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天花粉蛋白抑制胃癌细胞生长及其分子机制研究
目的 观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对人胃癌细胞SGC7901诱导凋亡的作用及机制.方法 应用荧光显微镜观察0、7、14、28μmol/L TCS对SGC7901细胞形态学的影响及细胞计数.应用流式细胞仪测定各浓度TCS对SGC7901细胞周期及凋亡的作用.应用Western Blot法观察SGC7901Caspase-9、Caspase-3、PARP、pERK、ERK蛋白表达.结果 TCS处理后的SGC7901出现了皱缩、变形,对SGC7901细胞的生长有明显的抑制作用,并且阻滞于S期.TCS诱导SGC7901发生凋亡,呈浓度依赖性(r=0.901,P＜0.05).Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达降低,呈浓度依赖性(r=-0.984,r=-0.991,r=-0.951,P＜0.05).并且随着TCS浓度的升高,ERK表达降低,呈药物浓度依赖性(r=-0.957,P＜0.05),TCS处理(7μmol/L和14μmol/L)激活ERK,磷酸化ERK升高(P＜0.05).结论 TCS可以抑制SGC7901细胞的生长,诱导细胞凋亡,其机制与ERK信号通路有关.
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caspase蛋白在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展
caspase蛋白在促进细胞凋亡过程中发挥关键作用,在肝脏缺血再灌注损伤和对细胞凋亡过程的实验研究时,常可检测到caspase蛋白.现就caspase蛋白在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展作一综述.
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内质网应激与阿尔茨海默病
内质网(endoplasmic reticulum, ER)是细胞参与蛋白质翻译后的修饰、折叠和寡聚化,还参与钙的储存、脂质代谢和类固醇激素的合成,ER中钙离子紊乱和未折叠蛋白质蓄积可引发内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS),发生具有保护作用的未折叠蛋白反应,而长期过强的ERS或ERS机制失常将诱导细胞凋亡.阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种常见的神经系统变性疾病,近的研究表明AD与ER的功能障碍有关.深入研究ERS将为进一步探索AD的发病机制和治疗方案开辟新的思路.
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HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡诱导作用的机制研究
目的 评价HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡蛋白Caspase 3、8、9以及Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探究HPS-1抗肺肿瘤可能机制.方法 人肺腺癌A549细胞经低、中、高剂量HPS-1处理不同时间后,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)法检测各组细胞凋亡率及细胞周期比例,比色法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表达,RT-PCR法检测各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的增殖具有明显抑制作用,且具有时间、剂量依赖性;FCM法检测发现,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的凋亡具有促进作用,且与剂量呈正相关;比色法检测各组细胞发现,HPS-1促进凋亡蛋白Caspase-3、8、9的上调,且HPS-1高剂量组凋亡蛋白上调更明显.结论 HPS-1具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡作用,且该作用可能与HPS-1阻滞细胞周期G1期,上调凋亡蛋白Caspase-3、8、9及Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达有关.
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辛伐他汀通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡
目的 观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡不同时间的膜电位(△ψm),caspase-3、9和细胞色素C的改变,以推测其凋亡通路.方法 采用浓度为20 μmol·L-1的辛伐他汀处理K562细胞24、48、72 h,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3、9蛋白活性,免疫组织化学法检测细胞色素C蛋白.结果 浓度为20μmol.·L-1辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(6.1±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随着凋亡率增加线粒体膜电位降低分别为(39.6±4.80)%,(24.4±2.45)%,(6.0±1.62)%;caspase-3、9蛋白活性与对照组相比上调,细胞浆内细胞色素C升高.结论 辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时线粒体膜电位下降,caspase-3、9活性增高和细胞色素C释放.推测辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡可能经过线粒体凋亡途径.
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稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡
目的:建立稳定过表达微粒体谷胱甘肽S转移酶1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)基因的市腺癌SPC-A-1细胞系,探讨MGST1在肺腺癌中的作用及其机制.方法:重组质粒pcDNA3-MGST1和空载体pcDNA3以脂质体介导的方法转染至SPC-A-1细胞中,经过G418筛选稳转细胞系,标记为pcDNA3-MGST1细胞和空载体pcDNA3细胞.实时荧光定量PCR及Western blotting鉴定稳转细胞中MGST1 mRNA和蛋白的表达情况.MTS法检测稳转细胞的活力;流式细胞仪和Western blotting检测H2O2诱导下稳转细胞的凋亡率和下游凋亡相关蛋白水平变化.结果:酶切鉴定和测序结果显示pcD-NA3-MGST1重组质粒构建成功,并获得具有G418抗性的稳转细胞株.pcDNA3-MGST1细胞中MGST1在mRNA和蛋白水平表达均显著升高(P＜0.01),且细胞活力明显增加(P＜0.05).H2O2诱导下,pcDNA3-MGST1细胞的早期凋亡率明显低于pcDNA3组[(3.30±0.40)％vs(6.50±0.95)％,P＜0.05];pcDNA3-MGST1细胞凋亡相关蛋白caspase 9、caspase 3、PARP表达增多,cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、cleaved-PARP表达明显减少.结论:本研究成功构建了稳定过表达MGST1的SPC-A-1肺腺癌细胞系,MGST1可能通过调节caspase凋亡通路抑制肺腺癌细胞的凋亡.
