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反式白藜芦醇（TR）对痴呆大鼠海马旁回iNOS、caspase3表达的影响及机制
目的：观察反式白藜芦醇（TR）对痴呆大鼠海马旁回的作用。方法：大鼠随机分为给药组和对照组。在大鼠海马内注射Aβ25-35后5天，采用TUNEL法检测5组大鼠海马细胞及周围皮质凋亡情况，采用real time RT-PCR法检测两组大鼠海马及皮质iNOS、caspase-3表达。结果：对大鼠海马以及周边区域的iNOS、caspase-3的表达进行分析结果，给药组的iNOS、caspase-3表达水平下调2.59%，明显低于对照组的9.33%，差异有统计学意义。结论：TR对损伤的大鼠海马周围皮层神经元有保护作用，其机制可能部分与下调iNOS、caspase-3表达有关。
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莱菔硫烷对脂多糖诱导血管内皮细胞中COX-2和iNOS mRNA表达的影响及转录机制研究
目的 研究莱菔硫烷(SFN)对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞ECV304中COX-2和iNOS mRNA表达的影响及转录机制.方法 以体外培养的血管内皮细胞ECV304为研究模型;采用实时定量PCR(real-time PCR)测定COX-2mRNA的表达;采用RT-PCR测定细胞中iNOS mRNA的表达;采用Western blotting测定细胞浆中IκB-α蛋白表达;采用免疫荧光杂交法测定NF-κB核内转位情况.结果 Real-time PCR结果表明,5～20 μmol/L SFN能明显降低脂多糖诱导的COX-2 mRNA的表达,抑制率分别为24%、16%和30%;RT-PCR结果显示,SFN对LPS诱导的iNOS mRNA表达也有显著的抑制作用;SFN抑制LPS诱导的IκB-α蛋白降解及NF-κB核内转位.结论 SFN能抑制LPS诱导的血管内皮细胞炎症反应,提示SFN对心血管疾病具有预防作用.
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脂多糖通过调节iNOS表达影响人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的研究
目的 观察脂多糖诱导的SKOV3/DDP细胞内分泌型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞株顺铂耐药性的影响,并初步探讨机制.方法 体外培养SKOV3/DDP细胞,分为对照组、顺铂组、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)组和联合用药组共4组,对照组给予常规不加血清培养基,顺铂组给予10 μg/ml顺铂,LPS组给予浓度为1 μg/ml的LPS,联合用药组给予10 μg/ml顺铂和1μg/ml LPS,均作用24 h.MTT法检测各组细胞活力;蛋白免疫印迹法观察各组iNOS表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;间接免疫荧光法观察各组细胞激活型Caspase-3表达.结果 联合用药组细胞活力明显低于顺铂组(P＜0.05);顺铂组与对照组iNOS表达差异无统计学意义(P＞0.05),LPS组和联合用药组iNOS表达水平明显高于对照组(P＜0.05),且联合用药组高于LPS组(P＜0.05);流式细胞术结果显示联合用药组细胞凋亡率明显高于顺铂组(P＜0.05),且通过间接免疫荧光法显示联合用药组细胞激活型Caspase-3表达高于顺铂组(P＜0.05).结论 LPS能够降低人卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性,这可能与其提高SKOV3/DDP细胞内iNOS表达水平有关.
关键词： 脂多糖 顺铂耐药性 iNOS SKOV3/DDP细胞 -
关木通对肾上腺毒性及其机制
目的探讨关木通(AMK)对大鼠肾上腺的毒性作用和相关机制.方法测定自制关木通水煎剂中马兜铃酸(aristolochic acid,AA)含量.
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祛瘀生新方对急性脑梗死血清HIF-1α、VEGF、iNOS、BDNF的影响
目的 观察祛瘀生新方对急性脑梗死患者血清低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平及HIF-1α、BDNF基因表达的影响.方法 80例急性脑梗死患者在常规神经内科处理的基础上,观察组予祛瘀生新方,对照组予常规中药汤剂治疗,均每日1剂,10天为一个疗程,共治疗3个疗程.用ELISA检测血清中HIF-1α、VEGF、iNOS、BDNF的含量,用qPCR检测HIF-1α、BDNF的基因表达.结果 与对照组相比,观察组血清HIF-1α、VEGF、BDNF均升高,iNOS降低,BDNF基因表达升高.结论 祛瘀生新方对急性脑梗死患者血管再生及神经修复有一定作用.
