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阿地福韦在慢性乙型肝炎治疗中的应用
核苷类似物在慢性乙型肝炎治疗中具有广阔的应用前景.阿地福韦(Adefovir)是核苷类似物的一种.在体外实验证实阿地福韦对体外培养的鸭肝细胞、人肝癌细胞系中的乙型肝炎病毒(HBV)的复制和表达具有显著的抑制作用.动物体内实验研究表明,阿地福韦对于体内的肝炎病毒的复制和表达也具有显著的抑制作用.I期临床试验研究表明,阿地福韦对于乙型肝炎病毒具有显著的抑制作用.在长期应用核苷类似物如拉米夫定等治疗的过程中,容易发生病毒基因的突变,从而产生抗药性.研究表明,阿地福韦不仅对于野生株具有显著的抑制作用,而且对于拉米夫定等的耐药病毒株也具有显著的抑制作用,提示阿地福韦可能是解决乙型肝炎病毒核苷类似物耐药问题的有效治疗办法.
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乙型肝炎病毒基因型对阿德福韦酯抗病毒疗效的影响
目前治疗慢性乙型肝炎重要和有效的方法是通过抗乙型肝炎病毒(HBV)药物抑制病毒复制[1].核苷(酸)类似物具有高效、低毒、服用方便等特点,在临床上得以广泛应用[2].阿德福韦酯是一种新型核苷(酸)类抗病毒药物,临床研究表明阿德福韦酯对HBV野生株以及对拉米夫定及其他抗HBV药物出现耐受变异株的HBV均有很强的抗病毒活性.探讨HBV基因型和抗病毒疗效的相关性及其机制,对于指导临床选择有效抗病毒药物、预测抗病毒疗效具有重要的参考价值和理论意义.笔者观察了不同HBV基因型对阿德福韦酯抗HBV疗效的影响,现将结果报告如下.
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戊型肝炎病毒的传播与控制研究进展
戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是20世纪80年代初认识的一种病毒性肝炎.是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的急性自限性肝炎,又称为肠道传播型非甲非乙型肝炎病毒,归类于萼状病毒科.Meng等[1]1997年首次从美国本地猪中分离出野生株HE病毒,由此也揭示了动物作为戊型肝炎传染源的可能性.戊型肝炎其临床表现与甲型肝炎相似,起病急,以乏力、消化道症状(腹胀、纳差、恶心、呕吐)尿黄、发热为主要症状、体征,以巩膜、皮肤黄染为主,多数伴有胆囊受累、表现为胆囊区压痛,与胆红素代谢、排泌、贮存异常有密切关系[2].
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内源性TNF-α对HBV转染细胞HLAⅠ表达的诱导作用
HLAⅠ分子组成性表达于各种有核细胞表面,细胞因子可通过旁分泌或自分泌效应诱导其表达增强.Zhou等[1]实验表明HBV能增强HepG2细胞的HLAⅠ表面表达,排除细胞内IFN-β的产生和介导作用.为进一步研究其它内源性细胞因子的介导作用,我们构建HBV基因组野生株(WT)及核壳蛋白变异株L97稳定表达载体,探讨TNF-α对HBV转染细胞HLAⅠ表达的调节作用.
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变形链球菌耐酸性缺陷株的构建
变形链球菌(简称变链菌)是主要的致龋菌,耐酸性是其关键的毒力因子,但对其基因调控机制并未明了.本实验欲用转座子Tn917随机诱变变链菌野生株UA159,筛选耐酸性变异的突变株,以便于找到一个与耐酸性相关的调控基因.
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错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用
耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一.利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法,错配PCR法等[1-2].错配PCR技术早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查,目前已广泛应用于基因点突变的检测[3-4].根据PCR引物设计的不同,可将其分为间接错配PCR,即引物与野生型完全互补,以突变株为模板不能扩增得到PCR产物,和直接错配PCR,即引物与特定的点突变完全互补,以野生株为模板不能扩增得到PCR产物.已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道[5-6].本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象,建立了直接错配PCR法,并与间接错配PCR法进行了比较.
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HBV YMDD变异相关因素的分析及防治对策
近年来,国内外专家对治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝,CHB)已形成了共识[1-5],认为抗病毒是治疗CHB的重要关键环节.临床研究发现:HBV在人体存在的形式是野生株与各种变异株混合存在,HBV本身致病性有限,肝脏的病理改变主要是机体的免疫系统在清除病毒过程中引起的免疫损伤.
