%,均P＜0.01).MTA1和PTEN的阳性表达率与肿瘤浸润深度(P=0.003,P=0.001)、病理分期(P=0.004,P=0.008)、淋巴转移(P=0.000,P=0.001)、远隔转移(P=0.004,P=0.006)、临床分期有关(P=0.001,P=0.000);E-cadherin的正常表达率与肿瘤浸润深度(P=0.027)、病理分化程度(P=0.006)、淋巴转移(P=0.044)、临床分期有关(P=0.000).Spearman相关分析显MTA1与PTEN蛋白、MTA1与E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.518,r=-0.424,均p＜0.05).PTEN蛋白与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(r=0.53,P＜0.05).结论:MTA1蛋白水平高表达和PTEN,E-cadherin蛋白水平低表达可能与胃癌浸润和转移有关,且联合检测可以用于判断胃癌的生物学行为.

利用组织芯片技术研究P73和mP53基因编码蛋白在胃癌中的表达及意义

目的:构建胃癌及其癌前病变组织芯片,采用免疫组化方法观察研究P73和mP53基因编码蛋白在胃癌中的表达并探讨其临床病理学意义.方法:收集2003-2004年辽宁省肿瘤医院和中国医大附属一院104例胃癌及癌前病变组织标本构建两个组织芯片蜡块,组织样品直径为1 mm.采用SABC免疫组化方法检测胃癌组织中P73和mP53蛋白的表达,观察分析其与胃癌病理生物学行为的关系.结果:P73基因编码蛋白在胃癌、肠上皮化生、不典型增生病变组织中的阳性表达率显著高于远癌正常胃黏膜(90.1%,44.0%,80.0%vs 17.9%,P＜0.01).Borrman Ⅲ/Ⅳ型胃癌P73蛋白阳性表达率(92.9%/100%)显著高于BorrmanⅡ型胃癌(57.1%)(P＜0.05).伴转移胃癌组P73蛋白阳性表达率(淋巴结转移组94.4%,肝转移组100%,卵巢转移100%)显著高于无转移组(76.2%)(P＜0.05).胃癌组织中P73蛋白表达与mP53蛋白表达密切相关(χ2=9.6736,P＜0.01).结论:P73蛋白表达与胃癌恶性病理生物学行为密切相关,其虽与抑癌基因P53同源,但与mP53蛋白表达呈正相关,提示其可能作为P53的一种模拟突变体在胃癌发生、发展中起作用.

自身免疫性胰腺炎的研究进展

自身免疫性胰腺炎是一种特殊类型的慢性胰腺炎,在较长时间的临床实践中没有认清其本质.近年来,随着研究的深入,发现自身免疫性胰腺炎与其他胰腺炎相比较有所不同,呈现多种临床特征,因此作为一个独立的临床疾病,受到越来越多的关注.现将近几年来关于自身免疫性胰腺炎的发病机制、临床表现、诊断和治疗进展作一综述.

胆道出血误诊1例

报告1例因胆囊结石、急性胆囊炎相继引起顽固性消化道大出血、急性胰腺炎、急性腹膜炎误诊病例.患者首发表现为发热、腹痛和上消化道出血,上消化道出血原因一度被认为是胃溃疡所致,但积极的止血措施并无明显疗效,继而又并发了急性胰腺炎,终因急性腹膜炎外科手术而确诊.此病例提醒我们上消化道出血的鉴别诊断不可忽视胆道出血,尽管胆道出血大多因外科、介入或创伤所致,急性胆囊炎也是重要病因之一,如果诊断不及时,治疗不得当,可能会延误对患者的抢救.

累及消化系统多脏器过敏性紫癜1例

过敏性紫癜患者1例,以腹痛为首发表现,累及消化系统多脏器,出现急性胰腺炎、十二指肠多发溃疡、食管炎、浅表性胃炎伴胆汁反流、消化道出血、肝功能损害、胆囊炎.此外,尚出现肾脏、血液系统受累,临床上较为罕见,治疗上以大剂量糖皮质激素为主.

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