世界华人消化杂志
World Chinese Journal of Digestology 세계화인소화잡지
- 主管单位: 华人消化杂志;新消化病学杂志
- 主办单位: 山西省科学技术厅
- 影响因子: 0.00
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 14-1260/R
- 国内刊号: 李军亮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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儿童消化系统疾病致再发性腹痛的临床特点
目的:探讨儿童消化系统疾病所致再发性腹痛(RAP)的临床特点.方法:应用X线造影、纤维胃镜、B型超声显像及脑电图等诊断儿童RAP 211例.结果:功能性RAP46例(21.80%)中,肠痉挛17例、便秘9例、神经性厌食12例、肠易激综合征8例.器质性RAP165例(78.20%)中,胃窦炎及十二指肠炎118例、十二指肠溃疡14例、肠系膜上动脉压迫综合征8例、胆石症4例、蛔虫症11例、黑色素斑-胃肠多发息肉病2例和腹型癫痫8例.结论:儿童消化系统的RAP中,器质性RAP发病率较功能性RAP高,以消化性溃疡及炎症常见,提示RAP多为器质性疾病所致.
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肝细胞癌合并布加综合征的影像学诊断和治疗42例
目的:探讨肝细胞癌合并布加综合征的影像学诊疗价值.方法:回顾性分析42例肝细胞癌合并布加综合征的影像学诊疗资料.所有患者均行超声和CT检查(其中24例行CT增强扫描),18例行MRI检查.17例行经肝动脉化疗栓塞术,7例行下腔静脉内介入治疗.结果:29例下腔静脉癌栓超声检查表现为团块状不规则的稍高回声,2例为下腔静脉狭窄,11例无法显示下腔静脉情况.CT平扫均能显示肝脏的原发病灶,24例CT增强扫描于静脉期可见下腔静脉癌栓为低密度充盈缺损.18例MRI检查能直观显示下腔静脉内癌栓,于T1加权和质子加权像呈较高信号,T2加权像呈较低信号.对2例下腔静脉狭窄者行单纯PTA治疗,2例下腔静脉闭塞者经溶栓治疗后行PTA治疗,3例患者于PTA治疗后置入血管内支架.结论:综合多种影像学检查对肝细胞癌合并布加综合征有较高的诊断价值,血管内介入治疗是其有效的治疗手段.
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分段外切内注保留齿状线术治疗结缔组织型环状混合痔174例
目的:采用新方法治疗结缔组织型环状混合痔.方法:采用保留齿状线外痔分段切除、内痔消痔灵注射术的方法,对174例结缔组织型环状混合痔进行手术治疗.结果:术后所有患者随访3 mo.术后患者满意率86.8%(151/174),症状有所缓解者占13.2%(23/174).住院患者平均住院天数13±3 d.术后并发症:术后肛门疼痛:轻度72例,中度69例,重度33例.术后排尿障碍27例,8例出现急性尿潴留.肛门水肿发生率21.8%(38/174).术后大便出血5例.随访3 mo,4例复发,8例内痔有出血再次行消痔灵注射术后缓解.未发生1例肛门狭窄,大便失禁.结论:采用该方法治疗环状混合痔,不但临床疗效显著,且具有手术简单,术后痛苦少、恢复正常生活早,保持肛门生理功能,减少术后并发症的特点.
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慢性乙型肝炎患者血清内毒素、IL-4、IL-18水平的变化
目的:研究慢性乙型肝炎患者病程中血清内毒素(LPS)、IL-4和IL-18水平的变化,探讨他们在发病中的作用.方法:采用鲎试剂基质显色法,检测血清LPS;用ELISA法检测血清IL-4、IL-18.同时检测ALT等生化指标和五型肝炎病原学指标.慢性乙型肝炎35例,健康对照30名.结果:血清LPS、IL-4和IL-18水平于慢性乙型肝炎活动期及缓解期均显著高于健康对照(t=2.656,P<0.01),活动期明显高于缓解期(t=2.650,P<0.01).活动期三项指标均呈正相关(t=2.672,P<0.01).结论:慢性乙型肝炎病程中内毒素、IL-4和IL-18水平的变化及其相互调节,影响着慢性乙型肝炎发病和转归.
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同种肝细胞脾内移植治疗大鼠肝衰竭的实验研究
目的:探讨经脾内同种异体移植培养的原代肝细胞与肝细胞悬液治疗大鼠药物性肝衰竭的疗效,并观察脾内移植肝细胞的生物学特性.方法:采用D-氨基半乳糖(D-gal)建立大鼠急性肝衰竭模型,24h后随机分为3组进行治疗,Ⅰ组:经脾内移植体外培养3d的肝细胞2×107;Ⅱ组:经脾内移植预孵育8h的肝细胞悬液2×107;Ⅲ组:经脾内注射生理盐水1 mL.观察受体大鼠的存活率、肝脏功能和病理变化及移植肝细胞的生物学特性.结果:Ⅰ组、Ⅱ组大鼠存活率(78%,71%)与Ⅲ组大鼠存活率(23%)相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.05),肝功能各项指标均有明显改善,肝组织病理改变较轻.而Ⅰ,Ⅱ组大鼠的存活率、肝功能改变方面,没有统计学差异.经HE和PAS染色证实,移植的肝细胞在受体脾内结构和功能保持较好.结论:经脾内移植的培养肝细胞和肝细胞悬液均能提高大鼠药物性肝衰竭的存活率、改善肝功能及肝脏组织病理变化.而培养肝细胞与细胞悬液相比,统计学上没有明显差异,但结果显示培养肝细胞仍具有一定的优越性.
