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白细胞介素6和维甲酸诱导胃癌细胞凋亡研究
目的探讨重组白细胞介素6(IL-6)在体外对胃癌细胞凋亡的诱导作用.方法在细胞培养体系中加入IL-6诱导,维甲酸(RA)作为对照药物,用琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察IL-6和RA对SGC7901胃癌细胞DNA电泳、超微结构的影响.结果IL-6诱发胃癌细胞DNA出现典型的梯状改变较RA作用显著.电镜观察IL-6及RA作用胃癌细胞出现核固缩、染色体边集等凋亡改变.结论提示IL-6和RA促进SGC7901胃癌细胞凋亡,且随着剂量加大和时间增加,诱发凋亡程度增高.需进一步探讨IL-6治疗胃癌的可能性及价值.
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MMP-9在胃癌细胞中的表达及意义
目的:探讨MMP-9在人胃癌细胞SGC7901、BGC-823中的表达及意义.方法:选择两种不同的胃癌细胞(人胃癌转移淋巴结细胞SGC7901,人胃低分化腺癌细胞BGC-823细胞),采用细胞免疫化学SABC法对两种胃癌细胞中MMP-9表达情况进行检测和分析.结果:MMP-9在两种胃癌细胞中都高表达,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论:MMP-9在胃癌细胞SGC7901中的高表达与其细胞的转移能力密切相关.
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流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用
目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用.方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡峰及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.结果: 苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.
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参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响
目的:探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制.方法:以参芪抑瘤方3％,5％,10％含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase inhibitor,CDKN)1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测p27,p57蛋白表达情况.结果:不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低(P＜0.01),且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调(P ＜0.05,P＜0.01);Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调(P＜0.05,P＜0.01).结论:参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关.
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参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制
目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN) mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达.结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8g·mL-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25％,33.09％,34.50％;参芪抑瘤方含药血清(2.8g·mL-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18％,49.46％,36.46％;COX-2 mRNA表达量下降90％,PTEN升高89.72％;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P＜0.05).结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力.
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通莲汤对裸小鼠胃癌移植瘤组织形态学及外周血免疫因子的影响
目的:研究通莲汤对胃癌MGC803细胞荷瘤裸鼠组织形态学及对外周血免疫因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)和IL-8的影响作用.方法:胃腺癌MGC803细胞接种于Balb/C裸小鼠右前肢皮下,建立荷瘤模型,随机分为模型组(生理盐水10 mL·kg-1),消癌平组(1.8 g·kg-1),通莲汤高、中、低剂量组(1.5,0.75,0.37 g·kg-1),各组连续给药3周,再连续观察3周,6周后处死小鼠,分离瘤组织,HE染色,光镜观察组织形态结构;裸鼠眼球取血,分离血清,ELISA法检测血清中TNF-α,IL-6和IL-8含量.结果:高剂量通莲汤干预的裸鼠移植瘤瘤体微结构淡染,核分裂少见,中心出现大片坏死区;中、低剂量通莲汤干预的细胞组织形态学变化甚微.高剂量通莲汤可显著下调裸鼠外周血清TNF-α,IL-6和IL-8水平,分别为(33.82±14.43) ng·L-1,(45.49 ±15.61) ng·L-1和(132.09±29.51) ng·L-1,与模型组比较有显著性差异(P ＜0.05,P＜0.01).结论:较高剂量的通莲汤可促进裸鼠胃癌移植瘤组织坏死,其抑瘤机制与下调血清TNF-α,IL-6和IL-8等因子水平,增强免疫调节有关.
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羟基红花黄色素A对体外培养人胃癌细胞增殖、凋亡及周期的影响
目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃癌BGC803细胞培养上清液诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304、原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)异常增殖的抑制作用,探讨HSYA对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、周期的影响.方法:建立肿瘤细胞上清液刺激下异常增殖血管内皮细胞模型,通过MTT实验筛选肿瘤上清液佳作用浓度,观察不同剂量HSYA在不同时间点对异常增殖血管内皮细胞的作用;并以人胃癌BGC823细胞为研究对象,MTT法检测不同浓度HSYA对其增殖能力的影响,流式细胞仪检测HSYA对BGC823细胞凋亡及周期的影响.结果:一定浓度HSYA能抑制血管内皮细胞的异常增殖,抑制BGC823细胞的增殖,并促进其凋亡引发周期阻滞.结论:HSYA通过抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.
