骨形态发生蛋白2、6在肝癌中的表达及意义

目的:研究骨形态发生蛋白2、6(BMP-2、6)在肝癌组织中的表达,并探讨其与肝癌生物学行为的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和Western blot检测30例正常肝脏组织和30例肝癌组织的BMP-2、6的表达水平.结果:正常肝脏组织BMP-2、6 mRNA相对表达量显著低于肝癌组织(0.3245±0.1127vs 0.8298±0.1187,0.2947±0.1853 vs 0.7145±0.1373,均P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期肝癌组织BMP-2、6 mRNA相对表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期(0.92431±0.1234 vs 0.69355±0.1925,0.8354±0.1423 vs 0.6043±0.1234,均P<0.05).We s t e r n b l o t检测有远处转移的肝癌组织BMP-2、6表达高于无远处转移的肝癌组织(0.9854±0.2888 vs 0.6244±0.3087,0.9076±0.1276 vs 0.5678±0.2493,均P<0.01).结论:BMP-2、6在肝癌中表达上调,可能在肝癌的发生发展中起着重要的作用,其表达上调可能促进肝癌的浸润和转移.

下丘脑STAT3在非酒精性脂肪性肝病大鼠发病中的作用及降脂颗粒的干预

目的:观察非酒精性脂肪肝大鼠下丘脑STAT3蛋白表达和组成性激活的改变,以及中药降脂颗粒对其干预作用.方法:高脂饲料制备非酒精性脂肪肝大鼠模型,待造模成功后将大鼠随机分为模型对照组(n=10)、辛伐他汀组(n=10)、降脂颗粒组(n=10),每日进行ig药物干预,4 wk,并设空白对照组(n=8).比色法检测血清TG、TC;HE染色观察观察肝组织脂肪变和炎症;Western blot检测下丘脑磷酸化STAT3蛋白表达,EMSA检测下丘脑STAT3的组成性激活状态.结果:磷酸化STAT3蛋白表达及其组成性激活在非酒精性脂肪肝大鼠均明显降低,降脂颗粒用药组及辛伐他汀组能下调大鼠血清TG(0.54±0.09 mmol/L,0.68±0.08 mmol/Lvs 0.84±0.09 mmol/L,均P<0.05)、TC(1.85±0.31 mmol/L,2.08±0.30 mmol/L vs 2.84±0.30mmol/L,均P<0.05)水平,减轻肝脂肪变(2.26±0.52,2.57±0.67 vs 3.10±0.57,均P<0.05)和炎症程度(0.68±0.67,0.95±0.6 vs 1.52±0.71,均P<0.05);上调下丘脑组织磷酸化STAT3蛋白表达及其组成性激活.结论:STAT3在非酒精性脂肪肝大鼠下丘脑组织表达和激活明显下降,中药降脂颗粒对非酒精性脂肪肝有很好的治疗作用,并可上调STAT3的表达和组成性激活.

射频消融治疗对兔肝VX2肿瘤VEGF表达的影响

目的:探讨射频消融(RFA)对兔肝VX2肿瘤血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:建立日本大耳白兔肝VX2肿瘤模型,随机分为3组:对照组直接处死取肝脏标本;RFA治疗(4 h和24 h)组于射频消融后4 h和24 h处死取出肝脏组织.并以正常兔肝脏组织为正常对照,通过免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测VEGF的蛋白和基因表达.结果:VX2肿瘤浸润性生长,射频后中央消融区呈现大片坏死,周围见炎性反应带,外围癌组织残留.免疫组化和RT-PCR示对照组肿瘤组织VEGF的蛋白和基因表达均高于正常组(VEGF/GAPDH基因灰度比:1.3048±0.1936vs 0.8993±0.1107,P<0.05),射频消融后4 h和24 h表达明显下降(VEGF/GAPDH基因灰度比:0.7388±0.1503,0.8935±0.1936,均P<0.05),但不同时间段并无明显差异.结论:RFA治疗能下调肿瘤VEGF基因和蛋白水平的表达,抑制血管生成,减少血供,进而降低了复发和转移几率.

