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儿童反复腹痛与幽门螺旋杆菌
肖晓是个活泼健康的孩子,上了五年级以后,经常喊肚子痛,一会儿指胃,一会儿指肚脐,家长也没注意,总以为是吃得不合适或肚子着凉了,后来干脆吃了驱虫药,结果还是不管用.肖晓渐渐不愿吃饭,有时恶心呕吐,脸色发黄,瘦了不少.到医院查血幽门螺旋杆菌抗体(Hp-Ab)阳性,胃镜检查十二指肠及胃小弯部各有1cm×1cm溃疡,胃黏膜充血水肿,还有浅表糜烂,胃黏膜组织尿素酶活检(HPUT)阳性.当医生告诉家长,肖晓是幽门螺旋杆菌相关性胃炎(HpG),并有胃、十二指肠溃疡时,他们都大吃一惊.怎么也没想到孩子闹肚子痛居然竟是幽门螺旋杆菌(Hp)捣乱(Hp),尤其是根本不知道什么是幽门螺旋杆菌.
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淮安地区幽门螺杆菌感染与反流性食管炎关系的临床观察
自1982年澳大利亚学者Warren和Marshall发现幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp),并在1983年成功地从人胃黏膜组织中分离以来,对Hp的研究一直是胃肠病研究中的重点.反流性食管炎(RE)是酸相关性上消化道动力障碍性疾病,近年来成为上消化道常见疾病之一,其与Hp感染的关系存在着较大的争议,目前尚无定论[1].为此,本研究观察了Hp阳性患者中RE的检出率以及RE患者中Hp的感染率,同时也观察了根除Hp对治疗RE患者的疗效,旨在指导临床治疗.
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胃复春对胃黏膜不典型增生中iNOS、COX-2表达的影响
胃黏膜不典型增生也称异型增生,是一种常见的消化系统疾病,属癌前病变.幽门螺杆菌(Hp)感染是胃黏膜不典型增生的重要发病因素[1].近年的研究表明,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的过度表达与许多肿瘤的发生、发展和转移有关[2],为了探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、COX-2与胃黏膜不典型增生的关系及胃复春的保护作用,我们采用免疫组化技术对用药前后的胃黏膜组织中iNOS、COX-2的表达进行了检测,现报告如下.
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人胃黏膜组织蛋白质组二维电泳图像的获得
目的初步建立并优化人类胃黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法刮取手术胃黏膜组织,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节, 如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化.以固相pH梯度--IPG胶条(pH=3~10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(13%)的垂直电泳为第二向.结果成功地得到了胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱.
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小儿胃黏膜肠上皮化生病理组织学特点
一、材料和方法1.材料:对1990-2004年我科及浙江大学附属儿童医院病理科共12 746例胃镜活检胃黏膜组织进行回顾性研究,其中诊断胃炎伴胃黏膜肠上皮化生55例,男性23例,女性32例,年龄小者3岁,大16岁,平均年龄(9.1±2.8)岁.随机抽取200例经病理诊断胃炎不伴肠化患儿作为对照组.
