2型糖尿病患者LEP-2548位点SNP与非酒精性脂肪肝的关系

目的:探讨2型糖尿病(type 2 diabetes.T2MD)患者瘦素基(1eptin gene promoter,LEP)启动子区-2548单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphisms,SNP)与其合并非酒精性脂肪肝的关联.方法:以208例T2MD患者为病例组,其中合并非酒精性脂肪肝患者98例,无脂肪肝者110例,同时选择在性别、年龄上与之匹配的100例健康体检者为正常对照组:采用基于连接酶(ligase detection reaction,LDR)的测序分型方法,检测LEP-2548G>A位点的SNP:同时测量受试者的身高、体质量、腰围、臀围,并检测空腹C肽水平、肝功能、血糖、血脂等临床指标.结果:LEP-2548G>A住点SNP的分布在正常对照组及合并非酒精性脂肪肝、无脂肪肝的T2MD组间差异有显著性(P<0.01);SNP的分布与中腹部肥胖相关,且LEP-2548AA基因型发生中腹部肥胖的风险高,为GG基因型的2.720倍(OR=2.720,95%CI:1.1 86-6.235,P<0.05);LEP-2548G>A位点的基因型作为独立变量与T2MD患者合并非酒精性脂肪肝患病相关,AA基因型是T2MD患者合并非酒精性脂肪肝的危险因素(95%CI:1.210-7.615,P<0.05).结论:LEP-2548AA基因可能通过调控机体脂肪分布,增加中腹部肥胖风险,促进T2MD合并非酒精性脂肪肝的发生.

多种血液净化联合治疗重症急性胰腺炎32例

目的:探讨多种血液净化联合治疗重症急性胰腺炎的疗效和机制.方法:29例接受内科综合治疗患者为对照组,32例在内科综合治疗基础上增加血液净化(包括连续性高容量血液滤过、血液灌流及腹膜透析)为治疗组,观察2组治疗效果.结果:治疗组在腹痛缓解、腹水淀粉酶下降、APACHEⅡ评分及CT严重度指数多项指标均比对照组好转恢复快;预后对照组治愈好转21例(占72.41%),死亡8例(占27.59%),治疗组治愈好转29例(占90.63%),死亡3例(占9.38%).差异有统计学意义(P<0.05或0.01).结论:血液净化治疗重症急性胰腺炎疗效明显,可迅速改善患者病情,降低死亡率;对病情特别严重患者,采用连续性高容量血液滤过、血液灌流及腹膜透析联合治疗效果更佳.

山莨菪碱和加贝酯对胆总管结石术后胆道动力的影响

目的:观察胆总管结石术后,使用山莨菪碱、加贝酯对胆道和机体的影响.方法:将胆总管结石术后患者65例.随机分为对照组(n=20),山莨菪碱组(n=22)和加贝酯组(n=23),分别于术后1、2、3、4、5及7 d检测胆道压力及血清中内毒素的变化.于术后3、7 d进行99mTc-EHIDA肝胆动态功能显像定量分析.结果:胆道压力术后1、2、3 d,加贝酯组的低于对照组(1.76±0.20 kPa vs 1.84±0.28 kPa;1.60±0.221 kPa vs 1.86±0.20 kPa;1.56±0.22kPa vs 1.74±0.24 kPa,均P<0.05);术后3、4 d,山莨菪碱组和加贝酯组血清中内毒素水平低于对照组(P<0.05);术后3d,30 min十二指肠显影率(DAR)山莨菪碱组、加贝酯组与对照组间有明显差异(P=0.026,0.018);而肝高峰摄取时间(Tmax)、半排时间(T1/2、胆总管高峰摄取时间(Tmax)及半排时间(T1/2差异无显著性.结论:本研究提示术后早期,山莨菪碱组、加贝酯等药物可以促进胆汁排泄,降低血清内毒素水平,其作用机制可能与改善术后Oddi括约肌功能有关.