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葛根素对心肌梗死大鼠心肌iNOS,eNOS蛋白表达及AKT磷酸化水平的影响
目的:探讨葛根素诱导血管生成的分子机制.方法:通过大鼠心肌梗死动物模型,运用Western-blot的方法检测心肌iNOS、eNOS,AKT,p-AKT的蛋白表达.结果:葛根素120mg/kg腹腔注射四周能不同程度增加心肌梗死大鼠缺血区域和非缺血区域心肌eNOS蛋白表达以及AKT磷酸化水平,而对iNOS蛋白表达没有明显的影响.结论:葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其促进AKT磷酸化水平,从而激活eNOS,使NO生成增加有关.
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温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及VEGF和iNOS表达的影响
目的 观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠的认知功能的改变及其对脑内相关血氧动力改变诱导的血管内皮生长因子(VEGF)以及一氧化氮合酶(iNOS)基因表达,以评价温肺降浊方的脑保护作用.方法 实验大鼠随机分为:空白对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、温肺降浊方组,采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD动物模型,以Morris水迷宫试验和穿梭箱实验检测来评价大鼠的认知功能,采用免疫组化法测定大鼠VEGF和iNOS的表达.结果 模型组的潜伏期短,错误次数多(P<0.01).温肺降浊方组的潜伏期大于尼莫地平组(P<0.01).温肺降浊方组及尼莫地平组潜伏期大于模型组(P<0.01).同时,假手术组与空白对照组大鼠跨越平台次数、目标象限次数无差异(P>0.01);模型组跨越平台次数、目标象限次数均低于假手术组(P<0.01);温肺降浊方组及尼莫地平组越平台次数、目标象限次数高于模型组(P<0.01);温肺降浊方组与尼莫地平组指标比较,差异有统计学意义(P<0.05).温肺降浊组、尼莫地平组VEGF阳性细胞多于模型组(P<0.01),温肺降浊方组阳性细胞数多于尼莫地平组(P<0.05).各组大鼠海马区iNOS阳性细胞数分布状况:假手术组及空白对照组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组和尼莫地平组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组iNOS阳性细胞数与尼莫地平组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 温肺降浊方能抑制血管性痴呆大鼠iNOS表达,上调VEGF的表达,改善认知功能.
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辛开苦降法对反流性食管炎模型大鼠食道下段组织 iNOS 蛋白表达的影响
目的：探讨辛开苦降法对反流性食管炎（RE）模型大鼠食道下段组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达的影响。方法将98只成年雄性 wistar 大鼠随机分为正常组（10只）和造模组（88只）。用改良部分贲门肌切开术+外置幽门半结扎术进行造模，造模后去除死亡大鼠和虚弱大鼠，选取恢复较好的大鼠60只将其随机分为模型组，中药低、中、高剂量组，中西药混合组、西药组，每组各10只。正常组不予处理，各组分别给予相应的药物灌胃，模型组给予0.9%生理盐水，中药低、中、高剂量组分别给予不同浓度的以辛开苦降法为主的半夏泻心汤加减化裁，西药组予含多潘立酮、铝碳酸镁、雷贝拉唑钠的混合药液，中西药混合组予中药中剂量组及西药组的混合药液。依据治疗时间不同，每组又分为7 d、14 d 两个亚组，每个亚组5只大鼠。分别于治疗第7天和第14天取材，采用免疫组化和 western - blot 法，检测各组食管下段黏膜 iNOS 的表达水平。结果模型组与正常组对比，大鼠食道下端 iNOS 表达增加（P <0.05），治疗7天后，各组与模型组比较，iNOS 表达没有显著差异（P >0.05）；治疗14天后，中药高剂量组、中西药混合组、西药组与模型组比较，iNOS 表达均有不同程度减少，差异有统计学意义（P <0.05，P <0.01）。结论辛开苦降法治疗 RE 模型大鼠的作用机制可能与其下调 iNOS 的蛋白表达相关。
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蒲公英含药血清对巨噬细胞功能干预作用的初步研究
目的:观察蒲公英含药血清对巨噬细胞(macrophage,Mφ)功能的干预作用,探索该药抗炎免疫作用的部分机制.方法:采用蒲公英水煎剂灌胃干预清洁级SD大鼠常规制备含药血清,于96孔板中分5％、10％和20％3个浓度与小鼠腹腔Mφ共同培养,24h后以中性红法检测Mφ吞噬功能、Griess比色法检测培养上清液中NO含量、免疫组化法检测iNOS表达量、ELISA法检测培养上清中IL-6含量.结果:①与本组同浓度不加LPS的Mφ孔比较:在一定浓度的正常血清组中,经LPS活化的Mφ孔吞噬功能增强、NO和IL-6分泌增加、iNOS表达增强(P＜0.05,P＜0.01);一定浓度的蒲公英含药血清组中,经LPS活化的Mφ吞噬功能降低、NO和IL-6分泌量减少(P＜0.05,P＜0.01),但iNOS表达量在5％与20％浓度组减少(P＜0.05,P＜0.01)、在10％浓度组增强(P＜0.05);②与相同浓度的正常血清组比较:一定浓度的蒲公英含药血清组未经LPS活化的Mφ吞噬功能增强、NO和IL-6分泌增加、iNOS表达增强(P＜0.05,P＜0.01),经LPS活化的Mφ吞噬功能降低、NO和IL-6分泌量减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:蒲公英含药血清对LPS刺激前后的Mφ吞噬功能和炎症因子分泌功能具有不同的干预效应,这可能是其炎症免疫调节作用的重要机制之一.