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高压氧加自由基拮抗剂对大鼠肝脏基质金属蛋白酶-2表达的影响
目的:观察高压氧加自由基拮抗剂对大鼠肝脏损伤早期及肝纤维化形成过程中肝脏基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响方法:用CCl4建立大鼠肝纤维化模型,在2 wk和8 wk分别给予高压氧结合自由基拮抗剂、高压氧、自由基拮抗剂处理,放免法测定血清透明质酸(HA)的含量,以了解细胞外基质合成情况,免疫组化法检测肝组织MMP-2蛋白以及其调节相关的生长因子TGF-β1蛋白的表达;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MMP-2 mRNA水平.结果:实验2 wk末模型组高压氧结合自由基拮抗剂组肝脂肪变性和水样变性及点状坏死与模型组相比明显减轻,MMP-2蛋白及mRNA,TGF-β1蛋白表达均低于模型组,差异显著(MMP-2:5.04±1.34 vs 56.75±3.03,P<0.01;MMP-2 mRNA:0.155±0.005 vs 0.547±0.013,P<0.01;TGF-β1:3.28±0.33 vs 4.96±0.28,P<0.01).血清HA虽低于模型组,但无显著差异(P>0.05).实验8 wk末模型组肝小叶内纤维结缔组织增生明显并形成粗细不等的纤维条索,高压氧结合自由基拮抗剂组以肝细胞脂变和细胞水肿为主,纤维结缔组织无明显增生,肝组织MMP-2蛋白及mRNA,TGF-β1蛋白表达和血清HA水平与模型组相比均明显为低(MMP-2:12.53±2.51 vs 160.57±5.54,P<0.01;MMP-2 mRNA:0.506±0.013 vs 0.685±0.014,P<0.01;TGF-β1:4.97±0.35 vs 7.76±0.39,P<0.01;HA:116.8±17.7μg/L vs 87.8±31.6μg/LP<0.01).高压氧组、自由基拮抗剂组在2 wk末和8 wk末肝损伤略轻于模型组,MMP-2蛋白和TGF-β1蛋白表达均低于模型组,且高压氧组MMP-2 mRNA表达亦较模型组低.结论:高压氧结合自由基拮抗剂可以降低CCl4损伤大鼠肝脏MMP-2表达,可以迟滞肝纤维化病变的发展.
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内毒素致肝损害中库普弗细胞的作用及大承气汤的调节
目的:探讨库普弗细胞(KC)在内毒素脂多糖(LPS)所致肝细胞(HC)损伤中的作用并观察中药大承气汤的调节作用.方法:以胶原酶体内循环灌注结合体外胰蛋白酶加皿内消化方法分离高纯度的HC和KC,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)掺入法测定HC的DNA合成及KC和LPS对HC的影响并观察中药大承气汤的调节作用.结果:低剂量的LPS能使HC的DNA合成轻度增加,到1mg/L时出现明显增加,但LPS剂量再加大,则出现DNA合成的抑制.LPS刺激不能使HC产生TNF;但能刺激KC分泌TNF,且随着刺激浓度增加,KC分泌TNF增加.在没有LPS存在下,KC对HC无明显影响;LPS对与KC混合培养的HC的DNA合成呈现明显的抑制性作用,而且随着LPS浓度加大,这种抑制作用愈加明显.当HC培养液中LPS量逐渐升高时,上清液中谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)含量亦随之升高,细胞内酶逸出增多;当LPS浓度达到1000μg/mL的高浓度时,可见ALT和LDH不仅不见增高,反而明显减少.精制中药大承气汤能明显逆转HC DNA合成的受抑状态.LPS能激活肝KC释放TNFa,大承气汤对KC释放TNF有明显抑制作用,减低HC培养上清液中ALT和LDH含量,减少酶的逸出.结论:内毒素LPS对单独培养HC的DNA的合成呈双相影响;LPS对HC功能具有直接损伤作用.LPS可刺激肝脏的KC释放TNF,加剧LPS所致HC功能损伤.中药大承气汤能对KC功能进行正确调控,对HC功能具有双重保护作用.
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生长激素和肝细胞生长因子对大鼠肝大部切除后再生的影响
目的:了解肝大部分切除后再生过程中甲胎蛋白(α-FP)、端粒酶活性(TA)和肝脏组织学、肝功能的变化,探讨促肝细胞生长因子、生长激素治疗对肝细胞再生及甲胎蛋白、端粒酶活性和肝脏组织学、肝功能的影响.方法:选取体重200g左右大鼠36只并随机分成6组,其中组1进行肝大部分切除后生长激素(GH)治疗;组2进行肝大部分切除后应用肝细胞生长因子(HGF)治疗;组3仅进行肝大部分切除而不给予任何药物治疗;组4、组5、组6均不进行切除手术,但组4和组5分别给予生长激素、肝细胞生长因子治疗,组6则不给予任何治疗.1 wk后取材,再生肝组织端粒酶活性采用PCR-ELISA法检测,血清甲胎蛋白含量采用夹心ELISA法检测.另外,肝组织还作病理切片观察.结果:手术组TA,AFP,ALT,GGT值均显著高于非手术组(两组TA分别为1.33±0.26,0.496±0.054,P<0.01;两组AFP分别为62.9±13.5μg/L,8.9±2.8μg/L,P<0.01;两组ALT分别为1 204±0.57 nkat/L,61.11±15.48 nkat/L,P<0.05;两组GGT分别为10.72±1.58 nkat/L,5.75±1.78nkat/L,P<0.01),而手术组ALB则显著低于非手术组(分别为28.1±3.0g/L,31.4±2.3g/L,P<0.01).组1的ALT显著高于组2和组6(三组ALT分别为82.16±18.5 nkat/L,60.83±7.96 nkat/L,66.67±11.02 nkat/L,P分别<0.01,0.05),组2和组3的ALB显著低于组6(三组ALB分别为28.3±4.1g/L,26.9±2.3g/L,31.8±2.1g/L,P分别<0.05,0.01).组1、组2和组3的TA(三组TA分别为1.56±0.18,1.38±0.10,1.04±0.12)及AFP值(三组AFP值分别为75.9±9.6μg/L,59.6±12.2μg/L,53.1±7.0μg/L)显著高于组4、组5及组6(三组TA分别为0.48±0.04,0.52±0.06,0.48±0.06)(三组AFP值分别为10.3±3.4μg/L,9.6±2.4μg/L,6.9±0.8μg/L)(两指标P值均<0.01).组织病理学研究发现手术组的残肝和非手术组的肝脏大体组织形态学差异不大,而手术组的再生肝则无典型的肝小叶结构,但可见肝窦,且细胞排列较残肝和非手术组肝脏更密集.结论:促肝细胞生长因子、生长激素能显著促进肝细胞再生,并且促肝细胞生长因子有利于肝细胞膜的稳定性及肝功能的恢复,而生长激素有明显促进白蛋白合成的作用.
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连续性血液净化在重症急性胰腺炎中的作用
重症急性胰腺炎(SAP)是一种死亡率很高的危重疾病,其早期死亡的主要原因是多器官功能障碍综合征(MODS)."白细胞的过度激活"及炎性递质的"瀑布样级联反应"是MODS的主要病理机制,通过连续性血液净化非选择性清除多种促炎因子,有可能防止MODS的发生从而改善SAP患者的预后.本文就连续性血液净化技术在SAP中的作用研究作一综述.
