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乙型肝炎病毒基因点突变与临床的关系
本文对近几年来乙型肝炎病毒(HBV)的四个开放读码框(S区、C区、X区和P区)与临床关系较为密切的点突变的研究作了简要的综述.
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湖南省急性弛缓性麻痹病例分离株的性状分析
1997~2001年,湖南省疾病预防控制中心从急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本中共分离到单型脊髓灰质炎(脊灰)毒株85株,经中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室用逆转录-聚合酶链反应-限制性酶切片长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)方法进行型内鉴定,全部为疫苗相关株.对其中从"零"剂次免疫患儿、有残留麻痹患儿和一些其他相关的患儿粪便标本中分离到的脊灰病毒进行了VP1区和3D区的核苷酸序列测定.结果显示:在脊灰Ⅱ型毒株中,绝大多数毒株在VP1区的核苷酸中第2909位位点发生突变,导致第143位氨基酸由Ile变为Asn或Thr.在脊灰Ⅱ型毒株中,广泛存在着型间重组现象.在重组病毒中,以Ⅱ型与Ⅲ型病毒的重组为主,占90%.从AFP病例及健康儿童中,从有残留麻痹患儿及无残留麻痹患儿的粪便标本中,都能分离到重组株,说明重组的发生具有普遍性,重组发生的位点在核苷酸的不同位置,重组的形式又具有多样性.通过对湖南省毒株的碱基突变和重组的研究表明,在湖南省1997~2001年的分离株不支持隔年传播,只在局部地区某一年内可能发生有限的循环.通过加强口服脊灰疫苗的免疫,提高免疫覆盖率,可以阻止疫苗相关病毒局限的循环.
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滤泡细胞来源的甲状腺癌的分子改变
甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤。按组织形态特点,主要分为甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡癌、甲状腺髓样癌、低分化以及未分化癌,其中除了甲状腺髓样癌起源于神经嵴衍化的滤泡旁C细胞外,其余四者都来源于甲状腺滤泡细胞。甲状腺乳头状癌在上述五种甲状腺癌中为常见,约占甲状腺癌人群的87.3%,其后为甲状腺滤泡癌,约占8.4%,未分化癌和髓样癌则分别占所有甲状腺癌的0.9%和1.8%。近年来有关甲状腺癌的分子改变的研究很多,甲状腺癌中常见的信号通路中分子的改变包括RAF基因点突变,RET/PTC基因重排,RAS基因、PAX8/PPARγ基因重排, PI3KCA和CTNNB1的基因改变,以及NTRK、TP53、PTEN,还有IDH-1和TERT启动子的点突变等。我们针对以上分子改变在滤泡细胞来源的甲状腺癌中的作用机制作一概述。
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错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用
耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一.利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法,错配PCR法等[1-2].错配PCR技术早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查,目前已广泛应用于基因点突变的检测[3-4].根据PCR引物设计的不同,可将其分为间接错配PCR,即引物与野生型完全互补,以突变株为模板不能扩增得到PCR产物,和直接错配PCR,即引物与特定的点突变完全互补,以野生株为模板不能扩增得到PCR产物.已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道[5-6].本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象,建立了直接错配PCR法,并与间接错配PCR法进行了比较.
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食管癌早期诊断的分子生物学标志物
肿瘤相关基因产物及肿瘤标志物的检测用于食管癌的早期诊断,已显示出可喜前景.核抗原Ki67、P53、P21、p27、c-myc蛋白和Bcl-2蛋白过量表达,cyclin D1基因蛋白表达及DNA倍体的定量检测,抑癌基因FHIT缺失、P16基因点突变,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、P53抗体的联合检测,微卫星不稳定性与D3S4513、D5S2501等标志物,iNOS,Cox-2蛋白,TSGF,端粒酶,Egr-1 mRNA和蛋白,脂肪酸合酶,TGFβ1和TGFβR Ⅱ,维甲酸受体RAR β等在食管癌的早期诊断中均不同程度的显示出自身的价值,对食管癌早期诊断的研究有重要作用.
