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异种器官移植中PERV病原安全性的研究进展
猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)是指以前病毒DNA形式整合进宿主细胞基因组中,并随细胞染色体复制而复制的反转录病毒.由于PERV在体外可以感染人的多种细胞,这引起了人们对猪-人异种移植病原安全性的广泛关注.本文从PERV的生物学特性、基因组的结构与功能及其病原安全性等几个方面综述了近年来的研究进展.
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膦甲酸钠治疗慢性乙型病毒性肝炎临床疗效观察
我国是乙型病毒性肝炎发病率较高的国家,受感染者高达1.2亿,目前尚缺乏有效的治疗方法,积极寻找新的有效的药物非常重要.膦甲酸是一种广谱抗病毒药,它可以抑制DNA和RNA聚合酶从而抑制反转录病毒和RNA病毒.1991年用于治疗艾滋病,近来研究发现具有抗乙型肝炎病毒的作用,为此我们从1999年10月至2000年10月用膦甲酸钠(foscarmet sodium)治疗慢性乙型肝炎32例,现将结果报告如下.
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贵州省凯里市6例人类免疫缺陷病毒阳性孕妇抗病毒治疗效果评价
人类免疫缺陷病毒(HIV )母婴传播是艾滋病3种传播途径之一,HIV可以通过胎盘、分娩过程及母乳喂养感染婴幼儿,在不采取任何干预措施的情况下,HIV的母婴传播率可以达到30%~40%,而有效的药物预防则可降低 HIV母婴传播率到4%[1]。一直以来,HIV阳性孕妇及其婴儿接受抗反转录病毒药物预防和治疗是 HIV母婴传播的有效干预手段,为阳性孕产妇及其婴儿提供高效抗反转录病毒药物治疗可以将 HIV母婴传播率降到1%以下[2]。通过高效抗反转录病毒治疗阻断 HIV母婴传播国外有许多报道,国内报道较少,本文就贵州省凯里市疾病预防控制中心艾滋病抗病毒治疗门诊自2005年开展抗病毒治疗以来收治的6例HIV阳性孕产妇的抗病毒治疗及母婴阻断效果进行分析。
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喉癌中CD44V表达的研究
CD44是近年来研究较多的与肿瘤转移密切相关的黏着分子之一,许多研究发现CD44变异型(CD44V)在非霍奇金淋巴瘤、结肠癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤表达明显升高,且与肿瘤的转移与浸润密切相关.本研究采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)研究CD44V在喉癌组织及声带息肉的表达情况.
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人谷胱甘肽S-转移酶P1基因及其人群多态性
人类细胞质谷胱甘肽S-转移酶(hGSTs)超基因家族主要包括4个家族:A、M、T、P(按旧命名系统分别为α、μ、θ、π)[1],其中GSTM1以及GSTT1的人群多态性以及与疾病易感性关系的研究开展较早,也有了一定的积累[2~4].GSTP1的人群多态性问题则是近年来才引起医学界的注意.hGSTP1是hGSTs家族中酸性同工酶P1(有些文献中命名为GSTπ)的编码基因.1989年Board等人分离了人类GSTP1基因的cDNA克隆,将其定位于染色体的11q13,并首次报道了GSTP1基因的外显子5(ICe105→Val)和外显子6(Ala114→Val)存在多态性[5],并在12q13-14区段发现一个可能是由于部分反转录再插入形成的相关假基因.由于hGSTP1与一些人类环境致癌剂的体内代谢反应有关,其过表达与肿瘤药物耐受性密切相关,基因多态性不同形式与各种癌症易感性之间的关系也越来越多地受到关注.现将有关hGSTP1基因及其人群多态性研究现状介绍如下.
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AIDS的基因治疗
一、AIDS基因治疗的可能性:近些年来,AIDS基因治疗的研究取得了一些进展,NIH重组DNA顾问委员会(RAC)已先后批准多个HIV感染的基因治疗的临床研究方案--1993年7月批准Nobel G等人把插入Rev10基因的CD+4 T细胞用于临床研究;当年9月又批准了Greenberg PD的临床实验计划,把针对HIV-1抗原特异性的携带自杀基因的CD+8 T细胞用于过继转移治疗HIV感染;于此前后,Wang SF等人采用LNL6载体将HIV-1先导序列hairpin核酶基因导入CD+4 T细胞以研究转化细胞在患者体内的行踪方法也获批准.将表达gp160的反转录病毒重组体直接注入患者体内的基因治疗已进入Ⅰ期临床试验阶段[1].这些结果展示了AIDS基因治疗的光明前景.
