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低体温降低内毒素性急性肺损伤大鼠肺血管ICAM-1表达
目前认为急性肺损伤(acute lung injury,ALI)"早期事件"是肺内中性粒细胞聚集和激活,而中性粒细胞和肺血管内皮细胞之间的黏附作用需要细胞间黏附分子表达上调.有研究显示,低温可降低细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达及随后的中性粒细胞迁移,从而减轻缺血性损伤[1].据此,本研究探讨中度低温对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)性ALI大鼠肺血管ICAM-1表达及肺内中性粒细胞聚集的影响.
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肺纤维化大鼠模型中结缔组织生长因子表达上调
本文旨在观察结缔组织生长因子(Connective tissuegrowth factor,CTGF)基因在大鼠肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)肺纤维化模型中表达水平的变化.
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一种基于TIL的肿瘤相关抗原特异性T细胞的筛选方法
Wolfl 等[1]的研究建立了一种以 CD137为表面标记,从人 CD8+T 细胞中快速鉴定和分离抗原特异性 T 细胞的方法。由于 CD137分子表达于活化的 CD4+和 CD8+T 细胞表面[2],其表达上调依赖于 T 细胞经抗原刺激后活化,并可在抗原刺激后12 h ~5 d 内持续表达[3]。因此可以CD137为标记,从 T 细胞中检测和分离比例较低的抗原特异性 T 细胞。
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非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测的经验总结分析
肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害严重的恶性肿瘤之一。研究表明,表皮生长因子受体(EGFR)在43%~89%的非小细胞肺癌(NSCLC)中表达上调,它在肿瘤的形成以及介导瘤细胞的生物学行为上发挥着重要的作用,是目前NSCLC治疗的重要靶点之一[1]。吉非替尼等治疗肺癌的靶向药物,为EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI),可通过对肿瘤细胞EGFR的特异性结合阻断细胞信号通路,抑制肿瘤细胞增殖并促其凋亡[2]。
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人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因对人喉鳞癌细胞系表皮生长因子受体和基质金属蛋白酶9表达的影响
表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶(MMP)9在肿瘤的侵袭和转移发生过程中发挥着重要作用,其表达上调能导致肿瘤的侵袭和转移潜能增强.人乳头状瘤病毒16(HPV16)为喉鳞癌的主要致病因素,其主要转化活性部位在E6和E7开放读码框架.我们采用脂质体转染技术将携带有HPV16-E6/E7 DNA的真核表达质粒导入HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系,使其在细胞中表达,研究其对Lscc-02喉鳞癌细胞系EGFR和MMP-9 mRNA及蛋白表达的影响,探讨HPV16-E6/E7基因与喉鳞癌演进及预后的关系.
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何首乌饮对衰老大鼠胰岛素信号通路的影响