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凌霄花总黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠NF-κB/iNOS-COX-2信号通路的影响
目的:研究凌霄花总黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NF-κB/iNOS-COX-2信号通路的影响,并探讨其可能机制.方法:60只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,阿司匹林片组(50mg/kg),凌霄花总黄酮高、低剂量组(200、100mg/kg).建立短暂性大脑中动脉阻塞大鼠模型(tMCAO),分光光度法检测脑匀浆中iNOS活力和NO水平;免疫组化染色法评价脑组织中NF-κB p65和COX-2阳性表达情况.结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆中iNOS活力和NO水平明显升高(P＜0.01);NF-κB p65、COX-2阳性表达细胞数明显增多,发生核移位的NF-κB p65阳性细胞数也明显增多(P＜0.01);与模型组比较,凌霄花总黄酮高、低剂量组和阿司匹林组均能明显降低脑匀浆中iNOS活力和NO水平(P＜0.01),明显减少NF-κB p65、COX-2阳性表达细胞数和发生核移位的NF-κB p65阳性细胞数(P＜0.01);与阿司匹林组比较,凌霄花总黄酮高剂量组能明显降低NF-κBp65、COX-2阳性表达细胞数目,并抑制NF-κB p65蛋白的核移位(P＜0.01,P＜0.05).结论:凌霄花总黄酮能抑制脑缺血再灌注损伤的炎性反应,可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路的激活有关.
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参白口服液对病毒性心肌炎心肌组织INOS表达的影响
目的:研究N0与病毒性心肌炎(WC)发生发展的关系及参白口服液的防治作用.方法:给BALB/C小鼠接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒(CVB3m)诱发VMC,在接种后3、7、14、20、30d动态对照观察VMC的检出(光、电镜)及小鼠心肌组织INOS表达(免疫组化)情况.结果:CVB3m可引起VMC,受检心肌中IN0S的阳性率表达为95.8%,中药组的表达量明显减少(P＜0.05).结论:N0的变化可能参与VMC的发生和发展,参白口服液有良好的防治作用.
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虎杖苷对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用及机制研究
观察虎杖苷(PD)对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用,并探讨其可能机制.利用小剂量STZ连续5d腹腔注射建立小鼠糖尿病模型,以心肌肥厚指数(LVHI,左心室/右心室+室间隔)、左心室/体重(LV/BW)、组织学检查和心房利钠因子(ANF) mRNA表达为心肌肥厚指标;监测空腹血糖值(FBG),并检测血清胰岛素含量、血浆糖化血红蛋白(HbA1c)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME.IR);分别用qRT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白表达.结果显示,模型组小鼠FBG持续超过11.1 mmol·L-,BW明显降低,胰岛素含量、HbA1c和HOME.IR明显升高,提示糖尿病模型建立且保持稳定;糖尿病小鼠LVHI,LV/BW及ANF mRNA均增加,细胞表面积增大,提示小鼠出现心肌肥厚.同时,模型组PPARβ mRNA和蛋白表达降低,NF-κB p65,COX-2及iNOS表达则明显增加.给予PD(50,100 mg·kg-1·d-1)治疗后,糖尿病小鼠BW增加,FBG,胰岛素及HbA1c含量降低,胰岛素抵抗改善,心肌肥厚指标亦明显好转,提示PD具有保护糖尿病心肌肥厚的作用.同时,PD使PPARβ的表达上调,并抑制NF-κB p65,COX-2及iNOS的表达,提示PD的保护作用可能与其激活PPARβ,抑制NF-κB及COX-2,iNOS信号通路有关.
