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  • 天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞调亡的分子机制研究

    作者:黄益玲;胡火军;黄利鸣

    目的:利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌Hela细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法:提取药物处理前后HeLa细胞RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-I 表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePix Pro 3.0软件分析.结果:两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞黏附及细胞间相互作用相关的MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下降,与细胞凋亡密切相关的NOP56、TNFSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调.结论:基因芯片技术能高通量分析天花粉蛋白作用于HeLa细胞的相关靶基因,为进一步揭示天花粉蛋白的抗癌机制提供了新的思路.

  • 天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响

    作者:黄益玲;黄利鸣;石新兰;陶彩云

    目的:研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24~72 h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达.结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,显微镜下观察到细胞圆缩,染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰,随着天花粉蛋白浓度的增加,Bax基因的表达增加而Bcl-2的表达减少.结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白的减少与Bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一.

  • 天花粉蛋白对子宫颈癌Hela田胞Survivi基因的影响

    作者:谭寒星;黄利鸣;王艳林;韩钰;刘朝奇;尤程程;黄玉蓉

    目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制.方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态;RT-PCR和Western blot 分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响;流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响.结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖;②rCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低;③YCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量.结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制.

  • 天花粉蛋白介导入肺癌A549细胞Caspase-3表达及相关JNK信号通路的研究

    作者:庄静;汪丛丛;吕庆亮;刘泽旺;秦宝宁;曹晓靖;孙长岗

    目的:探讨JNK信号通路在天花粉蛋白(TCS)诱导肺癌A549细胞凋亡信号分子caspase-3表达的作用及相关调节机制.方法:不同浓度的TCS处理人肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖活性,免疫印迹分析JNK、p-JNK的表达.选取JNK特异性抑制剂(SP600125),按随机数字表法分为对照组、SP组、25 μMTCS组、50μMTCS组以及TCS+ SP组,PCR法检测各组细胞Caspase-3 mRNA的表达.结果:TCS对人肺癌A549细胞株的生长抑制作用明显,呈时间和剂量依赖性.随着天花粉蛋白浓度的升高,磷酸化JNK表达水平明显高于对照组(P<0.05);而JNK表达水平与天花粉蛋白药物浓度无明显变化(P>0.05).胞内Caspase-3 mRNA的表达量随TCS浓度增加呈上升趋势,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.05).预先加入JNK特异性抑制剂,Caspase-3表达量相较于对照组减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:TCS可能通过抑制JNK通路的活化调控肺癌A549细胞caspase-3 mRNA表达,从而诱导细胞凋亡.

  • 浅论天然药物实验药理学研究方法

    作者:刘建勋;丛伟红

    目前,国外对天然药物活性成分的筛选和药理研究极为重视,发展也较快.如美国的Genelab等多家生物技术公司正从事天花粉蛋白的开发研究,因为已发现天花粉蛋白能抑制HIV的复制;由石蒜科植物沃氏雪莲花和水仙属植物提取得到的磷酸二酯抑制剂加兰他敏现被用于老年性痴呆的研究,英国Shire公司、奥地利Waldheim公司均已完成其Ⅱ期临床研究.

  • 黄山栝楼挥发油的成分分析及其生物活性的初步研究

    作者:徐礼英;张小平;蒋继宏

    黄山栝楼Trichosanthes rosthornii Harms var.huangshanensis S.K.Chen属葫芦科多年生草质藤本,产于黄山、歙县(清凉峰),生于海拔600~800 m的山坡灌丛和乱石堆中,是安徽特有的药用植物[1].其根有清热解毒、生津和止渴的功效,根中的天花粉蛋白有抗病毒、抗肿瘤的作用[2];其果实、果皮和种子有宽胸散结、清热化痰、润肺止咳等功效;其籽粒营养丰富,经过炒制加工,清香可口.

