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锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究
目的观察不同锌摄入水平对应激大鼠海马脑区不同金属硫蛋白亚型表达的影响.方法将Wistar雄性大鼠随机分为8组:正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组,分别给予正常饲料、缺锌饲料和补锌饲料,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量.动物喂饲1周后开始束缚应激,持续4周.以血红蛋白镉饱和法测定脑组织金属硫蛋白含量,分离海马提取总RNA,以RT-PCR检测金属硫蛋白亚型MT-1 mRNA和MT-3 mRNA.结果缺锌动物出现血锌含量明显降低,脑组织金属硫蛋白含量和海马金属硫蛋白mRNA的表达均出现降低,但其表达在缺锌应激组动物仍有明显升高;而补锌动物金属硫蛋白的表达有所增加,补锌应激组动物的表达增加更加明显.缺锌和缺锌应激组动物的血浆皮质醇、IL-1、IL-6和NO水平也较其它组显著升高.结论缺锌可降低动物脑和海马组织中金属硫蛋白的表达,但缺锌动物在接受应激刺激后,金属硫蛋白的表达仍可明显增加;而补锌可增加金属硫蛋白的表达,补锌应激使脑组织中金属硫蛋白的表达升高更为显著;应激对动物的损伤作用与其锌营养状况有关,缺锌可降低机体对应激的抵抗能力.
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逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区GAP-43和Nogo-AmRNA基因表达的调节作用
目的 观察海马及杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散对其表达变化的作用.方法 使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA表达的情况.结果 在慢性束缚应激中,GAP-43 mRNA在海马各区的21天模型中都下调(P<0.01和P<0.05),在CA3和DG区的影响较大(7天和21天模型都下调),而在杏仁核中上调显著(P<0.01和P<0.05).Nogo-AmRNA在海马各区的21天模型中都上调(P<0.01和P<0.05),以CA3的影响明显,而在杏仁核中下调显著(P<0.01).束缚时间越长,对它们的影响愈大.在CA1区,7天模型组中,GAP-43mRNA没有变化(P>0.05),在CA3和BLA区7天模型组中,No go-AmRNA都没有变化(P>0.05).慢性束缚应激明显地影响了大鼠海马和杏仁核中GAP-43和Nogo-AmRNA基因的转录情况,引起突触结构的改变可能影响了突触可塑性.逍遥散对慢性束缚应激引起的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录可能有明显的调节作用,但有选择性,总的来说CA3和D G区的作用明显,而在CA1的7天模型组中没有作用.结论 逍遥散可双向的调节CA3和D G区的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录水平,可能影响突触可塑性.
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奔豚汤对慢性束缚应激小鼠焦虑的影响
目的:实验观察奔豚汤对慢性束缚应激诱导小鼠焦虑模型的影响,从中枢神经递质角度阐述奔豚汤抗焦虑的可能机制.方法:72只小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,奔豚汤低、中、高剂量组(3.51,10.53,31.59 g·kg-1)和阳性药地西泮组(4 mg·kg-1),各组均采用灌胃给药30 d.通过慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型;自主活动检测、旷场实验、明暗箱实验和高架十字迷宫实验从行为学分析奔豚汤对焦虑小鼠行为学的保护作用;高效液相结合荧光检测器检测海马谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马内γ-氨基丁酸受体(GABAa-Rα5),GABA转运体-1(GAT-1)和GAT-3蛋白表达.结果:与模型组比较,奔豚汤高剂量可以明显提高旷场中央区域的时间(P＜0.05),增加在高架十字迷宫开臂停留时间和进入次数(P＜0.05),提高海马内GABA水平(P＜0.05),降低Glu水平(P＜0.05),且能够明显降低GAT-1和GAT-3蛋白表达(P＜0.05).结论:奔豚汤能够改善慢性束缚应激诱导小鼠焦虑行为,可能是通过下调海马区GAT-1和GAT-3蛋白表达,进而调节中枢神经系统氨基酸类神经递质的含量.
