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160六价铬诱导P53蛋白活化的机制
本研究探讨了Cr(Ⅵ)诱导P53活化的机制.培养人肺上皮细胞系A549并进行传代.取3×105A549细胞转入一个6孔平皿,于37℃下温孵24h,立即转染1μg报告质粒和1μg β-半乳糖苷酶(β-Gal)质粒,温孵过夜后冲洗,加入含10%FBS的F-12K培养基,再培养24h后加入5、10、20、50和100μmol/L的Cr(Ⅵ)溶液处理(未经处理的为对照),然后加入400μl报道溶解缓冲液,在4℃下抽提细胞2h;取80μl细胞溶解产物测量虫荧光素酶和β-Gal活性,结果以β-Gal标化的相对P53活性(与对照相比)来表示.另取经Cr处理后的A549细胞,抽提细胞经声处理断裂DNA和减少粘度,然后取20μl全细胞溶解产物加热、离心,进行蛋白印迹分析(Westernblot).取细胞溶解产物、20μlRecin/TNT(1:10)和10μg抗体在4℃下温孵过夜并离心,取上清进行Western blot反应.
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β-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的研究
β-半乳糖苷酶的研究进展 β-半乳糖苷酶来源及作用机理.β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)普遍存在于动物(幼小动物的肠中)、植物(杏、苹果等)及微生物(细菌、霉菌等)中,能够将乳糖水解为葡萄糖及半乳糖供生物体代谢使用.在生物体体内,β-半乳糖苷酶是由LacZ 基因编码翻译而成的蛋白质酶类,通过提取动物、植物及微生物中的乳糖酶蛋白,发现来自于不同物种体内的蛋白同源性较高,进而对乳糖酶基因进行深入分类研究,并建立了β-半乳糖苷酶基因库,其中大部分基因均来自于细菌[1].
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中药治疗对大鼠慢性肾衰肾功能的影响
采用大鼠口服腺嘌呤造成慢性肾功能衰竭(CRF)并引起血清中分子量物质(MMS)含量、尿半乳糖苷酶(GAL-ase)排泌增加,观察降逆汤对MMS、GAL-ase等的影响.结果表明:降逆汤对CRF大鼠血清MMS含量的升高及尿GAL-ase排泌的增加具有明显的降低作用.
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大肠杆菌β-半乳糖苷酶ED片段与人B型钠尿肽抗原的共表达
B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)又称脑钠肽(brain natriuretic peptide),是心室分泌的激素样短肽,具有利尿利钠效应,能够舒张血管、抑制醛固酮分泌及肾素活性[1].血浆BNP水平已被证实是充血性心力衰竭诊断和预后判断的生物标志物.
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大肠杆菌β-半乳糖苷酶EA、ED融合蛋白的表达
大肠杆菌β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)是由四个相同亚基组成的四聚体,相对分子质量(Mr)为540000,通过溴化氰裂解或基因重组技术可得到一系列无酶活性的突变肽段,其中有些突变体在体外能重新聚合成全酶活性的四聚体,这一现象被称为α-互补[1].β-半乳糖苷酶的这种α-互补性已被用于分子生物学、蛋白质与蛋白质相互作用的监控、克隆酶供体免疫分析技术(CEDIA)、表达免疫分析等[2,3].通常具有α-互补活性缺失大部分C端氨基酸的小片段突变体如CNBr2被称为α-供体或酶供体(ED);而缺失N端约40个氨基酸的大片段突变体如M15蛋白被称为α-受体或酶受体(EA).为了进一步研究β-半乳糖苷酶的α-互补特性并促进其应用,我们通过DNA重组技术构建了一对编码β-半乳糖苷酶突变体EA、ED的质粒,并以融合蛋白的方式进行表达制备.