吡格列酮对SD大鼠非酒精性脂肪肝病形成的预防作用及其机制

目的:探讨吡格列酮(pioglitazone,PIO)对SD大鼠非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liverdisease,NAFLD)形成的干预作用及机制.方法:♂SD大鼠72只,随机分为正常饮食组(NG)、高脂饮食组(HG)和PIO干预组(PIOG)各24只.PIOG喂饲高脂饲料,并同时予PIO药物灌胃8 wk.正糖高胰岛素钳夹实验检测IR水平,放免法和全自动生化仪检测血清生化指标,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)mRNA表达,Western blot检测肝组织c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminalkinase 1,JNK1)和PPARγ蛋白表达.结果:HG大鼠GIR水平降低和JNK1蛋白表达增高,均呈明显时间依赖性(均P<0.05);8 wk末HG大鼠肝细胞出现明显脂肪变性,与NG相比,体质量、肝指数,TG、ALT、AST、FFAs、FINS、TNF-α水平明显增高,IR加重,JNK1蛋白表达明显升高,肝组织PPARγ表达明显降低(TG:1.23±0.08 vs 0.62±0.12,ALT:92.80±7.09 vs 51.34±8.12;AST:153.22±20.65 vs 119.26±13.61;FFAs:511.94±24.88vs 335.31±15.71;FINS:41.23±1.84 vs 22.65±2.25;TNF-α:1.02±0.12 vs 0.34±0.07,均P<0.05);而PIOG大鼠,上述各项指标均得到明显改善,但仍不能完全达到NG大鼠水平(均P<0.05).结论:PIO对于由高脂饮食诱导的NAFLD的形成及其他IR相关疾病有预防作用.

砷暴露与大鼠肝脏损伤及激活素A,转化生长因子-β1的相关性

目的:探讨水砷暴露与大鼠肝脏损伤的关系,了解激活素A(ACTA),转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝脏损伤中的作用.方法:大鼠110只随机分成对照组、模型组(浓度100 mg/L的亚砷酸钠溶液)、自然恢复组.对照组和模型组分别予第1、2、3、4月末各处死10只,自然恢复组第1月给予砷溶液,月末随机取出10只改为自来水,其余仍给予砷溶液.第2月末处死上月分出的10只,并在此取出10只改为自来水,1 mo后处死,依次类推,第4月末将后10只停用砷溶液的大鼠处死.股动脉取血进行血清肝功能和肝组织病理学检查以观察其肝脏损伤的动态变化,取大鼠肝组织采用实时荧光定量PCR法检测ACTA、TGF-β1的基因表达水平.结果:砷暴露1 mo后脱离自然恢复1 mo可见炎细胞浸润明显减轻.ALT、AST模型组中增高,第3、4月造模,ALT升高差异有统计学意义( P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1 mo,ALT降低有统计学意义(49.33±13.51 U/L vs 62.68±23.57 U/L,62.75±14.40U/L vs 64.36±18.24 U/L,65.74±11.85 U/Lvs 69.36±15.7 U/L,均P<0.05).ACTA mRNA第3、4月造模与对照组比较有统计学意义(64.83±28.29 vs 28.33±18.70,98.67±26.80vs 28.33±18.70,均P<0.05),TGF-β1 mRNA1、2、3、4 mo造模与对照组比较均有统计学意义(46.27±18.39 vs 33.64±20.17,67.06±20.79 vs 33.64±20.17,88.33±23.42 vs 33.64±20.17,110.57±24.23 vs 33.64±20.17,均P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1mo,TGF-β1 mRNA降低有统计学意义(35.36±16.48 vs 46.27±18.39,52.04±21.37 vs67.06±20.79,70.69±35.27 vs 88.33±23.42,均P<0.05).结论:砷暴露所引起的肝脏损伤随暴露时间的延长而加重,越早脱离暴露其损伤的肝细胞修复越快;促炎症因子ACTA、TGF-β1与砷暴露肝损伤的发生相关.

靶向Skp2基因siRNA对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的:设计和构建Skp2特异性的siRNA真核表达载体,观察Skp2siRNA重组体对人大肠癌HCT116细胞株生物学特性的影响.方法:人工合成Skp2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体pRNAT-U6.1/Neo,通过测序鉴定.用脂质体介导的基因转染方法转入HCT116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,半定量RT-PCR方法检测靶基因的表达.流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果:测序表明Skp2干扰序列完全正确.RTPCR结果显示2条Skp2siRNA真核表达质粒均能有效抑制核干细胞因子mRNA的转录表达( P<0.05).MTT比色法检测显示,与阴性对照组及未转染组细胞比较,干扰组细胞增殖率明显下降(29.21%±1.40%,30.10%±1.50% vs49.05%±4.50%,53.03%±4.92%,均P<0.05).流式细胞术检测结果显示转染后G0/G1期细胞数占生长周期细胞数的比例增多,即表现为G1期阻滞,S期细胞的比例降低.结论:成功构建了S k p 2 干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人大肠癌细胞Skp2mRNA表达,细胞增殖能力减弱,为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据.

