叶酸治疗萎缩性胃炎并改变P16蛋白表达

目的:研究叶酸干预萎缩性胃炎后的黏膜改变、P16蛋白表达变化及p16基因甲基化状态.方法:根据胃镜及病理结果确诊为萎缩性胃炎的患者56例,随机分为叶酸治疗组(n=28)和非叶酸治疗组(n=28),治疗前后观察临床症状、血浆叶酸水平、黏膜病理、P16蛋白表达变化,并采用甲基化敏感的内切酶酶切后PCR法检测p16基因甲基化状态.结果:叶酸治疗组临床症状缓解快而持久,患者血浆叶酸水平升高(47.98±2.68 μg/L vs14.37±3.56μg/L,P＜0.01),病理改变逆转(有效率:80.8%vs39.3%,P＜0.01),P16蛋白表达增强,有效率达61.6%(P＜0.01),而p16基因甲基化状态两组在治疗前后均正常.结论:萎缩性胃炎的发生与叶酸缺乏有关,叶酸治疗可以提高血浆叶酸水平,有效改善临床症状,一定程度上逆转胃黏膜的萎缩、肠化和不典型增生,能提高P16蛋白表达.萎缩性胃炎中不存在甲基化异常.

克隆性分析技术在肝脏局灶性结节性增生诊断中的应用

目的:探讨整个肝局灶性结节性增生(FNH)病变及各结节的克隆性,以阐明其本质,同时比较其与肝细胞腺瘤(HA)鉴别的克隆性组成.方法:女性肝脏标本3例共4个FNH病灶.在病变区和非病变区取组织提取基因组DNA,余标本制备石蜡切片,HE染色,应用显微切割技术分离其中3个FNH内的小结节状病变,提取基因组DNA,经甲基化敏感的HpaⅡ或HhaⅠ消化,巢式PCR扩增磷酸甘油酸激酶(PGK)和雄激素受体(AR)基因.应用Bst Ⅺ酶切和琼脂糖凝胶电泳显示PGK基因的单核苷酸多态性;应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示AR基因的CAG重复序列长度多态性.2例HA和4例HCC作为肿瘤参照.结果:2例HA及4例HCC均为单克隆性.4个FNH病变,直径1.5-5.3 cm,但缺乏特征性的中央星状瘢痕,结果均显示为多克隆性病变;其中的61个结节性病变中,56个呈变异肝细胞结节(NAH)形态,5个为普通再生结节.克隆性分析结果显示,56个NAH样病变中,除4个未扩增成功外,52个NAH中有21个(40.4%)显示X染色体失活嵌合性丢失,提示为肿瘤性病变;其中1例FNH的14个单克隆结节中,有2个与其他病变失活带型不一致,提示在同一FNH中,存在着不同起源的NAH样病变.5个普通肝细胞增生结节及病变周围肝组织均为多克隆组成.结论:FNH是由无数个NAH构成的,其整个病变是多克隆性,但其中某些结节已经是肿瘤性增生.克隆性检测有助于其与HA的鉴别,而且所取样本必须是病变的整个切面或其大部分.

冷缺血时间及组织相容性对胰岛细胞活性的影响

目的:探讨胰岛细胞移植中冷缺血时间、组织相容性对于胰岛细胞活性的影响.方法:采用脑死亡自愿捐赠器官的供者胰腺(已知血型和HLA配型);高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过经主动脉原位灌注后,肝、肾、胰腺联合及分别切取,测定不同的冷却血时间条件下胰岛细胞活性的变化.测定胰岛细胞和血液组织相容性,分析供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系.结果:肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取顺利,在冷却血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性;人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中,胰岛将诱发一个迅速血细胞消耗.进行血小板激、中性粒细胞和单核细胞计数,HLA错配组分别为(1.0±0.72)×109/L,(0.54±0.24)×109/L,(0.0l±0.00)×109/L, HLA匹配组为(6.0±0.27×109/L,(0.63±0.19)×109/L,(0.03±0.01)×109/L,无论HLA错配还是匹配血细胞都发生明显的消耗;加入肝素后血细胞计数HLA错配组分别为(57.2±21.10)×109/L,(1.74±0.87)×109/L,(0.75±0.24)×109/L,HLA匹配组为(67.9±19.0)×109/L,(3.42±0.61)×109/L,(0.47±0.08)×109/L,与对照组比较反应明显减轻(P＜0.05);胰岛细胞体外培养24 h后,匹配组活性胰岛细胞数量分别为(1.085±0.167)×105/L,错配组为(0.697±0.193)×105/L,具有显著性差异(P＜0.05).结论:把握胰岛细胞移植过程中冷缺血时间及组织相容性关系能够提高胰岛细胞的存活.