Twist、E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及意义

目的:探讨转录因子Twist及皮黏附分子E-cadherin在人肝内外胆管细胞癌、癌旁和正常胆管中的表达及其意义.方法:收集2008-01/2009-03华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科和胰腺外科中心手术切除的胆管细胞癌患者49例,其中肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)29例.肝外胆管细胞癌(extrahepatic cholangiocarcinoma,ECC)20例:另取24例癌旁组织(ICC与ECC各12例)、20例正常的胆管组织作为对照.免疫组织化学法检测Twist及E-cadherin的表达,分析其临床病理意义.结果:Twist蛋白在ICC及ECC中表达明显强于癌旁组织或正常胆管(79.31%,80.0%vs20.83%,1 5.0%,均P<0.05):E-cadherin在ICC及ECC中表达明显弱于癌旁组织或正常胆管组织(44.83%,40.0%vs 95.24%,100%,均P<0.05),组间表达差异有显著性:Twist和E-cadherin在胆管细胞癌中表达呈高度负相关(r=0.67,P<0.01);Twist蛋白表达水平与年龄、性别及组织病理分级无关(P>0.05).而与CA19-9水平、肿瘤浸润及淋巴结转移有关(P<0.01).结论:Twist与E-cadherin的异常表达与胆管细胞癌的发生发展相关;Twist可能参与了胆管细胞癌浸润转移的过程.

腹内高压对肠黏膜氧化还原状态的影响

目的:探讨腹内高压对肠道氧化还原状态的影响及其致肠黏膜屏障损伤机制,为临床研究提供实验依据.方法:健康成年新西兰兔21只,采用氮气气腹法制作腹内高压动物模型,按IAP大小分为正常对照组、10、20、30 mmHg组,按IAP维持时间分为1、2 h组,每组3只.制备肠黏膜组织匀浆上清液,检测丙二醛(MDA)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量,总抗氧化能力(T-AOC),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,RT-PCR检测肠黏膜组织GPx基因表达.结果:氧化性物质MDA、GSSG随时间延长及压力增高含量增加,还原性物质GSH及T-AOC随时间延长及压力增高含量降低,GSH/GSSG比率在压力升高至20 mmHg时显著降低;GPx、CAT、SOD酶活性呈现先增高后降低的趋势,20mmHg 1 h GPx基因表达明显高于正常对照组(0.600 vs 0.556,P<0.05),但随时间延长逐渐降低,30 mmHg作用1、2 h均显著低于正常对照组(0.450,0.420 vs 0.556,均P<0.01).结论:腹内高压可导致肠道氧化还原状态失衡,是导致肠黏膜屏障功能损害的重要因素.

P21真核表达载体的构建及其对HepG2细胞增殖的影响

目的:构建核定位信号突变型P21基因的真核表达载体并初步探讨其功能.方法:采用基因定点诱变技术获得核定位信号突变型P21基因.采用DNA重组技术,将突变型P21基因亚克隆至pDsRed1-C1真核表达质粒中,重组为pDsRed1-C1-P21NLS-.酶切鉴定及DNA测序,脂质体转染HepG2细胞,RT-PCR检测目的基因pDsRed1-C1-P21NLS-的表达,荧光显微镜观测目的基因亚细胞定位,台盼蓝拒染法检测质粒转染HepG2细胞生长曲线.结果:成功克隆了核定位信号野生型及突变型P21基因,成功构建TpDsRed1-C1-P21WT及pDsRed1-C1-P21NLS-重组质粒,酶切片段分别为4.7和0.5 kb,酶切鉴定正确,测序结果与GenBank核酸序列数据库比对表明,核定位序列中共9个核苷酸发生变异,由CGAAAACGG突变为GCGGCCGCG,测序成功.高效表达的红色融合蛋白,野生型主要定位于细胞核:而突变型主要定位于细胞质.野生型P21抑制HepG2细胞的生长;突变型促进HepG2细胞的生长,二者差异具有统计学意义(P<0.01).结论:P21的亚细胞定位,对HepG2细胞增殖影响具有明显差异.胞核P21抑制肿瘤生长,而胞质P21促进肿瘤生长.