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Survivin与肿瘤
Survivin是新近发现的结构独特的凋亡抑制蛋白家族成员,具有抑制凋亡和调节细胞分裂的双重功能.他参与细胞的生长和分化,在终末分化成熟的正常成人组织中无表达,又重新表达于多种转化细胞和人类绝大多数常见肿瘤组织中.他与肿瘤的关系密切,此方面的研究是学术界的热点问题,研究包括Survivin在各种肿瘤中的表达,Survivin在肿瘤细胞中的作用机制以及在肿瘤早期诊断和治疗中的应用等.本文介绍Survivin的生物学特性以及与肿瘤相关的研究进展,为肿瘤的诊治带来希望.
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幽门螺杆菌的基因组及蛋白质组学研究进展
随着幽门螺杆菌26 695与J99菌株基因组测序工作的完成,人们对该菌的基因组学特点有了较清楚的认识,在此基础上,利用生物芯片、2-D电泳、质谱及生物信息学技术开展的后基因组学研究正成为Hp研究的前沿领域.本文首先对幽门螺杆菌的基因组特点及其多样性研究进行了概述,然后重点对后基因组学研究的新进展进行了综述,特别是对当前Hp蛋白质组研究的核心技术(2-D电泳、免疫印迹、亲和层析及基质辅助激光解析/电离质谱等)的特点及其优缺点以及在Hp遗传变异、免疫靶点筛选及毒力因子确定等方面的应用进行了比较和阐述,对目前Hp的基因组和蛋白质组研究面临的问题及发展趋势也进行了展望.
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肝纤维化的中医药研究
中医药工作者在防治肝纤维化方面进行了许多有益的探索,包括病名的确定、发病原因及病理机制的探讨、体内(人、动物)体外实验、单味中药及复方的疗效和作用机制研究等方面.本文对其进展情况作一阐述.
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腹腔镜肝脏切除术
腹腔镜肝脏切除术(laparoscopic liver resection,LLR)是新近发展起来的一种微创肝脏切除技术,但肝脏因其特殊解剖生理特点,以及目前缺乏有效的适于肝脏止血的腹腔镜止血设备,腹腔镜技术在肝脏外科治疗中的应用一直较为缓慢,肝脏的腹腔镜切除术成为难度大的腹腔镜治疗技术.经过腹腔镜专家的不懈努力,近年已取得了较大进展.本文介绍了腹腔镜肝脏切除术在肝脏良性疾病、肝脏恶性肿瘤、肝脏移植等方面的新进展;同时介绍了此方法的适应证,方法选择,疗效,特殊并发症及目前存在的问题和策略.认为目前手助腹腔镜技术是微创肝脏切除的一种较好方法.
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肝性脑病的定义、命名、诊断和定量标准修订方案的新进展
肝性脑病(HE)的临床研究与其定义、诊断方法和定量指标等密切相关,目前在HE的定义、诊断方法和定量指标诸方面不够明确,尚需进行适当调整.为此由肝脏病学、神经病学和神经心理学专家组成的工作小组在第11届世界胃肠病大会(维也纳,1998)就HE的标准化命名、临床试验的疗效指标、现代神经影像技术的作用以及亚临床型肝性脑病(SHE)等专题作出专门陈述和后续研究.终报告建议:修正当前HE临床诊断的命名方法;使用包括五项指标在内的心理测量肝性脑病评分(PHES)指标;进行大型研究以重新定义肝病患者的神经心理异常问题,在严格统计学基础上明确轻微型HE(MHE)的临床诊断;有必要对新型神经影像技术对HE的诊断价值进行仔细评估.
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肝纤维化的无创性诊断
肝组织活检是目前肝纤维化疾病诊断的金指标.但具有创伤性,近年来,无创性诊断方法的确立成为国内外学者关注的热点问题.实验室及临床研究结果表明血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶及其组织抑制因子以及转化生长因子-β1等细胞因子与该病密切相关.本文对目前国内外各项无创性诊断的研究进展进行综述.
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应激与小肠运动的研究进展
应激存在于现代生活各个方面、涉及临床各个科室,机体遭受应激后可引起明显的胃肠道功能紊乱,如外伤、烧伤、大出血等,可致明显的腹胀、肠胀气、黏液血便及胃出血等症状.应激状态下胃肠道动力学的改变与某些胃肠疾病如肠激惹综合征(irritable bowel syndrome,IBS)、功能性消化不良等有关,研究应激诱导胃肠道动力学的改变及其机制,对胃肠运动功能障碍性疾病的临床治疗和预防有较大意义.现结合有关文献,对应激与小肠运动功能紊乱及其可能的病理生理学机制进行综述.
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干细胞研究的问题与对策
干细胞的研究就是探索有关单个细胞增生、分化,甚至发展为一个生物有机体,在成熟的机体内健康的细胞替换衰老和受损伤的细胞规律和机制的研究.干细胞的研究已深入到了医学的各个方面.本文结合近年的文献,对干细胞研究过程中,随着新的发现而来的一系列问题:干细胞的定义、干细胞的来源、干细胞的不同类型、干细胞进行医学方面的治疗潜力、干细胞应用于临床疾病的治疗必须解决的问题和需要克服的障碍等几个方面的问题和进展作一综述.
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Barrett食管诊断和内镜治疗进展
Barrett食管是一种癌前病变状态,部分可发展成食管腺癌.目前主要的诊断方法是常规内镜检查加病理活检,但随机性较大且检出率不高.治疗方法主要是抑酸药物治疗和外科食管切除术,但均有不足之处.近年来出现了一些新的诊断技术和内镜治疗技术,取得了较好的效果.本文就Barrett食管诊断技术和内镜治疗方面的新进展作一综述.
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TIPS的临床应用再评价
TIPS(经颈静脉肝内门体分流术,transjugular intrahepaticportosystemic stent)是一种治疗肝硬化合并门脉高压症及其他并发症的有效方法,日益受到临床的重视.他不仅对急性胃底、食管静脉曲张破裂和反复、难治性的出血有很好的疗效,而且对门脉高压症引起的顽固性胸、腹水,肝肾综合征亦有好的疗效,同时还能有效地预防等待肝移植的患者的消化道出血.尤其对部分内镜治疗不能控制的出血及一些不宜或不能耐受外科手术的患者,唯行TIPS治疗有效.TIPS的近期疗效肯定,由于分流道的狭窄或闭塞,其中、远期疗效尚有待进一步提高,带膜支架的研究和临床应用有望解决这一问题.本文就TIPS的临床应用作一再评价.