利用组织芯片技术研究COX-2在胃癌中的表达及其与血管生成的关系

目的:研究COX-2在胃癌中的表达及其与血管生成的关系,探讨其在胃癌转移中的作用及与胃癌病理生物学行为的关系.方法:采用EnVision方法检测胃癌组织芯片中COX-2的表达,用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),分析其相关性.结果:COX-2在胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜(P=0.001).COX-2的高表达与胃癌的转移(P=0.019)和胃壁浸润深度(0.031)呈正相关,与胃癌的组织病理分型无关(P=0.495),与Borrmann分型无关(P=0.109)组织MVD(65.49±20.64)明显高于正常胃黏膜组织(36.21±18.47,P=0.001).MVD值与胃癌的组织病理分型(P=0.003)和转移有关(P=0.043),与胃癌胃壁浸润深度(P=0.627)和Borrmann分型(P=0.634)无明显相关性.COX-2表达阳性组的MVD指数明显高于COX-2表达阴性组(68.59±19.8vs 25.82±7.76,P＜0.05),COX-2表达与MVD呈正相关(P=0.001).结论:组织芯片技术对于快速检测胃癌及其他肿瘤的分子病理学改变是一个强有力的工具.COX-2表达可能通过促进血管形成对胃癌的发生、发展起重要作用,其可作为判断预后和指导治疗的有效指标.

利用大鼠Y染色体特异性PCR技术检测卵圆细胞源性肝癌细胞

目的:利用Y染色体体细胞的特异性来寻找卵圆细胞分化为肝癌细胞的直接证据,从而为卵圆细胞源性的研究及临床肝癌治疗方法提供理论依据.方法:选择健康♂Wistar大鼠30只饲喂每千克含0.6 g 3-甲基-4-二甲基偶氮苯(DAB)的饲料4 wk,建立卵圆细胞增生的♂Wistar大鼠动物模型.卵圆细胞的分离、提取和鉴定(光镜、电镜、免疫组化).将实验用♀Wistar大鼠60只随机平分成对照组和实验组.对照组不接种细胞悬液,连续喂含DAB饲料14 wk.实验组按25 mg/kg体重戊巴比妥腹腔麻醉,消毒开腹,用吸取♂Wistar大鼠卵圆细胞悬液,接种至肝脏包膜下,每点106个,之后连续喂含DAB饲料14 wk,促进肝肿瘤的生成.从GenBank调出雄性大鼠的SRY基因,利用引物设计软件设计引物片断.14 wk后提取两组大鼠肝肿瘤组织的基因组DNA,利用所设计的引物进行PCR扩增,对PCR产物进行电泳分析.结果:光镜下可找到卵圆细胞,核仁小而清晰,胞质少,细胞体积较小,约为正常肝细胞的1/3,直径约9-12 μm不等.电镜下观察可见细胞表面少量短而小的微绒毛突起,呈现未分化细胞的形态.免疫组化观察肝卵圆细胞胞质c-kit染色呈棕黄色阳性信号.14 wk后对照组和实验组共计60只大鼠均见肝脏肿瘤生成,肿瘤组织在外观上和性状上无显著性差异.实验组电泳后见与设计片断长度相符的电泳阳性条带.结论:大鼠的卵圆细胞可以分化为肝癌细胞,为卵圆细胞源性肝癌细胞的假说提供实验依据.