  • 天花粉蛋白抑制胃癌细胞生长及其分子机制研究

    作者:邓心燕;杨玉;胡仁豪;尹雪;戈雨桐;董小耘

    目的 观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对人胃癌细胞SGC7901诱导凋亡的作用及机制.方法 应用荧光显微镜观察0、7、14、28μmol/L TCS对SGC7901细胞形态学的影响及细胞计数.应用流式细胞仪测定各浓度TCS对SGC7901细胞周期及凋亡的作用.应用Western Blot法观察SGC7901Caspase-9、Caspase-3、PARP、pERK、ERK蛋白表达.结果 TCS处理后的SGC7901出现了皱缩、变形,对SGC7901细胞的生长有明显的抑制作用,并且阻滞于S期.TCS诱导SGC7901发生凋亡,呈浓度依赖性(r=0.901,P<0.05).Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达降低,呈浓度依赖性(r=-0.984,r=-0.991,r=-0.951,P<0.05).并且随着TCS浓度的升高,ERK表达降低,呈药物浓度依赖性(r=-0.957,P<0.05),TCS处理(7μmol/L和14μmol/L)激活ERK,磷酸化ERK升高(P<0.05).结论 TCS可以抑制SGC7901细胞的生长,诱导细胞凋亡,其机制与ERK信号通路有关.

  • 天花粉蛋白对肺癌A549细胞JNK、Bcl-2蛋白表达的影响

    作者:庄静;孙伟国;汪丛丛;刘瑞娟;吕庆亮;曹晓靖;孙长岗

    目的 观察天花粉蛋白(TCS)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法 取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,调整细胞浓度至2×104/ml,接种于96孔培养扳中预培养24h后加入TCS注射液,使每组合TCS终浓度分别为:0.04、0.08、0.12、0.16 mg/ml,每个剂量分别设4个复孔,并设正常细胞组作对照,细胞共育24 h.分别于24、48、72 h光镜下观测凋亡细胞计数,计算凋亡指数.选用JNK特异抑制剂SP600125,实验分为空白对照组、SP600125组(20nmol/L,100μl)、TCS组(0.12 mg/ml,100μl)、TCS加SP600125组(100μl),采用Western blot法检测各组JNK、Bcl-2蛋白表达水平. 结果 与空白对照组比较,除0.08 mg/ml组24h外,0.08 mg/ml组、0.12 mg/ml组、0.16 mg/ml组各时间点凋亡指数均明显升高(P <0.05或P<0.01);与本组24h比较,0.04 mg/ml组48 h和0.08 mg/ml组、0.12 mg/ml组、0.16 mg/ml组32 h、48 h凋亡指数均明显升高(P<0.05).与SP600125组比较,TCS组、TCS加SP600125组JNK蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与TCS组比较,TCS加SP600125组JNK蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05). 结论 TCS可能通过JNK信号转导通路的激活诱导肺腺癌A549细胞Bcl-2的表达下降,从而导致细胞凋亡.

  • 天花粉蛋白抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡之机制探讨

    作者:何金峰;李继承

    目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌HeLa细胞生长抑制作用及其机制,探讨HeLa细胞凋亡发生的分子机制.方法采用CCK-8的方法,检测TCS对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞仪检测TCS对细胞周期的影响;电子显微镜和Annexin法观察TCS对HeLa细胞诱导凋亡的作用;应用Western blotting观察HeLa细胞caspase-3酶原的变化;用caspases活性检测试剂盒,检测caspase-3,8,9的活性.结果1.TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用;2.TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;3.TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,HeLa细胞出现典型的凋亡特征--染色质浓缩和凋亡小体,且凋亡率具有时间依赖性;4.caspase-3酶原表达的降低呈现时间和浓度依赖性,而caspase-3活性随时间依赖性的增高,提示在TCS诱导HeLa细胞凋亡的过程中caspase-3被激活;5.caspase-8,9的活性增高,有时间依赖性,且具有时间顺序.100 mg/L TCS处理24h后,caspase-8早于caspase-3被激活,提示活化的caspase-8可能对caspase-3起到激活作用.结论TCS对HeLa细胞的抑制作用是通过将HeLa细胞阻滞于S期和诱导细胞凋亡来实现的.caspase-3的激活是介导TCS诱导HeLa细胞发生凋亡的通路,同时,活化的caspase-8,9可能参与了caspase-3的激活和凋亡的诱导.