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三叶因子家族研究进展
三叶因子家族(trefoil factorfamily,TFF)是一群主要由胃肠道黏液细胞分泌的小分子多肽.其共同特征为均含一特殊的P结构域,由38-39个氨基酸通过6个半胱氨酸残基经由3个二硫键相互联接,使整个肽链扭曲、折叠形成三叶状结构,由此命名.这种结构的稳定性使三叶因子家族具有明显的抗蛋白酶水解、酸消化及耐热特性,因而能在消化道复杂的环境中保持生物活性.目前在哺乳动物体内发现的有pS2/TFF1、SP/TFF2和ITF/TFF3三种,他们具有黏膜保护与修复、肿瘤抑制、信号传导、调节细胞凋亡等功能.
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多巴胺及其受体与胃黏膜保护
多巴胺作为第三类儿茶酚胺类神经递质,广泛地存在于中枢和外周组织,并在中枢和外周组织的不同部位被合成.采用新型的多巴胺受体分子生物学分类系统,根据对腺苷酸环化酶活力的不同影响的受体识别特性,多巴胺受体可分为D1和D2两个家族,其中D1家族包括D1和D5两个亚型,其可激活腺苷酸环化酶,D2家族包括D2、D3、D4三个亚型,对腺苷酸环化酶有抑制作用,还与细胞内其他第二信使系统相关联,包括激活钾通道、抑制钙通道及转换磷脂酰肌醇[2].作为脑肠轴(brain-gut axis)的重要递质,多巴胺及其受体激动剂和拮抗剂通过结合并刺激α和β以及多巴胺受体,在胃肠运动、胃液分泌、胃黏膜血流和氧供等多种消化功能中起着重要调节作用,已被公认为是一种重要的胃黏膜保护因子.
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幽门螺杆菌的致病因子
现已明确,幽门螺杆菌(Hp)与慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌和黏膜相关性淋巴样组织(MALT)淋巴瘤密切相关.Hp呈螺旋形,有鞭毛、适应性的酶和蛋白,这使他能在胃腔不利的酸性环境中定植和生存.Hp产生的毒素和有毒性作用的酶能破坏胃黏膜屏障,他还能使机体产生炎症和免疫反应,影响胃酸的分泌,终导致一系列疾病的形成.以上Hp的特性、对胃黏膜的损伤及其对人体的损伤过程中,Hp的致病因子发挥了重要作用,但其确切机制并不十分清楚.本文结合国内外文献综述了Hp的致病因子及其致病作用、致病机制以及与临床疾病的关系,并对近年Hp致病因子的研究进展作了较详细的介绍.
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外源性NO预防大鼠应激性胃黏膜损伤中胃运动的作用
目的:研究胃运动在一氧化氮(NO)供体硝普钠预防大鼠胃黏膜损伤中的作用.方法:采用浸水束缚应激法建立大鼠应激性胃溃疡模型.气囊法记录胃运动,比色法测定血清和胃黏膜组织中NO含量,并观察胃黏膜组织病理学变化.结果:硝普钠可以明显减轻浸水应激引起的胃黏膜损伤;抑制胃运动亢进,尤其是降低胃运动指数、收缩时间百分比和高强度收缩次数;同时增加血清和胃黏膜中NO含量;胃黏膜病理损害程度显著减轻.结论:外源性NO对浸水应激性胃黏膜损伤的保护作用可能是通过抑制胃运动亢进和增加胃黏膜NO含量来共同实现的.
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生长抑素和生长激素对急性重症胰腺炎胰腺细胞凋亡的影响
目的:探讨生长抑素联合生长激素治疗大鼠急性坏死性胰腺炎对胰腺细胞调亡和调控基因Bax和Bcl-2的影响.方法:以牛胆酸钠诱导SD大鼠急性坏死性胰腺炎模型,并应用TUNEL染色,免疫组化SABC法检测胰腺组织中基因Bax、Bcl-2蛋白表达以及生长抑素联合生长激素治疗后对胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.结果:TUNEL染色显示生理盐水治疗组胰腺细胞凋亡指数显著低于生长抑素治疗组和生长抑素联合生长激素治疗组.免疫组化SABC法生长抑素联合生长激素治疗组胰腺细胞Bax染色阳性率明显高于生理盐水组,而生长抑素治疗组Bax染色阳性率虽高于生理盐水组,但无统计学意义;生理盐水组胰腺细胞Bcl-2染色阳性率明显高于生长抑素治疗组及生长抑素联合生长激素治疗组.结论:生长抑素治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡以减轻胰腺炎症反应,细胞凋亡机制可能与抑制Bcl-2的表达有关而与促进Bax的表达无关;生长抑素和生长激素联合治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡,这机制可能与促进Bax的表达及抑制Bcl-2的表达有关.
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热盐水致胃黏膜细胞凋亡及对热休克蛋白表达影响
目的:研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织中的凋亡细胞、增生细胞和Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α及P53表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法:采用脱氧核糖核酸转移酶介导等缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术.细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术.结果:TUNEL检测细胞凋亡显示:在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎中凋亡细胞数明显增多,在黏膜全层均可见到,呈弥漫性分布.萎缩性胃炎中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃黏膜(P<0.05);免疫组化法检测凋亡相关基因和PCNA,显示:Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α、P53及PCNA在热盐水灌胃所致的萎缩性胃炎中的表达率显著高于正常胃黏膜(P<0.05);流式细胞检测显示:在萎缩性胃炎时,在G0/G1峰前可见一个亚G0/G1峰,也即凋亡细胞峰出现,而在正常胃黏膜时未显示亚G0/G1峰.结论:热盐水灌胃可导致大鼠胃黏膜组织细胞增生和细胞凋亡异常,其调控基因(Bcl-2、Fas)及HSP60、HSP70、HSP90α、P53在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎发生中起重要作用.
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多种因子在门脉高压大鼠空肠黏膜中的表达
目的:探讨多种因子在门脉高压大鼠空肠黏膜中的表达及其意义.方法:实验组大鼠行门静脉搏两步结扎加左肾上腺静脉结扎;应用免疫组化S-P染色法检测 iNOS、ecNOS、ET-1、VEGF及TNF-α在大鼠空肠黏膜中的表达情况.结果:实验组iNOS、ecNOS、ET-1、VEGF及TNF-α表达较对照组增强,VEGF无明显变化.结论:iNOS、ecNOS、ET-1、VEGF及TNF-α参与门脉高压大鼠空肠黏膜局部病变.