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重组survivin腺病毒对喉癌细胞抗凋亡作用的体外实验
目的 观察survinvin基因对人喉癌细胞系HEP2的凋亡抑制作用及相关凋亡蛋白的表达变化.方法 重组survivin腺病毒感染喉癌细胞系后分别用MTT法、FACS、Western法检测转染细胞生长情况,并应用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱仪(surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析蛋白质谱的变化.结果 重组survivin腺病毒感染人喉癌Hep2细胞48h后,显微镜下可见明显的细胞生长旺盛;FACS检测见G1/S和G2/M期的细胞明显增多;Western法见凋亡相关蛋白CASPASE-3、CASPASE-10和CASPASE-11在病毒感染后表达减少;SELDI检测可见质荷比(m/z)分别为M4924_02、M8518_09和M2454_31的3个蛋白质峰在腺病毒感染组的峰度明显低于对照组.结论 重组survivin腺病毒在体外能够有效地抑制人喉癌Hep2细胞凋亡,并且其作用与Caspase-3、Caspase-10和Caspase-11有相关性.
关键词： 生存素 细胞凋亡 喉癌Hep2细胞 Caspase蛋白 SELDI-TOF-MS -
蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Caspase蛋白表达的影响
目的 观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞凋亡时Caspase蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测蛴螬提取物对A549细胞增殖的抑制率,透射电子显微下观察凋亡细胞的超微结构改变,运用S-P免疫细胞化学试剂盒检测Caspase3、Caspase8和 Caspase9的表达情况.结果 蛴螬提取物对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并出现典型的凋亡形态变化;加药组细胞Caspase3、Caspase8和Caspase9表达均增强.结论 蛴螬提取物诱导A549细胞凋亡过程中,激活了Caspase家族.
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线粒体融合素基因-2对肝癌细胞Caspase蛋白表达的影响及意义
目的 研究外源性线粒体融合素基因-2(mitofusin-2 gene,mfn2)对肝癌细胞Caspase蛋白表达的影响及意义.方法 用脂质体2000将质粒pEGFPmfn2、空质粒pEGFP-N2分别转染肝癌细胞株HepG2,分别检测转染后48 h HepG2细胞mfn2 mRNA的表达、蛋白表达及凋亡特异性蛋白酶Caspase3、Caspase 9及proCaspase 9蛋白表达的变化.结果 经脂质体2000转染后,HepG2细胞基因组中存在有目的 基因特异性片段,转染后细胞中有Mfn2蛋白表达;转染pEGFPmfn2组细胞中Caspase 3、Caspase 9表达明显增加(P＜0.05),而proCaspase 9的表达明显减少(P＜0.05).结论 外源性mfn2基因转染可激活Caspase 3、Caspase 9,进而激活细胞凋亡信号通路,这可能是mfn2基因诱导肝癌细胞凋亡的可能机制.
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基于CASPASE信号通路探讨白花蛇舌草调控胃癌凋亡的影响
目的:基于CASPASE信号通路探讨白花蛇舌草对胃癌凋亡的影响.方法:通过MTT法,流式细胞法观察人胃腺癌细胞系SGC-7901凋亡情况.应用Western Blot法检测凋亡过程中caspase-3,8的变化,通过观察caspase-3,8表达的变化,观察白花蛇舌草作用的位置.结果:白花蛇舌草能够使得caspase-3,8的表达增加.结论:白花蛇舌草作用于细胞凋亡的作用效果存在浓度依赖性.白花蛇舌草发挥抑制作用可能发生在S期.白花蛇舌草能够使得细胞内caspase-8的含量增加.白花蛇舌草可能通过caspase外源性通路作用于细胞凋亡.
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线粒体途径在大黄素促人混合培养淋巴细胞凋亡中的作用
目的：探讨大黄素促进人混合培养淋巴细胞凋亡的作用机制，为进一步研究大黄素的免疫抑制作用奠定实验基础。方法：建立混合淋巴细胞培养模型，给予不同浓度大黄素（1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L）培养24、48、72h后检测各组淋巴细胞凋亡、细胞内活性氧及线粒体膜电位情况。Western blot法检测共培养48h后淋巴细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-9、Bcl-2/Bax蛋白表达变化。给予还原性谷胱甘肽（ GSH）清除细胞内活性氧后，检测其对线粒体膜电位及淋巴细胞凋亡的影响。结果：随着培养时间和药物浓度的增加，大黄素对淋巴细胞增殖抑制和促凋亡作用逐渐增强，呈现浓度和时间依赖性。高浓度大黄素提高细胞内活性氧、降低线粒体膜电位水平，激活线粒体凋亡通路。使用还原性谷胱甘肽清除细胞内活性氧后，能够降低线粒体膜电位和淋巴细胞凋亡率。结论：线粒体信号途径的激活在大黄素促淋巴细胞凋亡中发挥重要作用。
