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某健齿露防龋功能性评价的实验研究
目的评价某健齿露对龋齿的预防作用.方法离体试验:将一定浓度的样品加入变形链球菌培养管中,培养一定时间,经革兰氏阳性染色和分光光度计测量观察变形链球菌的生长情况,测定其百分粘附率,并用酸度计测定细菌产酸后pH值.动物试验:采用变形链球菌建立大鼠龋损模型,设立空白对照组,低、中、高三个剂量组,每日给样,连续40天后处理动物,观察各组大鼠磨牙患龋情况,参照keyes经典龋齿计分标准进行龋齿计分.结果变形链球菌生长正常,但易形成长链,粘附率降低.pH值升高,大于6.动物实验表明:实验组与对照组龋损程度、龋齿计分之间差异有显著性(P＜0.01).结论该样品能减少龋损的形成,有效降低大鼠龋病的发生、发展,有一定的防龋功能.其防龋机理在于该样品可促进变形链球菌凝集,抑制变形链球菌在玻璃上的粘附,降低变形链球菌产酸.
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变形链球菌在儿童口腔内的定居时间与喂养方式和饮食习惯的关系研究
目的 研究变形链球菌在儿童口腔内的定居时间与喂养方式和饮食习惯的关系.方法 选取2015年6月～2016年6月我院儿童口腔科收治的的患儿100例作为研究对象,进行回顾性分析,对所有研究对象喂养方式和饮食习惯进行收集,并对所有患儿进行变形链球菌检测,对比变形链球菌阳性与阴性对象喂养方式和饮食习惯差异情况,分析变形链球菌在儿童口腔内的定居时间与喂养方式和饮食习惯的关系,并给予针对性预防措施.结果 所选取调查对象中共有56例儿童口腔内检查出变形链球菌,占56.00％.在断奶时间、喂养方式、辅食种类、饮食规律、零食次数、夜间进食次数、入睡习惯上,变形链球菌阳性与阴性对象相比,差异统计学意义(P＜0.05).上诉情况均是儿童口腔内变形链球菌过早定居的影响因素.结论 喂养方式和饮食习惯是儿童口腔内变形链球菌过早定居的主要影响因素,临床应针对性采取相关措施,指导父母在日常生活中的注意事项,避免变形链球菌过早定居,减少龋病的发生率.
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光动力疗法对变形链球菌抑制效果及作用机制初探
目的 探析光动力疗法对变形链球菌的抑制作用.方法 选取30颗恒牙标本制成釉质块,并置入人工唾液孵育形成人工获得性膜,再放入菌悬液孵育成人工龋后,将其均分为3组[单纯光敏剂组(A组)、PDT组(B组)、阴性对照组(C组)],每组各10块.按分组进行相应处理后,对三组菌落数及抗菌率进行比较.结果 三组菌落数及抗菌率之间比较均有统计学差异(P<0.05);其中B组菌落数显著低于其他两组,抗菌率显著高于其它两组(P<0.05).结论 PDT可有效抑制变形链球菌的生长.
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变形链球菌在义齿合金表面黏附的相关因素分析
目的:模拟口腔变形链球菌浓度和可摘局部义齿佩戴时间,研究菌液浓度和浸泡时间对变形链球菌在钴铬合金(CoCr)表面黏附的影响,为尽可能减少细菌在可摘局部义齿表面的黏附提供参考.方法:采用体外培养法,将钴铬合金试件放入不同浓度的含变形链球菌的人工唾液中,浸泡不同的时间,测定和分析变形链球菌的黏附量.结果:在不同变形链球菌浓度的人工唾液中培养24小时,菌液浓度对变形链球菌在钴铬合金表面黏附的有一定的影响;在相同变形链球菌浓度的人工唾液中培养不同时间,时间对细菌黏附有明显影响.结论:菌液浓度和浸泡时间会影响变形链球菌在钴铬合金表面的黏附,佩戴义齿的人们应减少可摘局部义齿的连续佩戴时间,以减少细菌在义齿表面的黏附.
