Objective A subcutaneous transplantation tumor model of human HT-29 cells in nude mice was established to evaluate anticarcinogenic activities, and the apoptosis-regulated mechanism effect of aqueous extract of fermented wheat germ with Lactobacillus plantarum dy-1 (LFWGE).
Methods The HT-29 cells were transplanted via subcutaneous injection of 1×107 cells into the right flank of each nude mouse. Then, nude mice were treated for 30 d with LFWGE (high-dose 2 g/kg/d;low-dose 1 g/kg/d) and for 7 d with 5-fluorouracil (5-FU, 25 mg/kg/d) by gavage and intraperitoneal injection, respectively. An inhibition of tumor growth was observed.
Results Tumor volume and weights decreased significantly in both groups of nude mice treated with LFWGE. In addition, the cell apoptosis rate of the LFWGE group (2 g/kg/d, 60.1%±4.4%; 1 g/kg/d, 58.6%±6.9%) was significantly higher than that of the control group (11.5%±1.6%) and 5-FU group (32.1%±3.5%) as measured by the TUNEL assay. Moreover, the real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot method further confirmed these enhancing apoptosis and growth inhibition effects. The involvement of LFWGE in inducing apoptosis was confirmed by the expression of Bax, Bcl-2, Caspase-3, and CyclinD1.
Conclusion The results showed that LFWGE could induce subcutaneous transplantation tumor apoptosis in nude mice and could be as a natural nutrient supplements or chemopreventive agent in the treatment of human colon cancer.

复方中药99-克星超声介入治疗肝癌裸鼠移植瘤凋亡与增生

目的:探讨超声引导瘤内注射复方中药99-克星治疗肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的抗癌作用.方法:取人肝癌SMMC-7721裸鼠皮下移植模型28只,随机分为99-克星中药治疗组14只,无水乙醇与生理盐水治疗组各7只.全部裸鼠在接种10 d后每隔5 d向肿瘤内注入治疗药物共4次,治疗20 d后处死.应用免疫组织化学方法检测移植瘤细胞Ki-67抗原的表达并行流式细胞仪(FCM)DNA分析以及采用TUNEL方法对移植瘤细胞凋亡现象进行观察.结果:中药99克星组与乙醇组的Ki-67指数分别为17±9%、21±11%,均显著低于盐水组的32±13%(P＜0.05);克星组凋亡指数高达49±5%,显著高于乙醇组的12±2%和盐水组的10±4%(均P<0.01);FCM DNA分析显示盐水组的异倍体峰出现率高达57%,明显高于克星组的7%与乙醇组的0%(P均<0.05),而克星组的凋亡峰出现率高达93%,明显高于乙醇组的14%与盐水组的0%(P均<0.01).结论:复方中药99克星能显著抑制裸鼠移植瘤细胞的增生,并诱发其凋亡.研究结果表明复方中药99克星具有强大的破坏与抑制肿瘤细胞生长的作用,其疗效不亚于无水乙醇,其主要机制可能有:(1)抑制癌细胞的增生,(2)诱导癌细胞凋亡.复方中药99-克星抗肿瘤的作用机制不同于无水乙醇,尤其以抑制癌细胞增生和诱导癌细胞凋亡的作用机制在抗肿瘤中具有重要的意义.本研究为传统中药治疗肝癌提供了一个新的给药途径与理论依据,其在肿瘤治疗研究中具有重要的意义和良好的发展前景.