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未经高效抗反转录病毒治疗的HIV-1感染者耐药性检测和分析
为了解上海部分地区未经高效抗反转录病毒治疗(HAABT)的HIV感染者HIV-1耐药突变的分子流行病学,笔者对14例在本中心就诊的HIV-1感染患者进行了基因型耐药检测和分析,现报告如下.
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禽反转录病毒与DNA病毒间的基因重组及其流行病学意义
自从中国香港报道H5N1亚型高致病性禽流感病毒可以感染人以及在中国暴发的SARS确认是由一种冠状病毒引起的以来[1,2],人们开始高度关注病毒在自然界中的变异.
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基因芯片技术及其在药学领域的应用
1 引言1995年,Schena[1]在
杂志上发表文章,他把拟南芥菜植物的cDNA文库中的48个cDNA用PCR方法扩增后,把PCR产物固化在玻璃片上,制成基因芯片(DNA microarray,也称DNA芯片).然后从拟南芥菜的不同组织中提取mRNA 反转录得到带荧光标记的cDNA,把不同组织来源的 cDNA混合后与玻璃片上的DNA进行杂交,用荧光双通道扫描系统对杂交点的荧光信号进行扫描分析,得到了拟南芥菜不同组织中基因的表达情况.自Schena的成功报道后,短短四﹑五年时间,有关基因芯片技术的研究与应用的报道已大量出现在多种新闻与学术媒体中. -
疾病基因克隆的策略及主要方法
目录一、定位克隆 (positional cloning) 策略 (一)家系连锁分析法 (二)等位基因共占法 (三)人群相关分析法 (四)cDNA筛选二、消减杂交 (subtractive hybridization) 策略 (一)消减杂交法和抑制性消减杂交法 (二)差示反转录PGR法和差异消减显示法 (三)代表性差异分析法和Sl核酸酶介导的缺失基因探针富集法 (四)基因组错配扫描法 (五)比较基因组杂交法 (六)DNA微阵列杂交系统三、两类策略的联系
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病毒预防靠病毒
异源基因转导细胞的重组病毒运载技术在各种基础与应用研究中已有几十年的历程.Darnell和同事利用重组腺病毒研究白蛋白启动子转录调控,属于早期应用实例之一[1].随着小鼠复制缺陷性反转录病毒问世,基因治疗的实验室研究进入了飞跃时期[2].该领域的研究热点为寻找各种DNA/RNA病毒载体或非病毒性载体[3-5].不久前,载体技术的思路已被引入基因疫苗的开发工作[6-10],这正是本系列综述所要涉及的主题.
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HBV基因型芯片检测方法的研究
HBV属于嗜肝DNA病毒科,基因组经反转录过程进行复制.由于反转录酶缺乏自我校读功能,且感染过程中,在宿主免疫反应的抗病毒压力或特异性治疗的作用下,病毒基因组发生变化,造成HBV核苷酸序列的显著差别.HBV基因分为A~H 8个基因型,能更好的刻画病毒致病性的不同.基因芯片技术的出现,对于像HBV这样高变异性病原体的基因分型检测无疑是一大改进.
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Smad 4在去势大鼠下丘脑、垂体中的表达和意义
目的::研究Smad 4 mRNA在去卵巢大鼠下丘脑、垂体中的表达水平和意义。方法:SD大鼠分为3组(每组10只):对照组(月龄<24周雌性大鼠)、去势组(手术切除双侧卵巢大鼠)、治疗组(去势后雌激素治疗雌性大鼠30天),动物处死后迅速取材,提取各组大鼠下丘脑、垂体组织RNA,反转录成cDNA,下丘脑,采用实时定量PCR方法( Real-time quantitative reverse transcriPtion Polymerase chain reaction;qRT-PCR),检测各组大鼠Smad4 mRNA在下丘脑及垂体中的表达。结果:去势组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组0.4±0.22倍(P<0.05),雌激素治疗组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组2.5±0.79倍(P<0.05);去势组大鼠垂体Smad4 mRNA水平是正常组0.2±0.12倍(P<0.05),垂体中Smad4 mRNA水平是正常组8.8±0.16倍(P<0.05)。结论:去卵巢大鼠下丘脑、垂体表达Smad 4基因,并与雌激素水平变化相关。
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一步反转录PCR法从组织及细胞中扩增HEK5
聚合酶链反应(PCR)技术诞生后不久即用于RNA的扩增[1].这种方法需要首先将RNA逆转录(RT)为cDNA链后再进行常规PCR扩增,程序较繁琐,且需逆转录酶及RNA酶抑制剂等成本较高试剂.
