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rRNA扩增结核分支杆菌直接检测(MTD)的临床初步应用
目的:2000年全国第四次结核病流行病学抽样调查结果显示:我国约有500万结核病患者,5亿结核病感染者,结核病疫情仍然很严重.目前我国结核病疫情位居世界第二,重庆位居全国第二.
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结核分枝杆菌的检验及结果分析
检出痰液中结核分枝杆菌一直是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的主要依据,涂片法简单易行,但阳性率较低,罗氏培养法虽为金标准,但因周期较长,均难以满足临床需要.近年来,作为直接检测分枝杆菌种系的鉴定及药敏的许多分子生物学方法得到长足发展,这些方法能将诊断的时间从几周缩短到几天,其中实时荧光定量PCR(FO-PCR)因其技术成熟,具有较高的敏感性和特异性,已逐步应用于临床,我们用以上3种方法同时检测100例临床痰液标本结核杆菌,对结果进行分析.
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DNA损伤和修复的生物标记物研究
DNA作为生命活动中重要的遗传物质,在维护机体的正常功能上有举足轻重的作用.由于DNA结构特点及半保留复制特性,DNA分子易出现损伤,引起细胞及机体损害.对DNA损伤的修复,则是机体抵御各种伤害的基础.DNA损伤和修复涉及人体生长、发育、衰老、疾病等所有方面.由于DNA结构微小,直接检测过于复杂和困难,利用生物标记物进行DNA损伤修复检测是可行的方法,也是危险性评价的重要方法.生物标志物是指生物系统内直接或间接与环境暴露相关的、可测量的生化、生理、细胞、免疫或分子变化,以及可测量的体液或房室中的代谢物水平[1].生物标记物显示了分子水平的暴露-效应关系. 在机体中,各种DNA损伤和修复机制均有各自特异性的因子和基因组,构成了各自的生物标记物.主要有以下几种:
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生物芯片、生物信息学与高通量中药活性筛选
药物筛选是一个采用适当方法与分析手段对候选物质药理活性评价的主动寻找药物的过程.高通量筛选技术是20世纪80年代后期形成的寻找新药的高新技术,其有3大技术支持,即组合化学、遗传学和高通量筛选,分别为新药开发提供新化合物源,新的作用靶标和大规模的筛选方法.后两者相辅相成,构成较为完整的筛选体系,即基于疾病机理,选择特定生物分子作为靶标的高通量筛选.目前机理筛选一般有两种模式,一种是直接检测化合物对生物大分子如受体、酶、离子通道、抗体等的结合及作用;另一种是检测化合物作用于细胞后基因表达(尤其是mRNA)的变化.不论何种筛选模式,其关键问题是药物靶标的确定和筛选效率的提高,生物芯片及相关技术的出现将在药物筛选的关键问题上发挥巨大的作用,不仅可促进药物基因组学的发展,尤其是对中药活性物质的筛选和方剂作用原理的研究提供有力的技术支撑.
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视锥蛋白样蛋白1水平或可预测早期阿尔茨海默病进展
阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)是老年人痴呆常见的病因,直接检测AD的神经元丢失是评估疾病临床和影像学进展的良好指标。其中有关神经损伤或神经元变性的脑脊液生物标志物在预测进展和指导预后评估方面很重要。已有研究显示视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)可能是AD患者神经元损伤的一个有用的生物标志物。
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不孕症患者子宫内膜HOXA-11基因与雌、孕激素受体的检测
基因剔除的小鼠能够正常排卵和受精,但受精卵不能正常植入,而HOXA-11基因剔除小鼠的受精卵却能在野生型小鼠中着床发育[1].研究发现HOXA-11基因在人类子宫不同期别内膜的表达是有差异的[2].雌、孕激素均可使子宫内膜间质细胞中HOXA-11基因的表达增加2~3倍,其中孕激素的刺激作用强于雌激素及雌、孕激素联合应用,而且孕激素增加HOXA-11基因的表达呈剂量依赖性[2].此结果反映了HOXA-11基因与胚胎着床及雌、孕激素的关系,提示HOXA-11基因可能是通过雌、孕激素受体(ER、PR)作用于子宫内膜的.本研究直接检测了子宫内膜组织中HOXA-11基因表达,探讨其与雌、孕激素受体的相互关系.
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沈阳市肾综合征出血热病原学分型
Hjelle B等和Kim EC等应用反转录套式PCR方法,分别对汉坦病毒肺综合症(HPS)及HFRS病人的血标本进行检测,急性期临床样本具有很高的阳性率,产物经测序或酶切分析表明有较好的特异性.国内学者设计了一套HAN(汉坦型病毒)和SEO(汉城型病毒)型特异性引物,使用套式PCR方法,可对急性期病人血中的汉坦病毒直接检测并分型,方法简便、快速、准确.笔者应用该方法对沈阳市汉坦病毒RNA进行了分型研究.