早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤大鼠Peyer's结淋巴细胞亚群的影响

目的:观察烫伤大鼠伤后不同时间Peyer's结细胞总数及淋巴细胞亚群在营养支持影响下的变化形式,了解不同肠内营养支持对Peyer's结内细胞亚群的影响.方法:选取健康SD大鼠,随机分为标准肠内营养组(EN组,n=32)和谷氨酰胺补给组(EN+Gln组,n=32),制成烫伤动物模型(30%TBSAⅢ度烫伤),伤后早期分别给予标准肠内营养制剂(能全力)和标准肠内营养制剂+谷氨酰胺,于伤后第1、4、7、10天观察Peyer's结细胞总数及进行流式细胞仪细胞亚群(CD3+、CD45Ra+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+)分析.结果:烫伤后Peyer's结淋巴细胞总数在伤后1 d明显减少,主要体现为B细胞总数的减少.EN+Gln组在伤后7 d时淋巴细胞总数恢复至伤前水平[(5.29±1.03)×106vs(6.13±1.14)×106,P>0.05],而EN组没有恢复:EN+Gln组B细胞比例及总数在7、10 d时与伤前比较无明显差异[(28.7±0.69)×106,(3.05±0.72)×106vs(3.29±0.62)×106,P>0.05],而EN组B细胞总数在10 d时与伤前比较明显减少[(2.07±0.63)×106vs(3.29±0.62)×106,P<0.05]:CD4+和CD8+细胞在伤后两组变化不明显.结论:肠内谷氨酰胺补给支持能快速有效地促进Peyer's结淋巴细胞增殖,尤其是B细胞.增加Peyer's结内淋巴细胞总数;有利于肠道免疫屏障的恢复和强化.

骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞的诱导分化

目的:探讨大鼠骨髓间充质细胞向肝细胞祥细胞的诱导分化,观察诱导分化细胞的形态和分子生物学特性,及其对急性肝损伤大鼠的治疗作用.方法:分离、培养并纯化大鼠骨髓间充质细胞.培养基中加入肝细胞生长因子(HGF)、纤维生长因子-4(FGF-4)及上皮细胞生长因子(EOF),分别于7、14、21、28 d观察细胞形态变化,采用RT-PCR方法检测细胞白蛋白(ALB)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、细胞角蛋白-18(CK-18)的mRNA表达.将诱导分化28 d的细胞经DAPI染料染色后,经门静脉注入同种异体大鼠体内,经24、48、72及168 h分批处死大鼠,观察大鼠肝组织内荧光细胞的分布.大鼠腹腔注射硫代乙酰胺制作急性肝衰竭模型,将1×106及5×106个诱导分化细胞经门静脉注入大鼠体内,经48、168 h采血查肝功,168 h处死大鼠,取肝组织病理学检查.结果:大鼠间充质细胞经上述3种细胞因子诱导后,形态和生物学行为方面都发生向肝细胞样细胞方面的转化,经门静脉注入大鼠体内后,有大量该种细胞在肝组织内分布,24 h荧光细胞多,随时间延长逐渐减少,可持续7 d.骨髓间充质细胞的诱导分化细胞经门静脉注入肝损伤模型大鼠体内后,大鼠肝功能有所好转,注入1×106细胞大鼠ALT由注入前238.0±113.5 U/L,48 h后降至189±68.4 U/L,168 h后降至149.0±54.2 U/L,TBIL由注入前2.9±1.6 μmol/L,48 h至3.0±1.4 μmoI/L,168 h至1.3±0.3 μmol/L;注入5×106个细胞者(ALT)由注入前238.0±113.5 U/L,48 h后降至169.7±46.0U/L,168 h后降至103.7±46.0 U/L,TBIL由注入前2.9±1.6μmol/L,48 h至2.9±1.3μmol/L,168 h至0.9±0.3 μmol/L.结论:大鼠骨髓间充质细胞可在某些细胞因子的诱导作用下发生类肝细胞样转化,将转化细胞经门静脉植入同种异体大鼠体内后可在肝组织内存活并对大鼠肝损伤有一定修复作用.

