拉米夫定耐药变异株在急性HBV感染者中的流行调查

目的:调查YMDD变异株在急性HBV感染(AHB)中的流行情况,为指导AHB的防治提供依据.方法:收集HBV感染者321例(HBV DNA≥1.0×107copies/L),其中未开始治疗的AHB患者100例和拉米夫定治疗(100 mg/d)不同时期的CHB患者221例.采集外周血标本,用荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测血清HBV YMDD及其变异,统计分析HBVYMDD变异在两组中的分布.结果:在AHB组,只检出HBV YMDD野生型,未检出变异型.而在CHB组,YMDD变异检出率为63.4%,其中YIDD占52.1%,YVDD占37.9%,YIDD+YVDD混合变异占10.0%:1年内、1-2年、2-3年、3-4年和4年以上疗程YMDD变异率分别为45%,66%,77%,75%和40%,YMDD变异检出率在两组中差异显著(X2=112.3,P=0.00).结论:目前在用拉米夫定治疗的CHB患者中仍有较高比率的YMDD变异株存在,但尚未发现该变异株在AHB患者中流行.

三维容积超声在肝脏肿瘤诊断中的应用价值

目的:探讨三维容积超声在肝脏肿瘤术前诊断中的临床应用价值.方法:应用三维超声重建技术,采集60例共78个肝实质性肿块内部及其周围肝脏组织的血供信息,观察其立体图像,并与病理结果对照结果:三维重建后瘤体内血管显示率较二维图像增多,并可获取二维实时扫查不能直接显示的肝脏肿瘤血管和周围血管分布的立体构象,进行定位诊断.78个病灶中HCC以内部血流为主,MLT以瘤周血流为主,总诊断符合率为94.9%.结论:三维容积超声技术可根据肝脏肿瘤内部和周围血管的走行及空间位置关系进行准确的定位,并为临床鉴别诊断提供依据.

血清胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ和G-17在功能性消化不良患者中的表达及其意义

目的:探讨功能性消化不良(FD)患者血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、Ⅱ及胃泌素-17(G-17)的水平和意义.方法:根据罗马Ⅲ诊断标准,229例FD患者纳入本研究.均采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量测定血清PG Ⅰ、PGⅡ和G-17含量,计算PG Ⅰ/Ⅱ比值(PGR),血清幽门螺杆菌(H pylon)抗体滴度大于等于35EIU为阳性.结果:以≤40岁、41-50岁、51-60岁和≥61岁进行年龄分组.FD组年龄≥61岁组PGR低于≤40岁组(P=0.049).FD患者PGⅡ、G-17水平要明显高于对照组(P=0.000,0.000),PG Ⅰ没有明显变化(P=0.067),而PGR明显低于对照组(P=0.000).根据ROC曲线计算出诊断FD的PGⅡ和G-17的佳界值分别为13.2μg/L(灵敏度51.5%,特异度96.2%,准确率65.5%),6.84μg/L(灵敏度52.8%,特异度100%,准确度67.5%).FD组男性在PG Ⅰ与PGⅡ水平均显著高于女性(P=0.003,0.004).FD组H pylori抗体阳性率高于对照组(P=0.028).结论:FD患者血清PGⅡ与G-17水平增加,胃窦与十二指肠近端黏膜可能存在功能学的改变.FD与Hpylori感染相关.

内镜下黏膜切除术治疗老年及老年前期大肠息肉561例

目的:观察内镜下黏膜切除术(EMR)对老年及老年前期大肠息肉的疗效,并对其临床病理特征、适应证及并发症等进行探讨.方法:2003-10/2008-10我院消化内科内镜中心老年及非老年大肠息肉EMR手术561例766处病变,对切除标本进行病理组织学观察.术后定期内镜随访1-60 mo,以评价切除效果,记录术中及术后发生的并发症及处理情况.结果:766处病变总治愈率96.3%;21处病变(2.7%,21例)术后病理示浸润癌再追加外科开腹手术.术中出血23例(4.1%),均内镜下止血成功:术后迟发出血10例(1.8%):7例经内镜下止血成功,3例经输血及内科保守治疗后出血停止;无穿孔、感染及其他并发症发生.病理结果示炎性息肉、增生性息肉、腺瘤性息肉、腺瘤癌变分别占29.0%,21.1%,45.7%,4.2%,随着年龄的增加,腺瘤性息肉的比例逐渐升(P<0.01).随访期间所有病例均无复发.结论:EMR是一种安全、微创的内镜治疗手段,对老年及老年前期大肠息肉治疗的效果优于传统的内镜下治疗方法.