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常用抗反转录病毒药物的不良反应
1996年何大一博士开创的高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)在发达国家得到了普遍推广,这种将几种抗病毒药物联合使用的治疗方案取得了理想的临床疗效.随着患者免疫功能的恢复,机会性感染及相关肿瘤的发生率显著降低.而在患者生命延长的同时,抗病毒药物不良反应的发生日益突出.
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有关HIV新信息和防治新理念
1新重要信息聚焦1.1人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的发现者获得2008年诺贝尔生理学或医学奖[1]法围巴黎巴斯德研究所病毒系反转录病毒感染调控专业教授Barre-Sinoussi和法国巴黎世界艾滋病研究和预防基金会名誉教授Montagnier因共同发现HIV,近获得2008年诺贝尔生理学或医学奖.
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大鼠肝再生相关基因LRRP1的克隆化
目的:利用抑制性消减杂交技术构建大鼠肝脏部分切除术后差异表达基因的cDNA文库,并通过同源引物反转录PCR的方法克隆大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列.方法:分别提取肝脏部分切除术后24h以及对照大鼠肝脏mRNA,以之为模板合成cDNA,称为测试和驱动.酶切消化后将测试分成两组,分别与不同的接头连接,分别与驱动进行杂交,然后混合两份杂交液,加入过量的驱动不经变性进行第二次杂交即消减杂交.之后进行两次PCR扩增,将产物克隆入质粒载体,构建差显文库,测序后以生物信息学技术进行序列同源性比较.通过同源引物反转录PCR的方法克隆基因全序列,并用软件分析其蛋白结构.结果:成功构建大鼠肝脏部分切除术后的cDNA差显文库,消减效果良好.将所得的部分基因进行测序分析,选择一个未知序列,通过同源引物反转录PCR的方法克隆到大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列,并初步分析了其蛋白结构.结论:确定了大鼠肝再生相关蛋白LRRP1的基因序列,并证明其在大鼠肝再生过程中高度表达.
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拉米夫定治疗乙型肝炎相关失代偿期肝硬化的进展
乙型肝炎病毒在体内的复制引起肝炎、肝硬化,拉米夫定是目前抗HBV的主要药物之一.拉米夫定通过抑制或干扰HBV病毒复制过程中反转录酶的活性而发挥其抗HBV作用,可以延缓慢性乙型病毒性肝炎患者进展为失代偿期肝硬化的进程.对于失代偿期肝硬化患者,拉米夫定可以改善肝脏储备功能和生存率,降低原发性肝癌的发生率,而且安全、有效.
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基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP11反式调节基因
目的:应用基因芯片技术研究未知功能基因NS5ATP11的表达对于肝细胞基因表达谱的影响.方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RTPCR)扩增出NS5ATP11编码区DNA,常规分子生物学技术构建NS5ATP11的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP11,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞,NS5ATP11的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA,逆转录为cDNA,并进行基因芯片技术分析.结果:证实构建pcDNA3.1(-)-NS5ATP11在HepG2细胞中表达正确.NS5ATP11重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达改变进行分析.结果表明,8种基因的表达水平上调,10种基因的表达水平下调.结论:NS5ATP11对于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径,有助于了解NS5ATP11对肝细胞和其他生物学功能的调节作用.
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肝细胞因子3和乙型肝炎的调节关系
0 引言乙肝病毒(HBV)是很小的包膜病毒,基因组结构精密,仅约3 200个碱基(bp),但能以小容量发挥高效功能.HBV DNA复制周期开始于共价闭合环状DNA(cccDNA),先转录为前基因组RNA,然后反转录为负链DNA,再合成正链DNA,双链DNA又成熟为cccDNA,是一个连续的过程.分散在整个HBV基因组中有多个调节元件,与细胞或病毒产生的调节因子结合,增强或抑制不同基因的表达[1-3].肝细胞因子3(HNF3)是重要的转录调节因子,对于调节前基因组RNA和前核心RNA等的转录复制有重要的作用.