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豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子的影响
目的观察豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子的影响,从细胞分子水平探讨该药的作用机制.方法选用健康Wistar大鼠,随机分为正常组,模型组,豆根管食通高、中、低剂量组,化疗组,应用S-P免疫组化法检测大鼠食管组织p16、Rb、cyclin D1、CDK4的表达.结果各药物治疗组p16、Rb表达率均有不同程度的升高,以豆根管食通高剂量组升高为明显,与模型组比较有统计学意义(P<0.05).cyclin D1、CDK4在食管癌模型组表达率明显提高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01).结论豆根管食通口服液对食管癌具有较好的防治作用,其抗癌作用的分子机理可能是通过上调抑癌基因p16、Rb,下调癌基因cyclin D1、CDK4的表达,阻断细胞由G1期向S期过渡,从而抑制大鼠食管癌细胞生长.
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牛磺酸对家兔缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响
研究表明,牛磺酸(taurine, Tau)对心肌缺血再灌注损伤有防护作用[1],但其确切的机制尚不十分清楚.心肌缺血损伤除引起心肌细胞坏死外,也可诱发心肌细胞凋亡.近几年的研究表明,细胞凋亡受多种因素调控,其中以细胞凋亡相关基因蛋白(如Bcl-2、Bax和Fas等)的作用较为重要;但牛磺酸对家兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有何影响,以及是否调控凋亡相关基因的表达,目前尚不十分明确.本实验观察了牛磺酸对家兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关调控基因蛋白表达的影响.
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乙型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡并伴随P16蛋白高效表达
近年的研究发现,甲、乙、丙型流感病毒感染宿主细胞时均可不同程度地诱导细胞凋亡,细胞凋亡是流感病毒杀死宿主细胞的主要方式.目前,甲型流感病毒诱导宿主细胞凋亡基因的调控及蛋白表达的研究结果已有报道,而乙、丙型流感病毒诱导细胞凋亡调节机制的结果尚未见报道.本文以乙型流感病毒(B/沪防93-1株)感染HeLa细胞,通过Hoechst 33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡,并用免疫组化技术测定P16基因蛋白表达,以MPIAS-500计算机多媒体图象分析系统作蛋白表达图象分析,用阳性染色A值(吸光度,原为光密度OD值)表示P16蛋白表达量,从而探讨乙型流感病毒诱导细胞凋亡及P16蛋白在细胞凋亡过程中可能的调节作用.
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脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与炎症性肠病的临床关系
目的:探讨脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine trail,FHIT)蛋白在38例溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)、25例Crohn's病、11例UC相关性腺癌和13例正常对照组中的表达情况.方法:标本常规石蜡包埋,采用免疫组化法检测FHIT在UC、Crohn's病、UC相关性腺癌和正常对照组中的表达.结果:38例UC中,25例FHIT蛋白表达阴性;25例Crohn's病中,19例表达阴性;11例UC相关性腺癌中,6例表达阴性.FHIT蛋白在UC和正常对照组(71.43% vs 7.69%,x2=18.80,P<0.01)、Crohn's病和正常对照组(76%vs 7.69%,x2=18.88,P<0.01)、UC相关性腺癌和正常对照组(54.55% vs 7.69%,X2=7.75,P<0.05)间均有显著性差异;而在UC和UC相关性腺癌中无显著性差异(54.55% vs 71.43%,X2=0.05,P>0.05).结论:FHIT蛋白在炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)和UC相关性腺癌中呈低表达或缺失,提示该基因可能与IBD和UC相关性腺癌发生有关.
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胃癌同证型中肿瘤转移相关基因蛋白的表达
目的:从基因蛋白表达层次探索胃癌中医证本质.方法:从第二军医大学长征医院普外科收集术前胃癌患者,并按中医辨证分型标准将其归属;取术后肿瘤标本,用免疫组化方法检测胃癌肿瘤中E-Cadherin、C-erbB-2、P53、nm23、ICAM-1、VEGF、KDR、MMP-2、TIMP-29种基因蛋白表达情况.结果:每个证型中的9个基因蛋白之间均有不同表达,统计学分析表明6证型的9个基因蛋白表达均有显著性差异P=0.0 001,进一步两两比较示同一证型内部多组基因都存在表达差异性;VEGF、E-cad、nm23表达率较高,分别为94%、90%、92%.痰湿凝结型中E-cad的蛋白表达高,以平均秩和表示为:63.09,肝胃不和、瘀毒内阻两型E-cad表达较低.结论:肝胃不和、瘀毒内阻两型胃癌发生转移可能主要与E-cad的缺失有关,但内部既有癌基因的高表达亦有抑癌基因高表达.