HBV抗原肽冲击的DC对慢性乙型肝炎及HBV携带者的免疫治疗作用

目的:观察HBV抗原肽冲击的自体树突状细胞对慢性乙型肝炎(CHB)及HBV携带者的疗效及安全性.方法:HBV抗原肽致敏的树突状细胞,经培养后回输给患者,总疗程6 mo,分为:密集治疗期(第1-3月),10-20 d为1个周期;巩固治疗期(第4-6月),30 d为1周期.临床疗效跟踪期(第7-12月);远期疗效观察期(第13-24月).首次治疗前行高通量HBV变异基因检测,每次治疗前、后检查HBV-M,HBV DNA,血尿常规、肝功能、肾功能、肝胆胰脾B超及血HBV DNA载量.结果:384例慢性HBV感染患者中,发生C区变异多:58例(15.1%);HBeAg(+)CHB 134例中,分别有58例(43.3%)、21例(15.7%)、75例(55.6%)发生单项病毒学、血清学及生化学应答;HBeAg(-)慢CHB 102例中,分别有40例(39.2%)、53例(52%)发生单项病毒学及生化学应答:81例慢性HBV携带者中,28例及33例分别发生病毒学、血清学应答.1年时,完全应答112例(29.2%),2年时,完全应答124例(32.4%);与治疗前相比HBsAg、HBeAg及血清HBV DNA载量均发生显著性的变化(2484.39±185.2 ng/L vs 1616.28±169.81 ng/L;32.1±5.78 ng/L vs 69.9±7.61 ng/L;0.08±1.78×108copies/L vs 1.79±1.21×108copies/L,P<0.05或0.01);治疗期间及结束后,无严重不良反应发生.结论:HBV抗原肽冲击的树突状细胞可用于CHB的治疗,疗效及安全性确切.

克氏螯虾壳聚糖抗菌的作用靶位

目的:研究克氏螯虾壳聚糖抗菌的作用靶位,探讨其抗菌机制.方法:用5(6)-羧-四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺标记克氏螯虾壳聚糖,应用标记克氏螯虾壳聚糖与大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌在pH5.6,37℃条件下220 r/min作用3.5 h,观察作用前后上清液中的核酸和蛋白质含量变化,并用激光共聚焦显微镜观察其对细菌的聚集部位.结果:荧光标记克氏螯虾壳聚糖对大肠埃希菌作用前后的上清液中,核酸和蛋白质的含量由作用前的0.00和0.22±0.01升高为1.13±0.06和1.49±0.05(P<0.01);对金黄色葡萄球菌作用前后的上清液中,核酸和蛋白质的含量由作用前的0.03±0.06和0.21±0.02升高为1.00±0.10和0.81±0.01(P<0.01);并且荧光标记克氏螯虾壳聚糖浓度越高,核酸及蛋白质含量也逐渐增高:激光共聚焦显微镜下显示两种实验细菌由表及里的荧光强度逐渐增强.结论:克氏螯虾壳聚糖的抗菌作用靶位,除部分作用于细菌细胞膜外,主要是进入细菌内作用于细胞器.

JAK/STAT抑制剂在TNBS诱发大鼠结肠炎中的作用

目的:探讨抑制Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠结肠炎发病机制中的作用.方法:建实验性大鼠结肠炎模型后,给予JAK特异性抑制剂AG490和STAT抑制剂雷帕霉素(RPM),腹腔注射治疗1 wk后处死大鼠,观察结肠炎症改变并进行评分,采用蛋白印迹法(Western blot)检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、TIMP-1蛋白表达:用明胶酶谱法检测结肠组织中MMP-2的活性.结果:与对照组相比,AG490治疗组肠道损伤积分降低(5.50±2.16分vs8.53±2.18分,P=0.012);RPM治疗组肠道损伤积分(5.17±1.80分)较对照组低(P<0.05).AG490组和RPM组MMP-1、MMP-2的蛋白质表达量均明显低于对照组(均P<0.05),而两实验组分别与对照组比较其MMP-3、TIMP-1蛋白质表达均无明显差异(均P>0.05).与对照组相比,两实验组MMP-2的活性均显著下降(P<0.05).结论:AG490和RPM通过阻断JAk/STAT信号通路的活化能缓解大鼠结肠炎.这一作用可能是通过抑制MMP-1、MMP-2的表达来实现的.

抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响

目的:探讨抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响.方法:将HT-29细胞分为3组:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组(稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞)、pcDNA3.1(+)/HT-29组(转染空白质粒的HT-29细胞)及HT-29对照组.通过鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验检测结肠癌细胞接种鸡胚血管形成情况.裸鼠成瘤实验观测种植瘤及其对裸鼠的影响,然后对种植瘤进行免疫组织化学实验检测其内部血管生成.RT-PCR检测NGX6基因及VEGF基因在各组细胞中的表达.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组鸡胚血管形成平均数量较HT-29与pcDNA3.1(+)/HT-29组明显减少(6.2±0.2 vs 8.6±0.2,8.4±0.3,P<0.05):HT-29组裸鼠明显消瘦且PcDNA3.1(+)/NGX6/H T-29组与HT-29和pcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤平均质量、种植瘤微血管密度明显降低(1.83±0.25 g vs 4.06±0.20 g,4.16±0.4 g;1.83±0.52 vs 7.36±1.12 vs 6.96±1.43,均P<0.05); VEGF在pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29细胞及种植瘤中较其余两组明显降低,而pcDNA3.1(+)/HT-29细胞与未转染的HT-29细胞与种植瘤中呈高表达;且HE染色切片显示HT-29组及PcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤血管内都有癌栓,而PcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组种植瘤内未见有癌栓形成.结论:NGX6基因能抑制结肠癌细胞HT-29血管的形成,抑瘤基因NGX6的抑癌能力部分是通过抑制血管形成来实现的.

γ-氨基丁酸B受体在CCl4诱导肝纤维化大鼠中的表达

目的:探讨γ-氨基丁酸(GABA)B受体在肝纤维化大鼠中的表达.方法:SD大鼠,腹腔注射50%CCl4制备大鼠肝纤维化模型.从第6周开始,每周1次取大鼠肝组织,得到不同肝纤维化程度的肝脏标本.一部分标本40g/L甲醛固定,常规石蜡包埋,连续4 μm切片,做组织病理学染色(HE、Masson)和免疫组织化学(α-SMA),以确定不同肝纤维化水平.另一部分标本-80℃保存用于提取肝脏RNA,逆转录得到cDNA,设计GABA(B)受体、α-SMA、TGF-β、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的引物,做实时荧光定量PCR,分析GABA(B)受体的表达与大鼠肝纤维化程度的相关性.结果:建模7 wk时,α-SMA、TGF-β、胶原Ⅰ和胶原Ⅲ较6 wk分别增加19.2倍、2.1倍、37.5倍和183.5倍.GABA(B)受体基因表达也明显升高,升高量达到116.2倍.6 wk对照组GABA(B)受体基因表达是模型组的2倍.到12wk初步形成假小叶时,只有α-SMA和胶原Ⅰ增加显著,分别为21.6倍和20.1倍.TGF-β和胶原Ⅲ变化不明显.其他时间点基因表达与6 wk模型相比无明显变化.结论:GABA(B)受体可能参与了肝纤维化的发生.在肝纤维化晚期,细胞外基质的合成主要以胶原Ⅰ为主,胶原Ⅲ次之.α-SMA的表达与肝纤维化水平呈正相关.

体外灌注法分离大鼠肝脏Kupffer细胞及原代培养

目的:探讨一种简便、高效的大鼠离体肝脏分离Kupffer细胞(KCs)及原代培养的方法.方法:采用大鼠肝脏离体Ⅳ型胶原酶灌注,剪碎肝脏,37℃消化30 min,低速离心去除肝细胞,Pcrcoll不连续密度梯度离心和选择性贴壁的方法分离KCs.通过墨汁吞噬实验和ED2免疫细胞化学来鉴定KCs.结果:分离的KCs的得率在细胞贴壁前(2.1±0.3)×106/g肝脏、贴壁后(1.5±0.1)×106/g肝脏,用0.4%台盼蓝染色,活率大于92%,ED2染色阳性的细胞达90%以上,分离的细胞培养后功能完整并延伸呈不规则型.结论:本实验建立的大鼠肝脏KCs的分离培养方法简便、高效、稳定,培养的细胞具有良好的生物学性状,为进一步研究提供基础.

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus.HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NSSB RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NSSBRNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的新研究进展.

重症急性胰腺炎实验动物模型的研究进展

为探讨重症急性胰腺炎(seve re acutepancreatitis,SAP)的病因、发病机制、病理生理变化及其治疗方法,已用多种方式建立了活体动物SAP模型.鉴于各种活体SAP模型能在不同侧面模拟人类SAP病变过程,但操作及控制各异、部分便于动态观察各项指标变化及治疗效果,可根据不同的实验目的选择合适、操作简单、重复性好的建模方案进行研究.本文简述目前SAAP究现状,启迪未来探索方向.

内皮素B受体基因与先天性巨结肠关系的研究进展

EDNRB/EDN3/ECE-1信号传导通路在胚胎发育期神经嵴细胞分化、迁移、发育为神经节细胞的过程中起到关键作用.内皮素B受体(endothelin receptor type B,EDNRB)基因突变导致该信号传导通路异常,神经嵴细胞迁移停顿,远端结直肠肌层间和黏膜下神经丛神经节细胞缺如而发生先天性巨结肠.