细胞外信号调节激酶与胶原在肝纤维化过程中的表达及相关性

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)在肝纤维化组织中的表达变化及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性,并探讨其在肝纤维化发生中的作用.方法:二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化,于用药1、2、3 wk分别取肝组织;收集临床肝手术标本,包括纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常肝组织做对照.采用免疫组化法检测ERK在肝纤维化组织中表达和定位及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性.结果:随着大鼠注射DMN时间的延长,ERK、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增加,且在各时间组肝组织中ERK的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈正相关(1 wk:r = 0.75,0.68,P<0.05;2wk:r = 0.82,0.78,P<0.05;3 wk:r = 0.74,0.83,P<0.05).同样,ERK在人肝纤维化组较对照组表达增加(1.068±0.258 vs 0.035±0.011,P<0.05),且ERK的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达正相关( r = 0.87,0.88,均P<0.05).结论:ERK可能与肝纤维化的发生机制及胶原合成密切相关.

钙结合蛋白S100A4与消化系肿瘤研究进展

S100A4基因编码的钙离子结合调节蛋白-S100A4蛋白,通过与钙离子结合,在许多肿瘤发展、转移过程中发挥重要作用.目前研究认为其与肿瘤的浸润和转移密切相关.本文就S100A4生物学特性及其在消化系肿瘤中作用及可能机制的研究进展作一综述.

经皮经肝肝内门体分流术后肝性脑病发病机制及其预防

随着经皮经肝肝内门体分流技术(transjugular intrahepatic portosystemic shunt,TIPS)的不断应用,其在食管胃底静脉曲张破裂出血和顽固性腹水的治疗方面,取得了突破性进展.然而,TIPS术后支架的狭窄闭塞和反复高发的肝性脑病(hepatic encephalopathy,HE)或称为分流性脑病(portal-systemic encephalopathy,PSE)成为困扰TIPS技术发展的两大难题,前者在近期带膜(血管)支架的大量应用后,得到极大的改善;后者始终未得到根本的解决,我们参阅了国内外的新资料,在此进一步阐述TIPS术后另一难题-肝性脑病的发生情况.

食管肠神经系统调控的研究进展

食管受到各级神经系统及体液的调控,而完成蠕动与收缩功能.食管的活动有赖于肠神经系统(enteric nervous system,ENS)的调控协调作用.食管存在着兴奋性神经元和抑制性神经元两种,他们通过多种神经递质相互作用而决定食管的紧张度、蠕动与收缩.对食管神经机制的理解及研发新型药物治疗食管功能紊乱和胃食管反流有重要意义.本文综述近十年来食管脑神经系统的研究进展.

川芎嗪对HSC-T6增殖的影响

目的:研究川芎有效成分川芎嗪对HSC-T6细胞增殖的影响.方法:以HSC-T6浓度2.0×108/L、每孔0.1 mL接种96孔板,培养24 h后将不同稀释度的川芎嗪按0.1 mL/孔加入培养孔.实验第4天以MTT法测定细胞A值,计算增殖抑制率.实验另设培养液空白对照组和细胞对照组.结果:川芎嗪具有较明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,其对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,有一定的量效关系.川芎嗪原液和1/2、1/4倍稀释浓度时的抑制率分别为42.5%、28.8%和26%,1/8以下浓度则抑制率虽然有所降低但下降趋势较缓.结论:川芎嗪有抑制HSC-T6细胞增殖的作用并有明显的浓度依赖.

选择性iNOS抑制剂对肝硬化大鼠门脉高压性胃黏膜病变的影响

目的:探讨选择性诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对肝硬化大鼠门脉高压性胃黏膜病变的防治作用及其机制.方法:将SD大鼠30只随机分为对照组( n =10)、模型组( n = 10)和AG组( n = 10),予400mL/L CCl4皮下注射12 wk建立肝硬化大鼠模型,AG组为皮下注射CCl4同时予AG饮用.观察比较各组大鼠胃黏膜形态及组织学变化,应用免疫组化法检测胃黏膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,并测定胃黏膜溃疡指数、门静脉压力.结果:AG组胃黏膜病变程度较模型组减轻,溃疡指数明显低于模型组(3.00±2.31 vs 10.60±3.47,P<0.01);模型组胃黏膜iNOS吸光度、面密度值均较对照组增高(0.64±0.04 vs 0.25±0.03;0.344±0.068 vs 0.017±0.008,均P<0.01),AG组胃黏膜iNOS吸光度值、面密度值(0.46±0.09,0.159±0.021)均较模型组明显下降(均P<0.01).AG组门脉压力较模型组降低.结论:AG可在一定程度上减轻门脉高压性胃黏膜病变,其机制可能主要通过抑制胃黏膜iNOS表达.