  • 天花粉蛋白对小鼠卵母细胞第1次减数分裂的影响

    作者:吕瑞芳;吕丹瑜;李英;马万云;胡德庆

    目的 研究天花粉蛋白(TCS)对小鼠卵母细胞第1次减数分裂的影响. 方法 性成熟昆明雌鼠,注射孕马血清促性腺激素10IU后48h,从卵巢中获取未成熟卵母细胞共480枚,在含不同浓度TCS的培养液中,分组进行体外培养,解剖镜下观察并统计其生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PB1)排出率;免疫荧光染色、激光扫描共焦显微镜分析系统观察各组卵母细胞第1次减数分裂过程中纺锤体形成及染色体排列状况.结果 TCS浓度≤15mg/L时,卵母细胞GVBD率、PB1排出率及到达第1次减数分裂中期(MⅠ)的卵母细胞百分率无明显变化;TCS浓度为30mg/L和60mg/L时,到达MⅠ期的卵母细胞百分率降低(P<0.05),纺锤体形成和染色体排列出现异常,PB1排出率低于对照组(P<0.05);TCS浓度达到120mg/L时,MⅠ期卵母细胞的百分率显著下降(P<0.01),GVBD率下降(P<0.05),浓度为240mg/L时明显下降(P<0.01). 结论 TCS干扰第1次减数分裂重启及纺锤体形成和染色体排列,阻滞小鼠卵母细胞第1次减数分裂,且这种阻滞作用呈浓度依赖性.

  • 天花粉蛋白体外抗人白血病和淋巴瘤细胞的作用机制

    作者:王媛媛;欧阳东云;郑永唐

    本研究的目的是探讨天花粉蛋白(TCS)对人白血病和淋巴瘤细胞系的杀伤作用机制.用台盼蓝染色法检测TCS对细胞生长的影响,应用流式细胞术检测TCS诱导细胞凋亡的情况及对细胞生长周期的影响.结果表明:12.5μg/ml浓度的TCS可以显著抑制各种白血病细胞系的增殖,但对T淋巴细胞系和巨噬细胞细胞系表现为诱导细胞凋亡的作用,而对B淋巴瘤细胞系则表现为生长抑制效应.通过细胞周期检测发现,TCS可以将B淋巴瘤细胞系细胞阻滞在S期,从而抑制细胞增殖,但对T淋巴细胞系则无明显影响.结论:TCS以不同的作用机制杀伤白血病细胞,根据不同的细胞类型分别表现为诱导细胞凋亡和阻滞细胞生长周期的作用.

  • 天花粉蛋白诱导NB4人白血病细胞凋亡研究

    作者:罗文达;任昌明;朱敏;陈葆国;李伯利;戴美珍;郭群依

    为了研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)诱导人类白血病细胞株NB4细胞的凋亡及增长抑制的影响,采用流式细胞术分析NB4细胞经TCS诱导后细胞膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ)表达及线粒体膜电位(△ψm)的改变;用MTT比色法测定TCS对NB4细胞的增长抑制率,用琼脂糖凝胶电泳做细胞凋亡DNA分析.结果表明:①TCS对NB4细胞具有明显的增长抑制作用,并随TCS浓度的升高及作用时间的延长,抑制现象愈加显著;②NB4细胞经TCS诱导后,annexin Ⅴ呈阳性表达,随作用时间延长阳性率进一步升高;③线粒体△ψm随着凋亡细胞的增加而逐渐降低;④DNA电泳呈梯状条带,表明TCS对NB4细胞确实存在诱导凋亡作用.结论:天花粉蛋白在体外能够明显抑制NB4细胞的增长,并诱导细胞凋亡,为今后TCS应用于急性早幼粒白血病的临床治疗提供重要的实验依据.