裸鼠肝内种植人肝癌组织的肿瘤特征

目的:观察裸鼠肝内种植人肝癌组织能否再现肿瘤特征,为在活体内研究肝癌的生物学特性,指导临床个体化治疗提供一种研究方式.方法:用组织学完整的新鲜人肝癌组织种植于裸鼠肝脏,观察种植瘤的存活率、生长曲线、组织细胞病理特征、转移情况以及肝癌的其他生物学特征,并与皮下、皮下-肝原位种植瘤模型比较.结果:来源于l例患者肝癌组织的第一代种植瘤存活率100%,自发性肝内转移75.0%,肺转移37.5%,骨转移37.5%;并保持分泌AFP的特性;流式细胞仪分析DI值为1.63.组织细胞病理、器官转移特征以及其他生物学特性与原肝癌相似.结论人肝癌组织裸鼠原位种植瘤的生物学特征与肝癌患者基本相似,基本模拟了人肝癌的自然过程,是目前体内研究人肝癌生物学特征、筛选有针对性敏感化疗药的较理想方法.

KAI1基因对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤及转移的影响

目的:研究肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤及转移的影响.方法:将已转染KAI1正、反义核苷酸的高转移潜能肝癌细胞MHCC97-H接种裸鼠皮下,观察皮下肿瘤生长情况,再将皮下肿瘤组织进行裸鼠原位肝接种,观察接种后肿瘤肺转移情况.其中,转染空载体及未转染的MHCC97-H亲本细胞作为实验对照组.结果:正义组、反义组、空载体组及亲本细胞组裸鼠皮下均成瘤,肿瘤出现的时间、肿瘤块生长的速度无明显差异,生长方式上反义组表现出明显的侵袭性.原位肝接种6 wk后裸鼠肺部均出现癌巢,AFP染色可见癌巢中肿瘤细胞质有黄色颗粒沉着,证实为肝癌转移至肺形成的转移灶.与MHCC97-H亲本细胞组比较,反义组转移灶数目明显增加(P=0.0 0158),正义组转移灶数目明显减少(P=0.00465),差异均有显著性,而载体组转移灶数目无明显变化(P=0.15166).结论:肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤性及肿瘤生长无明显影响,但上调KAI1蛋白的表达水平能在一定程度上降低肿瘤的侵袭性、抑制转移的发生.这为肝癌的抗转移治疗研究提供了重要线索.

肝癌DC疫苗活化的CTL对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:本研究探讨肝癌DC疫苗活化的CTL对人肝癌裸鼠皮下抑制瘤的抑制作用.方法:将负载肝癌相关抗原DC经BCG HSP7 0活化后制成肝癌DC疫苗,用此肝癌DC疫苗诱导的肝癌特异性淋巴细胞预防和治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤,同时观察DC对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的直接预防作用和冷冻复苏后肝癌特异性淋巴细胞对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的预防和治疗作用.结果:DC对肝癌细胞的抑制率为97%,用冷冻复苏后的CTL预防人肝癌裸鼠皮下移植瘤,对肝癌细胞的平均抑制率为96%;冷冻复苏后的CTL治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤,对肝癌细胞的抑制率为98%.结论;本研究结果为肝癌DC疫苗的进一步深入研究及今后的临床应用奠定良好的基础.

LHRH类似物对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察LHRH类似物的体内抗肝癌细胞增生活性,为LHRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供实验依据.方法:实验选用5-7周龄♂BALB/c裸鼠20只,分治疗组(丙氨瑞林瘤内注射组)和对照组(生理盐水瘤内注射组),用人肝癌hHCC细胞系建立肝癌荷瘤裸鼠模型,观察LHRH类似物丙氨瑞林(LHRH-A)对裸鼠移植瘤生长的影响;并分别用H-E染色和免疫细胞化学技术检测瘤组织的病理组织学改变和GnRH受体及凋亡蛋白Bax表达的变化.结果:LHRH-A瘤内注射(剂量为75 μg/d)可显著抑制肝癌移植瘤的生长.治疗3 wk后治疗组裸鼠肿瘤体积(1885.9±738.3mm3)明显小于对照组裸鼠的肿瘤体积(4223.4±1027.6mm3),两组间有统计学差异(P＜0.005);LHRH-A治疗3wk后的抑瘤率可达58%;治疗组裸鼠存活期(87.8±5.3d)较对照组(64.6±6.8d)显著延长(P＜0.05);治疗3wk后病理组织学发现治疗组瘤组织中癌细胞核分裂象减少,腺样癌组织、凋亡细胞数增多;治疗组瘤组织中表达GnRH受体的癌细胞数增加(72.5% vs 56.4%,P＜0.05),Bax阳性细胞比率增加(53.8% vs 41.5%,P＜0.05).结论:LHRH-A具有显著抑制肝癌裸鼠移植瘤细胞增生的活性,LHRH受体和凋亡蛋白Bax可能参与了LHRH-A对肝癌细胞增生的抑制作用.

