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无创性产前诊断的研究进展
妊娠孕妇外周血中或宫颈管内存在有胎儿细胞或遗传物质,利于各种方法富集它们并进行遗传分析,检测胎儿遗传病及染色体病,可达到无创性产前诊断的目的.
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孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立
本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断.根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术.将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:1、40:1、100:1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术.选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性.结果表明:单人血浆进行准确血型鉴定的少模板DNA量约为0.625 ng,500μ血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非O基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非O基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100%.结论:本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见.
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重度子痫前期孕妇外周血FNRBC与其红细胞免疫状况的关系及意义
子痫前期是妊娠期特有的严重并发症,可能与患者自身免疫系统病理损伤和紊乱有关,本研究通过检测重度子痫前期患者母血胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)数量及其红细胞免疫黏附功能变化及相关性分析,从而为重度子痫前期发病的町能机制提供理论依据.
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三种常用的密度梯度离心方法富集有核红细胞的比较
目的 探讨富集母血中胎儿有核红细胞的适宜密度梯度离心方法.方法 对10例脐血分别用Percoll 1090单密度梯度离法、Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法、Ficoll 1077单密度梯度离心法3种方法进行有核红细胞的分离,然后用适宜的密度梯度离心法分离12例10 mL母血中的胎儿有核红细胞.结果 ①Percoll 1090单密度梯度离法每mL脐血富集(70.58±5.67)×104个有核红细胞;Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法每mL脐血富集(23.62±1.90) ×104个有核红细胞;Ficoll1077单密度梯度离心法每mL脐血富集(4.53±0.26)×104个有核红细胞.②采用Percoll 1090单密度梯度离法从12例10 mL母血中富集到的平均有核红细胞数为12.9±5.4个.结论 Percoll 1090单密度梯度分离法可有效增加脐血中有核红细胞的分离数量,并从孕妇外周血中成功富集到胎儿有核红细胞.
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利用母血中胎儿细胞进行无创产前诊断的研究进展
无创性产前诊断方法是近年来围产医学领域研究的热点.母血中的胎儿细胞具有包含完整的胎儿基因组、不受母血DNA污染的优点.然而,胎儿细胞的数量稀少,很难应用于临床.近年来,测序和微序列分析等分子细胞遗传学技术的发展,为利用少数几个胎儿细胞诊断遗传病提供了可能.本文就胎儿细胞的发现、富集、鉴定、分析以及在无创性产前诊断的应用现状进行综述.
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孕妇血浆中游离DNA在先天性软骨发育不全产前诊断中的应用
基因病的产前诊断多采取在妊娠期取羊水或绒毛细胞进行基因分析的方法.但这2种取材方法均具有创伤性,可能对胎儿及孕妇生命造成危害.Lo等[1]研究证明,孕妇外周血中存在胎儿游离DNA,为单基因病的非侵入性产前诊断提供了一种新的途径.为探讨该途径临床应用的可行性,我们采用Qiagen公司的DNA分离试剂盒,结合基因扩增限制性内切酶分析技术成功地对1例先天性软骨发育不全(achondroplasia,ACH)的孕妇进行了非侵入性产前诊断.
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从孕妇外周血富集胎儿细胞技术的进展
目前,应用胎儿细胞进行产前基因诊断的主要方法有羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐静脉穿刺术.这些有创性检查导致的孕妇流产率均为1%左右,且与操作者技能密切相关.虽然可结合孕龄、血清生化及超声技术等指标进行产前筛查(阳性预测值2.3%),有选择性的进行上述产前检查,仍造成许多健康胎儿的夭折,对孕妇和家庭造成严重不良影响.
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孕妇外周血检测微小 RNA 行产前诊断的研究进展
寻找一种准确、无创的产前诊断方法取代目前的有创性检查,提高人口出生质量,是人们的追求目标。而检测孕妇外周血中胎儿细胞游离核酸物质逐渐发展成一种无创产前诊断新途径。本文综述了孕妇外周血中检测微小 RNA 行产前诊断的可行性及预测妊娠相关疾病的研究进展。
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是时候发出警报了——孕妇外周血游离DNA检查诊断胎儿非整倍体也存在假阳性
本文发表于2013年11月的《Am JObstet Gynecol》上.既往针对高危孕妇的研究显示,外周血游离DNA检查诊断胎儿非整倍体敏感度高,假阳性极低.