  • 天花粉蛋白抑制T细胞增殖的免疫学机制研究

    作者:王保龙;周芸;江阳;辛利军;周洪;周光炎

    目的研究天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的免疫学机制. 方法应用淋巴细胞体外增殖抑制试验,分别对丝裂原ConA、可溶性抗原OVA及CD3联合CD28 McAb三种T细胞增殖系统进行Tk诱导免疫抑制的剂量依赖性试验.建立OVA特异性的T细胞系(Tova),观察Tk对由IL-2-IL-2R信号介导的T细胞增殖的抑制作用.用FACS测定Tk处理过的脾脏单个核细胞(SMC)的凋亡.分离骨髓诱导产生未成熟的DC(iBDC),比较Tk冲击处理前后DC激活T细胞增殖能力的差异.用Tk冲击处理Tova,观察Tk冲击处理前后T细胞增殖能力的变化. 结果低剂量的Tk(1 ng/ml~500 ng/ml)对OVA增殖系统有强烈的抑制作用,对ConA增殖系统抑制较弱,而对CD3联合CD28 McAb及IL-2增殖系统的T细胞增殖几乎无抑制作用.在5 μg/ml的浓度以下,Tk不诱导SMC凋亡.Tk冲击处理过的iBDC提呈OVA激活特异性T细胞的能力明显下降;而Tk冲击处理过的Tova增殖能力没有受到影响. 结论 Tk通过影响APC来诱导免疫抑制.

  • 天花粉蛋白用于前置胎盘中孕引产临床观察

    作者:姚青峰;李红瑜

    目的:观察天花粉蛋白在治疗前置胎盘中孕引产中的治疗效果,探讨其治疗作用.方法:对50例B超确诊为前置胎盘无阴道出血或者阴道少量出血要求终止妊娠的妇女,应用天花粉蛋白进行引产.结果:50例妇女中有49例胎儿、胎盘经阴道完整排出,出血<200ml,1例因引产过程中阴道出血多改行剖宫取胎术终止妊娠.结论:天花粉蛋白用于前置胎盘中孕引产安全、有效,出血量少,能避免剖宫取胎术,减少了子宫切除的机率.

  • 天花粉蛋白治疗异位妊娠疗效观察

    作者:姚玉君

    目的:观察天花粉蛋白注射液治疗异位妊娠的有效性和安全性.方法:300例异位妊娠随机分为研究组和对照组各150例.研究组采用天花粉蛋白注射液治疗,对照组采用甲氨蝶呤配伍米非司酮治疗,观察比较2组治疗成功率和副反应.结果:研究组治疗成功 123例,成功率82%,对照组治疗成功121例,成功率80.6%,2组成功率比较差异无统计学意义(P>0.05).对照组和研究组患者经过治疗后,患者体内的β-HCG和孕酮都出现了明显的下降,差异有统计学意义(P<0.05),但研究组的下降水平要优于对照组,2组之间的差异较大,具有统计学意义(P<0.05),研究组患者发生副反应的几率低于对照组,2组之间的差异较为显著,有统计学意义(P<0.05).结论:天花粉蛋白注射液能有效治疗异位妊娠,副反应较少.

  • 天花粉蛋白抑制肝细胞癌肺转移的实验研究

    作者:孙健;吴志全;薛琼;陈军;陈洁;汤钊猷

    目的观察天花粉蛋白(TCS)抑制肝癌肺转移及可能机制.方法应用LCI-D20模型观察荷瘤裸鼠肺转移;采用MHCC97H细胞株观察TCS对瘤细胞粘附、运动及侵袭的干预.结果 TCS组肺转移率为41.7%(5/12),对照组为100%(20/20),差别有显著统计学意义(P<0.01).MHCC97H与纤连蛋白粘附力强,粘附百分比为74.3%.TCS降低粘附力,作用呈剂量依赖性.80μg/ml组粘附率仅相当于干预前的47.8%.MHCC97H运动力强,未干预组穿膜细胞数47.67±4.03/200倍视野.TCS抑制瘤细胞运动,作用呈剂量依赖性.10 μg/ml组穿膜细胞数仅相当于干预前的51.0%(24.33±1.50/200倍视野).MHCC97H侵袭力强,未干预组穿膜细胞数34.90±4.86/200倍视野.TCS抑制瘤细胞侵袭,作用呈剂量依赖性.5 μg/ml组穿膜细胞数仅相当于干预前的53.8%(18.77±4.81/200倍视野),抑制明显.结论 TCS通过干扰MHCC97H与细胞外基质粘附、抑制MHCC97H运动和侵袭力,减少LCI-D20肺转移.

