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β珠蛋白生成障碍性贫血聚合酶链反应-反向点杂交法基因诊断
β珠蛋白生成障碍性贫血亦称β地中海贫血是由于β珠蛋白基因座位突变导致β珠蛋白肽链合成减少或缺乏所引起的一类遗传性溶血性疾病.该病呈常染色体隐性遗传,在中国华南及西南地区是一种常见病,广东地区人群发生率达1.36 %~4.90 %.本病的轻型患者可以没有临床症状,重症患者一般在出生后一年内开始表现出严重的贫血,终身需要输血治疗.由于缺乏有效的根治性手段,目前对β地中海贫血以预防为主.通过对人群中地中海贫血突变基因携带者的筛查,有针对性地指导婚育,开展产前诊断工作,从而杜绝重症患儿的出生.本文利用聚合酶链反应-反向点杂交技术(PCR-RDB)对广东中山地区的288例可疑患者进行了基因水平的分析,结果报道如下.
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反向斑点杂交技术诊断β-地中海贫血误诊分析
β-地中海贫血(β-thalassemia)是一种以β珠蛋白肽链合成缺陷为特征的遗传性溶血性贫血,是世界常见遗传性单基因疾病之一,绝大多数均为β珠蛋白基因点突变和少数碱基缺失或插入引起.研究表明[1,2],反向斑点杂交技术是检测β-地中海贫血突变位点行之有效的方法.
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β地中海贫血罕见CD37(TGG-TAG)突变一例及产前基因诊断
β珠蛋白基因突变导致的β地中海贫血(简称β地贫)是我国南方常见的遗传病之一,从表现上看属于常染色体隐性遗传,但杂合子亦有轻微贫血症状,其在广东、广西等地区发病率约为3.4%~5.8%[1].迄今为止,中国已经发现的β地贫突变类型达29种以上[1-2].
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β珠蛋白基因座控制区缺陷研究进展
人类β珠蛋白基因(简称β基因)位于第11号染色体短臂上,总长度为60Kb,包括ε、Gγ、Aγ、δ和β及两个假基因ψβ2和ψβ1,它们紧密连锁,其边接顺序为5'-ψβ2-ε-Gγ-Aγ-ψβ1-δ-3'.每个β基因有两个非编码区(内含子)IVS-1和IVS-2,其长分别为130bp和850bp,它们分别插入到编码区(外显子)的相应于第30与31和104与105密码子的DNA序列之间.编码区编码β珠蛋白的146个氨基酸.
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建立α与β珠蛋白基因簇转基因鼠模型及β基因族反式因子研究
随着人类功能基因组研究的广泛开展,理解基因组中的遗传信息如何协调、有序地调控细胞分化与个体发育的时空过程成为研究的基本问题,阐明这一机制是真核基因表达调控研究的根本任务.
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基因芯片法诊断地中海贫血
ThalaChipTM是一种基于DNA芯片技术识别中国地区已知地中海贫血(珠蛋白合成障碍性贫血,地贫)基因型的新技术,专为快速检测α和β珠蛋白基因中的DNA缺失和突变而设计的,能够同时检测中国地区常见的-α3.7、-α4.2和-SEA 三种α地贫[1],以及21种β珠蛋白基因点突变[2],覆盖率达到β地贫的98%.我们对经初筛确诊或可疑地贫患者的血液标本首先用传统的PCR技术或PCR联合反向点杂交技术(PCR/RDB)作基因检测,再与基因芯片技术检测结果进行比较,用DNA直接测序法鉴定差异结果.
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siRNA沉默Ikaros基因对K562细胞中γ珠蛋白表达的影响
地中海贫血,即β珠蛋白合成障碍性贫血,简称地贫,是一种单基因缺陷的遗传性疾病,它是由于β珠蛋白多肽链合成减少或缺失,α链与非α链(β、γ、δ)之间不平衡所导致的以红细胞无效生成为特征的血红蛋白病.重型β-地贫常常有严重的临床症状,多采取规则的输血及祛铁治疗,但大多数病人终还是死于铁过载相关的心脏疾病,平均寿命不满20岁[1].
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异常HbK复合β地中海贫血家系及其风险胎儿的产前诊断
目的 了解一种由β珠蛋白肽链合成异常的HbK复合轻型β地中海贫血的家系及其风险胎儿的产前诊断.方法 用美国Helena公司全自动快速电泳分析系统进行血红蛋白电泳各区带定量分析和反向点杂交-RDB法进行β地贫基因联合检测,对家系及风险胎儿进行产前诊断.结果 先证者为异常HbK复合B珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变双重杂合子,临床表型为中间型β地贫.父亲为β-珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变杂合子,母亲为异常HbK杂合子,再次妊娠行产前诊断的胎儿为异常HbK杂合子,母亲和胎儿地贫基因型正常,建议保留胎儿.出生后8个月随访结果与产前诊断一致.结论 对β珠蛋白肽链合成异常和β地贫基因携带者的家庭进行遗传咨询和产前诊断,可预防中间型β地贫患儿出生.采用电泳技术联合β地贫基因检测技术,可在产前诊断中解决同类问题.