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胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素常见耐药位点PCR直接检测分析
幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, HP )是定植于人类胃部的螺杆状革兰氏阴性菌,人群感染率超过50%。 HP感染与胃炎、消化性溃疡及胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病密切相关。克拉霉素是根除HP应用广泛的抗生素之一,耐药率的不断增高严重影响着含克拉霉素 HP 根除治疗方案的成功率[1]。现已证实,23 S rRNA V 区的点突变( A2142 G/C, A2143 G)是引起HP产生克拉霉素耐药的主要因素[2]。本研究通过23 S rRNA V区PCR产物测序方法直接检测胃黏膜组织中HP相关基因特征从而快速获得克拉霉素耐药情况,并分析与相关菌株耐药表型测定( E-test 药敏方法)结果的一致性。
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肾移植患者不同病期淋巴细胞与细胞因子的检测
急性排斥反应期患者血和尿中多种细胞因子有不同程度升高.近年来各种方法测定细胞因子可作为诊断及鉴别诊断排斥反应的手段.由于外来抗原激活机体免疫系统,使淋巴细胞激活、增殖和分化,直接检测患者体内的淋巴细胞增殖程度以期为排斥反应的监测提供科学的依据,本文将淋巴细胞检测结果报告如下:?
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超声检查对肺栓塞的诊断价值
肺栓塞(PE)不是少见的疾病,但因临床医生对此病的认识不足,或因检查手段的限制而误诊漏诊者不少。目前PE的确诊多以血管造影、肺通气灌注扫描、螺旋CT、MRI、X线胸片等为主要手段,而超声检查可以方便、快捷地获得极为有用的信息,并可在床旁进行检查,可作为诊断PE辅助手段之一。1 直接检测右心和肺动脉栓子1.1 体表超声由于部位的局限,不易看到肺动脉的栓子,但仍有时看到右心室内的浮游栓子,也有的看到主要肺动脉的大栓子[1]。1.2 经食管内超声(TEE)由于更接近心脏和大血管,体表和肺的屏障减少,更容易看到主肺动脉和右肺动脉的栓子,有时也可看到左肺动脉的栓子,一部分叶动脉也可搜寻到栓子,而远端肺动脉则难以看到。TEE可以看到栓子的活动性和栓子引起的血流紊乱,可以评估栓子的年龄,从而有助于估计溶栓治疗的有效性。在少数情况下,TEE甚至发现了血管造影未检出的右房右室交界处的栓子[2]。1.3 血管内超声已在动物模型[3]和患者中[4]快速而准确地检出栓子。随着更易操作导管的发展,这项技术会更有用。
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子宫-胎盘循环的超声监测研究现状及进展
子宫-胎盘循环的监测是产科医师进行临床决策的参考依据之一,关系到产科质量的优劣和围生儿的预后.直接检测胎盘功能尚有因难.Assali等[1](1953年)和Mctcalfc等[2](1955年)使用一氧化氮Fickif 测定孕妇的母体-子宫血流量,两个研究小组得到了合理和相似的结果,但此种方法需子宫静脉插管,对孕妇有一定的创伤性.
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PCR限制性内切酶法在苯丙酮尿症突变基因诊断中的应用
苯丙酮尿症(PKU)是一种常染色体隐性遗传病,由苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变导致肝脏PAH酶活性降低或丧失所致.临床表现为不可逆的智力发育迟滞、癫痫等症状.新生儿筛查显示,PKU在中国人群中发病率为1/11 000[1].在中国人pah基因的已知突变中,一些突变改变了基因序列中限制性内切酶的酶切位点.为此,我们应用PCR限制性内切酶法(PCR-RFLP)直接检测一些改变了限制性内切酶酶切位点的突变基因.
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菌液直接进行聚合酶链反应快速检测葡萄球菌mecA基因的研究
耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)因其对β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物的多重耐药而成为危害严重的医院感染病原菌之一,不适当的治疗常常造成病情的延误以及病原菌在病房内的流行,这就需要临床微生物室快速准确地检测出MRS.应用聚合酶链反应(PCR)直接检测mecA耐药基因,具有高度的特异性和灵敏度且报告时间较快[1].以往报道的PCR方法都要求先提取细菌染色体DNA做模板,我们在实验中发现不进行标本的预处理,直接以菌液进行PCR扩增,亦可得到满意结果.