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胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素常见耐药位点PCR直接检测分析
幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, HP )是定植于人类胃部的螺杆状革兰氏阴性菌,人群感染率超过50%。 HP感染与胃炎、消化性溃疡及胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病密切相关。克拉霉素是根除HP应用广泛的抗生素之一,耐药率的不断增高严重影响着含克拉霉素 HP 根除治疗方案的成功率[1]。现已证实,23 S rRNA V 区的点突变( A2142 G/C, A2143 G)是引起HP产生克拉霉素耐药的主要因素[2]。本研究通过23 S rRNA V区PCR产物测序方法直接检测胃黏膜组织中HP相关基因特征从而快速获得克拉霉素耐药情况,并分析与相关菌株耐药表型测定( E-test 药敏方法)结果的一致性。
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抑癌基因Maspin在胃癌及癌前病变组织中的表达研究
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其发生是一个多阶段多因素参与的复杂过程,其确切机制尚不清楚。 Maspin 基因是采用杂交消减技术在正常乳腺上皮细胞中分离出的一种抑癌基因。本文通过研究不同胃黏膜病变中Maspin蛋白的表达,探讨其在胃癌发生发展、转移中的作用及其与预后的关系。
选取胃镜检查和胃癌手术切除石蜡标本204例,包括正常胃黏膜67例,癌前病变58例,胃癌79例。男性115例,女性89例。采用免疫组化S-P法检测不同胃黏膜组织Maspin蛋白表达,用免疫组化半定量积分法判断结果。采用SPSS13.0软件处理数据,率的比较采用χ2检验或四格表确切概率法, P<0.05为差异有统计学意义。 -
胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失
目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃黏膜组织、38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT基因启动子的甲基化状况,用免疫组化方法检测MGMT蛋白的表达情况.结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组织存在MGMT基因启动子甲基化,正常胃黏膜组织均不存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织MGMT蛋白失表达,其中7例(70.0%)存在启动子甲基化.胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺失存在显著联系(P<0.001).结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失,可能是胃癌发生的重要途径之一.
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热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜COX-2的表达
目的:检测热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织COX-2的表达情况,探讨长期热咸饮食造成萎缩性胃炎的机制.方法:用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,用免疫组化方法检测各实验组4,8,12,32 wk胃黏膜组织COX-2的表达情况,用ELISA方法检测胃黏膜组织PGE2的含量.结果:灌胃至12 wk时出现胃黏膜层变薄,固有层腺体减少,固有层纤维结缔组织增生,黏膜肌层明显增生,慢性炎细胞浸润等萎缩性胃炎表现,随着热盐水灌胃时间的延长,32 wk胃黏膜萎缩程度明显加重.正常对照组大鼠胃黏膜组织细胞COX-2蛋白不表达或仅有微量表达;实验组8 wk开始有少量表达,12 wk胃黏膜出现萎缩时,COX-2表达明显增加,与正常组相比具有显著差异(4.5±2.1%vs 14.7±5.7%,P<0.05).后随着灌胃时间的延长,COX-2的表达持续性上升,32 wk达高峰.实验组12 wk PGE2水平升高,与正常组相比有显著差异(125.6±21.2 ng/g vs 188.4±37.6 ng/g,P<0.05),32 wk升至高.结论:在热盐水引起的大鼠萎缩性胃炎的形成和发展过程,COX-2扮演了重要角色,提示热成饮食可导致萎缩性胃炎的发生,而改变喜食高盐热烫的饮食习惯将有助于预防萎缩性胃炎及胃癌的发生.
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幽门螺杆菌感染与慢性胃炎胃黏膜组织中COX-2、iNOS表达的相关性研究
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染对曼性胃炎胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)表达以及对胃上皮细胞增生与凋亡的影响,阐明Hpylori可能的致癌机制.方法:22例经胃镜及病理确诊为慢性浅表性胃炎患者,采用快速尿素酶及改良Giemsa染色法检测Hpylori;采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测胃黏膜中COX-1、COX-2和iNOS的表达;以染色法原位检测胃上皮细胞的凋亡;以免疫组化法检测胃上皮细胞的增生.结果:与正常对照组相比,Hpylori相关性胃炎胃黏膜组织COX-2和iNOS表达明显增高,增生、凋亡指数差异显著;Hpylori感染导致的COX-2和iNOS表达程度与胃黏膜上皮细胞增生、凋亡呈正相关(r=0.716,0.603,P<0.01;r=0.665,0.572,P<0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜COX-2和iNOS的高表达,与胃上皮细胞的增生与凋亡失衡有关,从而参与致癌.
