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肺癌不同组织类型灰度值的比较研究
近年来,我国肺癌的发病率和死亡率均呈明显上升的趋势.研究发现,细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因.而细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)是近年来提出的重要的原癌基因,在细胞周期的调控中起关键作用.为了探讨细胞周期蛋白D1基因与肺癌的关系,本文进行了肺癌不同组织类型灰度值的比较研究.1材料与方法1.1研究对象收集肺癌住院病人并经手术后病理证实的肺癌石蜡包埋组织108例.本实验组男75例、女33例,其中包括鳞癌59例、腺癌33例、小细胞未分化癌16例.
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甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的三种提取方法比较
为了寻找佳的自普通10% 甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,取我院2000年手术切除的10% 甲醛固定石蜡包埋的食管癌标本10例,分别以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法和不同pH值下加热提取法提取其DNA,然后进行电泳和PCR扩增分析.结果显示,蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于不同pH值下加热提取法.从而认为蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的DNA提纯方法.
关键词: DNA提取 PCR 石蜡包埋组织 10% 甲醛固定组织 -
两种提取石蜡包埋组织DNA方法的比较
从石蜡包埋组织提取组织DNA的质量是关系到PCR是否成功的关键因素之一,我们对Thomais等人提出的方法与传统酚-氯仿抽提法从石蜡包埋组织提取组织DNA进行了比较,并加以评价.
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石蜡包埋组织DNA的快速提取技术
方法提取石蜡包埋组织DNA,步骤繁琐耗时.本实验室以PCR方法检测结核菌为例,摸索出一种不经过脱蜡及酚-氯仿抽提,直接提取石蜡包埋组织DNA简捷而快速的方法.
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不同组织DNA提取的比较
分子生物学技术应用于病理学不仅能辅助诊断,而且在评估预后及指导治疗方面也具有重要作用.DNA提取是分子病理诊断和相关科研中的关键步骤.提取高质量的DNA除了需要操作者的经验、高质量的试剂盒以外,组织的来源也很重要.对于病理科常用的甲醛固定、石蜡包埋(FFPE)组织来讲,往往不同组织来源的DNA质量存在显著差异,是制约后续分子病理检测的重要因素.本文对比检测了不同组织来源DNA的浓度和质量,并加以总结分析.
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双重免疫组化技术在乳腺癌组织芯片中的应用
在生物医学和临床研究实践中,经常需要检测两种不同物质是否在同一样品或同一种细胞中共存,好使用双重染色法在同一个组织样本上进行杂交.双重染色的方法有两种类型,免疫酶组织化学和免疫荧光化学法.目前,在实体肿瘤中,由于甲醛固定石蜡包埋组织过高的荧光信号,免疫荧光法更适合用于冰冻保存的组织[1].双重免疫酶组织化学需要选择不同显色底物、不同的抗体、不同修复方法进行搭配,操作繁琐,在科研使用比较广泛,但临床操作要求稳定性高、操作简单,所以在临床不常规使用.
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甲醛固定及石蜡包埋组织的蛋白质组学研究进展
人体内多数疾病都有其独特的生物学特征,如某些蛋白质表达量的改变,新的肿瘤特异性蛋白质的出现等.近年来蛋白质组学及其相关技术为发现新的疾病特异性生物标志物以及探讨疾病发生发展机制,提供了高效便捷的工具~([1]).
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甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的降解情况
为了对比国外甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的保存质量与国内标本的差异,特设计实验如下.
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石蜡包埋组织HE染色切片的短串联重复序列荧光标记复合扩增
短串联重复序列(short tandem repeats,STR)的复合扩增是病理组织进行个体识别的常用技术.我们对石蜡包埋组织HE染色切片的STR荧光标记复合扩增进行实验研究,现报道如下.