兔肝动脉插管技术的方法学及DSA表现

目的:探讨实验兔肝动脉插管的实验方法.方法:大耳白兔24只,随机等分为2组,实验组,经股动脉穿刺插管至肝动脉;对照组,剖腹下直视穿刺插管至肝动脉,比较2组的手术操作时间及手术成功率.结果:实验组的手术成功率为91.67%(11/12),对照组为75%(8/12),两者相比无显著性差异(P>0.05);实验组的手术操作时间为41.5±3.6min,对照组为58.6±5.4 min,两者相比有显著性差异(P<0.05).结论:实验兔进行股动脉穿刺插管进行肝动脉灌注的方法简单、容易掌握、成功率高,适用于研究药物或细胞悬液经肝动脉灌注对肝脏的作用.

缬草波春对大鼠非炎症性结肠致敏模型的影响

目的:探讨中药提取物缬草波春对大鼠非炎症性结肠致敏模型的影响.方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=8):空白对照组、模型对照组、吗啡对照组及缬草波春药物实验组.正丁酸钠灌注直肠法制造大鼠非炎症性结肠致敏模型,缬草波春药物实验组给予缬草波春2.5 mg/(kg·d),吗啡对照组吗啡0.4 mg/(kg·d),生理盐水对照组和模型对照组等量生理盐水灌胃.共2 wk.直肠扩张法检验大鼠直肠的敏感性,水囊通过压力感受器记录结肠用药前后直肠压力改变.分析各组直肠初始压力感觉与大压力,结肠平均压力与大耐受压力.结果:缬草波春组与模型对照组比较,在压力为0、1.33、2.66 kPa时,直肠扩张积分差异无统计学意义,在压力为3.99、5.32、6.65、7.98kPa时,则有统计学意义(t=-2.50,-4.58,-3.00,-2.38,P<0.05或P<0.01),而与吗啡对照组比较,在上述压力下差异均无统计学意义;缬草波春组与模型对照组初始感觉压力比较明显升高.差异有显著意义(t=5.892,P<0.01),而与吗啡对照组比较,差异无显著意义;缬草波春组与模型对照组初始感觉压力和大压力耐受值比较明显升高,差异有显著意义(t=5.892,5.075,均P<0.01),而与吗啡对照组上述两项指标差异无显著意义;缬草波春组与模型对照组和与吗啡组比较结肠运动平均压力与其运动大压力明显降低,差异有显著意义(t=-6.583,-3.85,-3.698,-2.440,P<0.01或0.05).结论:缬草波春可降低大鼠非炎症性结肠致敏模型结、直肠的敏感性,抑制模型大鼠的结肠运动.

细胞凋亡在结肠腺癌组织中的变化及其相关蛋白的表达

目的:观察结肠腺癌组织细胞凋亡的变化,探讨抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w在结肠腺癌中的作用.方法:收集14例我院手术切除结肠腺癌标本,肠镜取正常结肠黏膜组织27例,所有标本均经病理明确诊断.用TUNEL法检测其组织细胞凋亡水平,并用免疫组织化学PV法检测蛋白Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w的表达水平.结果:正常结肠黏膜组织的细胞凋亡指数明显高于结肠腺癌,有统计学显著性差异(t=3.35,P=0.002);结肠腺癌中Bcl-xL与Bcl-w的表达均高于正常结肠黏膜组织,有统计学差异(92.86% vs 11.11%;85.71% vs 0%,P<0.01或P<0.05);Bcl-2的表达与正常结肠黏膜组织没有统计学差异(P>0.05).结论:结肠腺癌的组织细胞凋亡明显低于正常结肠组织:结肠腺癌中抑制凋亡蛋白Bcl-xL与Bcl-w的高表达可能发挥了重要的作用.

消化病中西医结合基础研究评述

近年来,中西医结合在消化领域取得了长足的发展.本文从消化病相关证的客观化研究,模型动物在消化病中西医结合研究中的运用以及消化疾病中药作用机制的研究三个方面,总结了中西医结合消化病学基础研究的现状,并提出将现代生命科学和祖国医学的理论知识和诊治经验有机地结合起来,逐步发展中西医结合新消化病学.

阑尾术后大网膜粘连综合征诊治1例

大网膜粘连综合征为普外科及消化内科相对常见疾病,但目前辅助检查对诊断该病无特异性.本文对气腹造影技术在诊断阑尾术后大网膜粘连综合征的应用及诊断价值进行分析讨论,以期增加普外科医师和消化内科医师对此类疾病的认识,减少对该病诊断的漏诊及误诊,同时可扩充普外科医师及消化内科医师对诊断术后慢性腹痛的思维.

致谢世界华人消化杂志编委