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“单亲二倍体导致的NIFTY结果与核型分析结果不一致”的点评
1 原文摘要Uniparental disomy (UPD) is an uncommon chromosome condition,but UPD involving chromosome 21 is rarely reported.We reported here a case who had first trimester screening test for Down syndrome,chorionic villus sampling for fetal karyotyping,quantitative fluorescence polymerase chain reaction (QF-PCR),as well as non-invasive prenatal testing (NIPT) by maternal plasma sequencing.There were discordant results between fetal karyotyping and NIPT due to UPD 21combined with confined placental mosaicism of trisomy 21.This demonstrated that it is possible to detect placental mosaicism by NIPT,but further studies are required to confirm its sensitivity.Therefore,all positive NIPT results must be confirmed by conventional invasive test and karyotyping.QF-PCR has the additional benefit in diagnosing UPD.2论文核心内容及点评本文发表于2013年3月的《Prenatal Diagnosis》杂志.基于孕妇外周血胎儿游离DNA的非侵入性产前检测胎儿非整倍体技术(NIFTY)是当前逐渐走向临床的新技术.这一技术避免了因侵入性取材过程导致的胎儿流产风险,在分子水平实现了快速、早期检出高危非整倍体胎儿的目标.
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利用孕妇外周血可检测胎儿性别
<胎儿诊断与治疗>杂志2007年第22卷第5期377~382页报道,可以利用母体血浆中游离的胎儿DNA 检测胎儿性别.
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孕妇外周血中胎儿DNA在唐氏综合征产前诊断的应用前景
产前诊断(prenatal diagnosis)是指在胎儿出生前诊断胎儿是否患有某种遗传性或先天性疾病的一种手段,对于预防和控制新生儿发病率具有重要的临床意义.目前,产前诊断主要以创伤性诊断方法为主,包括孕早期的绒毛穿刺、孕中期的羊水穿刺和孕晚期的脐带穿刺等.技术成熟,准确率99%.
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非侵入性产前筛查
围产期出生缺陷与死亡一直是世界范围待解决的难题。在发达国家和中国内地的围产儿死亡原因中,严重的出生缺陷仍占据第一及第二位,因此,预防和减少出生缺陷是降低围产儿死亡率的主要途径之一。目前,在临床上产科医生较为广泛用于检查、诊断及监测胎儿在母体宫内发育的工具是经腹及阴道超声扫描[1-6]。由于现代科技的发展,用于产前检查及产前诊断的超声仪发展日臻完善。自20世纪80年代初至今,由于人们对超声检查的认识及认可,对于超声检查是否会对人类胚胎造成畸形的研究日益增多,虽然部分学者仍持谨慎态度,但大多亦认为其安全性和准确性较高。其中一些国家,如英国及澳大利亚等,近90%~100%的孕妇在妊娠期接受至少1次的超声检查,而大多数欧美国家及现时中国大部分南方城?均把产前超声视为产前常规检查项目之一[2-3]。国家卫生部2003年5月1日颁布实施了《产前诊断技术管理办法》,建议在整个妊娠期中常规进行3次超声检查,时间分别为孕11~13+6周[测量胎儿颈部透明层(nuchal translucency,NT)和筛查唐氏综合征]、孕19~22周[系统筛查胎儿畸形(金标准)]及孕29~32周[7]。此外,作为胎儿宫内诊断的方法目前有侵入性和非侵入性两大类。随着分子生物学技术和医学遗传学的发展,产前诊断技术不断朝早期、快速、准确及无创的方向发展,使越来越多的出生缺陷能够在胚胎发育的较早期被安全及准确地诊断出来。其中非侵入性技术主要包括经宫颈脱落滋养细胞、孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿游离 DNA 的检测等[5-7]。
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脂氧素A_4对巨噬细胞集落刺激因子激活重度子痫前期孕妇单核细胞功能的影响
子痫前期是妊娠期特有疾病,其病因复杂.该病与炎症关系密切已是不争的事实,子痫前期孕妇体内哪些因子具有激发炎症的作用?一直为人们所关注.文献报道,子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)水平明显升高,提示M-CSF可能参与了子痫前期的发生~([1]).