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何首乌饮对衰老大鼠胰岛素信号通路的影响
目的::探讨何首乌饮对衰老大鼠胰岛素信号通路的影响。选用30只雄性大鼠随机分为3组:青年组(12月龄);衰老组(18月龄);何首乌饮组(何首乌饮4.8g/100g,灌胃60d,18月龄),每组各10只。采用β-半乳糖苷酶染色观察何首乌饮延缓睾丸衰老的情况,基因芯片技术筛选衰老大鼠受何首乌饮调控的差异表达基因群体,并采用qRT-PCR进行验证。从中筛选出受何首乌饮调控与胰岛素信号通路相关的关键基因IR、IRS1、IRS2、IGF1、IGFBP3,进行qRT-PCR、免疫荧光和Western blot 观察其在睾丸组织中的表达变化。结果:衰老组大鼠睾丸组织衰老细胞明显高于青年组(P<0.01),何首乌饮用药后衰老细胞明显减少( P<0.01)。基因芯片筛选出受何首乌饮直接调控的基因有912个,其中与胰岛素信号通路相关的基因有10个,从中选取的关键基因,衰老组IGFBP3的表达高于青年组(P<0.01),IR、IRS1、IRS2、IGF1表达低于青年组(P<0.01),用药后IGFBP3的表达下调,IR、IRS1、IRS2、IGF1表达上调(P<0.01)。结论:何首乌饮通过调节胰岛素信号通路关键基因的表达延缓大鼠睾丸衰老。
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乙型肝炎病毒包膜大蛋白的自激活
目的:构建乙型肝炎病毒包膜大蛋白的酵母表达载体,研究其自激活作用.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV包膜大蛋白(LHBs),前-S1蛋白(pre-S1),前-S2蛋白(pre-S2)及主蛋白(SHBs)的编码基因,并在其5'端引入EcoRI/BamHI内切酶位点,分别连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建酵母表达质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后分别铺于含有X-α-半乳糖的营养缺陷型培养基SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade上进行自激活验证(蓝/白筛选).结果:成功克隆出编码各种HBV包膜蛋白的基因,构建表达载体并在酵母细胞中表达,转化了pGBKT7-LHBs和pGBKT7-preS1的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶从而在铺有X-α-半乳糖的培养基上呈现蓝色,而转化了pGBKT7-preS2和pGBKT7-SHBs的细胞只能在SD/-Trp的培养基上生长,且没有变蓝.结论:LHBs可以作为反式激活子发挥作用,代替GAL4蛋白的激活域来激活GAL4上游激活序列(GAL UAS)和TATA盒,从而激活了下游报告基因(ADE2,HIS3,MEL1和LacZ)的表达,并且其自激活作用来自于前-S1结构域.
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CTGF、 TGF-β1和β-Gal在原发性肺大疱组织的表达及相关性研究
目的 检测肺纤维化因素结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子(TGF)-β1及衰老相关β-半乳糖苷酶(β-Gal)在原发性肺大疱组织中的表达,探讨肺纤维化因素及细胞衰老因素与原发性肺大疱形成的相关性.方法 通过免疫组化方法检测CTGF、TGF-β1、β-Gal在正常肺组织及肺大疱组织中的表达.由摄像系统提取数值化细胞图像输入Image-pro Plus 6.0形态学图像分析系统,半定量分析表达结果.结果 原发性肺大疱组织中CTGF和TGF-β1的表达水平明显高于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05).CTGF和TGF-β1的表达水平具有显著相关性(r=0.965,P<0.01).原发性肺大疱组织中β-Gal的表达水平与正常肺组织无明显差异.结论 CTGF及TGF-β1在原发性肺大疱形成过程中可能起重要作用,两者在原发性肺大疱的形成过程中起协同作用.细胞衰老与原发性肺大疱形成不具有相关性.
