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肝干细胞的研究进展
肝干细胞的来源主要有以下几个方面:1.肝实质细胞;2.卵圆细胞;3.骨髓造血干细胞;4.胚胎肝细胞;5、肝细胞样祖细胞.本文就近几年肝干细胞的来源及其分化的相关文献作一综述.
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原发性肝癌从脾肾论治的新机制探讨
本文根据现代医学肝癌干细胞的理论,结合传统中医理论,提出脾肾亏虚为肝癌的基本证候,试图为原发性肝癌的中医论治提供一条新的思路.
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我国肝干细胞研究取得重大进展
科技日报上海7月18日电通过4年攻关，第二军医大学基础部细胞生物学教研室主任胡以平教授课题组，实现了小鼠成纤维细胞向肝干细胞分化的重编程，并证明了这一方法所产生的肝干细胞，与活体内自然存在的肝干细胞具有相似的生物学特性。今天，国际权威学术刊物《细胞·干细胞》在线发表了相关研究成果。该课题组于兵博士和何志颖副教授为论文的共同第一作者。
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促血小板生成素对骨髓c-Kit+ Lin-细胞体外扩增的影响
目的 探讨在无血清条件下,血小板生成素(TPO)对c-Kit+ Lin-细胞增殖的影响.方法 经免疫磁珠分离小鼠骨髓c-Kit+ Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF)、FLt-3配基(FL)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的TPO,7 d后检测细胞总数,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数,并采用Annexin-V检测各组细胞凋亡率.结果 各组均能显著扩增c-Kit+ Lin-细胞,扩增倍数为4～7倍不等.当SCF+FL+LIF中加入50μg/L TPO时,c-Kit+ Lin-细胞及细胞总数扩增为7.07倍和40.19倍,比未加时明显增多,而凋亡率无明显差异.但随剂量加大,c-Kit+ Lin-细胞扩增下降,细胞凋亡率上升,200μg/L TPO组凋亡率为33.49%,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数仅为4.11倍.结论 TPO可协同SCF+FL+LIF使c-Kit+ Lin-细胞增殖,但过高剂量会诱导其分化和凋亡,以50μg/L浓度扩增效果佳.
关键词： 血小板生成素 骨髓c-Kit+Lin-细胞 肝干细胞 扩增 -
血管内皮生长因子家族及其受体在早期人胚胎肝发育过程中的作用
目的 通过观察血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子C(VEGFC)及其受体flt-1、flk-1、flt-4在人胚胎肝发育过程中的表达,了解血管内皮细胞和造血细胞与人胚胎肝干细胞发育的关系.方法 运用E3～12周胚胎,石蜡切片,免疫组织化学染色,光镜下观察人肝干细胞的发育、与血管内皮细胞和造血细胞的关系及其表达VEGFA、VEGFC等生长因子及其受体的情况.结果 E3～5周人胚肝细胞具有幼稚细胞的形态特点,并呈c-Met阳性反应.E10～12周,c-Met阳性的肝干细胞主要分布于汇管区周围.F4～6周胚,少数肝干细胞呈VEGFA免疫反应阳性,E7周以后阳性反应消失.VEGFC、flt-1、flk-1、flt-4阳性肝细胞在4～12周胚胎肝内都可检测到.E4～6周,靠近肝芽的横隔间充质中可见较多的血管内皮细胞,并正在形成血管,而在远离肝芽处的内皮细胞和毛细血管较少.E4、5周时,靠近原始肝的横隔间充质组织中血管内皮细胞呈VEGFA、VEGFC、flt-1、flk-1和flt-4阳性,肝内的血管内皮细胞为VEGFA、flt-1、llk-1、VEGFC和flt-4免疫反应阴性.E4～12周胚胎,造血细胞呈VEGFA和flt-4阳性反应,而VEGFC和flt-1、flk-1免疫反应阴性.结论 肝干细胞的发育受肝外间充质血管产生的VEGFA、VEGFC的诱导和调节.造血细胞分泌的VEGFA可以通过旁分泌途径调节肝干细胞的发育,而造血细胞的发育依赖于肝干细胞产生的VEGFC.
