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血清CA125检测及其临床意义
血清CA125检测已经有20年历史,CA125测定肿瘤标志物的检测方法,完全不同于由绒毛分泌的绒毛促性腺激素(hCG),后者具有极高的特异性与敏感性.而肿瘤则没有特异性抗原,只有肿瘤相关性抗原,因之特异性差.所以需要了解CA125测定的原理才能很好的应用于临床.一、基本概念1981年Bast等以卵巢上皮癌细胞株OVCA433为抗原制备了单克隆抗体OC125,OC125所识别的抗原称为CA125.用放射性同位素131I标记OC125后可进行卵巢上皮癌的检测.并以OC125检测各种组织,发现CA125不但存在于卵巢浆液性上皮癌中,尚存在于下列组织:(1)间皮细胞组织,包括腹膜、胸膜及心包膜;(2)副中肾管上皮,包括卵巢上皮癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌及间皮细胞瘤等.
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肺癌癌性胸水中TIL对肺癌细胞杀伤活性的实验研究
目的:研究肺癌癌性胸水中肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)对肺癌细胞株(A549)的杀伤活性,为临床应用TIL治疗肺癌提供依据.
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OC-3-VGH卵巢癌细胞简捷培养方法的研究
目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响.方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml/只接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2个月后处死,取肿瘤组织制片,并与传统培养方法结果进行比较.结果:两种方法培养的细胞均生长活跃,皮下接种7d左右,裸鼠长出肿瘤,组织学检查未见明显差异.结论:改良细胞培养方法减少了传统方法的繁琐步骤,方便细胞培养.
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激活低氧诱导因子-1的转导通路
低氧诱导因子-1(HIF-1)与心血管缺血、肺高压和癌症等有密切关系,是在低氧的肝细胞癌细胞株hep3B细胞的核提取物中发现的,是一种结合于促红细胞生成素(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列的特异蛋白.据报道,许多类型的细胞都可被低氧诱导而产生效应,其中HIF-1起主要作用,提示细胞中普遍存在一个低氧转导机制.一些转录因子,如活化蛋白-1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)、HIF-1[1]都与低氧应激反应有关.哺乳动物细胞对缺氧的适应性反应主要是表达HIF-1,这一过程与某些蛋白基因如醛缩酶A、烯醇化酶α、乳酸脱氢酶LDH、丙酮酸激酶和葡萄糖转移酶-1(GLUT-1)的表达有密切关系[2].
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205 黄芪女贞子汤抗癌作用的基础研究:黄芪女贞子汤对L-10癌细胞株群体迁移的阻止作用
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刺五加皂甙对肺癌细胞的生物效应
剌五加提高人体免疫力.多年来国内外对刺五加的药理进行了大量的研究.现将我们实验的刺五加皂甙对肺癌细胞株的生物效应结果报道如下.材料与方法1.刺五加皂甙由吉林大学基础医学部化学教研室提供,以生理盐水配成1.0g/L浓度灭菌溶液.
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人胚肺成纤维细胞突变株Z-HL16 C转化性质的初步鉴定
目的 初步鉴定人胚肺成纤维细胞(HL)突变株Z-HL16C的转化性质.方法 采用细胞形态学观察、细胞遗传学染色体分析、细胞在裸鼠体内恶性生长情况的组织病理学检测以及细胞对病毒的敏感性等方法.结果 HL细胞转化的Z-HL16C细胞在形态上由梭形的纤维细胞变成多边形的上皮样细胞,且具有稳定无限传代等特点;染色体数目由正常人的46条二倍体,转化成多数为亚三倍体或超三倍体;染色体结构核型中约有30%~40%的染色体为结构异常染色体;裸鼠移植肿瘤发病率为100%,其瘤组织病理检测结果显示,该细胞株为癌变细胞株.病毒实验表明,Z-HL16C细胞对单纯疱疹等多种常见病毒高度敏感.结论 人胚肺成纤维细胞的突变株Z-HL16C是对病毒高度敏感的癌细胞株.
关键词: Z-HL16C细胞株 癌细胞株 病毒敏感性 -
丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29组织蛋白酶D表达水平的影响
目的:观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的组织蛋白酶D(Cath-D)表达水平的影响.方法:运用细胞增生抑制实验(MTT法),光镜观察,免疫细胞化学技术观察丁酸钠对HT-29细胞株的生长,凋亡和对Cath-D表达水平的影响.结果:丁酸钠能抑制HT-29细胞株增生,诱导凋亡,并促进Cath-D表达.结论:丁酸钠能够影响Cath-D的表达水平,这暗示了Cath-D在丁酸钠诱导的凋亡中可能伴有重要角色.