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大鼠应激性溃疡胃黏膜nNOS/iNOS表达对细胞凋亡的影响
目的:探讨细胞间信息传递因子NO在胃黏膜遭受应激损伤时的变化及与细胞凋亡发生的关系.方法:原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠水浸-束缚应激(WRS)结束前后不同时间点细胞凋亡的发生;免疫组化的方法检测胃黏膜组织nNOS/iNOS蛋白表达的变化;检测不同剂量的NO合成抑制剂L-NAME对细胞凋亡的影响.结果:iNOS蛋白表达与细胞凋亡的变化呈显著正相关;nNOS蛋白表达与细胞凋亡变化呈负相关;与对照组比较,小剂量L-NAME(2.0 mg/kg)可降低凋亡细胞发生率34.6%(P<0.01);大剂量L-NAME(20.0 mg/kg)明显增加凋亡细胞发生率25.8%(P<0.05).结论:正常生理状态下及应激初期,胃黏膜以nNOS表达为主.若应激源持续存在,nNOS表达受抑制,iNOS表达增强,诱导合成大量NO,有明显细胞毒作用,促进细胞凋亡发生.
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颈交感神经干离断对应激大鼠ET-1及胃黏膜血流量的影响
目的:研究颈交感神经干离断对浸水大鼠胃黏膜血流量的影响.方法:30只♂SD大鼠随机分为3组(n=10)Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为浸水对照组;Ⅲ组为颈交感神经干离断后浸水组.Ⅰ、Ⅱ组只将颈交感神经干暴露、分离,不离断;Ⅲ组离断颈交感神经干并将断端结扎.将Ⅱ、Ⅲ组大鼠垂直浸水(水温23±1℃)至剑突水平,6 h后取出,测定各组胃黏膜血流量(GMBF),评价黏膜损伤程度.放免法测定血浆及胃黏膜ET-1含量.结果:Ⅱ组胃黏膜见出血及糜烂.Ⅲ组黏膜损伤程度明显轻于Ⅱ组.Ⅲ组与Ⅱ组比较GMBF明显升高,二者分别为130.0±14.5;68.9±12.7(P<0.01).Ⅱ组和Ⅲ组的溃疡指数(UI)分别为50.1±12.3;26.6±9.4差异极显著(P<0.01),Ⅱ组和Ⅲ组的GMBF值与UI呈高度负相关,γ=-0.847,P<0.001.Ⅱ组大鼠的血浆及胃黏膜的ET-1值明显高于Ⅰ组,P<0.01;Ⅲ组的血浆ET-1值也明显高于Ⅰ组但与Ⅱ组比较明显减少,P<0.01.Ⅲ组大鼠的胃黏膜组织的ET-1值明显高于Ⅰ组,P<0.01,但与Ⅱ组比较无显著差异.结论:颈交感干离断可增加浸水应激大鼠胃黏膜血流量,对胃黏膜损伤有保护作用.血浆及胃黏膜ET-1参与了颈交感神经干离断对胃黏膜保护的作用.
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内皮素-1特异性抗体对应激性胃黏膜损伤的保护作用
目的:探讨内皮素-1抗体(ET-1Ab)对应激性胃黏膜损伤(SU)的保护作用.方法:建立SD大鼠冷束缚应激性(CRS)胃溃疡模型,观察静脉应用ET-1 Ab对冷束缚应激大鼠血浆、胃黏膜组织ET-1含量、胃黏膜血流量(GMBF)及胃黏膜损伤指数(UI)等变化的影响.结果:(1)与正常对照组相比,各应激组血浆胃黏膜ET-1水平和UI明显升高(116.2±4.7 mv and 125.1±4.2 mv vs49.1±9.7 mv,113.8±9.3 mv and 122.9±19.6 mv vs52.3±10.3 mv,28.6±1.85 mv and 51.2±5.93 mv vs0,P<0.01),GMBF明显下降(227.8±13.5 mv and150.8±11.5mv vs 405.8±23.3mv,P<0.01);ET-1水平与UI呈显著正相关(r=0.96,P<0.01),与GMBF呈显著负相关(r=-0.91,P<0.01).(2)与单纯应激组相比,ET-1Ab应激组ET-1水平和UI明显下降(69.2±7.3mv vs 116.2±24.7mv,80.6±12.3 mv vs 125.1±24.2 mv,58.5±6.3 mv vs113.8±29.3mv,68.9±9.6mvvs122.9±19.6mv,13.2±2.05 mv vs 28.6±1.85 mv,25.8±3.62 mv vs 51.2±5.93 mv,P<0.01),GMBF明显回升(329.8±16.3 mv vs227.8±13.5 mv,251.9±11.3 mv vs 150.8±1.5 mv,P<0.01),且ET-1Ab可呈剂量依赖性地显著降低ET-1水平、增加GMBF和降低UI.结论:在冷束缚应激诱发大鼠SU的过程中,血浆胃黏膜组织ET-1水平显著升高,并可能通过其缩血管效应,引起GMBF显著下降,从而导致急性胃黏膜损伤.ET-1Ab可呈剂量依赖性地显著减轻应激性胃黏膜损伤程度,对SU具有一定的防治作用.