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DNA损伤和修复生物标记物的检测研究
DNA是生命活动中重要的遗传物质,易受各种因素的作用而出现损伤,导致DNA完整性的改变,引起细胞及机体损害.对DNA损伤进行修复则是机体抵御各种损害的基础.由于DNA损伤和修复的直接检测过于复杂和困难,一般需采用间接的灵敏可行的生物标记物法.生物标记物是指生物系统内直接或间接与环境暴露相关的、可测量的生化、生理、细胞、免疫或分子变化,以及可测量的体液或房室中的代谢物水平[1].DNA损伤修复的生物标记物可主要分为3种:特异性酶和代谢产物、特异性修复基因、DNA加合物[1,2].根据不同的生物标记物,可采用不同的检测方法.
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硝酸盐还原试验直接检测痰标本中结核分枝杆菌耐药性
WHO报道2005年全球有880万结核病新发病例,死亡病例160万[1],而且,这种情况随着艾滋病和耐多药结核分枝杆菌的流行而日趋严峻[1-3].监测结核分枝杆菌耐药性是控制耐多药菌株流行的有效方法之一.然而,目前所用方法受到检测费用高和检测时间长等不利冈素的限制,因此,急需发展快速价廉的检测方法.
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对血培养阳性标本直接检测的评估
菌血症和败血症是临床上严重危及患者生命的疾病,进展迅速,死亡率较高[1].快速准确地检测出血液中细菌进行鉴定和药敏试验,是临床有效诊断和治疗的关键.对此,我们对BACTEC9050全自动血培养仪检出阳性瓶培养液,直接用于美国德灵公司Walk Away40型自动鉴定系统上机进行药敏试验.报告如下.
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rRNA扩增直接检测结核分枝杆菌的临床应用价值探讨
为满足临床迫切需要一种更快、更准确地早期诊断结核病的方法,以保证及早的、更合理地进行治疗,我们引进了美国Gen-Probe公司rRNA扩增结核分枝杆菌直接检测(MTD)技术[1]应用于临床,并与传统的涂片抗酸染色和L-J培养法进行平行观察,以比较其优劣,以探讨该法的临床应用价值.
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聚合酶链反应直接检测粪便中志贺菌的临床意义
近年来志贺菌在众多的腹泻病致病菌中仍然具有较高的发病率[1].在基层部队常常引起急性细菌性痢疾(急性菌痢),并时呈集体暴发流行.应用聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌已早有报道,但应用于临床实际诊断的研究报道不多.本文采用PCR和长臂光敏生物素探针杂交技术对2起急性菌痢,共17例进行了检测,进一步探讨PCR用于临床腹泻病诊断的实用性.
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MHC-表位肽四聚体技术在病毒性肝炎研究中的应用
可溶性MHC-肽四聚体是根据T细胞活化的双识别原理,用生物工程技术将MHC-Ⅰ类分子重链α与β2微球蛋白在体外组装,并结合抗原表位肽,形成一个能够与相应TCR特异性结合的单体,再将4个单体组装在一起,称为四聚体.四聚体用荧光染料标记,供流式细胞仪检测,就可以用于具有特定TCR的T细胞的研究.在病毒性肝炎的研究中,四聚体技术可以直接检测抗原特异性CTL数量,在感染急性期抗原特异性CTL比恢复期高,肝炎自愈者高于慢性感染,肝内高于外周血,但明显低于其他病毒性疾病.四聚体标记联合其他膜表面分子的标记(或细胞内细胞因子染色),可以评价抗原特异性CTL的功能状态,还可以联合一些特殊的荧光染料,评价抗原特异性CTL的分裂增生能力.
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慢性HBV感染肝炎突发患者外周血病毒抗原表位肽特异性CTL的数量研究
目的:了解慢性乙肝患者肝炎突发时抗原特异性CTL反应水平.方法:用四个HBV抗原表位肽四聚体(HBcAg18-27,HBsAg183-191,HBeAg335-343,多聚酶P的575-583)对外周血中抗原特异性CTL进行检测,分析健康献血员和慢性乙型肝炎患者病毒抗原表位肽特异性CTL的出现频率.结果:6例HLA-A2阳性献血员,6例HLA-A2阴性的HBV感染患者,抗原表位肽特异性四聚体阳性细胞占CD8细胞的高百分比为0.02%,以0.02%为四聚体检测域值.29例HLA-A2阳性慢性HBV感染患者,其中27例外周血四聚体细胞阳性,检出率93.1%.肝功能ALT在正常上限5-10倍者四聚体阳性细胞比例描写高于其他组(P<0.05).结论:HLA-表位肽四聚体技术直接检测外周血中抗原特异性CTL具有特异性高,敏感性强的特点.大部分慢性HBV感染患者体内仍存在抗原特异性的CD8细胞,而且肝炎突发时抗原特异性细胞数量增加.