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食管癌早期诊断的分子生物学标志物
肿瘤相关基因产物及肿瘤标志物的检测用于食管癌的早期诊断,已显示出可喜前景.核抗原Ki67、P53、P21、p27、c-myc蛋白和Bcl-2蛋白过量表达,cyclin D1基因蛋白表达及DNA倍体的定量检测,抑癌基因FHIT缺失、P16基因点突变,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、P53抗体的联合检测,微卫星不稳定性与D3S4513、D5S2501等标志物,iNOS,Cox-2蛋白,TSGF,端粒酶,Egr-1 mRNA和蛋白,脂肪酸合酶,TGFβ1和TGFβR Ⅱ,维甲酸受体RAR β等在食管癌的早期诊断中均不同程度的显示出自身的价值,对食管癌早期诊断的研究有重要作用.
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FHIT基因蛋白表达与结直肠癌及癌前期病变的临床关系
目的:探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine trail,FHIT)蛋白在45例结直肠癌、36例结直肠腺瘤和23例正常对照组中的表达情况.方法:标本经40 g/L甲醛固定,常规石蜡包埋,采用免疫组化SP法检测FHIT在结直肠癌、结直肠腺瘤和正常对照组中的表达.结果:在45例结直肠癌中28例FHIT蛋白表达显著减少或缺失,5例表达减弱,12例表达阳性;其中结直肠癌DukesA,B和C期FHIT蛋白表达阴性比例分别为6/1l,5/12和17/22.在36例结直肠腺瘤中7例FHIT蛋白表达显著减少或缺失,4例表达减弱,25例表达阳性;其中结直肠腺瘤伴轻、中和重度不典型增生FHIT蛋白表达阴性比例分别为2/16,1/7和4/13.FHIT蛋白阴性表达在结直肠癌和正常对照组(62.2% vs 4.4%,x2=25.33,P<0.01)、结直肠癌和结直肠腺瘤(62.2% vs 19.4%,x2=14.19,P<0.01)、结直肠癌未伴淋巴转移的Dukes A+B期和已伴淋巴转移的C期(47.8% vs 77.3%,x2=4.28,P<0.05)间均有显著性差异,而在结直肠腺瘤伴轻度不典型增生和中、重度不典型增生(12.5% vs 25.0%,X2=0.84,P>0.25),结直肠腺瘤和正常对照组(19.4%ys 44%,x2=3.51,P>0.05)中无显著性差异.结论:FHIT蛋白在结直肠癌中呈低表达或缺失,且FHIT低表达与转移状况有相关关系,提示该基因可能与结直肠癌的发生发展有关.
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细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P<0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P<0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P<0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
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胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究
目的:利用免疫组化的方法探索P53基因在癌前病变到癌这一转化过程的重要作用以及在胃癌早期诊断中的意义.方法:采用胃镜活检标本,选择胃黏膜不典型增生的病例,分出癌变组与未癌变组,利用免疫组化的方法检测P53基因蛋白表达情况.结果:正常胃黏膜、轻、中、重度不典型增生的癌变率分别为0%、3.4%、10.7%、16.7%,随着不典型增生程度的增加其癌变率亦增加.在未癌变组中P53蛋白阳性表达中、重度不典型增生与正常胃黏膜、轻度不典型增生间有显著性差异(P<0.05),在癌变组中,轻、中、重度不典型增生与正常胃黏膜间有显著性差异(P<0.05),未癌变与癌变组间差异有显著性(P<0.05).结论:不典型增生是一种重要的癌前病变,P53基因的变异在胃癌的发生、发展中起重要作用,对不典型增生胃黏膜进行P53基因检测有助于胃癌的早期诊断.
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三氧化二砷对肝癌诱导血管内皮细胞相关基因蛋白表达的影响
目的:研究三氧化二砷(As2O3)注射液对肝癌诱导血管内皮细胞相关基因蛋白表达的影响.方法:构建了人肝癌SMMC-7721细胞株诱导人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的实验模型,应用免疫组织化学方法,严密观察了As2O3注射液对SMMC-7721细胞、ECV304细胞及SMMC-7721细胞条件培养液培养的ECV304细胞,有关基因蛋白表达的影响.结果:2 mg/L的As2O3注射液,对SMMC-7721细胞、ECV304细胞及SMMC-7721细胞条件培养液培养的ECV304细胞表达肿瘤相关基因蛋白,均有一定的调节作用;可下调VFGF、整合素β1和EGFR的表达;上调E-钙粘连蛋白的表达.结论:As2O3注射液抗原发性肝癌及防治肝癌复发和转移的作用机制,可能与其能调节肝癌细胞及血管内皮细胞VEGF、整合素β1、E-钙粘连蛋白和EGFR等基因蛋白的表达,干预细胞的信号转导,抑制肿瘤血管形成有关.