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iNOS在血管再狭窄大鼠的表达及黄芪当归的作用
目的:观察iNOS在血管再狭窄大鼠的表达变化及黄芪、当归的作用.方法:建立内皮剥脱后血管再狭窄动物模型,随机分为对照组、模型组、黄芪治疗组、当归治疗组、黄芪当归联合治疗组；治疗组在造模后给药,连续给药21 d,应用组织形态学、免疫组化的方法分别检测观察术后3,7,14,21 d iNOS在增生内膜中表达变化,并观察中药黄芪、当归注射液单独及联合应用对iNOS表达的影响.结果:正常主动脉内膜和中膜均检测到极少量iNOS表达；术后3d大鼠主动脉壁内膜iNOS表达增强；7～21 d随着损伤时间延长及内膜的逐渐增厚,增生内膜iNOS阳性颗粒的数量增多,颜色变深,21 d达峰值；与模型组比较,黄芪、当归治疗21 d后,iNOS棕色颗粒明显减少,颜色变浅,以联合应用组作用更为明显.结论:iNOS表达参与内皮损伤后血管再狭窄过程,黄芪、当归可抑制血管内膜损伤后引起的血管内膜增生,其机制可能与抑制iNOS表达有关.
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胃复春对胃黏膜不典型增生中iNOS、COX-2表达的影响
胃黏膜不典型增生也称异型增生,是一种常见的消化系统疾病,属癌前病变.幽门螺杆菌(Hp)感染是胃黏膜不典型增生的重要发病因素[1].近年的研究表明,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的过度表达与许多肿瘤的发生、发展和转移有关[2],为了探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、COX-2与胃黏膜不典型增生的关系及胃复春的保护作用,我们采用免疫组化技术对用药前后的胃黏膜组织中iNOS、COX-2的表达进行了检测,现报告如下.
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自发1型糖尿病小鼠细胞因子变化及β细胞凋亡
研究自发的1型糖尿病雌鼠模型(NOD)在自然状态下发生糖尿病过程中β细胞凋亡及细胞因子TNF-α、IFN-γ,诱生型NO合酶(iNOS)和Fas、FasL在不同周龄的表达.HE法检测胰岛炎,免疫组化法检测各种抗体的表达,TUNEL法检测凋亡细胞,半定量法对胰岛炎评分并计数凋亡的β细胞和各种抗体阳性细胞率,分析其相关性.凋亡细胞两个峰值出现在3周和32周,与周龄无关,与胰岛炎及血糖均相关.Fas+细胞97.3%为胰岛细胞.FasL表达于胰岛细胞和浸润的单核细胞,在发病小鼠单核细胞上阳性率增高,FasL与血糖相关.IFN-γ、TNF-α的表达与周龄相关.IFN-γ在晚期而TNF-α持续起作用,但在幼鼠与成鼠不同.两种细胞因子相关.iNOS与周龄、胰岛炎及血糖均相关.β细胞主要以凋亡方式死亡,凋亡是多因素作用的结果.Fas-FasL、NO和IFN-γ、TNF-α可能独自起作用;后两者作用于不同阶段.
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羧胺三唑抑制大鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达和NF-κB活化
目的 探讨羧胺三唑(CAI)对多种炎性相关因子的体外调节作用及机制.方法 利用MTT法观察5～40 μmol/L的CAI对细胞活力的影响.将上述浓度的CAI加入巨噬细胞中共同培养18 h,同时加入脂多糖(LPS)诱导上述细胞活化.分别用硝酸还原法和TNF-α EMSA检测试剂盒测定培养基上清中NO的含量和TNF-α的水平,用Western blot法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB活化.结果 浓度在5～40 μmol/L范围内的CAI对正常大鼠腹腔巨噬细胞的细胞活力没有影响,但20和40 μmol/L的CAI能够剂量依赖性地降低LPS诱导的NO释放(P＜0.01和P＜0.001)以及TNF-α分泌(P＜0.05和P＜0.01),且明显抑制LPS引起的iNOS蛋白表达和NF-κBB活化.结论 CAI对与炎件反应相关的调控因子iNOS蛋白表达和NF-κB活化具有抑制作用,该机制与抑制IκBα磷酸化和降解相关.
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大鼠缺血心肌中NF-κB活性改变及其对iNOS表达的影响
观察心肌梗死大鼠不同时期缺血心肌中NF-κB的活性变化, 评价其是否参与调控缺血心肌中iNOS的表达.将雄性Wistar大鼠36只复制心肌梗死模型,检测心肌梗死后1、2、3及4W缺血心肌中NF-κB活性和iNOS的表达;另腹腔每日注射NF-κB抑制剂NAC(160mg/kg)及注射盐水作对照,2周后检测缺血心肌中iNOS的表达.共6组,每组6只,另取6只假手术对照.用EMSA检测NF-κB,RT-PCR及免疫组化测iNOS.结果显示:(1) 心肌梗死后,缺血心肌中NF-κB活性明显增高,1～2W活性强,3W后开始下降,4W接近正常水平.(2) 心肌梗死1W后缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质表达明显增加,其变化趋势同NF-κB.(3)加用NAC干预后的大鼠缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质的表达显著下降.实验说明缺血可刺激心肌中iNOS的表达增加及NF-κB的活化;NF-κB参与调控缺血心肌中iNOS的表达.