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外源性NO预防大鼠应激性胃黏膜损伤中胃运动的作用
目的:研究胃运动在一氧化氮(NO)供体硝普钠预防大鼠胃黏膜损伤中的作用.方法:采用浸水束缚应激法建立大鼠应激性胃溃疡模型.气囊法记录胃运动,比色法测定血清和胃黏膜组织中NO含量,并观察胃黏膜组织病理学变化.结果:硝普钠可以明显减轻浸水应激引起的胃黏膜损伤;抑制胃运动亢进,尤其是降低胃运动指数、收缩时间百分比和高强度收缩次数;同时增加血清和胃黏膜中NO含量;胃黏膜病理损害程度显著减轻.结论:外源性NO对浸水应激性胃黏膜损伤的保护作用可能是通过抑制胃运动亢进和增加胃黏膜NO含量来共同实现的.
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鼠肝移植对胃黏膜损伤的实验研究
目的:观察肝移植术后胃黏膜的病理变化.方法:采用二袖套法+肝动脉重建吻合法行鼠肝移植,经组织病理和电镜切片观察肝移植后胃黏膜的组织结构和细胞结构的变化.结果:肝移植后胃黏膜组织结构表现为充血、水肿、溃疡、糜烂形成.结论:肝移植伴随胃黏膜的损伤,需要预防治疗.
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幽门螺杆菌相关性胃炎中核因子-κB与IL-8,COX-2表达的意义
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染时胃黏膜组织中核因子-κB(NF-kB)p65蛋白、IL-8及环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白的表达间的关系.方法:采集Hpylori阴性慢性胃炎18例和Hpylori阳性慢性胃炎38例患者的胃黏膜活检标本,采用免疫组化法和原位杂交法检测胃黏膜中NF-kB p65蛋白、IL-8及COX-2mRNA和蛋白的表达情况.结果:NF-kBp65,IL-8和COX-2主要表达于胃黏膜上皮细胞,固有层炎性细胞也有不同程度的表达.Hpylori阳性胃黏膜中p65蛋白,IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达较Hpylori阴性组显著增强(5.6±3.3vs 3.0±2.5,3.7±2.6vs1.1±1.3,3.9±2.9 vs 1.9±1.6,3.0±2.4vs 1.5±1.1,2.8±2.3vs 1.0±0.7,P<0.01),三者的表达均与胃黏膜炎症程度之间具有显著相关性(P<0.01);胃黏膜NF-kB p65蛋白表达与IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达均呈正相关关系(rs分别为0.690,0.709,0.448,0.480,P<0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜NF-kB p65,IL-8及COX-2表达增加,NF-kB可能通过调控IL-8和COX-2的表达,参与了Hpylori相关性胃炎的病理生理过程.