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变形链球菌在婴幼儿牙齿表面定植时间的研究
目的:了解变形链球菌在牙齿表面的定植与婴幼儿年龄变化的关系.方法:本研究调查了变形链球菌在婴幼儿齿表面定植的时间,选取8～36个月的婴幼儿124名,并对其中16名婴儿进行了跟踪检查.结果:变形链球菌可在10个月婴儿的牙面定植,12个月以内的婴儿定植率为20.00%,16～18个月幼儿为54.50%,19～24个月的为60.00%,30个月时达71.43%;在牙面有MS定植的儿童中,51.67%儿童MS的检出时间是在13~24个月.对16名婴儿跟踪调查,发现在12个月后有10名儿童牙面MS检查由阴性转成阳性,占62.50%,感染时间平均为(18.24士3.25)个月.结论:在本研究中婴幼儿感染MS的时间较早,预防龋病的发生和MS的定植应从婴幼儿牙齿萌出时开始.
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甜茶护齿含片对口腔几种常居菌的体外实验研究
目的:观察甜茶护齿含片对几种常见口腔常居细菌和白色酵母菌生长的影响.方法:将磨成粉末的甜茶护齿含片,采用二倍稀释法,用TSA培养基,配制成从5.000g/50ml到0.313g/50ml的5个浓度的实验组的含药平板,用加样枪多点加入培养鉴定后配制浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液(约1-2μl)接种于琼脂平板表面,每点菌数约为104CFU,形成直径为5～8mm的菌斑.接种好后置37℃孵育16-24h,孵育后观察细菌生长情况,以抑制细菌生长的琼脂平板所含低药物浓度为MIC.设立不含甜茶甙的平板做阴性对照.结果:甜茶护齿含片对4种微生物的生长均有一定的抑制作用,不同微生物之间抑制效果不同.随着甜茶护齿含片纸片浓度的逐渐下降,4种不同微生物在各浓度组间的差异均有统计学意义(P ＜0.05),4种微生物组中,金黄色葡萄球菌对甜茶护齿含片比较敏感,其它3组微生物对甜茶护齿含片均不甚敏感.结论:甜茶护齿含片能不同程度的抑制口腔常居微生物的生长.
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含锌活性涂层种植体材料对细菌黏附的影响
目的：探索纯钛种植体材料表面含锌（Zn）活性涂层化学组成及对细菌黏附能力的影响。方法应用等离子体电解氧化技术，在纯钛表面制备含Zn的活性涂层，分为低锌组（L?Zn）、中锌组（M?Zn）和高锌组（H?Zn）、阴性对照组（不含Zn）。X射线光电子能谱分析涂层化学组成及各元素百分比；荧光法评价4组涂层材料对变形链球菌（Streptococcus mutans，S.m）黏附的影响；场发射扫描电镜观察细菌在涂层表面黏附数量和菌体形态的变化。结果 X线光电子能谱（X?ray photoelectron spectroscopy，XPS）分析显示随着电解液中锌浓度的提高，涂层中锌所占比重随之增加；荧光法实验表明，与对照组（30.53±9.33）比较，各实验组（L?Zn组：20.93±6.13；M?Zn组：19.47±7.35；H?Zn组：16.87±5.38）涂层表面S.m黏附的数量均明显减少（P<0.05）；电镜示随锌含量的升高涂层表面细菌黏附数量逐渐减少。结论含锌活性涂层可有效抑制S.m黏附并影响其菌体形态，且与锌的含量有关。
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变形链球菌耐酸性缺陷株的构建
变形链球菌(简称变链菌)是主要的致龋菌,耐酸性是其关键的毒力因子,但对其基因调控机制并未明了.本实验欲用转座子Tn917随机诱变变链菌野生株UA159,筛选耐酸性变异的突变株,以便于找到一个与耐酸性相关的调控基因.
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蔗糖浓度对口腔变形链球菌gbpC基因表达的影响
目的 观察不同浓度蔗糖环境对变形链球菌葡聚糖结合蛋白C编码基因gbpC表达的影响.方法 变形链球菌分别在0.5%、1.0%、5.0%蔗糖条件下培养,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测不同环境条件下变形链球菌gbpC基因的表达.结果 当蔗糖浓度从0.5%升高至1.0%时变形链球菌gbpC基因表达明显上调(P<0.05),而5.0%蔗糖较1.0%蔗糖条件下gbpC表达无明显改变(P>0.05);黏附较强菌株其gbpC基因表达高于黏附较弱菌株,特别是在0.5%和1.0%蔗糖环境中差异具统计学意义(P<0.05).结论 蔗糖量从0.5%增至1.0%可促进变形链球菌gbpC基因表达,这可能是蔗糖促进变形链球菌黏附的机制之一;gbpC基因的表达量可能与变形链球菌黏附力相关.