氩离子凝固术对兔大肠黏膜的损伤作用

目的:研究国产氩离子凝固治疗仪不同输出参数对兔大肠黏膜的损伤深度,探讨APC治疗的安全使用范围.方法:以国产氩离子凝固治疗仪对32只新西兰白兔在体大肠黏膜进行凝固,参数选用不同氩气流量(2.0、2.5、3.0、4.0 L/min)和不同作用方式(3 s连续方式和脉冲方式凝固).内镜超声测量结肠壁厚度,光学显微镜下观察组织损伤深度.结果:内镜超声扫描喷凝局部黏膜呈高回声,其余各层回声减低.随氩气流量和输出功率增加,大肠黏膜损伤加重( P = 0.006、0.023).脉冲方式和连续方式对大肠壁的损伤程度有统计学差异( P = 0.030),脉冲方式的组织损伤程度较连续方式轻.结论:氩离子凝固术对大肠黏膜损伤深度可控,可以作为一种安全的治疗手段.

ATP酶在细菌潜生体相关的IBS大鼠模型肠黏膜中的变化

目的:研究细菌潜生体相关的肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠模型肠黏膜ATP酶的变化.方法:Wistar大鼠分为正常对照组和细菌潜生体相关的IBS大鼠模型组.采用无机磷法检测大鼠回盲部黏膜ATP酶活性,高效液相色谱法检测回盲部黏膜细胞的腺苷酸能荷及ATP与总腺苷酸库比值,MTT法检测回盲部黏膜呼吸酶活性.结果:与正常对照组相比较,IBS大鼠模型组回盲部肠黏膜Na+-K+-ATP酶(22.44±5.54 vs14.20±3.03,P<0.01),Ca2+-Mg2+-ATP酶均显著下降(16.46±1.86 vs 10.63±1.78,P<0.01),ATP显著降低(0.96±0.18 v s 0.48±0.20,P<0.01),同时呼吸酶活性显著变化(0.50±0.07vs 0.21±0.05,P<0.01).结论:IBS大鼠回盲部黏膜ATP酶活性显著降低,与能量代谢降低相关,这可能是引起肠黏膜屏障功能受损的重要原因,与IBS病因相关.

Par-3及Connexin在结直肠肿瘤中的表达变化

目的:研究Connexin、Par-3在结直肠肿瘤组织中的表达变化及特征,探讨其临床意义.方法:选取2007-05/2008-03在本院诊断治疗结直肠肿瘤患者51例,取材肿瘤组织并分为3组:肿瘤组织、癌旁组织(2.0 cm)和正常组织(距肿瘤>5.0 cm).电镜下观察肿瘤细胞形态变化,HE染色观察肿瘤组织病理变化,免疫组化及Western blot检测Connexin、Par-3的表达.结果:肿瘤上皮细胞形态不规则,细胞极性消失,细胞器排列紊乱,细胞连接结构破坏,紧密连接、中间连接和桥粒结构基本消失.正常上皮细胞形态规则,细胞极性明显,细胞连接结构完整.免疫组化检测显示:正常肠道组织中Par-3与Connexin的表达水平高(0.572±0.051,0.485±0.042),癌旁组织次之(0.432±0.049,0.367±0.035),癌组织表达水平铑低(0.290±0.041,0.227±0.031);三种组织两两之间的差异性检测有极显著的统计学意义( P<0.05).结论:Connexin和Par-3的表达下调极可能是癌细胞恶变程度加重与复发转移的前兆.

未来肝癌治疗的新靶点-肝癌干细胞

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病.基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键.新研究表明,肝细胞型肝癌可能是由肝干细胞未分化或分化不全引起的.对于肝癌细胞的研究我们知道肝细胞型肝癌中的细胞具有干细胞特性,如永生性,可移植性以及对治疗手段的抵抗性.但至今为止,确切的肝癌干细胞的标志物没有找到,而且没有分离出肝癌干细胞.

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