HCV p7蛋白反式调节基因p7TP2的克隆化及生物信息学分析

目的:克隆HCV p7蛋白反式调节未知功能新基因p7TP2,构建其真核表达载体,并应用生物信息学初步探讨其结构及功能.方法:应用PCR技术从HepG2细胞提取的cDNA扩增p7TP2基因,选用pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR,限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His A,通过PCR,限制酶切分析进行鉴定,并应用生物信息学初步分析其物理化学性质、蛋白质结构域、功能及染色体定位.结果:成功从HepG2细胞提取的cDNA中扩增出p7TP2基因,编码区为495核苷酸(nt),编码产物为164氨基酸残基(aa),经核苷酸序列数据库(GenBank)同源序列的搜寻,与已知基因序列和蛋白序列之间没有显著同源性,属于未知功能新基因,并成功进行TA克隆,酶切、测序均正确,并进一步亚克隆至pcDNATM3.1/myc-His A真核表达载体,生物信息学分析此基因位于8q24.3,Mrl7 146.5,理论pⅠ:9.26,半衰期为30 h(体外哺乳类网状细胞),属于不稳定蛋白,疏水指数较高,含有潜在的三个螺旋区域,四个β折叠,四个蛋白激酶C磷酸化位点,一个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,5个N-肉豆蔻酰位点,预测可能为具有不紧密的球蛋白结构,具有信号肽及两个跨膜结构域.结论:发现了HCV p7反式调节新的靶基因,构建了pcDNATM3.1/myc-His A真核表达载体.

重症急性胰腺炎心脏损伤临床表现与机制研究进展

重症急性胰腺炎(SAP)是较常见的急腹症,其发病凶险,病情演变迅速,并发症多,危害极大,死亡率高,近几年来发病率呈上升趋势.SAP可以引发局部和全身性过度炎症反应,造成血管渗出、低血容量、休克和多脏器功能障碍等全身炎症反应综合征(SIRS),甚至导致多器官功能不全综合征(MODS).随着对SIRS、MODS等的深入研究,SAP时的心脏损伤逐渐被人们重视.在SAP胰外器官损害中,对心脏损害的研究较少,但SAP时心脏失代偿是导致死亡的高并发症之一.因此,进行SAP心脏损伤临床表现与机制的研究对治疗SAP患者有重要意义.我们将对SAP心脏损伤临床表现与机制的研究进展进行阐述.

骨髓干细胞分化为肝细胞的多种移植途径

近年来许多研究证实,人类和啮齿类动物的骨髓细胞可分化为多种细胞类型,包括骨骼肌细胞、心肌细胞、神经细胞和肝细胞等,这些骨髓干细胞的可塑性研究,为肝细胞移植提供了新的供体来源.骨髓干细胞替代肝细胞进行移植具有来源丰富,费用相对低廉,对患者损伤小等优点,且自体骨髓干细胞移植可以完全避免移植排斥反应,同时,骨髓干细胞只有5-15 μm,移植后不会发生栓塞等并发症.因此骨髓干细胞移植在治疗肝病以及解决供体肝脏来源短缺方面具有广泛的应用前景.本文就骨髓干细胞的移植途径做一综述.

肝脏移植耐受及其抗原递呈细胞相关作用的研究进展

免疫排斥反应是移植器官组织终能否成活的大障碍.解决此问题理想的方法是诱导特异性免疫耐受.肝脏除了有代谢消化功能外,还能够处理外来抗原并诱导机体对其产生特异性免疫耐受反应,尤其是在移植耐受中表现出了独特作用.目前相关机制研究发现,除了特殊的微环境外,肝脏还拥有大量的驻留和非驻留型抗原提呈细胞参与内部免疫反应.肝脏抗原递呈细胞在移植耐受诱导过程中占有重要地位.

小鼠甲胎蛋白基因的克隆表达鉴定及稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株的建立

目的:克隆小鼠甲胎蛋白(AFP)基因并进行表达鉴定,构建小鼠AFP真核表达载体并建立稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株.方法:从Hepa1-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR,克隆出小鼠AFP基因,亚克隆于pcDNA3.1中构建真核表达载体pmAFP,进行酶切、测序和表达鉴定,pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞株,RT-PCR检测EL-4(mAFP)细胞mAFP mRNA的表达,Western blot检测mAFP蛋白表达,将EL-4(mAFP)细胞种植于6只小鼠背部皮下观察成瘤情况.结果:RT-PCR成功克隆出小鼠AFP基因,酶切、测序和表达鉴定证实真核表达载体pmAFP构建成功,RT-PCR及Western blot检测证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA及蛋白的表达,5只小鼠背部皮下种植处有肿瘤形成,22 d肿瘤体积为2 279.97±235.13 mm3.结论:小鼠mAFP基因克隆成功,真核表达载体构建成功,建立的EL-4(mAFP)细胞株能有效表达小鼠甲胎蛋白,在小鼠体内成瘤性良好.