罗格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的干预作用

目的:观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROSI)预处理后重症急性胰腺类(SAP)大鼠胰腺组织中PPARγ与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,探讨ROSI对大鼠SAP的干预作用.方法:将72只6 SD大鼠随机分为假手术(SO)组、SAP组及ROSI组.每组24只.逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)制备SAP模型.ROSI组在制模前1 h腹腔注射1%罗格列酮(1mL/kg),然后制备SAP模型.术后3、6、12 h经腹主动脉取血处死大鼠(每个时间点8只),胰腺组织病理切片HE染色后评分,留取胰腺组织检测髓过氧化物酶(MPO)、iNOS、NO含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中PPARγ和iNOS mRNA的表达水平.结果:与SAP组比较,ROSI组12 h点胰腺组织中MPO活性下降(2.09±0.36 U/g vs 2.67±0.58U/g,P<0.01),胰腺病理学评分改善(10.50±1.67 vs 12.50±1.77,P<0.05);ROSI组6、12 h点iNOS、NO活性低于同时间点SAP组(6 h点:4.39±1.20 U/mgprot vs 6.44±1.73 U/mgprot;22.58±5.49 μmol/gprot vs 36.90±7.28μmol/gprot;12 h点:9.87±2.69 U/mgprot vs 15.68±1.74 U/mgprot;17.06±5.40μmol/gprot vs24.47±4.98 gmol/gprot,均P<0.0 1);ROSI组胰腺组织中PPARV mRNA表达在3 h点明显增加,6 h点达高峰,单次剂量(10 mg/kg)至12 h点仍持续表达,其表达水平分别为0.229±0.091,0.394±0.081,0.364±0.064.与SAP组比较.而6 h点与12 h点iNOS mRNA表达较同时段sAP组均有下降,差异有统计学意义(0.197±0.049 vs 0.269±0.068;0.266±0.067 vs 0.415±0.076,P<0.05或<0.01).结论:罗格列酮通过活化PPARγ途径,抑制胰腺组织中iNOS mRNA表达,减少iNOS和NO生成,减轻中性粒细胞浸润,从而减轻SAP时胰腺病理损害.

难辨梭状芽孢杆菌相关性腹泻的认识进展

难辨梭状芽孢杆菌相关性腹泻的发病率及严重程度在全球范围内呈上升趋势.其发病绝大多数与近期内接受广谱抗生素治疗有关,但高龄、免疫损伤状态、长期住院等因素亦为该病发生的危险因素.粪便中难辨梭状芽孢杆菌毒素测定仍被认为是本病实验室诊断的"金标准".一旦确诊或高度怀疑本病,应立即停用原有抗生素,应用甲硝唑或万古霉素治疗.本文就难辨梭状芽孢杆菌相关性腹泻的流行病学、临床表现、诊断及治疗方法等研究进展作一综述.

CIP2A与肿瘤关系的研究进展

蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)是近被识别的一种癌蛋白.研究表明CIP2A具有稳定c-Myc蛋白表达水平,促进细胞锚着非贴壁性生长与体内肿瘤形成的作用.CIP2A在人类头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、胃癌及结肠癌中高表达.但目前CIP2A在人类癌症发生发展过程中的作用机制及临床相关性仍不十分清楚,有待进一步深入研究.