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转导S基因的树突状细胞对肝癌患者细胞免疫的影响
目的:将乙肝病毒表面抗原基因(S基因)转导树突状细胞(DC),观察DC在体外诱导肝细胞癌患者淋巴细胞的免疫反应,探讨用基因工程方法制备的DC作为肿瘤疫苗激发特异性抗肝癌免疫作用的可行性.方法:分离7例肝细胞癌患者的DC,每例分为单纯培养组、绿色荧光蛋白基因(GFP)转导组和S基因转导组培养.用基因工程的方法构建含有S基因和GFP的重组腺相关病毒rAAV-S和rAAV-GFP,转导相应组的DC,转导成功后再诱导来自同一患者的淋巴细胞.通过IFN-γ分泌检测法测定诱导后的淋巴细胞对表达表面抗原的细胞株HepG2215的免疫杀伤情况.结果:构建的rAAV-S和rAAV-GFP分别成功的转导树突状细胞.诱导后测定S转导组、GFP转导组和单纯培养组淋巴细胞中分别有31.99±5.71%、9.90±1.53%和2.49±0.91%的细胞能够分泌INF-γ.三组结果间具有显著性差异(P<0.01三组间的t值分别为10.99、13.49、9.88).结论:转导S基因的树突状细胞可在体外诱导出特异性细胞免疫反应.基因工程制备的DC可作为特异性肿瘤疫苗应用于肝细胞癌的免疫治疗.
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胶囊内镜与小肠钡餐在小肠疾病中诊断价值的对照分析
目的:评价及比较胶囊内镜和小肠钡餐对小肠疾病的诊断价值.方法:使用胶囊内镜和小肠钡餐对怀疑有小肠疾病的患者进行检查,比较二者对小肠病变的检出能力和副作用发生情况.结果:疑有小肠病变的14例患者都进行了胶囊内镜和小肠钡餐检查.患者症状包括:腹胀3例,腹痛3例,腹泻2例,消瘦1例,周期性发热1例,鲜血便4例,暗红色血便或黑便2例、癌胚抗原升高原因不明1例、肝癌查体1例.14例患者中,胶囊内镜检出了病变13例,病变检出率达92.86%,明确病因10例,检出的疾病包括小肠平滑肌瘤,淋巴瘤,息肉,黄色瘤,Crohn's病,十二指肠球炎,血管畸形,蛲虫症,小肠炎(糜烂、充血斑),黏膜下肿物(性质未明).小肠钡餐检出病变2例,病变检出率为14.29%,其中明确诊断1例.结论:胶囊内镜检查对小肠病变的检出能力优于小肠钡餐,且无任何副作用,在一定的范围内可作为小肠疾病诊断的首选方法.
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酒精性肝病患者血清中CA125水平的改变及意义
目的:抗原CA125是一个非特异性肿瘤标记物,他可以来源于正常组织和肿瘤细胞.近有文献报道CA125除在卵巢癌等恶性肿瘤升高外,许多良性疾病也有升高,特别是在肝硬化伴腹水的报道较多.临床上酒精性肝病患者CA125水平常升高,本研究目的检测酒精性肝病和其他原因引起的肝病CA 125水平的改变,探讨CA 125是否可用于诊断酒精性肝病的敏感指标.方法:收集188例肝病患者和19个正常人的晨起空腹血清.将这些肝病患者分为原发性肝癌组,肝炎后肝硬化和酒精性肝硬化组,酒精性脂肪肝组和非酒精性脂肪肝组.其中肝硬化组根据Child-Pugh的分级又分为A,B,C三级.用ELISA法检测受检者血清中CA125水平.结果:原发性肝癌组,肝炎后肝硬化组,酒精性肝硬化组及脂肪肝组血清CA125水平分别为797±1 468 U/L,327±364 U/L,210±207 U/L,77±64 U/L明显高于健康对照组的17±9 U/L(P<0.05或P<0.01),但非酒精性脂肪肝组为38±33 U/L,与正常对照组无明显差异(P>0.05).在肝硬化Child-Pugh分级中,酒精性肝硬化A级和B级的CA 125水平为168±166 U/L和285±261 U/L,明显高于肝炎后肝硬化组的A级92±83U/L和B级161±71 U/L(P<0.01),在C级为522±496 U/L,在统计学上与肝炎后肝硬化C级的390±276 U/L没有明显差别(P>0.05).在酒精性肝硬化患者中,CA 125水平在Child C级明显高于B级,B级明显高于A级(P<0.01).在肝炎后肝硬化患者中,Child C级的CA 125水平明显高于A级和B级(P<0.01),但ChildA级和B级在统计学上无明显差异(P>0.05).酒精性肝硬化和肝炎后肝硬化腹水阳性组CA125水平为400±416 U/L和306±256 U/L,均高于腹水阴性酒精性肝硬化组228±245U/L和肝炎后肝硬化组122±88U/L(P<0.01),在腹水阴性患者中,酒精性肝硬化患者CA125水平明显高于肝炎后肝硬化患者(P<0.05),但腹水阳性患者中,二者无明显差别(P>0.05).结论:CA 125不仅在肝癌时升高,在肝脏良性病变肝硬化时也升高,尤其在酒精性脂肪肝及酒精性肝硬化时A级,B级及在腹水阴性时CA125水平较肝炎后肝硬化升高更为明显,但在Child C级和腹水阳性患者中无明显差异,CA125可作为酒精性脂肪肝及酒精性肝硬化的一个敏感性指标和早期诊断指标.
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SARS伴腹泻病例的临床特点
目的:了解SARS合并腹泻患者的临床特点,并探讨其致病机制.方法:对118例(19例有腹泻,99例无腹泻)SARS患者临床资料进行回顾性分析.结果:19例(16.1%)SARS患者有水样便症状,2-6次/d不等,量约100-200 mL/次,持续1-3 d,多数患者有发热,但无明显的消化道症状及脱水表现,大便检查无明显的异常改变.腹泻及非腹泻患者有接触疫史例数分别为18例(94.7%)和80例(80.8%),P=0.25;两组的潜伏期分别为6.8±3.1(3-10 d)和7.6±4.3(2-18 d),P>0.5;两组的重患者及死亡病例比相近,分别为15.8%(3/19)和20.2%(20/99)、5.3%(1/19)和4.0%(4/99),两组患者均可出现发热、肌肉酸痛、干咳的、关节痛、咳痰、咯血及胸闷气短等症状(P>0.1);二者出现肝功能异常、LDH/HBDH升高及WBC减少的例数比也相近(P>0.01);腹泻组SARS-GovIgG抗体的阳性率为76.5%(13/17),非腹泻组为72.7%(64/88).结论SARS冠状病毒可侵犯胃肠道,引起水样腹泻,但症状轻,持续时间也较短;而且腹泻对SARS整个疾病的其他临床表现、病情的轻重和预后影响不大.