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大肠癌细胞可产生趋化因子IP-10
目的:通过大肠癌细胞的原代培养和大肠癌细胞株的培养,探讨大肠癌细胞能否产生趋化因子,产生趋化因子的条件及其产生的动力学情况.方法:分别用α-TNF,γ-IFN及IL-1刺激培养原代细胞及细胞株.采用RT-PCR方法检测培养细胞趋化因子IP-10mRNA的表达.结果:大肠癌细胞在原代培养下经α-TNF、γ-IFN、IL-1的刺激可表达IP-10 mRNA.大肠癌细胞株Colo320经α-TNF,γ-IFN或IL-1的刺激可表达IP-10 mRNA.Colo320的IP-10 mRNA表达依刺激因子浓度和时间的改变而改变.结论:大肠癌细胞在一定的条件下能够表达趋化因子如IP-10mRNA等.
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肿瘤多药耐药和进展期大肠癌耐药细胞株建立研究进展
目的:综述进展期大肠癌多药耐药细胞株建立的进展.方法:回顾复习近年的的文献,了解多药耐药与大肠癌细胞株建立的情况,并对大肠癌多药耐药细胞株建立的情况进行概括.结果:多药耐药(MDR)是大肠癌化疗失败的主要原因之一,建立多药耐药细胞株,为临床治疗大肠癌奠定的基础.结论:建立大肠癌耐药细胞株,为临床克服化疗障碍,提高大肠癌对化疗药物的敏感性,对大肠癌治疗起到重要作用.
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高低转移表型大肠癌细胞株蛋白质表达谱差异初步分析
目的:应用蛋白质组学技术分析高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱差异.方法:以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析.结果:SW480和LoVo细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1184±47和1124±54,共获得88±5的蛋白质差异点,其中48±3个点仅在SW480细胞株中表达或表达明显增强,41±3个点仅在LoVo细胞中表达或表达明显增强.结论:高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些差异点进行鉴定将为研究大肠癌转移机制提供一定的线索.
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Fas死亡受体及FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响
目的:比较不同大肠癌细胞Fas受体及其下游通路抑制因子FLIP的表达差异,探讨Fas、FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响.方法:体外培养大肠癌细胞,应用直接免疫荧光流式细胞术检测细胞表面Fas表达率,半定量RT-PCR法测定FLIPmRNA的水平,并采用Annexin V法评价细胞对Fas介导的凋亡的敏感性.结果:大肠癌细胞表面Fas表达率不同,其中HT-29细胞的表达率为42.46±4.32%,明显高于其他3株细胞.SW620和HT-29细胞FLIP mRNA含量较高,Colo205居中,Lovo则呈阴性;且相对于任何一株FLIP表达阳性的细胞,FLIPL的表达水平均高于FLIPs.给予凋亡诱导型抗Fas抗体(CH-11)刺激后,4株大肠癌细胞凋亡敏感性均较低.结论:不同的大肠癌细胞株可能通过不同途径逃避Fas介导的凋亡,其中包括下调Fas的表达和上调FLIP的含量.
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细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P<0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P<0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P<0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
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NM-3含药血清对体外胃癌细胞株SGC-7901生长和VEGF及其受体KDR、Flt-1表达的影响
目的:探讨NM-3含药血清对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用.方法:将SGC-7901胃癌细胞分成空白对照组、血清对照组、NM-3含药血清低、中、高剂量实验组共5组.在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率,分析细胞周期分布;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1mRNA的表达.结果:NM-3含药血清3组随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,其高、中剂量组在6 h(16.80%±0.40%,25.20%±0.86%)、24 h(26.95%±3.25%,43.62%±3.53%)、72h(39.85%±4.10%,54.35%±5.42%)内的细胞早期凋亡率与空白,血清两个对照组相比有显著性差异(5.34%±0.28%,5.66%±0.72%;6.91%±1.06%,8.90%±0.86%:6.87%±1.24%,8.06%±0.78%;.P<0.01).随着NM-3药物剂量的增加,G0/G1期细胞增多,而S期及G2/M期细胞则相应减少.细胞培养72 h后,NM-3含药血清高,中,低剂量组与两对照组比较可显著抑制VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达(P<0.05).在72 h后细胞凋亡率,细胞周期以及胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1.mRNA的表达上,高剂量组与中低剂量组均有明显差异(P<0.05).结论:NM-3含药血清可抑制胃癌组织的血管生长,并可诱导胃癌细胞凋亡.
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尼美舒利对结肠癌细胞ICAM-1 mRNA表达的影响
目的:初步研究尼美舒利对培养结肠癌细胞生长及其ICAM-1 mRNA表达的作用.方法:以人结肠癌细胞株H-T-29,HCT-116为研究对象,体外药物敏感试验(MTT)法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增生抑制效应;RT-PCR方法检测尼美舒利作用前后细胞ICAM-1 mRNA表达的变化.结果:尼美舒利对结肠癌细胞HT-29、HCT-116生长抑制作用呈时间、剂量依赖性方式,对HT-29细胞抑制效果强于HCT-116细胞.尼美舒利下调HT-29细胞ICAM-1mRNA表达,而对HCT-116细胞ICAM-1 mRNA的表达无显著作用.结论:尼美舒利可明显抑制结肠癌细胞HT-29生长,提示NIM可能通过抑制COX-2酶活性,下调细胞ICAM-1的表达,从而降低癌细胞播散及转移几率.