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p14ARF基因在大肠癌中的表达及意义
目的:探讨p14ARF基因在大肠癌中的表达及其生物学意义.方法:应用免疫组织化学(S-P)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术原位观察60例大肠癌患者的癌组织、癌旁组织和正常组织中p14ARF基因蛋白的表达和细胞凋亡.结果:癌组织p14ARF基因的阳性表达相对含量(PU)(9.57±1.03)明显低于癌旁(28.17±5.26,t=2.51,P=0.02<0.05)和正常组织(43.76±7.14,t=3.61,P=0.006<0.01);癌旁凋亡指数(AI)(8.51±2.63%)高于癌组织凋亡指数(AD(5.65±1.76%,t=2.18,P=0.04<0.05);p14ARF基因蛋白的阳性表达按患者的性别、年龄、肿瘤大小分组比较各组间无明显区别:按癌组织的分化程度、淋巴结转移和Dukes分期比较,低分化组、有淋巴结转移组和Dukes C+D期组的p14ARF基因蛋白表达分别低于高分化组(7.93±1.89 vs 12.76±2.28,t=2.36,P=0.03<0.05)、无淋巴结转移组(7.21±1.95 vs13.12±2.33,t=2.34,P=0.03<0.05)和Dukes A+B期组(7.87±1.18 vs 12.03±2.15,t=2.36,P=0.03<0.05).结论:p14ARF基因在大肠癌组织中表达下调,从而抑制大肠癌的细胞凋亡,这可能是大肠癌发生、发展的机制之一:p14ARF基因的表达下调与大肠癌的恶性生物学行为有关.
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胃癌前病变p21ras,c-erbB-2,P53表达与中医证候的关系
目的:观察胃癌癌前病变p21ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白表达与中医证候的关系.方法:经胃镜及病理证实为胃癌癌前病变的病例共40例,其中中度异型增生24例,重度异型增生9例,不完全性结肠化生7例;中医辨证属脾胃气阴两虚兼气滞者10例,兼胃热者12例,兼血瘀者18例.所有胃黏膜活检标本采用抗生蛋白链菌素-生物素免疫组织化学标记的方法作p21ras、c-erbB-2、p53表达的检测.结果:p21ras,c-erbB-2,p53在胃癌癌前病变中有过表达,且其表达随着病变的进展而升高,但中、重度异型增生及不完全性结肠上皮化生胃黏膜之间的表达差异无显著性(P>0.05).在不同的兼证中,p21ras,p53的表达兼血瘀者大于兼胃热、气滞者(P<0.01),c-erbB-2的表达兼血瘀、胃热者大于兼气滞者(P<0.05).结论:p21ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白在胃癌癌前病变中有过表达,其表达与不同中医兼证有关,可能有一定的证候特异性.
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缬沙坦后处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响
一、材料与方法1.实验动物和分组:健康新西兰大白兔24只,雌雄不分,体重2.0~2.5 kg,随机分为3组,每组8只.①对照组:结扎左冠状动脉前降支1 h,再灌注6 h;②后处理组:操作同对照组,于再灌注前15 min耳缘静脉注射缬沙坦(30 mg/kg),再灌注6 h;③药物干预组:操作同对照组,于再灌注前15 min耳缘静脉注射缬沙坦(30 mg/kg),再灌注前5 min给予蛋白激酶C抑制剂-GF109203X(0.05 mg/kg)耳缘静脉注射,持续5 min,后心肌再灌注直至6 h.
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ER、PR结构在女性生殖器官的分布
我们知道,雌、孕激素发挥其生物作用是通过其受体,故ER、PR对子宫内膜影响的分子生物学机制以及其在子宫的分布将成为子宫内膜正常变化和子宫内膜异常病变的决定性因素,随着现代分子生物学及其相关学科的发展,一些生物学指标,例如某些生长因子及其受体的水平、雌孕激素受体水平、分布特点、原癌基因蛋白表达及组织细胞增生动力学等对病变组织的影响及处理意义越来越受到国内外学者的重视,现就ER、PR的分子生物学特征、在女性生殖系统的分布方面进行阐述.