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荧光定量聚合酶链反应检测石蜡包埋组织结核杆菌的应用价值
在病理学形态上有多种疾病在光镜下都表现为上皮样肉芽肿性病变,如结核病、结节病、麻风病等慢性感染性疾病,在不同部位、不同患者及不同病变时期,其上皮样肉芽肿病理表现的典型性也不同,在病理诊断中常难以鉴别这类疾病,容易引起误诊.在病理形态上主要表现为上皮样肉芽肿性病变的疾病在临床上常见的是结核病,故在病理诊断中应特别注意结核病的诊断与排除诊断.目前结核病病理诊断的主要辅助检测是抗酸染色,但其灵敏度较低[1];文献报道针对结核分枝杆菌特定DNA序列进行荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测痰液、胸腹水标本中结核分枝杆菌的敏感性高、特异性强,且省时、易操作,用于诊断肺结核病取得较好效果[2].
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利用量子点免疫荧光双标法在石蜡包埋组织中进行抗原的检测
在组织切片中利用免疫荧光标记抗原是一种广泛使用的方法.在大多数研究中,使用的荧光染料是一些有机分子如F1TC、TBITC、Cy3等.
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细胞和细胞核微阵列的制作及其应用
组织微阵列(TMA)又称组织芯片(tissue chip) 技术[1].基于其优点,新近学者们考虑能否将细胞也同样制成相似的阵列进行研究.我们利用打过孔的石蜡为模具,将培养悬浮的细胞和从石蜡包埋组织中提取的细胞核制成细胞和细胞核的微阵列,并将其用于荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、mRNA原位杂交、免疫细胞化学基因蛋白的检测,证明其效果良好,具有组织微阵列的优点.
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用荧光原位杂交在石蜡切片上检测t(11;18)和涉及bcl-10基因染色体易位的方法
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridisation,FISH)是在石蜡包埋组织中检测细胞染色体变化及基因异常的一种敏感性强、特异性高的分子生物学方法.对石蜡包埋组织进行FISH染色所采用的方法有两种,在提取的细胞核上进行和直接在石蜡包埋组织切片上进行.然而,从石蜡包埋组织中提取细胞核进行FISH的方法复杂、耗时,而且所需组织较多,在临床活检小组织中的应用受到一定局限.我们介绍一种简单易行的在常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片上进行FISH方法.
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抗原修复技术研究发展的新起点
7年多前,我们曾经受贵刊编辑部之邀发表过“抗原修复技术研究进展”一文[1]。在那篇文章里,尽管已经有片言只语提到可以应用抗原修复技术原则从石蜡切片中提取蛋白质和核酸。但是,全文的主题与绝大部分内容还是局限在免疫组织化学染色的问题方面。转瞬过去的7年在后基因组时代的舞台上大放异彩,高通量检测数以千计的蛋白质组学分析技术的开发以及各种形形色色的蛋白质质谱分析技术的开发,在探讨人类疾病的多种相关生物标志物及其在诊断治疗上,正在扮演着先锋作用的重要角色[2-4]。图像质谱分析是近开发出来的一门新技术,它是建立在质谱分析法特别是通过基质辅助激光解析( matrix-assisted laser desorption ionization )技术或者次级离子质谱分析法( secondary ion mass spectrometry )能够在一张组织切片上进行蛋白质、脂质等细胞组成成分在组织结构内的质谱分析。1997年,离子质谱分析法( IMS )早由Caprioli的实验室发表。此后不久即开始用于临床研究,如癌组织中HER2表达以及分布等的研究显示出颇具魅力的发展前景。但是,这些新兴的技术从开始起步就面临着和20多年前免疫组织化学在常规甲醛固定石蜡包埋( FFPE )组织切片染色上同样的尴尬局面:必须依赖新鲜组织冷冻切片。随着抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色的广泛推广,人们从数以万计的近代有关加热抗原修复技术的文章中,毫不怀疑地认识到,加热抗原修复技术在免疫组织化学染色等方面取得的优异成果,开启了如何把现代分子生物学技术用于FFPE组织科研宝库的途径。