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束缚应激与中医肝的关系
1936年Selye将"应激"这一名词从物理领域引入到生物领域,实验中发现强烈刺激引起一系列相同的非特异性变化.在当时提出的应激原仅是生理效应和生物性刺激,忽视了重要的社会因素.Wolf正式提出了应激的概念并补充了应激学说,从而为生物-心理-医学模式在生物和医学领域里广泛应用做出了重要的贡献[1].20世纪70年代,Mason提出心理应激学说,对应激的非特异性提出挑战,即对应激的研究除了研究外界环境变化之外,还应注意人或动物的感知以及由此引起的情绪变化和行为变化.
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辐照结合束缚应激致血虚肝郁大鼠证候模型的建立
目的:建立辐照结合束缚应激致血虚肝郁证大鼠模型.方法:SD雄性大鼠随机分为空白组、辐照组、束缚组、模型组,模型组采用大鼠单笼饲养、辐照结合束缚21d造模,检测各组大鼠体质量、外周血象并进行糖水实验、敞箱实验和跳台实验,测定血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT),下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和大脑海马单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)等含量.结果:模型组大鼠生长缓慢,外周白细胞,红细胞、血红蛋白下降明显(P＜0.05),血浆中ACTH明显升高(P＜0.05),CORT和下丘脑CRH含量有升高趋势,脑内单胺类神经递质5-HT和DA含量明显降低(P＜0.05).结论:从血象、行为学、下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴和脑内单胺类神经递质等方面验证了辐照结合束缚应激造成的大鼠模型可作为中医血虚肝郁证的动物模型.
关键词： 辐照 束缚应激 血虚肝郁 下丘脑-垂体-肾上腺轴 单胺递质 -
肝郁脾虚因素刺激对大鼠实验性肝癌发生和鸟氨酸脱羧酶表达的影响
目的观察肝郁脾虚因素刺激对二乙基亚硝胺诱发大鼠实验性肝癌发生和鸟氨酸脱羧酶表达的影响,以及疏肝健脾方药的调控作用.方法大鼠造模后选取第9、14、19周3个时间点分批处死大鼠,取肝组织,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达,以及肝组织病理切片观察.结果用肝郁脾虚因素刺激二乙基亚硝胺诱发的肝癌大鼠,在第9周后大鼠肝组织表达ODC比单纯用二乙基亚硝胺诱发的肝癌大鼠显著增强,并随着肝癌的发生发展在第14周和第19周时逐渐增强.结论肝郁脾虚因素刺激对化学诱发的大鼠实验性肝癌具有显著的促进作用.疏肝健脾中药可以降低肝癌组织细胞中ODC的表达,在一定程度上可控制肝癌细胞的增殖.
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中药九节茶提取物对应激负荷小鼠免疫功能的改善作用
目的:研究中药九节茶对束缚应激小鼠免疫功能的改善作用.方法:实验将雄性C_(57)BL/6小鼠分为正常对照组,应激对照组,125,500 mg·kg~(-1)九节茶提取物给药组,制备脾脏淋巴细胞悬液,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群、NK细胞和NKT细胞比例及数目.结果:与应激对照组相比,中药九节茶可以提高束缚应激小鼠脾脏淋巴细胞总数,改善T淋巴细胞亚群比例,同时增加脾脏NK细胞和NKT细胞比例及数目.结论:中药九节茶可以改善应激负荷小鼠淋巴细胞数目及淋巴细胞亚群比例.
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束缚应激大鼠中枢AMPA受体和相关蛋白mRNA表达的变化及逍遥散对其调节作用
目的 观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体各亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散的作用.方法 使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核AMPA受体亚基GluR1-4、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)mRNA表达的情况.结果 7天束缚应激状态下,GluR1 mRNA在海马CA1区表达显著下降(P＜0.05),在CA3区和杏仁核表达显著上升(均P＜0.05),GluR2、GluR3 mRNA在杏仁核(均P＜0.05),GluR4 mRNA在CA1区(P＜0.01)表达显著增高,NSF、PICK1 mRNA表达在杏仁核有明显增高趋势;逍遥散对CA1区GluR4及杏仁核GluR1、GluR2、GluR3 mRNA表达变化有显著调节作用(P＜0.05,P＜0.01).21天束缚应激状态下,CA1区GluR4、DG的GluR2 mRNA表达显著下降(均P＜0.05),杏仁核GluR1 mRNA表达显著增强(P＜0.01);逍遥散对CA1区GluR1、GluR4 mRNA表达变化有显著调节作用(均P＜0.05).结论 短期重复应激对于AMPA受体各亚基mRNA表达的影响较强,逍遥散对AMPA受体各亚基mRNA表达的调节在海马CA1区和杏仁核较明显.