关键词： 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白C 黏附 TaqMan实时荧光定量PCR -
LuxS基因缺失的变形链球菌突变株的构建及鉴定
目的 通过同源重组法构建LuxS基因缺失的变形链球菌(Streptococcus mutans)突变株.方法 运用基因同源重组方法将红霉素抗性基因(Eymr)连接到PCR扩增LuxS基因两端区域产生的2个基因片段之间,并共同插入到pUCl9载体的多克隆位点中,构建出带红霉素抗性标志的缺失突变载体pUCluxKO.将突变载体转化到含完整LuxS基因的突变受体变形链球菌标准株中,红霉素筛选出LuxS基因缺失的变形链球菌突变株,并经PCR、生物荧光检测及DNA测序鉴定.结果 构建的突变载体经限制性内切核酸酶酶切分析显示,产生的条带与设计结果完全一致.PCR方法扩增突变株LuxS和Eymr基因显示,LuxS基因已被完整敲除掉,经生物荧光检测,突变株不能诱导哈氏弧菌(Vibrio harveyi)BBl70的生物发光,说明不能产生信号分子AI-2(autoinducer-2).DNA测序证实筛选得到了LuxS基因缺失的变形链球菌突变株.连续传代培养后证实,变形链球菌LuxS基因突变株具有良好的稳定性.结论 成功构建出LuxS基因缺失的变形链球菌突变株,为研究LuxS基因对变形链球菌致龋毒力的影响奠定了基础.
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变形链球菌表面蛋白可变区真核载体质粒pEGFP-N1一SrV+的构建及在293T细胞的表达
目的 构建变形链球菌(变链菌)表面蛋白可变区(extended-v)真核表达质粒pEGFP-NI-SrV+,并转染哺乳动物细胞293T,为进一步研究该区功能奠定基础.方法 根据已报道变链菌OMZ175的sry+基因序列,化学合成srV+的编码基因srv+,将真核载体质粒pEGFP-N1和srv+基因片段分别用Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切,连接获取重组质粒pEGFP-NI-SrV+,并对其进行PCR、酶切和测序鉴定.通过脂质体法瞬时转染哺乳动物细胞293T.运用荧光显微镜观察、Western blot及real-time PCR法检目的 蛋白在293T细胞中的表达情况.结果 通过基凶化学合成技术,获得1136 bp的目的 基因srv+,经测序鉴定与模板目的 基因序列一致;成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-SrV+;PCR扩增榆测可获得1.33 kb目的 基因片段;Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切可见4.7 kb和1.1 kb两条电泳条带,证实重组质粒pEGFP-N1-SrV+携带目的 基因;通过荧光显微镜观察到重组质粒pEGFP-N1-SrV+融合GFP后的表达,目的 细胞的转染效率达到80%以上;Western blot检测到相对分子质量(M1)为72 × 103处有特征条带,其大小和Srv+融合蛋白(42 × 103+28 × 103=70 × 103)相吻合;real-time PCR 数值分析显示:在293T细胞中,srv+基因的过表达效果显著.结论 成功构建了真核表达载体质粒pEGFP-N1-SrV+,并能够在哺乳动物细胞293T中表达.
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编码基因pac的DNA疫苗经胃肠粘膜免疫SD鼠的研究
变形链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是主要的致龋菌,细菌表面蛋白PAc是其主要的毒力因子之一.抗PAc抗体能有效阻止S.mutans在牙面的非蔗糖依赖性粘附,从而可以预防龋病的发生.DNA防龋疫苗的成功研制[1,2],给免疫防龋的粘膜免疫提供了崭新的思路.核酸疫苗经粘膜免疫可以通过共同粘膜免疫系统(common mucosal immune system, CMIS)诱导循环及粘膜特异性抗体的反应,更重要的是粘膜IgA的应答,这无疑是免疫防龋的关键所在.本实验用bupivacaine(布比卡因)作为编码变形链球菌表面蛋白pac基因的表达质粒pCIA-P的载体,经由胃、直肠粘膜免疫SD鼠,评价DNA复合体疫苗的免疫效能,探索合适的防龋途径.