目的::探讨何首乌饮对衰老大鼠胰岛素信号通路的影响。选用30只雄性大鼠随机分为3组:青年组(12月龄);衰老组(18月龄);何首乌饮组(何首乌饮4.8g/100g,灌胃60d,18月龄),每组各10只。采用β-半乳糖苷酶染色观察何首乌饮延缓睾丸衰老的情况,基因芯片技术筛选衰老大鼠受何首乌饮调控的差异表达基因群体,并采用qRT-PCR进行验证。从中筛选出受何首乌饮调控与胰岛素信号通路相关的关键基因IR、IRS1、IRS2、IGF1、IGFBP3,进行qRT-PCR、免疫荧光和Western blot 观察其在睾丸组织中的表达变化。结果:衰老组大鼠睾丸组织衰老细胞明显高于青年组(P<0.01),何首乌饮用药后衰老细胞明显减少( P<0.01)。基因芯片筛选出受何首乌饮直接调控的基因有912个,其中与胰岛素信号通路相关的基因有10个,从中选取的关键基因,衰老组IGFBP3的表达高于青年组(P<0.01),IR、IRS1、IRS2、IGF1表达低于青年组(P<0.01),用药后IGFBP3的表达下调,IR、IRS1、IRS2、IGF1表达上调(P<0.01)。结论:何首乌饮通过调节胰岛素信号通路关键基因的表达延缓大鼠睾丸衰老。
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糖皮质激素对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响
糖尿病所致糖皮质激素增加对视网膜神经节细胞( RGC )的影响及机制尚不完全清楚。本实验利用链脲佐菌素腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型,再向眼球玻璃体内注射腺病毒( DM组)、腺病毒包装的糖皮质激素受体反义寡核苷酸( siGR组)或阴性核苷酸序列( ncRNA组),正常大鼠玻璃体腔注射腺病毒为对照组(CON组)。12周后,HE染色显示,DM组及ncRNA组大鼠视网膜RGC 密度下降,较CON组减少(P<0.01),siGR组大鼠RGC密度均匀,排列有序,较 CON 组无明显变化(P>0.05);与 CON 组相比,DM 组及scRNA组大鼠视网膜鼻侧及颞侧4个象限的视网膜厚度均明显变薄( P<0.01),而siGR组无明显变化( P>0.05)。免疫组织化学染色可见DM组及ncRNA组大鼠ROCK阳性的RGC数量较多且深染,而siGR组及CON组大鼠视网膜ROCK阳性RGC数量较少,着色较浅。 Western-blot检测结果表明,与CON组相比,DM组及scRNA组大鼠视网膜ROCK表达上调(P<0.01),siGR组无明显变化(P>0.05)。本研究提示,拮抗糖皮质激素受体能下调ROCK在糖尿病大鼠视网膜RGC内的表达,恢复RGC密度及视网膜厚度。
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NgR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响
视网膜神经节细胞( RGC)轴突形成了视神经,RGC凋亡是糖尿病视网膜病变( DR)的主要病理表现之一。 Nogo蛋白受体( NgR)能抑制神经再生,NgR表达上调是多种致盲性疾病RGC凋亡的主要机制。本研究利用链脲佐菌素诱导了糖尿病大鼠模型,构建了抑制NgR表达的siNgR腺病毒。结果发现,在视网膜NgR仅存在于RGC细胞内,糖尿病大鼠视网膜变薄, RGC数量减少,凋亡增加,突触数量降低, NgR的下游分子ROCK蛋白及NR2 B随着NgR的表达增加而上调。糖尿病大鼠玻璃体内注射重组腺病毒抑制NgR表达之后,能恢复糖尿病大鼠视网膜的病理变化。进一步的离体研究发现, NgR/ROCK信号通路激活能导致RGC胞体缩小,突起萎缩;NgR/NR2 B信号通路激活,能导致RGC细胞活力下降甚至凋亡。因此我们认为,糖尿病状态下,NgR表达上调通过ROCK信号通路影响了视网膜RGC细胞形态,通过NR2B信号通路导致了RGC细胞凋亡,RGC数量和形态的变化影响了视网膜突触数量,这可能是DR视力受损的重要机制之一。
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荧光实时定量聚合酶链反应检测非小细胞肺癌中胎盘生长因子基因表达状态的研究
在对肿瘤复发转移机制的研究中,人们逐渐认识到新生血管生成在肺癌生长和发展过程中起重要作用[1].血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知的诱导血管生成作用强的调节因子[2].我们前期研究已证实,VEGF与肺癌发生发展相关[3,4].胎盘生长因子(PIGF)是VEGF家族的重要成员[5],在食管癌、结直肠癌、胃癌、黑色素瘤、头颈部鳞癌和肾癌等[6-10]实体肿瘤中表达上调,但鲜见肺癌RNA水平表达的报道.