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褪黑素对抗小鼠束缚应激血清免疫抑制活性
为了阐明褪黑素对免疫功能的调节作用,本文利用束缚应激模型,观察褪黑素在整体和离体水平是否能够对抗应激血清抑制正常淋巴细胞转化的活性.结果表明,腹腔注射褪黑素12.5～50.0 mg/kg,能够剂量依赖性地对抗应激血清对正常淋巴细胞转化的活性;在体外培养中,10-14～10-5mol/L褪黑素对正常淋巴细胞转化无任何作用,生理浓度的褪黑素也不能对抗应激血清对正常淋巴细胞转化的抑制作用.上述结果初步提示:褪黑素对应激血清免疫抑制活性的抑制作用可能不是发生在靶(淋巴)细胞水平,而是通过药理学机制在束缚应激的早期发挥作用.
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束缚性应激对大鼠血小板NO合成通路的影响
目的 观察急性应激对大鼠血小板一氧化氮(NO)释放的影响及其机制.方法 大鼠浸水-束缚应激(WRS)2、4和8 h,以胃溃疡指数(UI)作为应激损伤的标识,采用Greiss法测定血小板孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量;同位素法测其一氧化氮合酶(NOS)活性和L精氨酸(L-Arg)转运量.结果 WRS 2 h血小板L-Arg转运量、NOS活性和孵育液NO2-含量较对照组显著增加,但随应激时间延长,其呈下降趋势,应激8 h时均显著低于对照组,胃溃疡逐渐加重.结论 WRS应激早期阶段可上调血小板L-Arg/NO通路,促进血小板NO生成;长时间应激下调L-Arg/NO通路,减少NO释放.
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腹腔注射6-羟多巴胺对抗小鼠应激免疫抑制蛋白的产生
采用腹腔注射交感神经化学切断剂6-羟多巴胺(6-OHDA)的方法,在小鼠束缚应激模型上观察外周交感神经在应激免疫抑制蛋白产生中的作用.结果表明,腹腔注射6-OHDA后,血清中应激免疫抑制蛋白的产生明显减少,第五天降至低点,以后逐渐恢复,第14天恢复正常.脾脏和淋巴结中去甲肾上腺素(NE)的含量,在注射6-OHDA后第一天明显降低,而且至少在14天内维持在很低水平.说明6-OHDA已损坏了交感神经纤维.注射6-OHDA前30min注射去郁敏(DMI),阻断交感神经的重吸收作用,可明显对抗6-OHDA抑制应激免疫抑制蛋白产生作用.以上结果表明,外周交感神经具有促进应激免疫抑制蛋白生成的作用.
关键词： 束缚应激 淋巴细胞转化 应激免疫抑制蛋白 6-羟多巴胺 高效液相-电化学检测 -
大鼠束缚后脑内Fos蛋白的表达
目的探讨大鼠束缚后对大鼠脑内Fos蛋白表达的影响. 方法将大鼠束缚于小的塑料桶内l、3或6 h,于解束后30 min处死,脑组织进行Fos蛋白免疫组织化学染色.结果Fos阳性神经元表达于1.前脑:扣带回、新皮质(尤其是第3和5层)、外侧隔核、杏仁中央核;2.间脑:下丘脑视前区、下丘脑外侧区、视上核、室旁核、第三脑室室周区、弓状核、丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体;3.脑干:中脑的上丘视性层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部;脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、A5区;延髓的耳蜗核、延髓内脏带(MVZ)等处.Fos表达的时间规律是束缚1 h高,3 h次之,6 h少.结论大鼠被束缚后全脑多处核团的神经元发生不同程度的Fos反应,随着束缚时间的延长,动物产生适应性,Fos表达减少.