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变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白诱导SD大鼠产生免疫应答
目的研究变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(glucan binding protein-A, GbpA)的GBD融合蛋白免疫SD大鼠时,其所诱导的血清和唾液特异性免疫反应. 方法用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠,免疫后间隔一定的时间收集大鼠的血清及唾液,间接ELISA检测血清及唾液中特异性抗GBD抗体. 结果 GBD融合蛋白免疫大鼠,可引起血清中IgG及唾液中IgA的显著提高.另外,GBD融合蛋白免疫大鼠,38d采血,血清中抗GBD抗体效价高,后逐渐降低. 结论变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白具有免疫原性,可供研制防龋疫苗参考.
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中药对口腔细菌生长抑制作用的研究进展
口腔是一个多菌种环境,细菌种类繁多.目前从口腔中能分离出的微生物种类多达300余种.现代口腔医学认为,口腔菌群失调是导致口腔疾病的主要原因,而菌斑堆积是引起牙周疾病不可或缺的始动因子.血链球菌、变形链球菌、粘性放线菌、牙龈卟啉单胞菌等被认为是主要口腔致病菌,在口腔中的异常生长以及生化代谢产物均能诱发口腔疾病,如牙龈炎、牙周炎、口腔溃疡等.
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九节茶对变形链球菌体外致龋力的实验研究
目的:观察九节茶提取物对变形链球菌体外致龋力的影响.方法:将不同浓度九节茶提取物加入培养基中进行变形链球菌培养,观察药物不同浓度在培养基中抑菌圈直径、菌细胞数和pH值变化情况以及葡糖基转移酶活性.结果:九节茶可抑制细菌生长、抑制葡糖基转移酶活性等.结论:提示九节茶可影响变形链球菌的致龋作用,可能是一种理想的防龋药物.
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不同牙科粘接剂抗变形链球菌性能比较
目的 对不同牙科粘接剂抗变形链球菌性能进行比较.方法 将临床常用的7种粘接剂分,3M公司的Single Bond 2 (SB)、Easy One (EO)和SE Plus B(SEPB),可乐丽公司的SE Bond(SEB)和Protect Bond(PB),松风公司的Fl-Bond Ⅱ(FLB),贺利氏古莎公司的Durafill Bond(DB),制备成10mm×10mm×1mm试件,采用薄膜覆盖直接接触法进行抗菌性能检测,将菌悬液滴加在试件中间,用无菌聚乙烯薄膜覆盖在菌液上,培养24h,将薄膜及试件用生理盐水震荡洗涤,洗涤液再行细菌培养、计数,对菌落计数结果进行单因素方差分析,比较各粘接剂固化后对变形链球菌的抗菌效果.结果 各种粘接剂对变形链球菌的抑菌菌落计数为SB:61.40±59.26；EO:0.20±0.45;SEPB:0.20±0.45;SEB:533.20±332.91;PB:16.80±30.72; DB:1099.60±329.05;FLB:936.40±308.20.SEPB、EO、PB抑菌效果佳,三者间无统计学差异(P＞0.05),与DB和FLB比,差异有统计学意义(P＜0.05).DB和FLB的抑菌效果差,两者间无统计学差异(P＞0.05).SB抑菌效果较好,与SEPB、EO、PB无统计学差异(P＞0.05),与DB和FLB有统计学差异(P ＜0.05)；SEB抑菌效果较差,与SEPB、EO、PB DB、FLB均有统计学差异(P＜0.05).结论 SEPB、EO、PB抑菌效果佳,其次为SB、SEB,而DB和FLB抑菌效果差.