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ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异
目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法.方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5'TTTAAA3'),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.同时PCR扩增2份已行HBVRT区基因测序证实未出现rtN236T变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒,扩增产物经DraI酶切,30 g/L琼脂糖凝胶电泳后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析.结果:所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高,可以检测到106copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致.结论:ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用,适用于ADV耐药变异的临床监测工作.
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乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-Ⅰ表达
目的:研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-Ⅰ/抗原肽复合物的表达.方法:通过定点突变技术将1.2拷贝HBV野生型质粒p3.8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97.经序列测定和生物学活性检测后,野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达.重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定,再用脂质体介导转染HepG2细胞,ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原,转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色,流式细胞术分析细胞表面HLA-I表达.结果:3株重组载体经内切酶消化,电泳后显示2条区带,分别与1.2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同.测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078 C→G和nt2189 A→C,保持原定点突变.EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S/CO值明显高于变异株V60和L97,3株HBsAg定量S/N值接近,HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当.EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达,3株重组载体转染细胞HLA-I的荧光强度不同,野生株增强为18.2,L97明显升高至34.5,而V60降低至3.4.结论:HBV能增强HepG2细胞表面HLA-I/抗原肽复合物的表达,核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-Ⅰ表达发生变化.
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鼠肝炎病毒3型N蛋白Ⅰ区激活mfg12凝血酶原酶基因
目的:研究鉴定激活mfgl2凝血酶原酶基因之冠状病毒3型或A59型鼠肝炎病毒(MHV-3,MHV-A59)核心(N)蛋白的功能区域.方法:应用定点突变技术、与mfgl2启动子共转染实验明确mfgl2凝血酶原酶基因之MHV-3或MHV-A59 N蛋白的功能区域.N蛋白内含Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞、Ⅰ基因表达载体与mfgl2启动子共转染实验阐明Ⅰ蛋白在mfgl2基因激活中的作用.结果:N蛋白包含由两个可变间隔区(A,B)隔开的三个结构区(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),MHV-A59N蛋白Ⅰ区可增强mfgl2转录活性,当其基因序列突变为非嗜肝性MHV-JHM或MHV-21区序列时,则丧失激活mfgl2启动子转录活性的功能.Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞后对mfgl2的激活无显著差异,共转染实验阐明Ⅰ蛋白并非mfgl2基因激活中的必备因素,该组mfgl2启动子转录活性与对照组无显著差异,而N蛋白可激活mfgl2启动子,使其转录活性提高62倍.结论:鼠肝炎病毒N蛋白Ⅰ区为激活mfgl2凝血酶原酶基因的病毒蛋白功能区域.
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结核病化疗细菌学监控的分子标记物
成功的结核病化疗依赖于对结核病患者和感染的结核分支杆菌野生株诸多影响结核病转归因素的明确的了解,从而制定恰当而合理的抗结核治疗方案.不幸的是,我们面对一个个就诊的结核病患者时,医生往往无法及时获得这些信息.虽然如此,医生仍不得不立即制定一个治疗方案进行治疗.这样就出现了方案是否恰当和佳的问题.患者的终治疗结果也只能依据群体资料推定的治愈几率寄以期望.为此,目前需要一个化疗预示和监控的概念和方法.文中仅就结核病化疗中细菌学监控问题进行一些思索.
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替诺福韦酯治疗慢性乙型肝炎临床研究进展
替诺福韦酯(tenofovir disoproxil fumarate,TDF)是一种单磷酸腺苷的无环磷酸化的核苷酸类似物,其二磷酸盐是人类免疫缺陷病毒(hmuanimmunodeficiency virus ,HIV)和乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逆转录酶抑制剂.该药已于2001年被美国食品药品管理局(Food andDrug Administration,FDA)批准用于HIV感染的治疗;并在HIV和HBV重叠感染的患者中显示出对HBV野生株和拉米夫定(lamivudine,LAM)耐药株均有很强的抑制作用.