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参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响
目的：观察参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响，探讨其相关机制。方法以参芪抑瘤方不同浓度药物血清干预胃癌 MGC-803细胞后，MTT 法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期， qRT-PCR检测CDKN1B、CDKN1C基因表达，Western blot检测p27、p57蛋白表达。结果3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24、48、72 h，细胞增殖水平显著降低（P＜0.01），且与时间和剂量呈依赖关系；3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24 h后，G0/G1期细胞增多，S期细胞减少；qRT-PCR检测结果显示，与对照组和空白血清组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞CDKN1B、CDKN1C mRNA表达显著上调（P＜0.01）；Western blot检测结果显示，与对照组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞p27、p57蛋白表达显著上调（P＜0.01）。结论参芪抑瘤方药物血清可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖，其机制可能是通过调节CDKN1B、CDKN1C mRNA和蛋白表达，进而干预细胞周期。
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天花粉蛋白抑制胃癌细胞生长及其分子机制研究
目的 观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对人胃癌细胞SGC7901诱导凋亡的作用及机制.方法 应用荧光显微镜观察0、7、14、28μmol/L TCS对SGC7901细胞形态学的影响及细胞计数.应用流式细胞仪测定各浓度TCS对SGC7901细胞周期及凋亡的作用.应用Western Blot法观察SGC7901Caspase-9、Caspase-3、PARP、pERK、ERK蛋白表达.结果 TCS处理后的SGC7901出现了皱缩、变形,对SGC7901细胞的生长有明显的抑制作用,并且阻滞于S期.TCS诱导SGC7901发生凋亡,呈浓度依赖性(r=0.901,P＜0.05).Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达降低,呈浓度依赖性(r=-0.984,r=-0.991,r=-0.951,P＜0.05).并且随着TCS浓度的升高,ERK表达降低,呈药物浓度依赖性(r=-0.957,P＜0.05),TCS处理(7μmol/L和14μmol/L)激活ERK,磷酸化ERK升高(P＜0.05).结论 TCS可以抑制SGC7901细胞的生长,诱导细胞凋亡,其机制与ERK信号通路有关.
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中药胃康宁对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子的影响
目的 观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2(Cyclin dependant kinase2,CDK2)Cdk4、Cdk6和p16~(INK4a)、p27~(KIP1)mRNA及其蛋白表达的作用.方法 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂对SD大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4、Cdk6和p16~(INK4a)、p27~(KIP1)蛋白和mRNA的表达.结果 中药胃康宁能将增殖过程中的MGC-803胃癌细胞阻滞于G_0-G_1期,使之不进入或延迟进入S期(即DNA合成期),抑制胃癌细胞的生长;免疫组化法结果显示,与空白对照组比较,中药胃康宁高、中剂量组CyclinE和Cdk2,CyclinD2和Cdk4、Cdk6蛋白均有明显升高,而p27~(KIP1)、p16~(INK4a)蛋白则显著降低(P＜0.01);RT-PCR结果显示,中药胃康宁高、中剂量组均能明显降低CyclinD2、CyclinE、Cdk2和Cdk4、Cdk6 OPTD值,同时升高p27~(KIP1)、p16~(INK4a) OPTDI值(P＜0.01).结论 中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p27~(KIP1)、p16~(INK4a)的表达,这可能是中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制.
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熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901和人结肠癌细胞HT-29增殖
目的:观察熊果酸体外对人胃癌细胞SGC7901及人结肠癌细胞HT-29增殖的影响,并对其机制进行探讨.方法:体外培养人胃癌细胞株SGC7901及人结肠癌细胞株HT-29.用MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞增殖的影响;不同浓度UA处理细胞24h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hochest33258染色观察不同浓度UA作用24h细胞凋亡情况.结果:20～40mmol/L UA可抑制SGC7901、HT-29细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,其作用SGC7901细胞及HT-29细胞24h的药物半数抑制浓度(IC50)分别为(34.28±2.05) mmol/L和(43.23±1.94) mmol/L;20～40mmol/LUA作用24h后,SGC7901细胞及HT-29细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时SGC7901细胞、HT-29细胞发生凋亡,凋亡细胞随药物浓度升高而增多.结论:熊果酸对SGC7901细胞及HT-29细胞具有较强的增殖抑制作用,其机制可能与细胞毒作用、诱导凋亡有关.