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线粒体tRNATEU(UUR)基因点突变与1型糖尿病关系的研究
近年来发现线粒体tRNALEU(UUR)基因点突变是糖尿病的致病突变之一[1,2],我们对线粒体tRNALEU(UUR)基因3243位点A→G突变与1 型糖尿病的关系进行了研究,旨在揭示该基因点突变在我国东北地区汉族1型糖尿病患者中的情况以及与自身免疫导致的1型糖尿病有无关联。 材料与方法 1.实验对象:选取57例1型糖尿病患者,祖籍三代均为东北地区汉族居民,其中以酮症起病者23例,男性12例,女性11例,平均年龄14.9±1.6岁,发病年龄10.0±1.5岁,体重指数17 .8 4±1.55kg/m2;缓慢进展型1型糖尿病34例,男性21例,女性13例,平均年龄45.2±2.0岁,发病年龄40.7±2.5岁,体重指数22.25±1.64kg/m2。
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肺癌患者支气管肺泡灌洗液中K-ras基因突变的检测及其临床意义
K-ras基因是与肺癌密切相关的原癌基因之一,目前国内外对它的研究主要局限于术后石蜡标本的回顾性研究.我们从肺癌患者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中检测 K-ras基因点突变的情况,为肺癌的早期诊断及预后评价提供依据.材料与方法 1.材料:我们检测了100份标本,其中40份为组织标本,包括纤支镜活检组织及术后蜡块(表1);60份为灌洗液标本,来自我院1998~2000年住院及门诊接受支气管肺泡灌洗术(BAL)的患者,男37例,女23例,平均年龄(56±12)岁.60例患者中肺癌44例,均为周围型肺癌,其中40例终经纤维支气管镜(纤支镜)活检、手术或经皮肺穿刺等取得病理学确诊,另4例为临床诊断肺癌患者.有16例患者同时具有BALF及组织标本,其中鳞癌7例,腺癌3例,小细胞癌3例,肺泡细胞癌1例,炎症1例,结核1例.16例肺部良性疾病作为实验的阴性对照(表2).所有肺癌患者经胸部CT、腹部B超及同位素骨扫描等检查后,据1987年国际抗癌联盟(UICC)分期标准进行TNM分期:Ⅰ期5例,Ⅱ期8例,Ⅲa期24例,Ⅲb期20例,Ⅳ期 5例.依据病理标本明确细胞分化程度.
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原发性血小板增多症JAK2V617F点突变研究
2005年3月起多个研究组[1-2]报道在原发性血小板增多症(ET)等bcr/abl阴性慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)中存在JAK2基因点突变即JAK2V617F,为该病的发病机制、诊治带来了革命性进展.由于检测方法不同,检测到ET中该突变发生率为23%~57%.我们收集了45例ET患者的外周或骨髓血DNA,来探讨JAK2V617F阳性率及临床意义.
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胰腺癌组织中K-ras基因点突变和端粒酶活性的检测与比较
许多近期研究已显示出分子生物学特征在胰腺癌发生发展中起着重要作用,现认为K-ras基因是与胰腺癌高度相关的癌基因,其第一外显子12密码子点突变见于90%左右的胰腺癌,远远高于在其它肿瘤的突变发生率.目前资料也显示,在正常组织中均无端粒酶活性检出,而在绝大多数恶性肿瘤组织均显示明显的端粒酶活性.因此端粒酶激活是癌细胞重要的生物学标记,其检测端粒酶活性对于肿瘤诊断具有重要意义.
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胰腺癌患者外周血和十二指肠液中K-ras基因点突变的研究
从1999年起,我们开展了对胰腺癌患者外周血及十二指肠液标本K-ras基因点突变的检测,现报告如下.资料与方法1.标本来源:收集我院1997年2月至2002年10月胰腺癌患者外周静脉血标本21例,其他外周血标本中急性胰腺炎5例、慢性胰腺炎8例、壶腹癌8例、胆管癌7例、十二指肠乳头癌4例、胰岛素瘤4例及胆石症7例.同期收集胰腺癌患者十二指肠液标本23例,其他十二指肠液标本中急性胰腺炎8例、慢性胰腺炎6例、壶腹癌7例、胆管癌7例、十二指肠乳头癌4例及胃癌5例.
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反向斑点杂交技术诊断β-地中海贫血误诊分析
β-地中海贫血(β-thalassemia)是一种以β珠蛋白肽链合成缺陷为特征的遗传性溶血性贫血,是世界常见遗传性单基因疾病之一,绝大多数均为β珠蛋白基因点突变和少数碱基缺失或插入引起.研究表明[1,2],反向斑点杂交技术是检测β-地中海贫血突变位点行之有效的方法.
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血清甘露糖结合凝集素水平及其基因点突变与妊娠期糖尿病发病的关系
妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠期常见的合并症之一[1],其研究主要集中在胰岛素分泌相对减少和母体、胎盘分泌的抗胰岛素激素和细胞因子等方面.本研究通过检测GDM患者血清甘露糖结合凝集素(mannose binding leetin,MBL)浓度及其基因54位密码子点突变,探讨MBL血清浓度及MBL基因缺陷与GDM发病的关系.
