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《孕妇血浆及血清中胎儿DNA出现的机制及组织来源研究》
现有的产前诊断技术,如绒毛活检、羊水穿刺、脐血穿刺等,对预防患有遗传病或先天性畸形胎儿的出生、提高出生人口素质具有十分重要的意义.但是,这些技术属于创伤性的,可能会带来流产、感染等不同程度的损伤.因此,发展无创伤性产前诊断技术已成为优生科学领域中研究的热点.
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孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究
本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性.采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化.结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因.结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断.
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孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测
本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断.选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血.结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7.结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义.
关键词: 缺失型α-地中海贫血 α-地中海贫血 游离胎儿DNA 单管多重PCR 孕妇血浆 -
孕妇血浆中游离DNA在先天性软骨发育不全产前诊断中的应用
基因病的产前诊断多采取在妊娠期取羊水或绒毛细胞进行基因分析的方法.但这2种取材方法均具有创伤性,可能对胎儿及孕妇生命造成危害.Lo等[1]研究证明,孕妇外周血中存在胎儿游离DNA,为单基因病的非侵入性产前诊断提供了一种新的途径.为探讨该途径临床应用的可行性,我们采用Qiagen公司的DNA分离试剂盒,结合基因扩增限制性内切酶分析技术成功地对1例先天性软骨发育不全(achondroplasia,ACH)的孕妇进行了非侵入性产前诊断.
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妊娠合并糖尿病的诊治
妊娠期间糖尿病有2种情况,一种为妊娠前已有糖尿病的患者妊娠,另一种妊娠前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退,怀孕时才发现糖尿病又称妊娠期糖尿病(GDM),我国发生率约1~5%,近几年有明显增高趋势,本人近5年对本院门诊及住院患者82例GDM的管理及治疗体会总结报告如下。
在妊娠早中期,随孕周增加,胎儿对营养物质的需求量增加,通过胎盘从母体获取葡萄糖是胎儿能量的主要来源,孕妇血浆葡萄糖水平随妊娠进展而降低,空腹血糖约降低10%。血糖降低原因:(1)胎儿从母体获取葡萄糖增加;(2)孕期肾血浆流量及肾小球滤过率均增加,但肾小管对糖的再吸收率不能相应增加,导致部分孕妇排糖量增加;(3)雌激素和孕激素增加对母体对葡萄糖的利用。因此,空腹时孕妇清除葡萄糖能力较非孕期增强。孕妇空腹血糖较非孕妇低,这也是孕妇长时间空腹易发生低血糖及酮症酸中毒的病理基础。到妊娠中晚期,孕妇体内抗胰岛素样物质增加,如胎盘生乳素、雌激素、孕酮、皮质醇和胎盘胰岛素酶等使孕妇对胰岛素的敏感性随孕周增加而下降,为维持正常糖代谢水平,胰岛素需求量必须相应增加。 -
无创产前检测与染色体核型结果的不一致
1997年,香港中文大学卢煜明教授(Dannie's Lo)在牛津大学发表了《孕妇血浆内含有相当比例的细胞游离胎儿 DNA 片段(cell-free fetal DNA, cffDNA)》的文章后,相关的研究如雨后春笋般的出现,且逐渐成为产前诊断(prenatal diagnosis)学术领域的显学[1]。近几年来,随着二代测序(next generation sequencing, NGS)仪器快速发展,无创产前检测(non-invasive prenatal testing, NIPT)正式被应用在临床上,成为胎儿染色体异常产前检测方式之一[2]。
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孕妇血浆游离核酸高通量测序检测胎儿遗传异常
孕妇血浆中胎儿源性的游离DNA的发现,为无创产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)奠定了科学基础.通过对孕妇外周血中的游离DNA进行检测,能够以无创的方式分析胎儿的遗传特征,为产前筛查(prenatal screening)和产前诊断(prenatal diagnosis)提供了有效的手段.新一代高通量测序技术(nextgeneration sequencing,NGS)的发展及其在临床的广泛应用,使其在孕妇血浆胎儿游离DNA检测中的应用成为必然趋势,并推动无创产前检测技术的迅猛发展.通过孕妇血浆游离DNA的高通量测序,可实现胎儿的染色体非整倍体、单基因遗传疾病、微缺失微重复的检测,也可以对胎儿基因组、DNA甲基化组以及转录组等信息进行分析.