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熊果酸体外抑制胃癌细胞SGC7901增殖及机制探讨
目的：探讨熊果酸（Ursolic Acid，UA）体外抑制胃癌细胞SGC7901增殖的作用机制。方法：人胃癌细胞株SGC7901常规培养于RPMI 1640培养基中，MTT法观察加入外源性PGE2前后UA对细胞增殖的影响；不同浓度UA处理SGC7901细胞24h后，倒置显微镜观察细胞形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡率；Westernblotting法检测环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2， COX-2）蛋白表达；放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）。结果：20～40mmol/L UA可抑制SGC7901的增殖，并呈浓度和时间依赖性，其作用24h的半数抑制浓度（IC50）为（34.28±2.05）mmol/L；外源性PGE2能够部分逆转UA对SGC7901细胞的增殖抑制作用；20～40mmol/L UA作用24h后，SGC7901细胞变圆，出现不同程度的漂浮；20～40mmol/L UA作用24h后，SGC7901细胞被阻滞于G0/G1期，并发生凋亡，凋亡率随药物浓度升高而增加；同时COX-2蛋白表达减少，其催化生成产物PGE2浓度下降。结论：熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制作用，其机制可能与直接的细胞毒作用、干扰细胞周期、下调COX-2表达、减少PGE2合成进而诱导凋亡有关。
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益气补肾方对胃癌细胞侵袭转移能力的影响
目的 探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响.方法 将胃癌SGC-7901细胞接种于RPMI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml 7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复3次,37℃、5％CO2培养箱孵育48h.采用MTT法检测不同浓度益气补肾方对SGC-7901细胞增殖的抑制率；采用RT-PCR法检测其对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的基因表达活性的影响. 结果 不同浓度的益气补肾方对SGC-7901细胞都有一定的抑制作用,以16mg/ml和32mg/ml浓度抑瘤作用较好,抑制率分别为53.17％和56.47％；MMP-2 mRNA在32mg/ml组同空白对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05),并且16mg/ml组也能下调MMP-2 mRNA的表达,但差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 益气补肾方能明显抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力,且以32mg/ml浓度好.
关键词： 益气补肾方 肿瘤转移 胃癌细胞 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶抑制酶-2 -
MicroRNA-29b重组慢病毒表达载体的构建及其抑制胃癌细胞系的迁移和增殖
目的 构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响.方法 将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体.pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共转染包装细胞系293TN,包装产生慢病毒.使用收获的慢病毒颗粒感染胃癌细胞系HGC-27,72 h后利用real-time PCR检测miR-29b在HGC-27内的表达水平,Western blot检测其靶基因MCL-1的表达.划痕实验和细胞增殖实验分别观察在HGC-27细胞中过表达miR-29b后细胞迁移能力及增殖能力的变化.结果 成功构建了miR-29b重组慢病毒的表达载体,感染胃癌细胞HGC-27后,能够成功过表达miR-29b.在HGC-27细胞中过表达miR-29b,其靶基因MCL-1的表达明显被抑制,并且Lenti-29b组与对照组Untreat组和Lenti-vector组相比,Lenti-29b组的迁移能力显著降低(P<0.01);Lenti-29b组与Lenti-vector组相比,Lenti-29b组在48、72及96 h 3个时间点的增殖能力均显著下降(P<0.01).结论 成功获得过表达miR-29b的重组慢病毒颗粒,miR-29b能够抑制其靶基因MCL-1的表达,并对HGC-27细胞的迁移和增殖有明显的抑制作用.
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VEGF-ASODN抑制裸鼠胃癌移植瘤微血管生长
目的 研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人胃癌移植瘤微血管的生长抑制作用.方法 人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数,ELESA法检测VEGF蛋白含量,MTT检测细胞生存力,细胞生长曲线检测细胞生长.建立裸鼠荷胃癌移植瘤模型.实验分为4组:(1)VEGF-ASODN组,(2)错义寡核苷酸组,(3)生理盐水组,(4)无荷瘤对照组.结果 VEGF-ASODN能降低胃癌细胞VEGF mRNA的水平,显著降低胃癌细胞及培养液VEGF蛋白含量,降低细胞生存力、抑制细胞生长.VEGF-ASODN还能显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、减小移植瘤的体积和重量、降低移植瘤微血管密度.结论 VEGF-ASODN抑制移植瘤微血管的生长.
关键词： 血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸 胃癌细胞 微血管 -
蟾蜍灵诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究
用MTT 法、形态学观察法、 DNA 电泳和流式细胞仪观察蟾蜍灵(Bufalin)诱导的胃癌细胞凋亡.结果表明,0.01mmol/L 蟾蜍灵作用 MGc-803细胞48 h,即可显著抑制细胞生长,IC50值约为0.1 mmol/L.琼脂糖凝胶电泳获得梯形图谱,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体峰,凋亡主要发生在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度和作用时间的增加而增高.以上结果提示,bufalin对胃癌细胞具有很强的抑制作用,诱导凋亡是其主要作用机制之一.
