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β珠蛋白生成障碍性贫血聚合酶链反应-反向点杂交法基因诊断
β珠蛋白生成障碍性贫血亦称β地中海贫血是由于β珠蛋白基因座位突变导致β珠蛋白肽链合成减少或缺乏所引起的一类遗传性溶血性疾病.该病呈常染色体隐性遗传,在中国华南及西南地区是一种常见病,广东地区人群发生率达1.36 %~4.90 %.本病的轻型患者可以没有临床症状,重症患者一般在出生后一年内开始表现出严重的贫血,终身需要输血治疗.由于缺乏有效的根治性手段,目前对β地中海贫血以预防为主.通过对人群中地中海贫血突变基因携带者的筛查,有针对性地指导婚育,开展产前诊断工作,从而杜绝重症患儿的出生.本文利用聚合酶链反应-反向点杂交技术(PCR-RDB)对广东中山地区的288例可疑患者进行了基因水平的分析,结果报道如下.
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聚合酶链反应反向点杂交法鉴定人乳头瘤病毒型别
为了探讨人乳头瘤病毒(HPV)的分型方法,我们将聚合酶链反应(PCR)技术和Saiki等[1]提出的反向点杂交(RDB)技术结合起来,对HPV进行型别鉴定,现报告如下。 一、 材料及方法 1. 标本来源:30份宫颈癌组织标本,选自贵阳医学院附属医院病理科,为1995年1月~1997年12月部分存档活检及手术切除的蜡块标本。 2. 菌种及试剂:内含HPV全基因组的4种PUC19质粒:HPV6B、11、16和18 及特异性寡核苷酸探针(SSO),通用引物序列为:GP5 5′-TTTGTTACTGGTAGATAC-3′,GP6 5′-GAAAAATAA-ACTGTAAATCA-3′(GP5的5′端由生物素标记),可同时扩增HPV 6B,11,16和18,扩增片段长度为150 bp,由国家计划生育委员会科研所提供(表1)。
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血清、组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系
目的:通过检测结直肠癌患者血清E-钙黏附素(E-Cd)浓度和组织E-Cd的mRNA水平,探讨E-Cd与结直肠癌浸润和转移的关联性.方法:应用酶联免疫黏附方法测定28例结直肠癌患者血清可溶性E-Cd浓度;应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的mRNA灰度均值.结果:结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P<0.001),Dukes C组或有淋巴结转移组明显高于Dukes A、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05),切除瘤体后上述各组的血清E-Cd浓度均明显下降(P<0.01-0.05).各组的组织E-Cd mRNA均值变化与血清E-Cd浓度的一致,且两指标间具有明显的相关性(P<0.05).结论:血清、组织E-Cd可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.
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胎儿细胞父源性人类白细胞抗原DQA基因检测
随着应用孕妇外周血中胎儿细胞进行无创性产前诊断研究的进展,多数研究者利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)或荧光原位杂交的方法检测性别决定基因(sex-determining region Y,SRY)[1-3],作为鉴定胎儿细胞存在或已成功分离的手段,但这些方法仅局限于检测妊娠男性胎儿的孕妇外周血中的胎儿细胞.人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DQA基因属于HLA-Ⅱ类抗原[1],该基因的多态性和高变异性使HLA-DQA基因位点具有较好的鉴别力[2].我们应用PCR-反向点杂交法,检测孕妇外周血中胎儿细胞父源性HLA-DQA基因,旨在推动无创性产前基因诊断的基础研究.
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抗病毒药
(接上期)姚光弼等对拉米夫定治疗429例慢性乙型肝炎疗效进行了评价,入选患者治疗前血清HBeAg持续阳性6个月以上,班点杂交法血清HBVDNA均为阳性,ALT高于正常.患者随机分为2组,分2个阶段治疗,拉米夫定治疗组每日晨口服3TC 100mg.治疗前12周分治疗组及对照组,12周以后全部用3TC 100mg治疗,直到52周.拉米夫定治疗12周,78.5%患者HBVDNA阴转,而安慰剂组的阴转率只有11.1%,差别非常显著.
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尿路及宫颈上皮病变中人乳头瘤病毒型别分布及相关关系比较
为探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus , H PV )在妇女宫颈病变中及尿路上皮病变中的型别分布异同,收集1213例宫颈病变活检组织标本和140例尿路病变活检组织标本,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法进行 HPV DNA 分型检测,现将结果报告如下。
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吉林地区、黑龙江地区人乳头瘤病毒感染状况分析
经过国内外学者近20 年的研究,已经证明人乳头状瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要病因.HPV 感染的检测与分型是处理宫颈病变的重要依据之一,是筛查不可缺少的内容[1].本文通过PCR-反向点杂交法进行HPV分型检测,分析吉林和黑龙江地区HPV感染情况,分析两个地区感染率、亚型分布特征,为宫颈癌癌前筛查及预防提供依据.
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地高辛标记探针检测重组双功能水蛭素中的DNA残留量
为检测注射用重组双功能水蛭素半成品中的DNA残留量,应用地高辛标记重组双功能水蛭素工程菌DNA,并以此为DNA探针进行点杂交,同时做特异性及灵敏度实验.结果证明,该方法检测低限值可达1 pg,且重复性好,特异性强,操作较简便,可用于双功能水蛭素制备工艺的质控及半成品的检定.
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1191例住院患者人乳头瘤病毒感染情况及亚型分布分析
宫颈癌已成为威胁妇女健康的常见疾病,位居全球女性癌症发病率之首。每年我国新发病例约13.15万人,约有3万名妇女死于宫颈癌。1976年人乳头状瘤病毒(HPV)被作为是子宫颈癌的致病因素(human-papillomavirus,HPV)也是目前已知的唯一能引起人类上皮组织增生性病变的双链DNA病毒。HPV感染是女性生殖道尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌等妇科疾病的主要致病因素【1】它主要分为低危型包括HPV6、HPV11、HPV41、HPV42、HPV44和CP8304等,高危型包括HPV16、HPV18、HPV33、HPV35、HPV39等【2】作者采用PCR-反向点杂交法,对2011年1月到2012年10月本院1358例住院患者进行HPV-DNA的检测并分型,以便于临床诊断与跟踪治疗。
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地高辛标记探针检测Vero细胞狂犬病疫苗残余Vero细胞DNA含量
地高辛标记Vero细胞DNA,并制备成DNA探针.以此探针进行点杂交,确定探针的工作浓度、特异性及灵敏度.并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗半成品中残余Vero细胞DNA含量.结果表明,该法特异性强,重复性好,快速简便,灵敏度高,检测值可达5pg/剂量,可用于精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定.
关键词: 地高辛探针 点杂交法 狂犬病疫苗 Vero细胞DNA含量