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ERG甲基化作为无创产前诊断唐氏综合征标记的可行性研究
目的 探讨ERG基因是否可以作为孕早期血浆中检测胎儿DNA的通用标志物.方法 随机选择早期妊娠孕妇70例,并以经体检确定为未孕健康妇女70例、分娩过21-三体胎儿的妇女11例和顺产后3 d妇女20例作为对照组.利用甲基化敏感限制性内切酶HpaⅡ、MspⅠ酶切后进行常规PCR的方法,检测血细胞、绒毛和血浆DNA目的 基因ERG 21-128序列的甲基化模式,并对妊娠组和对照组样本进行统计学分析.结果 位于21号染色体上的ERG基因21-128序列在70例孕8、9、10周孕妇绒毛组织中甲基化而在母体血细胞中未甲基化,绒毛甲基化检出率为100%;在血浆中游离胎儿DNA ERG基因21-128序列的甲基化检出率为77.1%,敏感度为77.1%.其中8、9、10周甲基化差异无统计学意义(P>0.05).在70例未孕健康妇女、11例生产过21三体胎儿的健康妇女和20例产后3 d妇女的对照组的血浆中ERG 21-128序列均未甲基化.结论 在母体和胎儿DNA中,ERG基因21-128区的甲基化有显著性差异,实验方法也比较简单,提示了ERG是无创性产前诊断DS的一个潜在标记物.
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孕妇血浆中游离胎儿DNA测定在产前诊断中的应用
传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术,因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等,使其在临床上的推广和应用受到了限制.利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径[1].但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少,而且存在个体差异,目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞,这无疑限制了这种方法在临床上的应用[2].1997年,有学者研究发现,孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域[2,3].
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妊娠高血压综合征患者瘦素与神经肽Y的表达及意义
瘦素是由肥胖基因编码的、脂肪细胞合成及分泌的一种多肽类激素.神经肽Y(neuropeptide Y,NP-Y)是由外周交感神经末梢分泌的一种多肽.瘦素作用于肥胖基因受体,可抑制下丘脑部位NP-Y的合成与分泌,通过抑制食欲、减少能量摄取、增加能量消耗、抑制脂肪合成等途径,减少机体脂肪沉积,从而调节体重[1,2].此外,瘦素和NP-Y还参与血压的调节[3].为了解妊娠高血压综合征(妊高征)时异常的病理生理变化,与瘦素和NP-Y的关系,我们对妊高征孕妇外周血、新生儿脐静脉血、羊水中瘦素水平和孕妇血浆NP-Y水平以及胎盘组织中NP-Y的表达进行检测,现报道如下.
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孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用
唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征,是新生儿常见的先天性染色体病,其发病率约为1/600~1/800[1],高龄产妇多发.新生儿出生后多智力低下,给社会和家庭带来了极大的负担,本研究采用实时定量PCR技术,测定正常孕妇及妊娠唐氏综合征患儿的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的变化,旨在寻找一种非创伤性、快捷、经济的产前筛查唐氏综合征的新指标.
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妊娠期肝内胆汁淤积症患者血浆促肾上腺皮质激素释放激素增长受限
妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是妊娠特有的并发症,其严重危害是突然胎死官内,具体机制尚未明了,可能是急性缺氧的结果,与子宫-胎盘-胎儿单位功能[1]及其血流调节[2]有关.胎盘小叶血管无神经分布,子宫-胎盘-胎儿单位血管床血流调控依赖于局部产生和循环中的血管舒张因子[3].促肾上腺皮质激素释放激素( corticotropin-releasing hormone,CRH)是近年研究较多的血管活性物质[4],主要由胎盘组织分泌,是妊娠期特殊标志物,对子宫-胎盘-胎儿单位血管具有强效的浓度依赖性舒张作用[5].关于CRH与ICP的关系尚未检索到相关文献报道,本研究通过测定ICP患者及正常妊娠孕妇血浆中CRH水平,观察ICP患者血浆CRH变化规律,探讨CRH与ICP胎儿缺氧的关系.
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孕妇外周血中胎儿游离DNA在产科中的应用
检测孕妇外周血中胎儿游离DNA,为无创产前诊断及妊娠相关性疾病的防治找到了新途径,此种技术具有诸多优势。孕妇外周血中胎儿游离DNA测序可用于胎儿非整倍体疾病、胎儿单基因遗传病、胎儿血型的检测、胎儿性连锁疾病的产前诊断筛查;胎儿游离 DNA 水平的变化可作为一种新的生物指标为妊娠相关性疾病的诊断及治疗提供帮助。随着分子生物学技术的不断发展,对孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究将更加深入。
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从ET-1及NO水平的变化浅谈妊高症发病机制
妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertensionsyndrome,PIH,简称妊高征)是妊娠妇女高发病,也是造成妇女妊娠期间,孕妇胎儿死亡的主要原因之一.近几年来,血浆内皮素-1与妊高征的关系逐渐引起人们的重视.一氧化氮(NO)是血管内皮细胞衍生的血管舒张因子,在妊娠中,NO和ET共同参与血管张力及血液动力学的调节.本文通过观察妊高征孕妇血浆ET-1及NO的变化,皆在分析、探讨妊高征发病机制.