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变形链球菌gtfs在不同蔗糖浓度下的差异性表达
目的 检测具有不同产细胞外多糖能力的变形链球菌株,在不同培养条件下产细胞外多糖的能力及与gtfA、B、C、D表达变化的关系.方法 选取变形链球菌高产糖与低产糖的临床分离菌株各10株及标准菌株UA159,用蒽酮法分别检测在1％、2％蔗糖培养下产细胞外多糖的能力;再用real-time PCR方法检测这些条件下与变链产糖能力密切相关的毒力因子葡萄糖基转移酶A、B、C、D的表达变化.结果 蔗糖能诱导各菌株产生细胞外多糖.不同蔗糖浓度,高产糖菌株葡萄糖基转移酶A、B、C、D的表达均高于低产糖菌株.1％蔗糖浓度下,高产糖株与低产糖株葡萄糖基转移酶A、B、C、D表达均有不同程度升高.2％蔗糖浓度下,低产糖株gtfB、C、D表达均不同程度降低,葡萄糖基转移酶A略有升高,而高产糖株葡萄糖基转移酶A、B、D表达升高,仅葡萄糖基转移酶C略有降低.结论 变形链球菌葡萄糖基转移酶的表达水平和产生细胞外多糖的能力受蔗糖浓度的影响.
关键词： 变形链球菌 葡萄糖基转移酶 Real-time PCR -
六种茶叶对口腔常见致病菌的抑菌作用
目的:选用普通绿茶、龙井茶、红茶、茉莉花茶、紫阳茶、乌龙茶的水浸液对龋齿致病菌和牙周炎可疑致病菌变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌进行抑菌研究.探讨饮茶防龋的作用及防牙周病的可能性.方法:6种茶叶的水浸液倍比稀释5个浓度,用杯碟法对4种细菌进行抑菌实验,测量抑菌环直径.结果:6种茶较高浓度的水浸液(24mg/ml)均对变链菌都有抑菌作用;普通绿茶、红茶、茉莉花茶、乌龙茶水浸液饮用浓度(12mg/ml)即对变链菌有抑菌作用;普通绿茶水浸液在低浓度(6mg/ml)对变链菌就有抑菌作用.普通绿茶和红茶水浸液在饮用浓度(12mg/ml)对具核梭杆菌有很好的抑菌效果;普通绿茶和茉莉花茶的水浸液浓度在48mg/ml对牙龈卟啉单胞菌有抑菌作用.高浓度(48mg/ml)的普通绿茶水浸液对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、变形链球菌、具核梭杆菌均有抑菌作用.结论:普通绿茶的抑菌效果好于其它茶叶.
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葡糖基转移酶多肽偶联疫苗抗原性
目的:研究人工合成葡糖基转移酶GTF第552～570位的多肽疫苗HDS的免疫原性.方法:将HDS与大分子载体钥孔帽贝血蓝蛋白偶联后,在腮腺区皮下免疫大鼠,取鼠血清,Western blot法检测鼠血清抗GTF抗体.结果:硝酸纤维膜上43KD-66KD间出现强阳性条带,此条带位置与葡糖基转移酶经SDS-PAGE电泳后条带位置一致.结论:抗人工抗原HDS-KLH抗体能与葡糖基转移酶发生抗原抗体反应,抗HDS-KLH抗体具有识别葡糖基转移酶的能力.
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几种常用口腔材料细菌粘附性能比较
目的：探讨5种口腔常用材料的抗细菌粘附性能。方法将自凝甲基丙烯酸甲酯基托树脂、Z250复合树脂、氧化锆陶瓷、纯钛和镍铬合金5种牙科常用修复材料,分别制备成3．0cm ×2．0cm ×0．2cm的板片试件,每组各5片。各组试件表面进行抛光处理,使试件表面粗糙度( Ra)值无显著性差异。实验菌株选用变形链球菌,用细菌悬浮液置试件表面,37℃培养48h,对粘附在材料表面的细菌再进行洗脱、培养、菌落计数,使用SPSSl7．0软件对试验结果进行统计分析。结果纯钛表面变形链球菌粘附量低,依次为氧化锆陶瓷、Z250复合树脂、镍铬合金、自凝甲基丙烯酸甲酯基托树脂。结论不同口腔材料在同样粗糙度的条件下,抗细菌粘附性能存在差异,钛具有较好的抗细菌粘附性能。