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对荷胃癌裸鼠的治疗

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI151融合基因治疗胃癌的可行性.方法:分别用500μL滴度为1×1012TCID50/L的粗制重组腺病毒AdCA13-hENDO-VEGI151或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次.后一次注射24 h后处死动物,检测肿瘤体积、抑瘤率、目的基因的表达、增生细胞核抗原指数(PCNA LI)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD).结果:注射AdCA13-hENDO-VEGI151的治疗组肿瘤体积为328±156mm3,注射AdLacZ的对照组肿瘤体积为2 356±1 140 mm3,差异显著(F=12.42,P=0.0125),抑瘤率为86.1%;重组腺病毒携带的目的基因均能在荷胃癌裸鼠肿瘤组织中表达;治疗组PCNA LI为0.13±0.09%,对照组为1.40±0.53%,差异显著(F=22.30,P=0.0033);治疗组AI为5.09±0.25%,对照组AI为0.61±0.67%,差异显著(F=155.13,P=0.0 001);治疗组MVD为0.06±0.03%,对照组MVD为1.09±0.76%,差异明显(F=7.38,P=0.0348).结论:重组腺病毒携带的融合基因能在荷胃癌裸鼠体内表达出有生物学活性的融合蛋白,并表现出一定的抑瘤效果.

TNP-470对结肠癌裸鼠腹水瘤生长的抑制作用

目的:研究血管生成抑制剂TNP-470对裸鼠荷人结肠癌腹水瘤生长的抑制作用.方法:采用MTT法检测TNP-470对结肠癌LOVO细胞的生长抑制作用.将LOVO细胞注入Balb/c裸鼠腹腔,建立结肠癌腹水瘤模型.30只裸鼠随机分成TNP-470组(30mg/kg,sc,qod)和对照组(给相同体积生理盐水).结果:TNP-470可抑制LOVO细胞的体外生长,IC50为2.14×102μg@L-1.两组裸鼠体质量分别为24.5±3.2g,29.5±2.1g;腹围分别为7.0±1.1cm,10.3±1.5cm;腹腔肿瘤结节数分别为40.3±12.3个,92.1±20.6个;腹腔大结节直径分别为3.3±0.7mm,7.3±2.3mm.统计分析表明:在鼠重、腹围、腹腔转移结节数、腹腔大结节直径等方面,TNP-470组与对照组比较均有显著性差异(P=0.005,p=0.001,P＜0.001,P=0.004).在累积生存率方面:治疗组和对照组的中位生存期分别为92d和40 d,两组裸鼠生存时间也有显著差异(P＜0.001).结论:TNP-470能有效地抑制结肠癌腹水形成和腹腔播散结节生长,提高荷瘤裸鼠的生存率.

腺病毒介导的p27kip1对食管癌裸鼠模型抑制的作用

目的:用腺病毒为载体,来研究p27kip1基因对食管癌的体内抑制作用.方法:用人食管癌细胞Eca109接种于裸鼠皮下,原代生长后在鼠间传代,再用组织块移植法构建食管癌裸鼠模型,应用直接注射法,将成功构建的携带人p27kip1基因的重组腺病毒及LacZ重组腺病毒导入裸鼠食管癌瘤体中,与对照组比较,绘制肿瘤生长曲线,并计算肿瘤生长抑制率.结果:p27kip1基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.001),肿瘤生长抑制率达64.1%.结论:腺病毒介导的p27kip1基因对食管癌具有较显著的体内抑制作用.

survivin反义寡核苷酸对人胆管癌裸鼠移植瘤及c-myc和cyclin D1表达的影响

survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的新成员[1],除了在胸腺和胚胎组织中有微量表达外,在终末分化的组织中不表达或极少表达,但可过度地表达于多种人类恶性肿瘤组织中.