胶囊内镜在乳糜泻诊断中的应用

一直以来,由于乳糜泻(celiac disease)以一种亚临床表现或静息期出现,且小肠活检一乳糜泻诊断的金标准也有着一定的局限性,故临床上极易被漏诊、误诊,现在胶囊内镜的应用可能大大地提高了他的诊断率.现本文将胶囊内镜在乳糜泻诊断中的应用作一综述.

胃癌耐药机制研究进展

胃癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,其死亡率与发病率都很高.虽然胃癌的治疗取得了一定的进展,但仍然是导致癌症患者死亡的主要原因之一,影响化疗疗效的关键问题之一是胃癌的耐药.本文较为全面地综述了胃癌耐药的机制.

莪术对大鼠结肠平滑肌收缩的促进作用及机制

目的:观察莪术对离体大鼠结肠平滑肌收缩运动的影响,并初步探讨其作用机制.方法:制备大鼠结肠平滑肌肌条,以9 g/LNaCl溶液(NS)为对照组,观察不同浓度莪术对结肠平滑肌的收缩效应;以莪术为对照组.分别观察酚妥拉明、维拉帕米和阿托品3种阻断剂孵育肌条后,莪术对肌条的收缩效应.结果:莪术高浓度组对离体大鼠结肠平滑肌的促进作用明显,与NS对照组比较,莪术1g/L、10 g/L组引起的肌条大收缩振幅和曲线下面积均有统计学意义(63.92±2.06,76.27±2.28vs100%;44.09±11.10,55.66±10.29vs100%,P<0.05或<0.01);与单独莪术组比较,阻断剂维拉帕米和阿托品对莪术引起的肌条收缩有抑制作用,其大收缩振幅和曲线下面积均有统计学意义(87.35%±50.49%,73.80%±9.37%vs 100%,33.97%±15.18%,27.55%±11.56% vs 100%,P<0.05或<0.01).结论:莪术对大鼠结肠平滑肌的收缩活动有兴奋作用,且与剂量呈正相关,其引起的收缩效应可被阿托品和维拉帕米阻断,而未能被酚妥拉明阻断.

雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用

目的:研究雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用及机制.方法:采用小鼠的蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡等腹泻模型及炭末推进法观察低、中、高剂量(14.87 mg/kg、29.74 mg/kg、59.48 mg/kg)的EA303对小鼠在体内胃肠道的作用.通过离体运动实验法分析不同浓度(10-5mol/L、3 × 10-5mol/L、10-4 mol/L)的EA303对家兔离体肠道平滑肌的作用.结果:EA303高、中、低3个剂量组灌胃给药后在不同时间段与生理盐水组相比可明显降低蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡所致的小鼠腹泻的腹泻指数;高剂量组与生理盐水组相比可明显降低正常小鼠的小肠推进率(58.53%±14.12% vs 78.41%±15.91%,P<0.01);高、中、低剂量组与生理盐水组相比均可明显延缓正常小鼠的排便时间(116.40±17.69 min,114.40±45.76 min,101.50±50.02 min vs 78.10±15.98min,均P<0.01);中、高剂量的EA303与未给药前相比能显著降低小肠平滑肌自主活动的振幅(43.26%±14.83%,16.70%±10.89%vs 100.00%±0.00%,均P<0.01),高剂量组与未给药前相比还显著降低小肠平滑肌自主活动的张力(58.94%±7.16% vs 100.00%±0.00%,P<0.01).结论:EA303具有抑制肠运动和抗腹泻作用,其作用机制可能是降低肠管平滑肌振幅和张力.