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慢性乙型肝炎的抗病毒治疗(下)
(接第17期)2.5.1拉米呋啶(LAM)药代动力学:适应证:LAM治疗特种乙肝评价包括:注意事项:在LAM治疗期,每3个月必须检测肝功能、HBV DNA定量、HBeAg和抗HBe,以早期发现YMDD变异和病情变化,决定治疗方案.如个别病人HBeAg尚未转阴,病情加重,应查明原因,进行相应处理,加强保肝治疗.切勿马上停用LAM,引起野生株复制反弹,激发免疫清除,反而加重病情,这时加用其他安全抗病毒药为妥.
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单纯疱疹病毒1型诱导的Hela细胞凋亡及钙浓度的变化
一方面认为宿主细胞可利用细胞凋亡来清除病毒感染细胞;另一方面病毒可以抑制细胞凋亡,以利于自身增殖需要.而病毒诱导细胞凋亡还是抑制凋亡,取决于多方面因素.Leppardi研究表明野生株HSV-1感染Vero细胞并不引起Vero细胞凋亡,但缺乏调节性基因α4的HSV-1突变株却可诱导Vero细胞凋亡[1];另外尚有许多报道认为HSV-1诱导或抑制细胞凋亡除与 HSV-1的基因有关,还与被感染细胞类型密切相关.
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乙肝病毒基因组1896位点变异株与野生株的快速检测
目的 建立一种能同时检测乙肝病毒基因组1896位点变异株与野生株的快速检测方法.方法 设计5条特异性引物和1条特异性探针,分别克隆出含变异株与野生株的质粒作标准模板,利用荧光定量PCR检测乙肝病毒基因组1896位点变异株与野生株.结果 本次实验共检测30个标本,有7个标本只检测到野生株,4个标本只检测到变异株,其余19个标本是变异株与野生株混合感染.结论 本法是可行的能同时检测乙肝病毒基因组1896位点变异株与野生株的快速方法.
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HBV前C区变异与细胞免疫功能及肝损害的关系
本文通过对各种肝病患者HBV前C区变异株与野生株感染组之间T细胞亚群及TNFa、IL-6两种细胞因子的比较,探讨其在肝炎发病机制中的意义.
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乙型肝炎病毒前核心区及基本启动子变异对干扰素抗病毒治疗应答的影响
乙型肝炎病毒(HBV)在慢性感染过程中具有适应性和变异性的倾向,在内源性(宿主免疫清除)和外源性(疫苗、抗病毒药物)选择压力下更易产生免疫逃逸的变异株[1].HBV变异常出现某些特定位点,如前核心区(前C区nt1896)及启动子(BCP,nt1762/1764)变异.在HBeAg阳性患者极大多数是野生株,而HBeAg阴性患者极大多数是变异株.我们采用微流基因芯片检测280例慢性乙型肝炎患者血清前C区nt1896及BCP变异,其中94患者予干扰素α2b抗病毒治疗,进一步探讨其对慢性乙型肝炎抗病毒治疗的影响.
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阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的生化学应答预测因素分析
阿德福韦酯(ADV)对HBV野生株和拉米夫定耐药变异株均有活性,且耐受性好,不易出现耐药[1].但临床中ADV治疗慢性乙型肝炎(CHB)时,有的疗效较好,有的疗效欠佳,而影响疗效的因素主要包括宿主及病毒.TNF-α是具有广泛生物活性的细胞因子,其单核苷酸多态性反映了不同种族和个体之间的遗传差异[2];而HBV基因型是否影响ADV疗效,相关研究也未得出较一致的结论.为此,本研究同时分析宿主和病毒因素,探讨ADV治疗HBeAg阳性CHB患者48周生化学应答的预测因素,以期提高疗效.
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乙型肝炎病毒前C区A83变异株在肝硬化中的感染状况及性别差异
已有的研究证明乙型肝炎病毒(HBV)前C区A 83变异株感染与肝炎病变慢性化有关[1],但变异株感染是否引起有别于野生株感染的临床表现和预后,尚缺乏系统的量化分析.我们选择典型的慢性肝炎晚期病型--HBV相关的肝硬化153例为研究对象,在测定血清A 83变异株感染状态的基础上,对同一病型中变异株感染和野生株感染病例的主要临床资料进行了比较,结果报告如下.
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cag致病岛在幽门螺杆菌致病与免疫防治中的作用
细胞毒素相关基因蛋白致病岛(cag PAI)在幽门螺杆菌(Hp)致病与免疫防治中的作用存在争议,本研究应用3对cag PAI野生株与cag PAI基因"敲除"(knock out)的突变株对此进行了研究.