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表皮生长因子及其受体mRNA在胃溃疡发生与愈合过程中的表达
目的:探讨人胃溃疡愈合过程中表皮生长因子(EGF)含量及表皮生长因子受体(EGFR)表达的变化及其作用.方法:采用放免及免疫组化方法,对正常胃黏膜(10例)、胃溃疡活动期(GA组,20例)、愈合期(GH组,20例)、瘢痕期(GS组,20例)胃液EGF含量及胃黏膜组织EGFR的表达进行测定及定位观察和图像分析.结果:正常胃黏膜和GA组的胃液EGF的含量分别为502.6±51.3、156.2±46.7 ng/L,经统计学处理差异有显著性意义(P<0.05);GH和GS组胃液的EGF含量分别为386.1±76.8、466.3±95.4ng/L,与GA组比较,差异有显著性意义(P<0.05).GA组胃黏膜EGFR的表达均较正常时增加,GH及GS组更加明显;GA组EGFRmRNA表达阳性密度(18.27±3.95)较正常组(8.52±1.18)增高(P<0.01),而GH组(24.61±4.98)和GS组(27.92±5.44)又较GA组明显增高(p<0.05).结论:人胃溃疡愈合过程中,胃液EGF与溃疡的发生和愈合有关,胃黏膜EGFR的表达由弱到强.
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热盐水致胃黏膜细胞凋亡及对热休克蛋白表达影响
目的:研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织中的凋亡细胞、增生细胞和Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α及P53表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法:采用脱氧核糖核酸转移酶介导等缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术.细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术.结果:TUNEL检测细胞凋亡显示:在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎中凋亡细胞数明显增多,在黏膜全层均可见到,呈弥漫性分布.萎缩性胃炎中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃黏膜(P<0.05);免疫组化法检测凋亡相关基因和PCNA,显示:Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α、P53及PCNA在热盐水灌胃所致的萎缩性胃炎中的表达率显著高于正常胃黏膜(P<0.05);流式细胞检测显示:在萎缩性胃炎时,在G0/G1峰前可见一个亚G0/G1峰,也即凋亡细胞峰出现,而在正常胃黏膜时未显示亚G0/G1峰.结论:热盐水灌胃可导致大鼠胃黏膜组织细胞增生和细胞凋亡异常,其调控基因(Bcl-2、Fas)及HSP60、HSP70、HSP90α、P53在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎发生中起重要作用.
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细胞周期蛋白D1 RT-PCR ELISA的建立及其初步应用
目的:建立一种灵敏、特异和简便实用的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平的检测手段.方法:生物素标记Cyclin D1 5'端引物,PCR DIG Labeling Mix取代dNTP,RT-PCR终产物置于链霉亲和素包被的ELISA板中孵育,洗涤、显色后,自动酶联检测仪测A45onm值.常规RT-PCR方法作对照.检测对象包括Cyclin D1表达细胞系SGC7901,转染反义Cyclin D1基因的SGC7901D1AS细胞及转染空载体的SGC7901neo细胞,原发性胃癌组织30例、胃癌旁和正常胃黏膜组织20例,胃良性病变组织22例.结果:RT-PCR ELISA与RT-PCR琼脂糖电泳检测结果吻合,所测得的A450nm值与Cyclin D1特异性基因片段的丰度和检测细胞数量有一很好的对应关系.SGC7901胃癌细胞转染Cyclin D1反义基因后,Cyclin D1mRNA表达显著降低(P<0.05).Cyclin D1 mRNA在胃良性疾病起即开始明显升高(P<0.05).在胃癌各组中,进展期胃癌伴转移组的Cyclin D1 mRNA表达水平显著高于其他两组(P<0.05).结论:本文建立的Cyclin D1 RT-PCR ELISA可作为一种侯选的、较为简便和半定量的cyclin D1 mRNA检测方法.致谢:第三军医大学数学教研室罗明奎主任在本课题结果统计分析的工作中给予了无私的指导和帮助.
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转化生长因子βⅡ型受体在胃癌中表达的研究
目的:观察转化生长因子(TGFB)Ⅱ型受体基因Poly(A)10片段在胃癌组织中的突变情况.方法:利用PCR/SSCP方法,对10例正常胃组织,21例肠化生组织,10例不典型增生,及62例胃癌组织中TGFβⅡ型受体基因Poly(A)10片段的突变情况进行了研究.结果:在62例胃癌组织中,有4例TGFβⅡ型受体基因Poly(A)10片段发生了突变,在正常胃黏膜组织、肠化生组织及不典型增生组织中,未见该片段异常.结论:胃癌组织中TGFβⅡ型受体基因的突变对胃癌发生发展起了重要作用.