继免疫组织化学染色之后,加热抗原修复技术的基本原理已经成功地被用于包埋前、后免疫电镜染色,核酸原位杂交,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记,从石蜡包埋组织中提取蛋白质或核酸等一系列的重要成绩。2008至2011年期间,意大利的Ronci等[5]、澳大利亚的Gustafsson等[6]、美国的Casadonte和Caprioli[7]相继发表了他们经过反复试验、成功地采用加热抗原修复技术方法,使得IMS能够用于常规FFPE组织切片的文章,由于从事IMS技术开发的科学家们逐渐从与日俱增的加热抗原修复在免疫组织化学染色等方面令人瞩目的成绩中,认识到FFPE人体组织是不可取代的极为宝贵的科学研究资源,任何一种现代化的分子生物学技术都不能够仅仅局限于新鲜组织冷冻切片。必须千方百计地寻求一种能够克服FFPE处理给予组织内高分子成分带来的负面影响的有效方法。于是,一切从事与常规FFPE组织标本相关联的科学研究和技术开发都顺理成章地归结到加热抗原修复技术。有力地证明这一极为简单的加热修复方法的确提供了解放石蜡组织中的蛋白质等高分子结构成分的坦途,开启了为病理学家和形态学家步入分子病理学、形态学的大门。
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CDX-2--肠源性腺癌的新标记
CDX2是一个新发现的特异性核转录因子,对正常和肿瘤性的肠上皮均有相对特异性和敏感性,免疫组织化学染色可以用来辅助明确转移性肿瘤的来源[1].CDX2-88(Ab No.392M)是核蛋白相对分子质量40 000 CDX2的单克隆抗体(小鼠IgG1、κ抗体),由Biogenex和Dana-Farber癌症研究所协作生产,可用于甲醛固定,石蜡包埋组织,以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性反应[1].
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内源性生物素在结肠组织中的表达及其对免疫组化的影响
目的:探讨内源性生物素在结肠组织中的表达及其对免疫组化结果的影响.方法:14例结肠黏膜组织标本按不同的免疫学方法进行实验和分析.结果:8例出现内源性生物素阳性表达(57.14%),主要位于表面上皮细胞胞质,尤其近基底侧.15%蛋清封闭液可以封闭结肠组织中的内源性生物素.传统SP法、SP法+15%蛋清液、PV-6002两步法和改进后的两步法Bax阳性表达数分别为12例(85.71%)、10例(71.43%)、4例(28.57%)和8例(57.14%),在这四种方法中Bax中等强度以上表达数分别为10例、6例、0例和5例.结论:内源性生物素在结肠组织中主要表达在表面上皮细胞胞质,尤其是近基底侧;免疫组化时可首选生物素标记的检测系统.
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溃疡性结肠炎组织中NF-κB,OX-2和iNOS表达的意义
目的:转录因子NF-кB的诱导,调控着免疫和炎症反应中众多基因的表达.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,C)存在上皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞的异常激活及细胞因子的表达失调.我们检测了UC组织中NF-кBp65,及两种启动子含NF-кB结合位点的蛋白COX-2和iNOS的表达和分布,探讨他们在UC发病机制中的作用,及三者之间的关系.方法:用免疫组化SP法检测39例活动期溃疡性结肠炎内镜活检标本及30例正常对照石蜡包埋组织中NF-κBp65,OX-2和iNOS的表达情况.结果:UC组p65,OX-2和iNOS均为阳性表达,主要分布于上皮细胞.固有层炎性细胞及血管内皮细胞也有程度不同的表达对照组均为阴性或弱阳性表达.三者在UC组的表达与对照组相比,差异均有非常显著性(P<0.01).p65的表达与内镜及病理分级有关.内镜Ⅱ级与Ⅰ级比较(5.8±2.6 vs 3.6±1.9),差异显著(P<0.05).病理Ⅱ,Ⅲ级与Ⅰ级比较(6.1±2.4,.3±2.5 vs 4.0±2 3),差异显著(P<0.05,<0.01).iNOS的表达与病理分级有关,Ⅲ级与Ⅰ,Ⅱ级比较(7.8±2.5 vs 4.6±2.3,5.0±1.6),差异显著(P<0.01,<0.05).COX-2的表达在病情轻重,内镜及病理分级间差异无显著性(P>0.05).p65与COX-2,NOS表达显著相关(rs1分别为0.713,.706;P<0.01),COX-2与iNOS表达显著相关(rs1=0.854,<0.01).结论:NF-кB的诱导参与UC的发生、发展.COX-2,NOS也参与UC的炎症及损伤过程,可能iNOS发挥的作用更显著.COX-2,NOS表达的调控机制可能相似,且与NF-κBp65的诱导有直接关系.