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胃癌组织环氧合酶-2异常表达与螺旋CT征象相关性研究
目的 探讨胃癌组织环氧合酶-2(COX-2)异常表达与螺旋CT的关系.方法 用免疫组化(SP)方法检测胃癌手术切除67例标本中上述基因表达.结果 胃癌COX-2过表达率为70.1%(47/67),且过表达与肿瘤大小、大体类型、组织学类型、淋巴结转移(LN)及临床病理分期密切相关(P<0.05).结论 胃癌COX-2异常表达与螺旋CT征象密切相关.
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非小细胞肺癌血管生成因子与耐药相关基因的关系及其临床意义
肿瘤细胞对化疗药物产生原发或继发耐药是化疗失败的主要原因之一,研究表明非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)耐药不仅与耐药相关基因蛋白表达有关,亦涉及血管生成因子[1].
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原发性胆囊癌nm23-H1和p53基因蛋白的表达及意义
原发性胆囊癌临床过程隐匿,转移早,侵袭力强,预后不佳.如何准确判断其恶性程度和浸润转移倾向,倍受人们关注.nm23-H1、p53抑癌基因被认为对恶性肿瘤的发生和转移有抑制作用,且与分级、分期及预后有关.本研究应用免疫组化技术检测了原发性胆囊癌及胆囊息肉样病变nm23-H1和p53基因蛋白表达及其与胆囊癌临床病理参数的关系.
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宫颈癌中nm23-H1、erbB3、erbB4相关表达及与预后关系
目的探讨nm23-H1、erbB3、erbB4基因蛋白在宫颈癌中相关表达及与宫颈癌临床病理参数和预后关系.方法采用免疫组化法HIGH-SABC法检测了50例宫颈癌(鳞癌、腺癌各25例)标本中nm23-H1、erbB3、erbB4基因蛋白表达.结果erbB3、erbB4在鳞癌表达率高于腺癌(分别为52%、44%;44%、36%),nm23-H1在宫颈腺癌阳性率(60%)高于鳞癌(44%),但均无统计学意义.宫颈鳞、腺癌erbB3、erbB4表达均呈正相关;腺癌中nm23-H1、erbB4表达呈负相关,且nm23-H1阳性表达同时伴随erbB4阴性表达者的5年生存率明显高于nm23-H1阴性表达而erbB4阳性表达的5年生存率.结论erbB3、erbB4表达的正相关性提示在调节宫颈癌细胞分化中,两者可能是以异二聚体形式存在.nm23-H1和erbB4联合检测在宫颈腺癌的预后评价中可能是重要的.
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豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子cyclin D1 CDK4 PCNA的影响
目的:观察豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子cyclin D1、CDK4、PCNA的影响,从细胞分子水平探讨该药的作用机制.方法:选用健康Wistar大鼠,除随机分出的空白对照组(正常组)外,其余大鼠均腹部皮下注射甲基戊基亚硝胺(MANA)5mg/kg连续20周,末次注射后将造模大鼠随机分为模型对照组(模型组)、豆根管食通高中低剂量组、西药替加氟组(化疗组),1次/天,4周后停止.应用S-P免疫组化法检测大鼠食管组织cyclin D1、CDK4、PCNA蛋白的表达.结果:①cyclin D1、CDK4在食管癌模型组表达率明显提高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01).各药物治疗组cyclin D1、CDK4表达率均有不同程度的降低,管食通高剂量组和化疗组其阳性率降低更为明显,与模型组比较有统计学意义(P<0.05).②PCNA阳性指数在食管癌模型组明显升高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01).各药物治疗组PCNA阳性指数均有不同程度的降低,尤以化疗组及管食通高剂量组降低明显(P<0.01).结论:豆根管食通口服液通过下调癌基因cyclin D1、CDK4的表达,阻断细胞由G1期向S期过渡,PCNA阳性指数下降,从而抑制大鼠食管癌细胞生长.
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B细胞淋巴瘤中CD4蛋白表达的研究①
B细胞淋巴瘤是发生于淋巴造血组织的恶性肿瘤.以往研究显示,B淋巴瘤的发生与EB病毒有关[1],也与抑癌基因p53失活,原癌基因c-myc激活及细胞周期调节失控有关[2-4].随着研究的深入,又有学者认为,B淋巴瘤的发生是由于B细胞生长分化发生障碍所致.那么,B细胞为什么不能正常生长?文献和我们已有的研究表明,造成这种情况的原因,可能与对B细胞起调控作用的T细胞表面分子如CD4蛋白表达异常有关.因此,有必要对这方面的问题进行深入探讨.我们通过对CD4基因蛋白表达的研究,探讨CD4蛋白的表达在B淋巴瘤发病中所起的作用及意义.