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孕妇血浆胎儿DNA的父源性α地中海贫血产前基因诊断
目的 检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性东南亚缺失型α地中海贫血1(SEAα地贫1)基因突变,进行无创伤性产前基因诊断.方法 应用荧光聚合酶链反应(PCR)和基因扫描方法分析10例孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变及短串联重复序列(STR);同时以常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的基因诊断结果作对照.结果 10例孕妇血浆胎儿DNA均检测到父源性STR等位基因.有4例检出父源性SEAα地贫1基因突变;6例未检出父源性SEAα地贫1基因突变,与常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的产前基因诊断结果一致.结论 应用荧光PCR和基因扫描方法检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变,可排除血红蛋白H病胎儿.
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054 有和无妊娠糖尿病的孕妇血浆磷脂多不饱和脂肪酸:与母亲因素的关系
[英]/Wijendran V…//Am J Clin Nutr.-1999,70.-53~61 本研究旨在阐述有无妊娠糖尿病(GDM)的孕妇妊娠后期血浆磷脂多不饱和脂肪酸(PUFAs)的变化,同时确定与血浆磷脂长链PUFAs相关的母亲因素。 对象和方法 从哈特福德医院妇产科选择15名GDM孕妇及15名健康孕妇(对照组)。排除患有高血压、高血脂、肾、肝、甲状腺疾病、多胎妊娠、产次>5的孕妇及需要药物或胰岛素控制血糖的GDM孕妇。GDM孕妇仅接受饮食治疗(每日摄入的热能中约45%来自碳水化合物,22%来自蛋白质,33%来自脂肪),以保持血糖正常(空腹血糖≤5.27mmol/L,餐后2 h血糖≤6.66mmol/L)。受试者在妊娠27~30周、33~35周、36~39周安排了3次产前诊视。每次由肘前静脉采5ML空腹血,测定血浆磷脂脂肪酸,胰岛素及糖化血红蛋白(HbAlc)的浓度,同时测定膳食PUFA摄入及母亲体重。记录受试者前一天所摄入的全部食物,孕前的身高、体重、空腹血糖值由医院记录中得到。 结果 磷脂中的主要n-6PUFAs(≥18碳)、亚油酸(LA)、花生四烯酸(AA)对照组与GDM组无明显差异;而n-6长链PUFAs(≥20碳)即二十碳二烯酸、二十碳三烯酸、二十二碳四烯酸GDM组比对照组低;n-3脂肪酸两组间存在明显差异。调整了饮食中二十二碳六烯酸(DHA)的摄入后,GDM组平均血浆磷脂DHA比对照组高13%(P=0.03)。妊娠后期,母亲的平均HbAlc与平均血浆磷脂AA在对照组(r=-0.56,P=0.03)及GDM组(r=0.76,P=0.001)均相关。GDM组平均空腹血浆胰岛素浓度与平均磷脂AA成正相关(r=0.69,P=0.004),而对照组也有此倾向(r=0.51,P=0.07)。孕前体重指数(BMI)与平均血浆磷脂DHA在对照组(r=-0.55,P=0.04)及BMI<30的GDM孕妇(r=-0.76,P=0.007)均成负相关。对照组平均空腹胰岛素浓度与平均血浆DHA成负相关(r=-0.54,P=0.05),在BMI<30的孕妇中也有此倾向(r=-0.51,P=0.10)。 结论 本研究首次报道了饮食控制治疗的GDM孕妇PUFA的状况。与正常孕妇相比,GDM孕妇血浆磷脂IA、AA无变化,而DHA较高。孕妇血糖控制及孕前BMI分别与妊娠后期血浆磷脂AA及DHA相关,膳食DHA的摄入也明显影响血浆磷脂DHA的浓度。(刘海珍 宋桂花摘 王 娟校)
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孕妇血浆胎儿DNA的β地中海贫血产前基因诊断
我们对广西地区可能生育重型β地中海贫血(地贫)患儿的高危夫妇,通过分离和提取孕妇血浆中的胎儿DNA,应用荧光聚合酶链反应(PCR)和基因扫描(Genescan)分析方法,进行无创伤性β地贫产前基因诊断.
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006 应用巢式PCR检测孕妇血浆及尿液中Y染色体特异DNA
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妊高征患者血浆D-二聚体和血小板数量的测定及其临床意义
D-二聚体(D-dimer)作为交联纤维蛋白的特异降解产物,其水平可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志之一[1]。在纤溶酶作用下,纤维蛋白原(Fg)和纤维蛋白(Fb)降解的总产物是FDP,而D-dimer则是交联纤维蛋白的降解产物,FDP 与D-dimer具有很好的相关性。本文对妊高征和正常晚孕妇血浆D-dimer和血小板计数(PLT)进行了对比分析,以探讨D-dimer对妊高征早期预测和诊断的意义。
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血浆胎儿纤连蛋白在67例妊高征患者中的表达
胎儿纤连蛋白(fetal fibronectin,FFN)与妊高征的关系已引起产科工作者的关注,本文通过检测孕妇血浆胎儿纤连蛋白值,探讨FFN与妊高征的关系,从而能够达到预测妊高征的目的.