裸鼠3.0 T MRI线圈选择的实验研究

影像研究中常用动物实验评价新技术、新设备以及日益更新的对比剂或疾病的治疗效果[1].国外多采用高或超高场强实验型MR仪和内径较小的线圈进行裸鼠成像研究[2-4],国内多数科研单位没有这种MR设备.为此,本研究采用Siemens Magnetom Trio Tim 3.0 T超导MR仪,对裸鼠进行成像研究,优化参数条件,观察在此参数条件下不同临床型线圈对裸鼠MR图像信噪比(SNR)的影响,优选适合裸鼠实验研究要求的成像线圈.

人肝癌转移模型体系的建立

原发性肝癌(以下简称肝癌)的死亡率在全世界所有癌症中占第三位[1],是我国第二位癌症死亡原因.经过几十年的努力,肝癌临床和基础研究取得了许多进展,手术切除是肝癌获得长期生存的主要手段,在某些临床中心,肝癌根治性切除后5年生存率可达到40%以上(我所治疗的肝癌病人的5年生存率在小肝癌切除术者中约为60%,大肝癌切除术者约为30%).但术后5年复发率高达60%以上(小肝癌也达40%～50%)[2].转移复发已成为进一步延长肝癌病人生存期、提高远期疗效的瓶颈问题,也是终攻克肝癌的关键.

过表达Mfn2对人乳腺癌裸鼠移植瘤血管表皮生长因子受体的影响

目的 探讨过表达线粒体融合素-2(Mitofusin-2,Mfn2)对表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)表达的影响及对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长、血管形成的影响.方法 分别构建稳定转染空质粒pEGFP-N1(MCF-7 pEGFP-N1)及转染Mfn2质粒的pEGFP-Mfn2(MCF-7 pEGFP-Mfn2)的MCF-7细胞稳系.分别将人乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7 pEGFP-N1、MCF-7 pEGFP-Mfn2接种于裸鼠右侧乳房垫内,观察裸鼠生长状况,每周两次测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线.5周后处死裸鼠,采用免疫组化验证肿瘤Mfn2蛋白的表达并检测CD34来观测肿瘤微血管密度(MVD),检测EGFR蛋白的表达情况.结果 pEGFP-Mfn2组肿瘤明显小于pEGFP-N1组和对照组(P＜0.05).pEGFP-Mfn2组微血管数目明显小于pEGFP-N1组和对照组(P＜0.05).pEGFP-N1组EGFR的表达与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组、pEGFP-N1组相比pEGFP-Mfn2组EGFR的表达明显降低(P＜0.05).结论 Mfn2明显抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长.下调EGFR表达、减少微血管生成可能为其抗肿瘤机制.

Gene-viral therapy, which uses replication-selective transgene-expressing viruses to manage tumors, can exploit the virtues of gene therapy and virotherapy and overcome the limitations of conventional gene therapy. Using a human telomerase reverse transcriptase-targeted replicative adenovirus as an antiangiogenic gene transfer vector to target new angiogenesis and making use of its unrestrained proliferation are completely new concepts in tumor management. CNHK300-mE is a selective replication transgene-expressing adenovirus constructed to carry mouse endostatin gene therapeutically. Infection with CNHK300-mE was associated with selective replication of the adenovirus and production of mouse endostatin in telomerase-positive cancer cells. Endostatin secreted from a human gastric cell line, SGC-7901, infected with CNHK300-mE was significantly higher than that infected with nonreplicative adenovirus Ad-mE in vitro (800±94.7 ng/ml versus 132.9±9.9 ng/ml) and in vivo (610±42 ng/ml versus 126 +/- 13 ng/ml). Embryonic chorioallantoic membrane assay showed that the mouse endostatin secreted by CNHK300-mE inhibited angiogenesis efficiently and also induced distortion of pre-existing vasculature. CNHK300-mE exhibited a superior suppression of xenografts in nude mice compared with CNHK300 and Ad-mE. In summary, we provided a more efficient gene-viral therapy strategy by combining oncolysis with antiangiogenesis.