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正常与硬化肝组织基因表达差异的初步分析
目的:了解肝硬化的基因表达概况,寻找在肝硬化及正常肝组织中差异表达基因.方法:以各24例肝硬化及正常肝组织的总RNA混合定量后反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜杂交.结果:放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,Integrin beta 7、collagen type XVⅢ等17个基因在肝硬化组织中表达上调,TFDP2、BAK、ABL等98个表达下调,参与细胞增生、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论:通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝硬化特异的基因表达谱.系统地研究肝硬化的基因表达改变,与肝硬化发生相关基因的差异变化可为肝硬化诊断和治疗提供线索.
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核因子κB在急性胰腺炎全身炎症反应综合征中的作用
急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP),特别是重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)病情凶险,死亡率高.在AP从胰腺局部病变至全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)再至MODS的发展过程中,核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的过度活化可引起多种炎症反应相关基因的表达上调,导致炎症递质、细胞因子的大量产生,并在细胞因子网络调节中起重要作用,直接影响着AP的发生发展和预后.
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趋化因子与肝病的研究进展
近年来,趋化因子(Chemokines)在肝病发病机制中的作用越来越受到重视.大量研究表明,趋化因子在各种肝损伤中表达上调.通过应用趋化因子抑制剂,特异性趋化因子缺陷动物模型以及调控趋化因子受体等方法,趋化因子与炎症细胞浸润的密切关系得以证实.而在肝脏慢性炎症中,炎症因子、生长因子、氧应激及其产物等刺激因素促进趋化因子的表达.高表达的趋化因子能激活肝星状细胞(HSC)参与肝纤维化甚至肝硬化的形成.由于趋化因子有促进血管生成和新生物增生的作用,其与肿瘤的关系也成为研究的热点.本文将阐述趋化因子在酒精性肝病,肝纤维化,肝硬化和肝癌中的作用机制.
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低剂量三氧化二砷对HepG2细胞基因表达谱调节的影响
目的:研究低剂量三氧化二砷作用于肝HepG2细胞之后,无机砷对于肝细胞基因表达谱的影响.方法:应用基因表达谱芯片技术,对5 umo1/L三氧化二砷诱导的HepG2细胞和以DMSO处理的相同细胞的mRNA进行差异显示分析,研究三氧化二砷诱导入HepG2细胞后的差异表达基因.结果:HepG2细胞经5 umo1/L三氧化二砷诱导后,所检测的4096条目的基因中有137条产生差异表达,其中53条基因表达上调,84条基因表达下调;其中有10条尚未在genebank登录的新基因.结论:成功筛选了低剂量三氧化二砷诱导肝细胞后的基因表达谱,为进一步阐明无机砷对肝细胞作用的调节机制及低剂量无机砷用于治疗肝癌等肿瘤的药理作用机制提供了科学依据.
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信号转导和转录激活因子6在溃疡性结肠炎中的表达
目的:探讨信号转导和转录激活因子6(STAT6)在溃疡性结肠炎(UC)中的表达和作用.方法:对50例经过结肠镜和病理检查证实的UC患者和50例正常对照者结肠黏膜病变,采用免疫组化方法进行STAT6和磷酸化的STAT 6(pSTAT6)的检测.结果:UC黏膜组织中STAT6免疫组化反应产物主要定位于细胞质,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).pSTAT6免疫组化反应产物主要定位于细胞质和细胞核,与对照组相比亦有显著性差异(P<0.05).结论:STAT6在UC黏膜组织中表达上调,STAT6可能在UC的发病机制中起重要作用.