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直肠内脱垂合并盆底疝手术疗效的影像学评价
目的:评价功能性直肠悬吊术、疝修补术及乙状结肠切除术(女性附加子宫悬吊固定)对直肠内脱垂合并盆底疝的治疗效果.方法:对盆腔造影结合排粪造影确诊的82例直肠内脱垂合并盆底疝患者进行外科治疗,手术方法采用功能性直肠悬吊术、疝修补术及乙状结肠切除术(女性附加子宫悬吊固定),术后1 mo后复查盆腔造影结合排粪造影,并随访疗效2 a以上.结果:术后74例(90%)恢复良好,复查盆腔造影结合排粪造影表现正常;治疗失败8例,影像学复查6例为直肠黏膜脱垂,2例为直肠全层套叠合并盆底疝.临床症状改善情况与术后影像学表现有很好的一致性.结论:对于直肠内脱垂合并盆底疝的诊治,功能性直肠悬吊术、疝修补术及乙状结肠切除术(女性附加子宫悬吊固定)是对其治疗的有效方法,而排粪造影结合盆腔造影是一种准确的检查手段,能为治疗提供可靠的客观依据.
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奥替溴铵对腹泻型肠易激综合征患者肛门直肠感觉运动功能的影响
目的:探讨奥替溴铵对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者肛门直肠感觉运动功能的效应.方法:用电子气压泵(barostat)及液流灌注压力监测系统对20例D-IBS患者及20名健康人进行肛门直肠测压检查.并对D-IBS患者用奥替溴铵治疗2 wk,再复查肛门直肠测压;治疗前后均对患者行临床症状评分.结果:肛门内括约肌静息压(kPa)、肛门内括约肌大收缩压(kPa)、小抑制容量(mL)、直肠顺应性(mL/0.133 kPa)在D-IBS患者与健康人之间无显著性差异(P>0.05);D-IBS患者的直肠初始感觉阈、排便阈、疼痛阈分别为52.6±17.3mL、84.6±34.3mL及128.6±24.3mL,分别低于健康人的87.3±14.5mL(P<0.05)、128.4±26.5mL(P<0.05)及206.1±36.5mL(P<0.05).奥替溴铵治疗前患者腹痛、腹胀、排便频率、粪便性状及IBS总体症状感觉评分分别为1.90±0.72、1.75±0.78、1.85±0.67、1.70±0.73及1.91±0.68,治疗后明显下降,分别为0.70±0.57(P<0.01)、0.55±0.51(P<0.01)、0.65±0.59(P<0.01)、0.75±0.50(P<0.01)、0.65±0.59(P<0.01).与治疗前比较,患者的直肠初始感觉阈、排便阈及疼痛阈均明显升高,分别为79.3±13.2mL(P<0.05)、112.2±23.2mL(P<0.05)及189.1±33.8mL(P<0.05).结论:奥替溴铵可改善D-IBS患者的直肠内脏高敏感性、并有效地缓解患者的临床症状.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MDM4信号转导的影响
0 引言Shvarts et al[1]报告了一种与p53蛋白结合蛋白的新基因,命名为MDMX,与MDM2蛋白在一级结构上具有同源性,特别是在p53蛋白结合域更是如此.另外,MDM2羧基末端的金属结合域在MDMX分子中也是高度保守的.MDMX蛋白又称为MDM4,是p53的一种结合蛋白,是p53蛋白的负调节因子.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对RET指蛋白信号转导的影响
0 引言RET指蛋白(RET finger protein,RFP)属于B盒式结构的锌指蛋白(zinc finger protein)家族成员,具有三分体结构特点,结构域包括一个环指结构、一个B-盒式结构、一个卷曲结构位点[1].
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丙型肝炎病毒蛋白对Bcl-10蛋白信号转导的影响
0 引言初原癌基因Bcl-10是作为低度B细胞淋巴瘤(BCL,B-cell lymphoma)相关基因得到鉴定的,Bcl-10是一种含有胱冬肽酶募集结构域(caspase recruitment domain,CARD)的蛋白,同时属于黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoidtissue,MALT)B淋巴瘤中鉴定的断裂位点的基因,在淋巴细胞中抗原受体介导的NF-κB激活过程中是必需的.Bcl-10属于CARD蛋白家族成员,调节细胞凋亡和NF-κB信号转导[1-5].初步研究结果表明,丙型肝炎病毒(HCV)基因组编码蛋白对于Bcl-10的基因表达水平具有显著的上调作用,Bcl-10基因的表达在HCV感染引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的发病机制中具有重要的作用[6].
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丙型肝炎病毒感染对脂类代谢的影响
0 引言丙型肝炎病毒(HCV)是导致经血传播的非甲非乙型肝炎(NANBH)的主要病原.其特征为较高的慢性化(70%以上)、持续感染,可导致肝癌、肝硬化及自身免疫性疾病[1].现在,越来越多的学者对HCV与脂代谢关系更感兴趣,这主要基于两个原因.一个是除了代谢性、酒精性等因素引起肝脂肪变性外,HCV是引起肝脂肪变性的重要因素.另一个是虽然HCV进入肝细胞的机制不十分清楚,但很多研究表明,低密度脂蛋白受体(LDL-R)是穿膜蛋白分子,或作为HCV的受体、或作为桥梁对HCV进入肝细胞起重要作用[2].
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白
0 引言1989年应用分子生物学技术发现了丙型肝炎病毒(hepatitisC virus,HCV),并证实可导致肝脏慢性疾病[1,2],是输血后肝炎的主要病因.全世界有1.7亿人感染HCV,面临肝硬化和肝细胞癌的威胁[3-6].随着基因组测序工作的完成,随后就是研究基因的功能,其中基因表达蛋白质的功能的研究尤为重要,因为基因是通过蛋白质起作用的.蛋白质与蛋白质之间的相互作用揭示了蛋白质功能的物理基础之一,即蛋白质起作用是通过与另一蛋白质进行物理接触而完成.大家知道HCV对人体有着广泛的作用,如引起人体免疫紊乱、慢性肝炎、肝硬化、肝肿瘤发生等,但是他们是如何作用的目前不是很清楚,但是可以肯定其中具有蛋白质-蛋白质之间的相互作用.目前鉴定的与HCV核心蛋白相互作用的蛋白有多种,为阐明HCV感染的发病机制,奠定了坚实的基础.
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人La自身抗原蛋白与肝炎病毒的关系
0 引言乙型和丙型肝炎呈全球分布,目前全世界有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),3.5亿人感染乙型肝炎病毒(HBV),其中相当一部分感染者发展为慢性肝炎,少数还发展成肝硬化甚至肝癌,对人类健康造成极大危害,至今缺乏有效的控制.