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国际肝干细胞研究文献可视化分析
目的 对国际肝干细胞研究文献进行可视化分析,为把握重点研究方向、选择前沿技术课题、进行科学合理的科技布局提供决策信息支持.方法 利用文献计量学方法 和信息可视化方法 对Web of Science中的SCIE数据库收录的国际肝干细胞研究文献的时间、国别、机构、期刊、学科、主题进行分析. 结果 科学引文索引扩展版(SCIE)收录了1092篇肝干细胞研究文献,自2000年开始文献数量进入快速增长期;在文献数量上中国与美国、日本差距较大;肝干细胞研究属多学科交叉领域,但发表期刊相对集中;其研究基本上经历了肝干细胞的发现辨认、来源和基础应用研究阶段;研究前沿有肝干细胞的识别和移植后鉴定、参与肝再生机制、诱导分化、外源基因的表达等. 结论 中国应加大肝干细胞资金投入、加强与顶级科研院所的交流合作、自主创新,引导肝干细胞从基础研究向临床研究转化.
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放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用
目的研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用. 方法用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验,用MTT法检测细胞毒作用;用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达. 结果发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用;而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用.进一步,发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡,在作用9?h即出现细胞凋亡(13.60%),48?h达高峰(51%),并且这种凋亡呈剂量效应关系.我们还发现,HGF可以明显拮抗ActD/TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡,并且呈剂量效应关系.Western blot结果显示,HGF刺激后,磷酸化MAPK蛋白高表达,表明HGF激活了MAPK途径.我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径,发现HGF的抗凋亡作用被阻断;然而,用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后,却并不影响HGF的抗凋亡作用. 结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用;虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径,但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的.
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肝干细胞的新研究进展
自从1997年2月22日英国苏格兰罗斯林研究所威尔穆特博士及其同事成功地克隆出名为多利的绵羊以来,全球掀起了一股有关干细胞的热潮.干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,能产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞,同时还能分化为祖细胞.本文就有关肝干细胞的生物学特性以及和骨髓、肝癌、胰腺、心脏的关系以及临床应用作一综述.
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肝大部分切除或HGF刺激可以引起STAT3和TEC的同时激活
目的:了解STAT3和TEC在肝再生以及HGF刺激的肝干细胞中激活情况,探讨在肝细胞早期增生中STAT3和TEC的活化的相关性.方法:建立小鼠肝大部分切除和HGF刺激肝干细胞(WB F-344)的体内、体外两个试验模型,采用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)、免疫印迹(immunoblotting,IB)的方法检测TEC和STAT3酪氨酸磷酸化激活水平与时间,使用凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)分析核蛋白与STAT3 DNA特异序列的结合能力.结果:肝大部分切除和HGF刺激下STAT3和TEC的磷酸化水平均快速明显升高,肝大部分切除后10-20 min时二者激活水平均达到高,HGF刺激后10 minTEC激活水平高,30 min STAT3活化水平高.肝大部分切除或HGF刺激下10 min左右,核蛋白与STAT3 DNA特异序列的结合能力明显增强.结论:肝大部分切除和HGF刺激下STAT3和TEC均被快速激活,他们之间可能存在相互作用,共同影响肝细胞早期增生反应.
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人胎肝干细胞的体外分离培养与鉴定
目的:对人胎肝干细胞进行体外分离、培养与鉴定,为其在生物人工肝及肝细胞移植方面的应用奠定基础.方法:取16-29周龄死产人胚胎肝脏,参照本室建立的方法对胎肝干细胞进行分离.所获细胞悬液用50 g反复离心,沉淀物用F12培养液悬浮细胞;将细胞悬液加入Percoll液进行梯度离心,吸取50%与70%Percoll层之间的细胞层,用Hanks液洗涤两次后离心.将细胞团悬浮于DMEM/F12(2:1)培养液中,接种于塑料培养瓶或六孔培养板中;在37℃50 mL/L CO2孵箱中培养.采用免疫组织化学法鉴定细胞表型.结果:原代细胞呈圆形或卵圆形,体积明显小于肝细胞,胞核大而胞质少,核浆比较小,培养中细胞生长旺盛.培养的细胞胞质CK19,OV6及白蛋白染色均呈阳性;部分细胞胞质同时表达白蛋白和CK19.结论:人胚胎肝脏中存在在肝干细胞,这些细胞表现出不同的分化状态.