DcR3-siRNA对SW480结肠癌细胞系放射治疗敏感性的增强作用

目的:观察DcR3对SWF480结肠癌细胞系放疗前疗效评估的价值,以及应用siRNA沉默DcR3基因对增强放疗敏感性的作用.方法:ELISA方法检测经不同剂量放射性137Cs照射的SW480结肠癌细胞中DcR3的含量.应用siRNA技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染入经放射性照射的SW480细胞及对照组细胞.应用图像分析系统进行记录细胞集落数量,流式细胞仪检测细胞凋亡状况.结果:与对照组相比,不同时间和不同剂量放射线照射后,SW480细胞DcR3含量均有增加(P<0.05),当照射10 G、48h后,其含量明显增加,经5 G137Cs照射后的DcR3-siRNA-SW480转染的细胞集落数量减少.DcR3-siRNA照射的SW480细胞M1期峰值明显增高,凋亡小体明显增加.结论:DcR3高表达可能对放射线抵抗性有一定预示作用,DcR3-siRNA可增强SW480结肠癌细胞对放射性照射的敏感性.

抗生素治疗大鼠急性胰腺炎后肠道真菌的变化与易位的关系

目的:观察急性胰腺炎(AP)大鼠使用抗生素治疗后,肠黏膜真菌和血清1-3-β-D葡聚糖的变化与真菌易位的关系.方法:采用雨蛙素(Caerulein)腹腔注射法复制大鼠急性水肿性胰腺炎模型.对成功复制AP模型的大鼠(治疗组)使用头孢哌酮舒巴坦治疗,分别治疗3,6,9,12及15 d,按观察时间随机分为5个亚组,每亚组67,.对照组为正常大鼠.观察期间正常喂食.分别于相同时间点处死2组动物并取相应的肠组织、肠系膜、肺和胰腺组织进行真菌培养,测定血清1-3-β-D葡聚糖含量.结果:与对照组相比,治疗组大鼠在抗生素治疗3 d后,肠道真菌数量开始增加,于第6天后肠道真菌和血清1-3-β-D葡聚糖的含量增加明显(P<0.05),第9天后肠外组织真菌检出率明显增加(P<0.05).血清1-3-β-D葡聚糖含量随着肠道真菌数量和真菌易位的增加而增加,肠道真菌增殖与肠道真菌易位和血清1-3-β-D聚糖水平之间均呈正相关(r=0.8972和0.7970).结论:使用抗生素治疗AP 6-9 d后,肠道真菌增殖和易位明显,此时预防使用抗真菌药物是合理的,血清1-3-β-D葡聚糖检测有助于早期诊断真菌感染.

利用RNA干扰技术抑制糖调节蛋白78在大肠癌细胞系中的表达

目的:观察靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)对大肠癌PKO细胞系GRP78mRNA汲蛋白的作用.方法:采用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结直肠腺癌、腺瘤及正常黏膜组织,PGRP7865表达:使用脂质体2000将GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转染至RKO细胞内,应用RT-PCR与Western blot法检测GRP78基因及蛋白的表达.结果:GRP78在结直肠癌组织中的表达水平显著高于正常黏膜组织(9.470±0.754 vs 0.780±2.468,Z=-8.140,P<0.05),腺瘤组织中其表达水平高于正常黏膜组织而低于癌组织,差别有统计学意义(5.330±2.744 vs 1.000±0.840,9.560±2.093,均P<0.05).然而在mRAN水平上,GRP78在3种组织中的表达无统计学意义:靶向shRNA质粒表达载体PGPU6/GFP/NeoGRP78能明显抑制RKO细胞中GRP78蛋白及mRNA的表达(F=11.670,27 1.860,均P<0.05).结论:靶向shRNA质粒表达栽体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)能明显抑制RKO细胞GRP78mRNA及蛋白的表达,为进一步明确GRP78在结直肠腺癌细胞增殖动力学中的作用奠定了实验基础.

气体信号分子H2S在肝硬化门脉高压形成中的作用

H2S、NO及CO共同构成了机体新的气体信号分子系统,他们在体内发挥重要的生物学效应,形成独立又相互作用的体系.本文综述了气体信号分子H2S在肝硬化门脉高压发生机制中的作用及对肝脏微循环与血液动力学的影响,为肝硬化门脉高压的防治提供新的理论与策略.

消息1