大鼠溃疡性结肠炎模型肠组织中MIF的表达和NF-κB的激活

目的:检测其肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨两者与溃疡性结肠炎(UC)的关系及MIF在UC发病机制中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)溶液诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,动物分为正常组,轻、重模型组共三组.每天观察各组疾病活动指数(DAI);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对肠组织MIF的表达水平进行半定量测定;应用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB的表达;生化法检测髓过氧化物酶(MPO)活性.结果:正常组MPO活性,DAI,NF-κB及MIFmRNA的表达水平依次为0.38±0.18 U/g,0.51±0.28,0.18±0.05,0.11±0.03;模型Ⅰ组1.68±0.45 U/g,5.04±0.73,0.62±0.08,0.65±0.04;模型Ⅱ组2.70±0.35 U/g,8.13±0.71,0.78±0.11,0.81±0.05.与正常组相比,模型组肠组织中MIF mRNA的表达显著增强(P＜0.05),NF-κB和MPO活性及DAI也显著增高(P＜0.05),且在病情严重组增高尤为明显.结论:MIF参与了溃疡性结肠炎的发病过程,其机制可能与激活NF-κB,诱导炎症细胞因子的过量表达有关.

溃疡性结肠炎结肠黏膜修复中HGF,c-Met,EGFR的作用

目的:观察并分析肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met与表皮生长因子受体(EGFR)在溃疡性结肠炎(UC)活动和非活动阶段患者结肠黏膜的表达情况,探讨其表达的临床意义.方法:根据改良Williams疾病活动指数(DAI)将42例UC患者分为活动期(n=25)和非活动期(n=17)2组,对照组(n=20)为门诊健康体检者或肠易激综合征患者.结肠镜下活检各组患者结肠黏膜组织,采用免疫组化SABC法检测各组患者结肠黏膜HGF及c-Met表达;SP法检测EGFR及增殖细胞核抗原(PCNA)表达.结果:对照组、活动期UC患者、非活动期UC患者HGF阳性表达率分别为22%,88%,100%(χ2=62.84,P＜0.01);c-Met阳性表达率分别为25%,92%,100%(χ2=62.34,P＜0.01);EGFR阳性表达率分别为25%,92%,100%(χ2=54.34,P＜0.01);PCNA过表达率分别为0,36%,100%(χ2=67.50,P＜0.01),组间比较差异显著.HGF, c-Met和EGFR在UC患者结肠黏膜表达与PCNA过表达正相关(r=0.648,0.645,0.565,P＜0.01).结论:HGF, c-Met,EGFR及PCNA在非活动期UC患者结肠黏膜中的表达较活动期UC患者和对照组明显增加.HGF及其受体c-Met与EGFR在UC患者结肠炎症黏膜修复过程中可能起一定作用.

CD4+CD25+调节性T细胞与炎症性肠病研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞是维持机体自身免疫耐受的调节性T细胞亚群,主要来源于胸腺,与自身免疫性疾病的发生、发展密切相关.炎症性肠病(IBD)是一种病因未明侵犯胃肠道的自身免疫性疾病,免疫耐受异常是导致其发病主要因素之一.CD4+CD25+调节性T细胞的异常表达可能与IBD的发病有关.

胆囊黏膜相关淋巴组织B细胞淋巴瘤1例

患者,女,77岁,因"尿黄,皮肤黄染伴瘙痒半个月"入院,伴白色陶土样便,半个月体质量下降约10 kg.CT和MRCP诊断为胆囊癌、胆道高位梗阻,后经病理确诊为胆囊黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(B细胞来源),此病例罕见.

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世界华人消化杂志投稿须知

肠易激综合征的诊断和治疗

0引言肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的胃肠功能紊乱性疾病.具有与排便相关或肠道习惯改变相关的腹痛,并伴有不正常排便及腹胀的特征.近年欧美大样本调查显示:肠易激综合征分别占普通人群的22%和11.6%,我国报道,IBS占胃肠道专科门诊量1/3,占人群的15%左右.由于症状反复发作,长期存在,对患者生活影响及给工作带来的不便相当明显,各种检查和治疗的花费更为可观.