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大鼠实验性肝癌发生中卵圆细胞的变化
目的:探讨卵圆细胞在大鼠肝癌发生、发展过程中的作用.方法:60只SD大鼠随机分为对照组(n=12)和实验组(n=48).用化学致癌剂3'-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3'-Me-DAB)诱发大鼠肝癌,通过免疫组织化学、RT-PCR,Western blot技术对大鼠诱癌过程(4,8,12,16,20,24 wk)中肝组织内卵圆细胞及p53基因表达的变化进行动态的检测.结果:诱癌4 wk,大鼠肝门管区及坏死区内均见大量卵圆细胞,这些细胞呈OV-6染色阳性.诱癌16 wk,肝组织内可见癌结节形成,癌结节内外均可见有卵圆细胞聚集,部分增生的卵圆细胞P53阳性反应,二者的分布区域基本一致.诱癌20 wk后大鼠肝癌组织内的p53 mRNA(F=4.78,P＜0.05),P53蛋白水平均显著升高(F=2.46,P＜0.05).结论:卵圆细胞贯穿了大鼠受化学诱癌剂作用后发生肝癌的全过程,与肝癌的发生有着密切的联系;其机制可能与p53基因的突变有关.
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利用大鼠Y染色体特异性PCR技术检测卵圆细胞源性肝癌细胞
目的:利用Y染色体体细胞的特异性来寻找卵圆细胞分化为肝癌细胞的直接证据,从而为卵圆细胞源性的研究及临床肝癌治疗方法提供理论依据.方法:选择健康♂Wistar大鼠30只饲喂每千克含0.6 g 3-甲基-4-二甲基偶氮苯(DAB)的饲料4 wk,建立卵圆细胞增生的♂Wistar大鼠动物模型.卵圆细胞的分离、提取和鉴定(光镜、电镜、免疫组化).将实验用♀Wistar大鼠60只随机平分成对照组和实验组.对照组不接种细胞悬液,连续喂含DAB饲料14 wk.实验组按25 mg/kg体重戊巴比妥腹腔麻醉,消毒开腹,用吸取♂Wistar大鼠卵圆细胞悬液,接种至肝脏包膜下,每点106个,之后连续喂含DAB饲料14 wk,促进肝肿瘤的生成.从GenBank调出雄性大鼠的SRY基因,利用引物设计软件设计引物片断.14 wk后提取两组大鼠肝肿瘤组织的基因组DNA,利用所设计的引物进行PCR扩增,对PCR产物进行电泳分析.结果:光镜下可找到卵圆细胞,核仁小而清晰,胞质少,细胞体积较小,约为正常肝细胞的1/3,直径约9-12 μm不等.电镜下观察可见细胞表面少量短而小的微绒毛突起,呈现未分化细胞的形态.免疫组化观察肝卵圆细胞胞质c-kit染色呈棕黄色阳性信号.14 wk后对照组和实验组共计60只大鼠均见肝脏肿瘤生成,肿瘤组织在外观上和性状上无显著性差异.实验组电泳后见与设计片断长度相符的电泳阳性条带.结论:大鼠的卵圆细胞可以分化为肝癌细胞,为卵圆细胞源性肝癌细胞的假说提供实验依据.
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腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠成体肝干细胞中的表达
目的:研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP的成体肝干细胞.方法:采用细菌同源重组法构建CMW驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP,在293细胞中包装制备腺病毒,并用重组腺病毒感染体外培养的成体肝干细胞WB-F344,观察腺病毒携带的外源基因EGFP在WB-F344细胞中的表达,及分析病毒对肝干细胞的感染效率.进一步单克隆培养纯化建立稳定表达EGFP的细胞株(WBEGFP),并采用流式细胞技术、免疫细胞化学技术、诱导分化实验以观察其生物学特性.结果:成功构建腺病毒载体,并包装制备高滴度的重组腺病毒Ad-EGFP.重组腺病毒有效的感染WB-F344细胞,感染率约40-70%.建立WB-EGFP细胞株,持续传代8-9代均较稳定表达EGFP及肝干细胞表面标记,仍保持干细胞样的增生、分化等基本生物学特性.结论:腺病毒可高水平的介导外源基因表达于成体肝干细胞,是有效的基因转移系统.稳定表达EGFP的肝干细胞株观察直观、可连续传代,并保持干细胞的生物学特性,可用于体内外肝细胞研究中的追踪、鉴定.