荷载白介素24的溶瘤腺病毒联合达卡巴嗪对裸鼠黑素瘤的抑制作用

目的 研究荷载白介素24(IL-24)的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪抑制裸鼠黑素瘤的作用.方法 建立裸鼠恶性黑素瘤A375细胞移植瘤模型后,分别给予ZD55-IL-24联合达卡巴嗪、ZD55-IL-24、达卡巴嗪、磷酸盐缓冲液(PBS)干预.Western印迹法检测A375细胞移植瘤组织IL-24、E1A蛋白表达.测量裸鼠肿瘤生长体积.结果 Western印迹结果表明,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪作用的裸鼠黑素瘤高效表达IL -24、E1A蛋白.接种30 d后,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组肿瘤平均体积为(2346.5±576.0) mm3,ZD55-IL-24组为(4141.6±1348.2) mm3,达卡巴嗪组为(5230.1±922.8) mm3,PBS组为(7135.1±1002.3)mm3,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组与各组之间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 荷载IL-24基因的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪有抑制黑素瘤增殖的作用.

荷载白介素24的溶瘤腺病毒联合达卡巴嗪对裸鼠黑素瘤的抑制作用

目的 研究荷载白介素24(IL-24)的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪抑制裸鼠黑素瘤的作用.方法 建立裸鼠恶性黑素瘤A375细胞移植瘤模型后,分别给予ZD55-IL-24联合达卡巴嗪、ZD55-IL-24、达卡巴嗪、磷酸盐缓冲液(PBS)干预.Western印迹法检测A375细胞移植瘤组织IL-24、E1A蛋白表达.测量裸鼠肿瘤生长体积.结果 Western印迹结果表明,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪作用的裸鼠黑素瘤高效表达IL -24、E1A蛋白.接种30 d后,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组肿瘤平均体积为(2346.5±576.0) mm3,ZD55-IL-24组为(4141.6±1348.2) mm3,达卡巴嗪组为(5230.1±922.8) mm3,PBS组为(7135.1±1002.3)mm3,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组与各组之间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 荷载IL-24基因的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪有抑制黑素瘤增殖的作用.

基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2在乙酰肝素酶ASODN转染的裸鼠A375细胞移植瘤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)在乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)转染的裸鼠恶性黑素瘤移植瘤中的表达.方法 分空白组、无关序列(N-ODN)组、10 μmol/L ASODN组、20 μmol/L ASODN组和30μmol/L ASODN组5组,以脂质体包埋分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,后接种于裸鼠皮下,待成瘤后采用免疫组化SP法检测移植瘤中MMP2和TIMP2蛋白表达的变化.结果 各ASODN组裸鼠移植瘤中MMP2和TIMP2蛋白表达水平均较对照组、N-ODN组显著下调(P＜0.05)；ASODN3个浓度组(10、20、30 μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 乙酰肝素酶ASODN对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中的MMP2和TIMP2蛋白的表达有显著抑制效应.