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肝细胞因子3和乙型肝炎的调节关系
0 引言乙肝病毒(HBV)是很小的包膜病毒,基因组结构精密,仅约3 200个碱基(bp),但能以小容量发挥高效功能.HBV DNA复制周期开始于共价闭合环状DNA(cccDNA),先转录为前基因组RNA,然后反转录为负链DNA,再合成正链DNA,双链DNA又成熟为cccDNA,是一个连续的过程.分散在整个HBV基因组中有多个调节元件,与细胞或病毒产生的调节因子结合,增强或抑制不同基因的表达[1-3].肝细胞因子3(HNF3)是重要的转录调节因子,对于调节前基因组RNA和前核心RNA等的转录复制有重要的作用.
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功能基因组学与病毒性肝炎发病机制
编者按随着人和各种生物的基因和基因组测序的完成,生物学和医学正处在一深刻变革的时代.基因组学(genomics)是指对人和其他生物类型基因组结构与功能的分析.基因组学可以分为结构基因组学(structural genomics)和功能基因组学(functional genomics),功能基因组学是指应用整体的研究技术阐明这些基因和蛋白的生物学功能.各种生物系统是一个复杂的系统,基因组中基因的序列是一个庞大的数据库,因此,需要发展一些强大的分析技术,代替传统的分析技术,对这些基因和蛋白质的功能进行研究.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对FAP48信号转导的影响
0 引言作为一种分子量为48 kD蛋白,FAP48是细胞内与免疫调节有密切关系的蛋白类型[1].虽然FAP48是在研究免疫抑制剂的作用机制中发现的,但是FAP48蛋白在免疫调节及临床疾病的发生、发展过程中具有十分重要的作用[2].
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多嘧啶序列结合蛋白与丙型肝炎病毒的关系
0 引言多嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract bindingprotein,PTB),在大多数哺乳动物细胞及人类原始肝细胞的胞核及胞质中均可检测到,其分子量约为57kD,故也有人称之为p57.PTB在稳态时定位于核内[1],且可通过能量依赖机制快速穿梭于细胞的胞质及胞核.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MAPKKK蛋白信号转导的影响
0 引言在真核细胞中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统对大量的细胞内、外刺激的转导起着中枢性调节作用,从而控制细胞的生长、增生、凋亡,如进入细胞周期、控制核苷酸的生物合成、G2/M期的转变、M期高尔基体的裂解和纺缍体的形成等[1].
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丙型肝炎病毒复制模型系统
0 引言丙型肝炎是严重威害人民生命健康的疾病之一,其慢性率高,肝硬化及原发性肝癌的发生率高.然而,迄今为止仍无令人满意的治疗手段,干扰素单用或联合用病毒唑治疗总体应答率比较低.阻碍人们对丙型肝炎病毒(HCV)深人研究的原因之一是缺乏一个能高效支持病毒复制的可靠的模型,近十几年来人们为寻找合适的模型进行了不懈的努力,取得了可喜的成就,现就这方面的研究成果综述如下[1-3].
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乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白
0 引言乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝细胞癌发生主要的危险因子,慢性HBV携带者发展为肝细胞癌(HCC)的危险性可增加100倍,疫苗的使用降低了乙型肝炎的发病率,同时HCC的发病率也随之平行下降,支持了HBV可以致癌.HBV属嗜肝DNA病毒科,还包括土拨鼠病毒(WHV)、地松鼠病毒、苍鹭肝炎病毒以及亲缘关系较远的鸭肝病毒.这些肝炎病毒均可引起宿主的慢性感染,但鸭肝病毒由于缺少X开放读码框架,引发的症状轻微预后良好.
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肝癌隐匿性破裂出血及肝动脉栓塞治疗2例
目的:提出肝癌隐匿性破裂出血的概念,探讨肝动脉栓塞对其意义.方法:总结2例典型肝癌隐匿性破裂出血病例的临床表现、影像学特征.采用超选择肝动脉栓塞止血及治疗肿瘤.结果:2例肝癌隐匿性破裂出血病例经超选择肝动脉栓塞及化疗后出血停止、肿瘤缩小,获二期切除.术后随诊6、12 mo,健在.结论:肝癌隐匿性破裂出血是肝癌(真性)破裂出血的前期病变,肝动脉栓塞是其有效的治疗方法.
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食管原发恶性黑色素瘤2例
报告2例食管原发恶性黑色素瘤,以期引起同道们的注意,因食管原发恶性黑色素瘤极为少见,且病变多发生在食管中下段,临床上多误诊为食管贲门癌,诊断时首先要除外其他部位黑色素瘤的转移.食管恶性黑色素瘤恶性度高,预后不良.治疗以根治性手术切除为主,辅以放疗.
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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP7的克隆
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的cDNA,克隆HBxAg反式激活相关靶基因.方法:以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次杂交消减及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了pcDNA3.1(-)的HepG2细胞提取总RNA,以RT-PCR技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为XTP7,在GenBank中注册,注册号为AF490256.XTP7基因的编码序列全长为588个核苷酸(nt),编码产物由196个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用SSH成功筛选与克隆HBxAg反式激活新型靶基因XTP7,为进一步阐明HBxAg反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.
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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP8的克隆
目的:应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的cDNA,克隆HBxAg反式激活相关靶基因.方法:以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了pcDNA3.1(-)的HepG2细胞提取总RNA,以RT-PCR技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为XTP8,在GenBank中注册,注册号为AF49257.XTP8基因的编码序列全长为1590个核苷酸(nt),编码产物由530个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆HBxAg反式激活新型靶基因XTP8,为进一步阐明HBxAg反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.
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酵母双杂交技术筛选人白细胞中与乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白基因
目的:筛选并克隆人白细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)相互作用蛋白的基因,进一步探讨HBxAg的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBxAg基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人淋cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HBxAg基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有X-α-gal的四缺培养基上均能生长,并变成蓝色的真阳性菌落50个,其中含真核翻译延伸因子2基因20个,真核翻译延伸因子1基因1个,真核翻译起始因子3基因2个,急性髓样白血病MTG8蛋白基因2个,髓样关联分化蛋白基因1个,髓样分化主反应蛋白基因1个,皮肤T细胞淋巴瘤肿瘤抗原基因1个,大组织相容性复合物Ib抗原基因3个,白细胞抗原CD37基因1个,慢性白细胞性白血病相关抗原基因1个,α白细胞整联蛋白基因1个,生长停止和DNA损伤诱导因子34基因1个,转录变异因子1基因2个,蛋白磷酸酶1调控抑制因子15A基因1个,单核细胞系胞苷脱氨酶基因1个,巨噬细胞钙离子依赖型凝集素2基因1个,KIAA1949蛋白基因3个,尿激酶型血浆素原激活剂基因1个,GDP分解抑制因子基因3个,软骨素4磺基转移酶基因1个,锌指蛋白1A亚目基因1个和未知蛋白基因1个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒X蛋白的结合蛋白,为进一步研究HBxAg的生物学作用提供了新的线索.