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肝干细胞研究现状
肝干细胞具有双分化潜能,可向肝细胞和胆管上皮细胞分化发育;胚胎期肝干细胞来源于肝始基,成年期肝干细胞可能来源于Hering管细胞和骨髓造血干细胞;细胞间作用和细胞基质间作用对于肝干细胞的分化成熟起重要作用;肝干细胞在肝脏疾病的基础研究和临床治疗方面具有广阔的应用前景.
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肝干细胞与肝损伤的研究进展
肝脏疾病是影响人类健康的严重疾病,目前尚没有令人满意的治疗措施,肝移植技术由于供体的数量、昂贵的价格等因素使其应用受到限制.近年来,越来越多的研究对干细胞进行了探索,研究表明,肝干细胞在一定条件下可以分化为肝实质细胞,并在肝损伤修复中起重要作用,本文就干细胞在肝脏疾病中的应用研究作一综述.
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骨髓造血干细胞与肝再生的相关性研究
感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等.新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导分化为肝样细胞,移植到肝损伤动物体内可以修复肝组织损伤,这为肝再生研究开辟了新的途径.对骨髓造血干细胞参与肝细胞再生的深入研究,有可能找到肝损伤治疗的有效措施.
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肝干细胞的研究进展
肝干细胞的存在与否曾是一个争议性问题,目前则趋于肯定,并取得重要研究进展.肝干细胞有肝源性和非肝源性两类,前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞,后者包括胚胎干细胞(ES细胞)、骨髓/血液干细胞及胰腺上皮细胞等.肝干细胞受多种细胞因子调节;卵圆细胞可通过流式细胞仪分离,经特殊培养液培养条件及遗传学改造等进行长期培养;肝干细胞与肝坏死后的再生及增生有关,也和肝细胞癌变有关.已在动物中成功进行了肝源性和非肝源性肝干细胞移植.肝干细胞是研究肝细胞发育、生长、增生、再生、纤维化及癌变等生理和病理生理过程中不可缺少的关键角色,并可能通过肝细胞移植、体外生物人工肝及肝导向基因治疗,在多种肝病及肝脏相关疾病中发挥重要作用.
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肝干细胞与肝再生、肝癌的关系
肝干细胞是存在于肝脏组织中的一类具有自我更新和向前分化为成熟肝细胞、胆管细胞等的不成熟细胞,这类细胞是生理性肝细胞更新和病理性肝损伤修复的起源细胞.肝癌是人类常见的恶性肿瘤,传统认为肝癌起源于肝细胞突变和异常增生,新近研究提示,肝癌起源于肝干细胞的异常分化和增生.肝癌干细胞学说为肝癌发生机制研究和肝癌防治开辟了全新的思路.
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TNF-α诱导肝干细胞凋亡及信号转导途径的改变
目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导肝干细胞(WB细胞)凋亡及其信号转导机制.方法:WB细胞经TNF-α诱导不同时间,用流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡及细胞周期改变;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA的变化:经Western blot检测TNF-α诱导WB细胞与凋亡有关分子的改变.结果:TNF-α诱导WB细胞24 h,FCS发现51%细胞凋亡,核酸电泳出现DNA"ladder"现象;同时与细胞凋亡相关的转录因子NF-KB核内转移,活化的凋亡蛋白酶caspase-3增多,而与细胞增殖相关的信号转导途径被阻断-磷酸化的Erk/Akt水平下调.结论:经TNF-α仅诱导,与凋亡相关的信号分子caspases-3被激活,而与细胞增殖有关的信号途径被阻断(p-Erk/Akt)下调,导致细胞可能发生增殖阻滞而凋亡.
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未来肝癌治疗的新靶点-肝癌干细胞
肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病.基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键.新研究表明,肝细胞型肝癌可能是由肝干细胞未分化或分化不全引起的.对于肝癌细胞的研究我们知道肝细胞型肝癌中的细胞具有干细胞特性,如永生性,可移植性以及对治疗手段的抵抗性.但至今为止,确切的肝癌干细胞的标志物没有找到,而且没有分离出肝癌干细胞.