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束缚应激对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响
目的:观察束缚应激对S180荷瘤小鼠T、B淋巴细胞增殖能力和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.方法:取腹腔传代第7天的S180肿瘤细胞,接种于昆明小鼠右腋皮下.接种后束缚限制活动,8小时/天.并设单纯束缚组、单纯肿瘤和正常对照组.10天后处死小鼠,取脾脏检测T、B淋巴细胞增殖能力,抽取腹腔巨噬细胞测定吞噬功能,并剥取肿瘤称瘤重.结果:束缚应激可明显降低S180荷瘤小鼠和正常小鼠脾T、B淋巴细胞增殖率(P分别<0.01和<0.05)和腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.01),并可明显增加肿瘤重量(P<0.01).结论:束缚应激可抑制荷瘤小鼠和正常小鼠免疫功能,并可通过抑制荷瘤小鼠的免疫功能促进肿瘤生长.
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束缚应激对大鼠S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸代谢的影响
目的：探讨束缚应激对肝脏S-腺苷甲硫氨酸（SAM）和S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）代谢的影响。方法Wistar大鼠16只随机均分为对照组和束缚应激组，束缚组每天束缚6 h，束缚6周。然后处死大鼠，用高效液相色谱法测定肝组织中SAM、SAH和S-腺苷同型半胱氨酸水解酶（SAHH）的活性。以SAH单位时间生成量和减少量来计算该酶的合成活性和水解活性。结果束缚组大鼠肝脏SAM含量显著低于对照组（P＜0.05），而SAH含量却显著高于对照组（P＜0.05），束缚组SAM/SAH显著低于对照组（P＜0.05），两组SAHH合成活性间差异无统计学意义（P＞0.05），但束缚组SAHH水解活性显著低于对照组（P＜0.05）。结论慢性束缚应激可能抑制机体转甲基作用。
关键词： 束缚应激 S-腺苷甲硫氨酸 S-腺苷同型半胱氨酸 -
复合束缚挤压伤对大鼠心电图及生存率的影响
目的：观察束缚挤压造成复合挤压伤大鼠受压过程中的心电图改变及生存率变化规律。方法雄性健康SD大鼠80只，随机分为束缚挤压模型组（40只）和单纯饥饿对照组（40只）。模型组大鼠四肢束缚固定同时给予双下肢3.5 kg重物挤压72 h造模，在整个挤压过程中及解压后24 h持续监测心电图，分析不同时间点心率、ST段偏移量、T波高度及心电图动态变化规律；同时在解压后继续观察7 d，对生存率进行统计。对照组给予禁食水72 h处理，同样进行心电图监测及生存率统计。结果束缚挤压模型大鼠出现不同程度的心率减慢、ST段升高及T波高尖改变。随挤压时间延长，心率呈持续减低趋势，挤压24 h后变化明显；挤压早期即可出现ST段抬高，24~48 h进入平台期，48~72 h升高明显；T波在挤压48 h后T波高尖明显；复合束缚挤压伤大鼠死亡率高，挤压72 h生存率仅为55%，解压后7 d降至25%，其中挤压48~72 h之间及解压后24 h为死亡高发期。单纯饥饿对照组大鼠心电图改变不明显，生存率为100%。结论复合束缚挤压伤心电图变化呈现多样性，大体可分为3种类型，其早期异常改变与不良预后相关。
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束缚应激对大鼠血清氨基酸含量的影响
目的：探讨慢性束缚应激状态下对大鼠血清氨基酸代谢的影响。方法Wistar大鼠16只随机分为两组，即对照组和束缚应激组，根据束缚组大鼠摄食量进行对喂。束缚组每天束缚6h，束缚6周。高压液相色谱法测定血清中半胱氨酸和还原形谷胱甘肽含量。全自动氨基酸分析仪测定血清中其它氨基酸含量。结果束缚组大鼠血清色氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、精氨酸和谷胱甘肽含量显著降低，P<0.05，而束缚应激后蛋氨酸和牛黄酸含量则显著升高，P<0.05。结论慢性束缚应激导致机体氨基酸代谢增强。
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大鼠应激性溃疡胃黏膜nNOS/iNOS表达对细胞凋亡的影响
目的:探讨细胞间信息传递因子NO在胃黏膜遭受应激损伤时的变化及与细胞凋亡发生的关系.方法:原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠水浸-束缚应激(WRS)结束前后不同时间点细胞凋亡的发生;免疫组化的方法检测胃黏膜组织nNOS/iNOS蛋白表达的变化;检测不同剂量的NO合成抑制剂L-NAME对细胞凋亡的影响.结果:iNOS蛋白表达与细胞凋亡的变化呈显著正相关;nNOS蛋白表达与细胞凋亡变化呈负相关;与对照组比较,小剂量L-NAME(2.0 mg/kg)可降低凋亡细胞发生率34.6%(P＜0.01);大剂量L-NAME(20.0 mg/kg)明显增加凋亡细胞发生率25.8%(P＜0.05).结论:正常生理状态下及应激初期,胃黏膜以nNOS表达为主.若应激源持续存在,nNOS表达受抑制,iNOS表达增强,诱导合成大量NO,有明显细胞毒作用,促进细胞凋亡发生.