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TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用
目的:观察TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用.方法:采用MTT法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞存活分数的影响;TUNEL法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡率的影响.结果:TRAII能有效地杀伤结肠癌SW480细胞,MTT法显示1000μg/L的TRAIL作用24 h SW480细胞存活分数仅为18.7%.TUNEL法均显示0,50,150,500,1500,5 000μg/LTRAIL蛋白诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为6.7%,29.4%,42.8%,50.8%,84.6%和87.4%;500μg/LTRAIL蛋白于0,6,12,18,24和30 h诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为7.8%,21.4%,41.8%,60.6%,73.8%和77.3%.TRAIL对结肠癌SW480细胞的作用存在较好的量效关系和时效关系.结论:TRAIL能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤SW480细胞,有可能成为有效的抗结肠癌新药.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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aFGF和genistein对大肠癌细胞株CCL229 PKC及ERK活性的影响
目的:观察aFGF及TPK抑制剂genistein对大肠癌细胞株CCL229细胞内PKC及ERK活性的影响,探讨其信号传导途径.方法:以不同浓度的aFGF(0.15mg/L,0.30mg/L,0.60mg/L,1.20mg/L)和genistein(6.00mg/L,12.00mg/L,24.00mg/L,48.00 mg/L)诱导CCL229细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定PKC及ERK活性结果:随着aFGF浓度的增加,PKC及ERK活性随之升高,与aFGF浓度呈显著正相关(P<0.05).当aFGF浓度为1.20mg/L时,PKC(胞质),PKC(胞膜)和ERK活性分别为对照组的2.60,2.79,1.77倍.genistein抑制细胞内PKC及ERK活性,且与genistein浓度呈剂量依赖效应(P<0.05).当genistein浓度为48.00 mg/L时,PKC(胞质),PKC(胞膜)和ERK活性分别为对照组的0.41,0.36,0.50倍.genistein对aFGF诱导的PKC及ERK活性抑制更显著.结论:大肠癌细胞株CCL229中aFGF受体具有TPK活性,TPK激活后促进蛋白质和酶磷酸化,导致PKC和ERK活性升高,进一步证明PKC及ERK确是TPK的下游信号分子.
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肠癌细胞株dynamin Ⅱ的差异表达
目的:应用半定量RT-PCR方法检测dynaminⅡ基因在大肠侧向发育型肿瘤细胞株同SW480细胞株及Lovo细胞株之间的差异表达.方法:以三种肠癌细胞株为标本,分别提取总RNA,逆转录合成cDNA,选择加入的模板量及循环数,优化PCR反应条件,确定适宜的反应体系,凝胶图像分析结果.结果:在大肠侧向发育型肿瘤细胞株同普通隆起型肠癌细胞株之间存在着dynaminⅡ基因的差异表达.结论:半定量RT-PCR方法具有简单,方便,经济的特点,通过该方法,我们发现在大肠侧向发育型肿瘤癌细胞株同SW480细胞株及Lovo细胞株之间存在dynaminⅡ基因的差异表达,此结果同我们基因芯片的筛选结果一致,结合dynaminⅡ基因的功能,我们推测该基因可能在LST的形态学或癌变机制中发挥一定作用.
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食管鳞癌中COX-2 mRNA的表达以及NSAID对其的影响
目的:检测人类食管鳞癌组织和细胞中COX-2 mRNA的表达及NSAID对其的影响,探讨COX-2与食管鳞癌发病机制之间可能存在的关系.方法:用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测22例食管鳞癌患者液氮冻存的食管鳞癌组织和癌周正常食管鳞状上皮组织标本COX-2 mRNA的表达.将人类食管鳞癌细胞株与阿司匹林或尼美舒利共同孵育后,用噻唑蓝法定量检测细胞增生情况,用RT-PCR法检测其COX-2 mRNA的表达情况.结果:在22例食管鳞癌组织标本中有12例(54.5%)COX-2mRNA表达阳性,但在癌周正常食管鳞状上皮组织标本均未检测到COX-2 mRNA表达.细胞培养结果表明,阿司匹林和尼美舒利对EC-9706细胞株的增生和COX-2 mRNA表达均有影响;但对EC-109细胞株,仅阿司匹林对细胞的增生和COX-2 mRNA表达有影响.结论:人类食管鳞癌常表达COX-2 mRNA,提示COX-2有可能在食管鳞癌的发生机制中起重要作用,而且NSAID很可能有助于预防和治疗此病.