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循环肿瘤DNA应用于乳腺癌的潜在价值探索
循环肿瘤DNA(ctDNA)是肿瘤细胞通过坏死、凋亡或直接分泌的方式向血液中释放的游离DNA。ctDNA常携带肿瘤相关的单核苷酸变异、拷贝数改变及结构变异等遗传学改变,这一特点促使循环肿瘤DNA成为潜在的生物标记物。以聚合酶链式反应(PCR)或二代测序(NGS)为基础的检测技术的进步提高了ctDNA检测的敏感性和信息量。ctDNA作为一种“液体活检”方法因其简便易行、侵害性小、实时动态佳等优势在乳腺癌领域得到了广泛研究,可以协助早期诊断、监测疗效、探索耐药机制、预测疾病复发和判断预后,为确定肿瘤患者治疗策略提供依据,从而真正实现乳腺癌的个体化治疗。
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家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变检测方法的建立及一例新发现的突变(论著摘要)
家族性高胆固醇血症(Familial Hypercholesterolemia,FH)是冠心病的一种很重要的危险因素,早期发现FH患者,进行预防和治疗,就能减少心肌梗死的危险性.但是只根据临床表现不足以作出准确诊断(尤其是杂合子患者),所以,对其病因即低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDL-R)基因突变的研究非常重要.本研究将PCR-SSCP与银染技术相结合,建立稳定的PCR SSCP检测条件,以期对LDL-R基因的全部18个外显子进行点突变的筛查.
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人类抑癌基因-p53点突变检测方法研究进展
癌与肿瘤基因的激活及抑癌基因失活有下面三种关系:①癌基因的激活导致肿瘤发生;②抑癌基因的失活导致肿瘤发生;③癌基因的激活与抑癌基因失活同时发生从而导致肿瘤的发生.p53蛋白是一种细胞核磷蛋白,p53基因只存地于脊椎动物中,是生物界长期进化过程中形成的一种保护性机制[1].在人类基因定位于17号染色体短臂上[2].p53是至今已克隆到的六个抑癌基因中的一个,p53基因初被认为是一个核内癌基因[3].随着人们对其研究的不断深入,表明具有类似致癌作用的p53基因是p53的各种突变型.
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基因芯片法诊断地中海贫血
ThalaChipTM是一种基于DNA芯片技术识别中国地区已知地中海贫血(珠蛋白合成障碍性贫血,地贫)基因型的新技术,专为快速检测α和β珠蛋白基因中的DNA缺失和突变而设计的,能够同时检测中国地区常见的-α3.7、-α4.2和-SEA 三种α地贫[1],以及21种β珠蛋白基因点突变[2],覆盖率达到β地贫的98%.我们对经初筛确诊或可疑地贫患者的血液标本首先用传统的PCR技术或PCR联合反向点杂交技术(PCR/RDB)作基因检测,再与基因芯片技术检测结果进行比较,用DNA直接测序法鉴定差异结果.
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p53基因突变和人乳头瘤病毒感染与喉鳞癌的关系
喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤,研究表明,人乳头瘤病毒16型、18型(HPV16、18)感染及抑癌基因p53突变都在喉癌的发生发展中起作用,但二者到底有什么关系呢?为此,我们应用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术对喉鳞癌组织中HPV16、18DNA和p53基因点突变进行了检测及相关性分析。1 材料与方法1.1 标本收集及处理 喉鳞状细胞癌标本40例,经病理检查确诊高分化18例,中分化15例,低分化7例。
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p53基因、血清CEA同步检测与大肠癌转移关系的研究
大肠癌确诊时淋巴或脏器的转移率较高,其早期检测及诊断尚缺乏有效的手段和方法.作者采用多聚酶链反应--单链构象多态性分析技术(PCR-SSCP)对p53 5~8外显子点突变及采用免疫放射技术(IRA)对血清CEA进行检测,探讨p53基因点突变、血清CEA对早期诊断大肠癌转移的临床意义及二者之间的相关性.
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幽门螺杆菌空泡毒素N端的变异分析
空泡毒素(VacA)是幽门螺杆菌(Hp)一个重要的毒力因子,口服纯化VacA可以对小鼠再感染产毒Hp菌株产生有效保护.然而,野生型VacA蛋白由于其致胃上皮细胞损伤作用而不能成为候选疫苗.尽管现在认为基因水平灭活毒力VacA蛋白可以成为合适的候选疫苗,但基因点突变是否可以将VacA细胞毒活性降低足够水平尚无定论.本文利用哺乳动物细胞瞬时转染系统研究VacA发挥致空泡化作用的小活性片段及其特征,并且对毒素功能有重要作用的区域和氨基酸残基进行突变研究.
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内皮细胞型一氧化氮合酶基因多态性与糖尿病肾病的相关性
糖尿病肾病是糖尿病(DM)致死致残的主要原因之一.近年来流行病学调查显示,有些DM患者虽血糖长期控制不良,但并不发生DN,而有些患者虽代谢控制良好,终仍发生DN[1,2],提示遗传因素在DN的发生发展中可能起关键作用.分子水平的研究发现,内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因第7外显子的Glu298Asp(894G→T)基因点突变及第4内含子一个27bp的插入/缺失(a/b)多态与糖尿病微血管并发症及冠心病、心肌梗死的发生有明显相关性[1-5],但该点突变及多态与糖尿病肾病的相关性各家报道不一[6,7],特别是该突变及多态存在于同一个体时与DN的关系国内外尚未见报道,本文对此进行研究.