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丹参酮ⅡA通过iNOS缓解小鼠肺纤维化
目的 探讨丹参酮ⅡA对小鼠肺纤维化的影响及其机制.方法 将A549细胞和博来霉素诱导的肺纤维化小鼠分为对照组、模型组和丹参酮ⅡA干预组,RT-PCR及Western blot检测不同组间iNOS的表达水平,ELISA检测下游TNF-α、IL-1β及IL-6的表达.结果 丹参酮ⅡA干预组小鼠肺组织切片和模型组相比肺泡隔纤维增生灶减少,肺组织iNOS表达水平明显降低(P＜0.05),肺灌洗液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平明显降低(P ＜0.05);A549体外实验发现丹参酮ⅡA干预组较IFN-γ刺激组iNOS表达明显降低(P＜0.05),细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平明显降低(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA通过iNOS通路调控下游炎性因子的释放,从而缓解小鼠肺纤维化.
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紫外线减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠肺部iNOS的表达及其与免疫保护关系的研究
目的研究紫外线照射减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及其与保护性免疫的关系.方法用紫外线照射减活尾蚴疫苗免疫小鼠,30 d后用尾蚴攻击感染.于感染后第4 d、9 d取免疫小鼠和未免疫小鼠肺脏,用RT-PCR半定量的方法检测各组小鼠肺部iNOS的转录水平;用免疫组化方法确定iNOS在肺部的蛋白表达定位.结果正常小鼠肺部无iNOS转录和蛋白表达.免疫小鼠和未免疫小鼠感染血吸虫尾蚴后第4 d肺部iNOS有较高水平的转录表达.感染后第9 d,免疫组小鼠 iNOS 的表达较第4 d下降,而未免疫组小鼠肺部iNOS的表达消失.免疫组化结果表明,免疫组小鼠肺部炎症病灶细胞中存在iNOS的表达.结论移行到肺部的血吸虫童虫能诱导肺部表达iNOS,紫外线减活尾蚴疫苗能促使小鼠肺组织较长时间表达iNOS,iNOS在肺部的持续表达可能与该疫苗使宿主产生的免疫保护力有关.
关键词： 血吸虫 日本 紫外线照射减活尾蚴疫苗 小鼠 iNOS -
高糖预处理影响单核细胞对热灭活金黄色葡萄球菌刺激的反应
目的 观察高糖状态下热灭活金黄色葡萄球菌(HKSA)诱导的人单核细胞株THP-1凋亡特点,以及表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-1β蛋白分泌规律.方法 体外培养THP-1单核细胞,分别以5.5 mmol/L葡萄糖(LG)和25.0 mmol/L葡萄糖(HG)培养12h～8d.将HG和LG培养6d的单核细胞加入HKSA.分别于HKSA加入前和加入后2～48 h提取单核细胞,检测细胞凋亡、IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达.细胞凋亡采用Annexin V与PI双染法,流式细胞技术检测；IL-1β蛋白分泌采用ELISA法检测；提取细胞总RNA,反转录生成cDNA后采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)法,检测iNOS和IL-1β mRNA表达情况.结果 (1)高糖刺激THP-1单核细胞12 ～48 h后IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达较刺激前显著增加(P＜0.05),iNOS和IL-1β mRNA表达在24 h达高值,IL-1β蛋白分泌48 h达高峰.细胞凋亡在高糖刺激48 h～4 d较刺激前显著增加(P＜0.05).(2)两组细胞加入HKSA后6～48 h表达iNOS和L-1β显著高于刺激前(P＜0.01),24h达高峰,48 h表达下降；IL-1β蛋白分泌在48 h达高值.两组细胞凋亡率在加入HKSA后12h、24h、48 h逐渐增加(P＜0.01).单核细胞加入HKSA前和加入HKSA后12h,高糖组与低糖组比较,高糖组IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达均低于低糖组,凋亡率高于低糖组(P＜0.05).结论 高糖和HKSA对单核细胞分泌IL-1β蛋白、表达iNOS和IL-1β mRNA的影响与刺激时间有关；单核细胞处于持续高糖状态时,高糖可以增加细胞凋亡率,降低IL-1β蛋白分泌、iNOS和IL-1β表达.