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花青苷联合氟尿嘧啶抑制体外胃癌细胞SGC-7901增殖
花青苷也称花色素,为植物主要显色物质,有较强的抗氧化活性,近年来又发现其抗肿瘤作用,正成为国内外研究热点[1].杨梅为中国特产水果,其果实富含花青苷,其中矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3 -glucopyranoside,C3G)为主要成分.本实验旨在明确C3G同氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)在胃癌细胞中联合应用的相互作用.
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RegⅠ在胃泌素促胃癌细胞体外增殖通路中的作用
目的 探讨再生蛋白I (RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用.方法 根据RegⅠ cDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利用脂质体2000转染试剂分别转染胃癌细胞BGC823细胞株、SGC7901细胞株,同时设转染空质粒的实验对照组和无质粒转染的空白细胞组.后经G418筛选建立稳定转染细胞株.RT-PCR检测RegⅠ基因mRNA的转录水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应.结果 酶切及测序鉴定,插入片段正确,3个RegⅠ-shRNA表达载体构建成功;RT-PCR显示,pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠ mRNA在胃癌细胞BGC823、SGC7901的转录.Western boltting结果显示,BGC823和SGC7901细胞的RegⅠ蛋白表达率分别下调到空载体对照组的(45±4)%和(53±4)%;MTT结果显示,RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系的增殖效率均降低(P＜0.05).胃泌素孵育后,胃癌细胞BGC823、SGC7901的增殖效率均增加(P＜0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系增殖效率则无明显改变(P＞0.05).结论 实验成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系; RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用.
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胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应
目的 探讨胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因转录因子的效应.方法 应用巢式PCR技术从胃癌细胞SGC7901基因组DNA扩增Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段,将该片段插入pMD19-T载体,序列分析鉴定.应用随机引物法以地高辛分别标记1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,经灵敏度检测后,作为探针.应用Genomatix MatInspector在线分析软件分析Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段的转录因子结合位点.分别以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17处理胃癌细胞SGC7901 48h,提取核蛋白.应用DNA-蛋白质印迹法(Southern blotting),分别以地高辛标记的1414bp、800bp和614bp片段为探针检测胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应.结果 1414bp探针可检测到20条蛋白主带.胃泌素孵育后,带型没有变化,但是一些条带的灰度值改变,带9、12、13、14、15和16的灰度值明显降低(P＜0.05)；不同浓度胃泌素处理组之间上述6个条带的灰度值差异不明显(P＞0.05).614bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和13,胃泌素处理后,此3条主带的灰度值明显降低(P＜0.05).800bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和14,胃泌素处理后,仅带14的灰度值明显降低(P＜0.05).614bp和800bp探针均未检出带15和带16.结论 胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达由多个转录因子协同调控.降低几个转录因子的结合活性可能是胃泌素上调胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达的途径之一.
关键词： Reg Ⅰ基因 胃泌素 转录因子 胃癌细胞 DNA-蛋白质印迹法 -
ZAC基因在奥曲肽抑制胃癌细胞体外增殖通路的作用
目的 探讨ZAC基因在生长抑素类似物奥曲肽(OCT)抑制胃癌细胞增殖通路的作用.方法 分别以不同浓度OCT处理胃癌细胞BGC823和SGC7901不同时间,MTT法筛选其增殖抑制的有效条件.OCT处理胃癌细胞(有效浓度/不同时间,有效时间/不同浓度),Western blotting检测OCT对胃癌细胞ZAC基因的效应.设计3条ZAC基因RNA干扰片段,分别插入pSUPER-EGFP-Ⅰ载体,构建3个ZAC-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-ZAC/1、pSUPER-EGFP-ZAC/2和pSUPER-EGFP-ZAC/3).经酶切和序列分析鉴定后,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901.经G418筛选,RT-PCR鉴定,建立ZAC基因敲低(knock-down)的胃癌细胞系.以有效条件OCT孵育胃癌细胞(对照组)和ZAC基因敲低胃癌细胞(实验组),MTT法检测OCT对胃癌细胞的生长抑制效应.结果 OCT抑制胃癌细胞增殖的有效条件为10nmol/L孵育24h;OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达.酶切及序列分析鉴定表明ZAC-shRNA表达载体构建成功.转染shRNA-ZAC/2的胃癌细胞,其ZAC mRNA水平明显降低(P＜0.05),为ZAC基因敲低胃癌细胞.ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖明显高于对应的BGC823细胞和SGC7901细胞(P＜0.05).OCT孵育后,BGC823细胞和SGC7901细胞的增殖明显降低(P＜0.05).然而,ZAC基因敲低胃癌细胞的增殖无明显改变(P＞0.05).结论 OCT以时间和浓度依赖的方式诱导胃癌细胞ZAC基因表达;ZAC基因在OCT抑制胃癌细胞增殖通路中具有重要作用.