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细胞因子诱导慢性乙型肝炎患者树突状细胞的免疫功能
目的:探讨体外培养诱导慢性乙型肝炎患者外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)功能状态改善的途径方法:以GM-CSF+IL-4诱生的慢性乙型肝炎患者外周血来源的DC作为对照组,三个实验组再分别加入TNF-α或IFN-γ或TNF-α+IFN-γ联合培养.FCM检测细胞表面免疫分子CD1a,CD83,CD80,CD86,CD40,HLA-DR的表达水平并进行细胞计数,MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增生能力及ELISA法检测DC培养上清中细胞因子IL-6,IL-12的分泌水平.结果:在培养6、9d,各实验组诱导生成的DC数量明显多于对照组(P<0.01).在培养8d,各实验组DC的CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40分子表达较对照组明显增高(P<0.01,P<0.05);各实验组DC表达的HLA-DR分子高于对照组(P<0.05;P<0.01),且以TNF-α+IFN-γ组表达高.各实验组DC刺激同种异体淋巴细胞增生的能力较对照组增强(P<0.05).培养6d各实验组DC培养上清中IL-12的浓度高于对照组(P<0.05),尤以IFN-γ组更为明显(P<0.01),而IL-6的浓度则显著低于对照组(P<0.01).结论:采用GM-CSF+IL-4联合TNF-α或IFN-γ或TNF-α+IFN-γ体外培养体系,能有效的改善慢性乙肝患者DCs的免疫功能状态.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP5的克隆
目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)反式激活新型靶基因.方法:以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRRNA并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:NS5ATP5基因的编码序列全长为1 191个核苷酸(nt),编码产物由396个氨基酸残基(aa)组成.命名为NS5ATP5,在GenBank中注册,注册号为AF529366.结论:HCV NS5A反式激活新型靶基因NS5ATP5的筛选与克隆,为进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.
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酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV NS3蛋白结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS3基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出NS3基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落18个,其中4个真核细胞翻译延伸因子2;2个免疫球蛋白λ轻链;1个肌动蛋白β;1个铁蛋白轻多肽;1个(丝裂原)活化蛋白激酶3;2个肌球蛋白因子1;1个白介素2受体β;1个富含精氨酸/丝氨酸剪切因子6;1个组织蛋白酶S;1个2'-5'寡腺甘酸合成酶类似物;1个缺失精子缺乏相关蛋白2;1个CNN2;1个新基因.结论:成功克隆出HCV NS3的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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淋巴细胞内与乙型肝炎病毒X蛋白结合的新蛋白X-30编码基因的克隆
目的:为探讨HBxAg在HBV致病过程中的作用,筛选并克隆人淋巴细胞cDNA文库中与HBxAg有相互作用的蛋白基因.方法:利用酵母双杂交系统3筛选并克隆人淋巴细胞cDNA文库中与HBxAg有相互作用的蛋白的基因.将HBxAg编码基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人淋巴cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,双重筛选阳性菌落,提取质粒并测序,结果进行生物信息学分析,发现其中有1个未知基因.根据GenBank中的序列信息设计引物,从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,命名为X-30,在GenBank中注册,注册号为AY280722.结果:X-30基因的编码序列全长为315个核苷酸(nt),编码产物由103个氨基酸残基(aa)组成.结论:HBxAg与淋巴细胞结合蛋白新型基因X-30的筛选与克隆,为进一步研究HBxAg的分子生物学机制及探索新型治疗技术奠定了基础.
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丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因TAHCCP2的克隆
目的:筛选与克隆HCV核心蛋白反式激活新型靶基因.方法:以HCV核心蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-core转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,从转染pcDNA3.1(-)-core的HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:新基因命名为TAHCCP2,编码序列全长为429个核苷酸(nt),编码产物由142个氨基酸残基(aa)组成,测序证实TAHCCP2克隆正确.在GenBank中注册,注册号为AY039043.结论:筛选与克隆HCV核心蛋白反式激活新型靶基因TAHCCP2,为进一步研究HCV核心蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.
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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因6的克隆和鉴定
目的:乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白质.为了探索HBxAg蛋白反式激活作用的新的靶基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术对于表达和不表达HBxAg蛋白的HepG2细胞进行研究,以期发现HBxAg蛋白反式激活作用的新靶点,为阐明HBxAg蛋白的反式激活作用分子生物学机制,以及HBV相关的肝细胞癌(HCC)形成的分子生物学机制开辟新的研究方向.方法:以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-HBxAg转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,克隆、鉴定新型基因.结果:在16种HBxAg蛋白上调的靶基因中,其中包括未知功能基因,利用生物信息学技术,获得HBxAg蛋白反式激活作用的新型靶基因,开放读码框架(ORF)长度为237个核苷酸(nt),编码产物由78个氨基酸残基(aa)组成,命名为XTP6,在GenBank中注册,注册号为AF490255.结论:HBxAg蛋白是一种具有反式激活作用的蛋白,应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆HBxAg蛋白反式激活新型靶基因XTP6,为进一步阐明HBxAg蛋白反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.
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酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究
目的:筛选并克隆人肝细胞中与HBcAg肝细胞结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨HBcAg结合蛋白C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增C-12基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶B基因1个、载脂蛋白M基因1个、细胞色素C氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
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坚持相对稳定的科研方向是关键
发现、形成、坚持一个适合自己发展的相对固定的科研方向,是一个科学工作者必须面对的、至关重要的、影响全局的重要课题.选择适合自己发展的科研方向,首先要对所从事的学科专业的发展历史和现状有一个非常清楚的了解,还要选择对于学科发展具有重要意义的方向,也要适合自己科学研究的客观条件.对于国内外相对成功的科学家的课题选择特点进行分析,科研选题的风格有许多,典型的包括"守株待兔"型、"隧道挖掘"型.形成适合自己的科研方向还要排除一切形式的不必要的外部干扰.科研方向初步形成之后,要坚持相对固定的研究方向,要坚持、坚持、再坚持.科学工作需要有相应的科学思想、科学传统、科学氛围和科学文化的支持与衬托.提出并思考关于科学的科学,从更高的层次上认识思考,对于我国的科学事业将是一个重要的推动.