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应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究
由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少,Hahn, Holzgreve[1]和Bianchi等[2]报道,孕妇每毫升外周血中仅有1~2个完整胎儿细胞.所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记,并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术,是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的佳手段[3].但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体,故不同学者选用的标记性抗体也有所不同.本研究采用荧光激活细胞分离技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS ),通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体(transferrin receptor, CD71)单标记染色和胎儿血红蛋白(fetal haemoglobin,HbF)单标记染色与双标记染色情况的比较,探讨CD71 与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值.
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未足月胎膜早破孕妇外周血、新生儿脐血和胎膜组织中ox-AAT、NE的表达及其与组织学绒毛膜羊膜炎的关系
未足月胎膜早破( pPROM )是产科常见的妊娠期并发症。 pPROM与感染互为因果,且多表现为亚临床感染,即组织学绒毛膜羊膜炎(HCA)[1]。 pPROM合并HCA可导致孕妇发生胎盘早剥、产后出血、产褥感染、败血症等围产期并发症,且新生儿发生感染性疾病,如新生儿肺炎、脑白质损伤的概率增加。因此,提早预测HCA的发生具有重要意义。氧化型α1-抗胰蛋白酶( ox-AAT )和中性粒细胞弹性蛋白酶( NE)与pPROM的发生有关,同时在炎症瀑布反应中起调节作用。因此,本研究通过检测pPROM患者外周血、新生儿脐血及胎膜组织中 ox-AAT 和 NE 的表达水平,探讨其在pPROM合并HCA发生中的作用。
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孕妇外周血中C反应蛋白和白细胞介素6在亚临床感染性早产预测中的价值
高效、微创、稳定的早产预测指标是改善早产儿结局的重要环节.妊娠34周前的早产是影响新生儿预后的关键性阶段,且与羊膜腔内感染(intra amniotic infection,IAI)有密切关系.80%以上的IAI表现为亚临床型,难以早期发现与诊断,而分娩后胎盘病理检查等仅限于产后的回顾性诊断[1-2].因此,本研究通过前瞻性检测妊娠24~34周孕妇外周血中C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(IL-6)水平,探讨其在亚临床感染性早产中的预测价值及意义.
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孕妇血浆中游离胎儿DNA测定在产前诊断中的应用
传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术,因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等,使其在临床上的推广和应用受到了限制.利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径[1].但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少,而且存在个体差异,目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞,这无疑限制了这种方法在临床上的应用[2].1997年,有学者研究发现,孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域[2,3].
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妊娠高血压综合征患者外周血及脐血端粒酶活性的检测
在高血压的发生、发展中,端粒的损伤不仅限于血管壁细胞,也涉及造血细胞[1].有研究证实,外周血细胞的端粒酶激活程度与端粒的损伤程度呈正比[2].也有文献报道,高血压患者外周血单个核细胞端粒酶活性明显增高[3].我们检测了妊娠高血压综合征(妊高征)患者外周血及胎儿脐血中端粒酶活性,旨在探讨孕妇外周血及脐血单个核细胞端粒酶活性与妊高征的关系.
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胎儿细胞父源性人类白细胞抗原DQA基因检测
随着应用孕妇外周血中胎儿细胞进行无创性产前诊断研究的进展,多数研究者利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)或荧光原位杂交的方法检测性别决定基因(sex-determining region Y,SRY)[1-3],作为鉴定胎儿细胞存在或已成功分离的手段,但这些方法仅局限于检测妊娠男性胎儿的孕妇外周血中的胎儿细胞.人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DQA基因属于HLA-Ⅱ类抗原[1],该基因的多态性和高变异性使HLA-DQA基因位点具有较好的鉴别力[2].我们应用PCR-反向点杂交法,检测孕妇外周血中胎儿细胞父源性HLA-DQA基因,旨在推动无创性产前基因诊断的基础研究.