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胃淋巴瘤组织Survivin表达与幽门螺杆菌感染的关系
目的:探讨Survivin基因在胃淋巴瘤中的表达及其与幽门螺杆菌(H pylori)感染的关系.方法:用免疫组化法检测30例胃淋巴瘤和30例正常胃组织Survivin的表达,同时用碱性品红染色法检测30例胃淋巴瘤及30例对照组H pylori感染情况.结果:30例胃淋巴瘤中14例Survivin表达阳性,而正常胃组织均无表达(46.67% vs 0%,P=0.0002).Survivin表达与淋巴瘤分化程度、淋巴结转移及预后相关.胃淋巴瘤组织中H pylori阳性检出率11例,正常胃组织7例(36.7%vs23.33%,P=0.26).胃MALT型淋巴瘤Survivin阳性表达与H pylori感染有显著相关性(r=0.644,P=0.04).结论:Survivin基因在胃淋巴瘤中表达上调,而且与分化程度、淋巴结转移及预后有关.H pylori感染与胃MALT型淋巴瘤和Survivin表达有关.
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直肠癌旁移行黏膜中Survivin基因表达的意义
目的:探讨凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况,为保肛手术的选择提供理论依据.方法:应用黏液组化方法确定各种组织类型直肠癌旁移行黏膜的分布规律,应用免疫组织化学方法检测凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况.结果:直肠癌旁移行黏膜范围,在黏液癌(平均7.83 cm)明显大于乳头状癌及管状腺癌(P<0.01),在Dukes C期(平均5.61 cm)明显大于DukesA、B期(P<0.05).正常黏膜(NM)、移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达,由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加,四组间差别有显著意义(P<0.05).结论:在移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中就存在survivin基因表达上调:在黏液癌及Dukes C期直肠癌旁移行黏膜范围明显增宽,提示对低位黏液癌及Dukes C期直肠癌保肛手术应慎重.
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基质金属蛋白酶-7表达与胃癌临床病理生物学行为的关系
目的:研究基质金属蛋白酶-7(MMP-7)表达在胃癌发生和演进中的作用.方法:采用S-P免疫组化方法利用抗MMP-7、抗CD34抗体研究113例胃癌原发灶中MMP-7表达和微血管密度(MVD),比较MMP-7表达和MVD与胃癌临床病理特征的关系,分析胃癌组织中MMP-7表达与MVD的关系.结果:MMP--7在胃癌旁黏膜中阳性表达率为29.2%(33/113),低于胃癌组织的阳性率69.0%(78/113);MMP-7表达与胃癌肿块大小、浸润深度、转移和TNM分期密切相关(P<0.05),而与胃癌的生长方式和分化程度无显著相关性(P>0.05);胃癌组织中MVD与肿块大小、浸润深度、转移和TNM分期关系密切(P<0.05),但与胃癌的组织分化和生长方式无显著相关性(P>0.05);特别是MVD的大小依赖于胃癌组织中MMP-7表达(P<0.05).结论:MMP-7在胃癌中表达上调,可作为揭示胃癌生物学行为的客观指标,其可能通过参与胃癌的生长、浸润、转移和血管形成而在胃癌的发生和演进中起到重要作用.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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血管紧张素Ⅱ促进升主动脉瘤主动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2增加
目的:一些研究报道证实胸主动脉瘤患者的升主动脉瘤壁中基质金属蛋白酶(MMP-2)表达和活性增高,然而触发MMP-2活性增强的分子和细胞学机制并不清楚。因此,我们将去探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否参与主动脉平滑肌细胞(SMCs)MMP-2表达上调及机制,这对胸主动脉瘤发病机制的揭示具有一定的作用。
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吸烟大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶的表达及其与肺泡Ⅱ型上皮细胞Fas/FasL系统表达的关系
吸烟可引起呼吸道慢性炎症,使气道中炎症细胞增加,特别是肺泡巨噬细胞(AM)明显增加,它可产生和释放许多细胞介质和酶引起呼吸道及肺泡组织结构损伤[1].Fas/FasL是细胞凋亡的重要信号通路之一,炎症时Fas抗原表达上调与靶细胞上配体FasL结合形成复合体而诱导靶细胞凋亡[2].我们就不同时期吸烟大鼠肺组织中原生型一氧化氮合酶(cNOS)和AM诱生一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化来探讨其对肺泡Ⅱ型上皮细胞Fas/FasL系统表达的影响.