特异性脐血DC疫苗对Beige裸鼠人结肠癌动物模型荷瘤免疫治疗作用的实验研究

背景：肿瘤免疫治疗目前在临床治疗中已广泛开展，但是临床上经过反复输注后，由于机体内肿瘤免疫抑制因素的增多出现了治疗效果下降的情况，严重影响了长期治疗效果，本实验通过构建二次成瘤模型尽可能的模拟人体的肿瘤发生及术后复发转移的肿瘤微环境，通过采用外源性脐血特异性Dc疫苗，起到改善体内免疫细胞功能，减少体内免疫抑制因素，从而达到改善肿瘤患者体内免疫微环境，发挥增强肿瘤免疫治疗效果的临床治疗目的。目的：通过成功构建SCID/Beige裸鼠人结肠癌动物模型，研究脐血来源特异性Dc疫苗对人源化免疫重建荷瘤裸鼠成瘤的免疫抑制作用。方法：分别选取健康志愿者外周血及正常分娩足月产孕妇脐带血，利用密度梯度离心法贴壁培养不同来源Dc细胞制备负载人结肠腺癌SW-1116抗原的特异性抗原提呈细胞，促其成熟后收获；选用健康雄性SCID/Beige裸鼠构建动物模型，将人SW-1116细胞接种于裸鼠腋窝皮下，观察并确定成瘤。空白对照组无任何预先处理，实验组、对照组及阴性对照组确定成瘤后自鼠尾静脉注入健康志愿者外周血PBMC行人免疫细胞微环境重建，在行二次荷瘤前24 h实验组给予脐血Dc疫苗尾静脉注射，实验对照组给予健康志愿者Dc疫苗尾静脉注射，阴性对照组给予健康志愿者无负载抗原的Dc疫苗尾静脉注射；经上述处理后在荷瘤裸鼠对侧腋窝皮下接种人SW-1116细胞，分别观察不同荷瘤组裸鼠二次荷瘤后的一般生活状态、成瘤时间、成瘤大小及瘤重。结果：空白组裸鼠双侧肿瘤生长快，裸鼠短时间内出现肿瘤破溃，部分出现活动差及死亡；经免疫预防处理后荷瘤裸鼠一般生活情况良好，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积较小，无破溃、坏死及裸鼠死亡；脐血来源Dc细胞能够负载人结肠癌细胞株SW-1116抗原，并进一步活化成熟发挥其专职抗原提成能力；脐血Dc实验组裸鼠瘤重及瘤终体积平均值明显小于对照组及阴性对照组，比较统计学差异显著。结论：脐血特异性DC疫苗能够改善外周血免疫细胞的免疫功能，促进增强其自身肿瘤免疫杀伤能力，对瘤细胞生长有明显抑制，延缓其肿瘤进展及程度，有积极的肿瘤免疫治疗作用。

In this study, immunotoxin (IT) was prepared by conjugating BAC5 and CT with SPDP. The effects of IT on NPC and its mechanisms were explored using double labeled with radioactive nuclides, immunography and electron microscope technique in vivo and in vitro. The specific concentration of BAC5 in the tumor area showed. The radioactivity rate of tumor/nontumor (T/NT) was up to 10.26. IT had cytotoxic effects both on the cultured CNE-2 cell line and tumor multicell spheroides. In vivo, the preliminary result indicated that IT also had a inhibitory action on the nude mice models bearing human NPC (Reported in another article). Under electron microscope, the necrosis and apoptosis of tumor cells were found. The membranes of most tumor cells were found intacted not or corrosined, some of them had the character of apoptosis, including reduce of tumor cells membrane villi, condensation of cytoplasm and pyknosis or cleavage of nuclear. There were many of apoptosis bodies, which were occasionally phagocytosed by tumor cells. The infiltration of immunocytoes in tumor tissue could be seen. The results indicated that BAC5 can specifically combine with NPC cells and BAC5-CT has the inhibitory effect on NPC in vitro and in vivo, mechanism of which may be related to the effects that ‘warhead' CT dissolute the membrane of tumor cells directly, or/and IT promote the infiltration of immunocytoes so as to induce the apoptosis of tumor cell.