  • 天花粉蛋白对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用

    作者:唐文皓;吴志全;樊嘉;陈军

    目的探讨天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用.方法采用人肝癌原位移植模型.将24只裸小鼠分为TCSI组、TCSlⅡ组、TCSⅢ组和对照组,TCS剂量分别为0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.6 mg/kg,对照组用生理盐水0.2 ml/只腹腔注射,共10次.第21天称瘤重和裸小鼠体重,计算抑癌率.应用免疫组织化学技术,检测瘤组织中Ki67的表达.结果对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均瘤重分别为0.99g、0.81 g、0.22 g和0.20 g.用药组瘤重与对照组相比有显著性差异(P<0.05).TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组抑癌率分别为18.18%、77.78%、79.80%.对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均鼠重增加为2.22 g、1.22 g、0.28 g、-2.37 g.用药组与对照组鼠重变化有显著性差异(P<0.05).对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67蛋白阳性表达百分率分别为31.33%、29.92%、10.25%和9.67%.TCSⅠ组Ki67百分率与对照组相比无显著性差异(P>0.05).TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67百分率与对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论 TCS对荷人肝癌裸小鼠的移植瘤有明显的抑癌作用.TCS抑制肿瘤细胞增殖可能是其抑癌的机制之一.

  • 栝楼愈伤组织和块根中天花粉蛋白相对含量的比较研究

    作者:李喜文;佟宏霞;李青山

    目的:分析离体培养的栝楼叶片愈伤组织中天花粉蛋白(TCS)的相对含量,并与栝楼块根进行比较。方法:采用丙酮沉淀方法,获得栝楼叶片愈伤和块根的蛋白提取物。应用免疫扩散反应、SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳和电泳图谱的薄层扫描技术进行检测分析。结果:栝楼愈伤组织提取物中TCS的相对含量高,占被分析的4种总蛋白量的44.22%。但其TCS的绝对含量明显地低于块根中的含量。结论:栝楼块根中TCS的绝对含量高于栝楼叶片愈伤组织,大约是愈伤组织的2.66倍。

  • 天花粉蛋白诱导Syk(L)基因去甲基化抑制喉癌Hep-2细胞生长研究

    作者:金巧智;李志海;蔡志毅;陈武兵;王雪

    目的 探讨天花粉蛋白通过全长型脾络氨酸激酶[full-length form of spleen tyrosine kinase,Syk(L)]基因去甲基化途径恢复Syk(L)表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭迁移的的抑制作用.方法 采用CCK-8法及Transwell实验检测不同浓度天花粉在不同时间点对Hep-2细胞增殖及处理72h后细胞侵袭迁移能力的影响;采用MS-HRM法、Q-RT-PCR及Westernblot法检测不同浓度天花粉蛋白对Hep-2细胞Syk(L)基因甲基化水平及其表达的影响.结果 CCK-8结果显示,天花粉蛋白对喉癌Hep-2细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度、结果时间依赖性;Transwell结果显示,天花粉蛋白能显著抑制Hep-2细胞的侵袭迁移能力;MS-HRM结果显示,天花粉蛋白可以逆转Hep-2细胞Sky(L)基因的高甲基化状态,恢复Syk(L) mRNA及蛋白的表达.结论 天花粉蛋白通过逆转Syk(L)基因启动子CpG岛的甲基化状态,使喉癌Hep-2细胞中Syk(L)基因表达活化,恢复Syk mRNA及蛋白的表达,终发挥抑癌基因的作用抑制Hep-2细胞恶性生物学行为,具有开发并成为抗肿瘤药物的潜在价值.

  • 天花粉蛋白抗肿瘤作用及机制的研究进展

    作者:周海祥;卜平;董小耘;高云飞;孟杰依;邓心燕

    天花粉蛋白(TCS)是一种分离提纯于中药瓜蒌块根中的碱性植物蛋白,属于Ⅰ型核糖体失活蛋白,具有RNA N-糖苷酶活性,能够水解真核细胞核糖体28S rRNA特定位点的腺苷酸,从而抑制细胞蛋白质的合成,因此TCS具有多种药理学活性.TCS起先用于引产,治疗葡萄胎、宫外孕等妇科疾病,伴随研究深入,发现TCS在抗病毒、调节免疫和抗肿瘤等方面亦具有良好作用.多数学者对于TCS的抗肿瘤作用尤为重视,体内外研究发现TCS具有多系统抗肿瘤作用,效果明显.虽然对于TCS的抗肿瘤机制研究报道很多,但尚未有明确统一阐述.

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