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K-ras基因在胰腺癌和慢性胰腺炎中突变和表达异常及其临床意义
目的:探讨Ras蛋白过度表达与胰腺癌和慢性胰腺炎临床病理的关系,以及K-ras突变在慢性胰腺炎中的临床意义和在胰泉癌诊断中的价值.方法:应用EnVision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织(24例)、癌旁组织(77例)、手术切缘正常组织(16例)和慢性胰腺炎(24例)石蜡包埋组织中P21 ras的表达情况.应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法分别检测胰腺癌、癌旁组织、手术切缘正常组织、慢性胰腺炎石蜡包埋组织的K-ras突变并进行DNA测序确认.结果:P21 ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为58.3%(14/24),与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的P21 ras表达阳性率45.8%(11/24)相比,二者差异无显著性(P>0.05):P21 ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为36.6%(30/82),与其在正常胰腺组织中的表达阳性率(0%)相比,有显著性差异(P<0.05);P21 ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率分别为0%、36.6%和78.9%,呈渐进过程,而且增生性导管病变与不典型增生相比,P21 ras表达阳性率的差异具有显著性(P<0.05).胰腺癌K-ras12密码子突变率(79%)显著高于慢性胰腺炎(33.3%)(P<0.01),且在切缘正常组织→癌周导管增生→癌周不典型增生→胰腺癌过程中,突变率有逐渐上升的趋势.突变方式以12密码子GGT→GAT、GTT、CGT为主且同1例患者突变方式一致.结论:P21 ras过度表达和K-ras基因突变在胰腺癌发生中起到作用,但K-ras基因突变作为胰腺癌诊断的分子标志缺乏特异性.
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组织芯片技术的建立及其在大肠癌的研究
目的:探讨石蜡包埋组织芯片技术的方法学及其在大肠癌研究中的意义.方法:选取病理科档案材料中44例大肠癌、13例癌旁结肠黏膜和26份大鼠结肠石蜡包埋组织,采用组织芯片仪及手工法制作208点列阵组织芯片,并进行HE染色和MIB-1抗体免疫组织化学染色.光镜观察并计数MIB-1阳性细胞在各组的分布.结果:经染色后组织芯片大部结构完整,每一点阵均有代表性组织形态;MIB-1阳性细胞标记指数(LI)在中低分化大肠腺癌(50.17%)中明显高于高分化(管状)大肠腺癌(32.38%),而癌旁大肠黏膜LI为10.08%.三者之间均具有非常显著性差异(P<0.01).结论:手工法组织芯片制作技术是一种简易可行的方法,在肿瘤病理研究中必将起到重要作用.MIB-1阳性细胞标记指数与肿瘤细胞生长活跃程度相关,可作为判断大肠癌生物学行为及其预后的指标之一.
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输卵管妊娠与病毒感染关系的回顾性研究
输卵管妊娠的病因研究越来越受到重视[1],感染仍被认为是高危因素之一,但对引起感染的病原体仍不明确.关于沙眼衣原体、解脲支原体与输卵管妊娠关系的研究,已有较多报道,有关病毒与输卵管妊娠的关系研究较少.我们对输卵管妊娠石蜡包埋组织中人巨细胞病毒(HCMV)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)及人类细小病毒B19进行检测,回顾性探讨输卵管妊娠与HCMV、HSV-Ⅱ及人类细小病毒B19感染的关系.