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非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征复合β地中海贫血的研究进展
遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(hereditary persis-tence of fetal hemoglobin,HPFH)是由于β珠蛋白基因簇中DNA序列的碱基替换或缺失导致出生后胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)持续增高的遗传性血红蛋白病[1]。 HPFH可分为缺失型HPFH和非缺失型HPFH(nd-HPFH)。 nd-HPFH是由于γ珠蛋白基因启动子区点突变或小片段缺失所致[2]。正常成人体内血红蛋白主要是HbA,HbF含量小于总血红蛋白的1%[3]。β地中海贫血(β地贫)是由于β珠蛋白基因缺陷或缺失使β珠蛋白肽链合成减少或缺如,导致血红蛋白组分改变的遗传性溶血性贫血,可分为轻型、中间型和重型,临床表现从几乎无症状到严重贫血[4-5]。 nd-HPFH复合β地贫的HbF明显升高,高水平HbF可通过平衡珠蛋白链合成而改善贫血症状[6]。广西、广东等南方地区是国内β地贫高发区,本文就nd-HPFH复合β地贫的基因突变类型和临床表现作一综述,为β地贫诊治提供理论依据。
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Krüppel样因子1在珠蛋白基因表达调控中的作用
Krüppel样因子(KLF)1属于锌指蛋白家族,是红细胞系特异性转录因子.KLF1在红细胞生成中发挥多种作用,如可通过调节染色质构象,活化β珠蛋白基因转录;可根据不同作用背景、协同因子及KLF1蛋白修饰状态,对γ珠蛋白基因表达起着活化或抑制的调控作用.目前,KLF1对珠蛋白基因表达的确切调控机制迄今仍未阐明,尚需进一步研究探讨.笔者拟就KLF1在珠蛋白基因表达调控中的作用进行综述,旨在初步探讨KLF1作为β地中海贫血基因治疗靶向因子的可能性.
关键词: Kruppel样因子 β珠蛋白 γ珠蛋白 -
HPV基因芯片检测质控点设计和参数优化研究
目的:设计人乳头状瘤病毒(HPV)基因芯片的质量控制点,优化质量控制探针和人β珠蛋白基因引物浓度以及HPV引物浓度比例,以提高基因芯片的检测质量.方法:收集临床HPV患者宫颈刮片样本,提取样本HPV58的DNA,用HPV通用引物扩增病毒DNA;利用人β珠蛋白引物扩增样本中的β珠蛋白DNA,将扩增的PCR产物与线性化的pMD18-T载体连接,构建人β珠蛋白和HPV58 L1区DNA质粒,转化大肠杆菌后,进行单克隆培养,获得HPV58样本和人β珠蛋白的DNA模板;以HPV58和人β珠蛋白DNA基因信息设计并制备扩增HPV和人β珠蛋白探针及PCR引物,将人β珠蛋白基因探针固定于基因芯片作为质量控制点(QC),按1:20、1∶10、1∶5和1∶4比例混合单克隆HPV扩增引物与人β珠蛋白扩增引物,采用PCR反向点杂交技术,对模板进行扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的产量,进行基因芯片孵育杂交和显色;用扫描仪扫描芯片,采用Image J软件对各阳性杂交信号点进行信号强度采集,计算佳的人β珠蛋白扩增引物和HPV扩增引物浓度比值;将QC的探针点样浓度设为0.1 pmol/L、l pmol/L、10 pmol/L、50 pmol/L和100 pmol/L,检测信号强度,优化质量控制探针点样浓度.结果:扩增了HPV58病毒DNA和人β珠蛋白的DNA模板,设计了HPV58和人β珠蛋白探针及PCR引物;琼脂糖凝胶电泳检测分析发现,当人β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的浓度比例为1∶10时,二者同时PCR扩增时,扩增的强度较为一致,得到的产物量相当,用此引物浓度比例进行PCR获得的产物与测试芯片进行杂交,显色的平衡性较好;对QC的点样浓度进行测试发现,当QC点样探针浓度为50 pmol/L时,可以获得佳的检测效果.结论:通过对β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的佳浓度比例和质量控制探针佳点样浓度的优化,提高了HPV检测点的检测质量.