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半夏泻心汤及其拆方对应激性胃溃疡大鼠胃泌素的影响
目的:研究半夏泻心汤对应激性胃溃疡的作用机理及其配伍规律.方法:采用水浸-束缚应激造成大鼠急性胃溃疡模型,运用免疫组织化学方法观察半夏泻心汤全方及其各拆方组对其治疗作用及对各组大鼠脑组织和胃黏膜胃泌素表达的影响,探讨半夏泻心汤的配伍规律及作用机理.结果:正常组胃泌素表达的面密度(脑组织0.0429±0.0052,胃黏膜0.0220±0.0061),模型组大鼠胃泌素的表达显著升高(胃黏膜0.0324±0.0047,脑组织0.0602±0.0116 vs正常组,P＜0.01).与模型组相比,全方组(胃黏膜0.0416±0.0150,P＜0.01)、苦降组(脑组织0.0234±0.0109,P＜0.05,胃黏膜0.0392±0.0077,P＜0.01)、甘补组(脑组织0.0230±0.0082,P＜0.05,胃黏膜0.0410±0.0099,P＜0.01)大鼠胃泌素的表达下降.结论:应激性胃溃疡大鼠脑组织和胃黏膜胃泌素表达增强,半夏泻心汤及其拆方各组通过抑制胃泌素表达发挥治疗作用,拆方研究显示甘补组、苦降组药物在本方中起主要作用.
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CGRP介导束缚应激大鼠骨代谢的实验研究
目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)在慢性束缚应激大鼠骨退化中的作用.方法 建立束缚应激大鼠模型,随机分为正常组(CON);束缚7d组(A组);束缚14 d组(B组);束缚21 d组(C组),每组10只.观察股骨软骨下骨组织结构、细胞形态变化;用特异性放射免疫分析方法测定各组大鼠外周血、观察各组降钙素基因相关肽(CGRP)的改变.免疫组化染色检测各组软骨下骨组织CGRP的阳性表达.结果 应激后C组大鼠细胞存活率下降(P＜0.01).C组外周血及软骨下骨CGRP的阳性细胞表达数均低于正常对照组,含量明显降低(P＜0.01).结论 在长期慢性束缚应激过程中低表达的神经肽导致骨代谢失衡,并显示退化状态.
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束缚应激上调小鼠脾脏淋巴细胞钾离子通道(Kv1.3)的表达
目的观察束缚应激条件下小鼠脾脏细胞Kv1.3表达的变化.方法采用RT-PCR、Western blot等分子生物学及免疫组化实验方法,分别从基因和蛋白质水平揭示束缚应激对小鼠脾脏细胞Kv1.3表达的调节.结果束缚应激16 h后小鼠脾脏细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平明显上调(P<0.05).但是,相同束缚应激条件下小鼠脑组织Kv1.3表达无明显变化(P>0.05).结论束缚应激状态下小鼠脾脏细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平呈明显组织特异性上调,提示束缚应激条件下免疫功能的调节可能与钾通道有关.这为进一步研究神经内分泌系统调节淋巴细胞功能的机制提供了新的思路.