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快速诊断溶酶体缺陷引起的非免疫性胎儿水肿的方法
本文发表在2012年12月的《Prenatal Diagnosis》上.非免疫性胎儿水肿(NIHF)指除因ABO及RH溶血以外的其他原因引起的胎儿水肿,病因复杂.NIHF可经孕期超声诊断,表现为胎儿多浆膜腔积液,皮肤水肿或胎盘肿大.溶酶体缺陷可引起NIHF,如Ⅰ型粘多糖病(缺乏Aβ-艾杜糖醛酸酶)、Ⅶ型粘多糖病(缺乏β-葡萄糖醛酸酶)、Ⅱ型粘脂贮积病(缺乏n-乙酰氨基葡糖-1-转磷酸酶)、神经节苷脂贮积病(缺乏β-半乳糖苷酶)、半乳糖唾液酸贮积症(缺乏β-半乳糖苷酶和神经氨酸苷酶保护蛋白)、戈谢病(缺乏β-葡糖脑苷脂酶)和多种硫酸酯酶缺乏症(缺乏多种硫酸酯酶)等.
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Fabry病诊断及治疗进展
Fabry病是由于溶酶体中水解酶α-半乳糖苷酶A(α-galactosidase A)缺乏,导致糖(神经)鞘脂[glycosphingolipid,主要成分为神经醯胺己三糖苷globotriaosylceramide(Gb3)]蓄积而导致多系统受累的疾病.
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Fabry病眼部表现一例
Fabry病[1]又称Anderson-Fabry病,属X-性连锁隐性遗传性神经鞘脂代谢病.由于溶酶体水解酶中α-半乳糖苷酶A(α-galactosidase A,α-Gal A)缺陷,故男性患者组织和体液中溶酶体水解酶活性减低,导致末端为α-半乳糖残基的糖鞘脂(主要为三己糖酰基鞘氨醇)无法降解,广泛沉积在体液、血管内皮细胞、表皮细胞及平滑肌细胞溶酶体中.
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Fabry′s病肾脏损害1例报告
Fabry′s (法布里)病是一种罕见的性连锁显性遗传的弥漫性血管角质瘤及糖鞘脂贮积症.发病率1∶40 000男性人群.其致病基因定位于X染色体长臂中段Xq2l至Xq24,该基因突变导致溶酶体α-半乳糖苷酶A缺乏,使N-脂酰鞘氨醇三己糖苷(globotriaosylceramide)及相关的糖鞘脂(glycosphingolipids)进行性积聚至体内,而引起肾脏、心脏和脑微血管等多器官病变.本文报告1例临床误诊为原发性肾炎的Fabry′s病患者.
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1例法布里病的护理体会
法布里(Fabry)病又称弥漫性躯体血管角质瘤或糖鞘脂类沉积症,是由于α-半乳糖苷酶的缺乏,引起神经酰胺三已糖苷酶不能分解而聚集在各种细胞内,主要沉积在血管壁细胞,致使血管的张力和功能障碍,从而引起复杂的临床症候群.此病尚无有效的治疗药物,大多数病人在40~50岁因心脏、脑血管并发症或尿毒症死亡.
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Fabry病4例报道并文献复习
Fabry病是一种X性连锁隐性遗传性疾病,1898年首次由皮肤科医生Anderson 和Johann Fabry各自报告1 例,故名Anderson-Fabry's 病,简称Fabry 病.本病患者由于基因突变导致细胞溶酶体中水解酶--α2半乳糖苷酶A(α2GalA) 先天缺乏或活性降低,致使糖鞘脂成分如神经酰胺三己糖苷(CTH或称为Gb3),以及二乳糖苷神经酰胺等堆积于体内各器官,如肾脏、心血管系统、神经系统等,引起患者多个系统出现相应的临床表现如肢端疼痛和感觉异常、皮肤血管角质瘤、少汗、心血管损伤及肾衰竭等,故又称α2Ga1A 缺乏症.
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Fabry病合并Ⅱ型狼疮性肾炎1例并文献复习
Fabry病是一种x连锁隐性遗传性疾病,因溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性缺陷导致糖(神经)鞘脂代谢异常而致病,常可累及肾脏、心脏、皮肤、眼睛等多系统。系统性红斑狼疮(systematic lupus erythematosis,SLE)作为一种自身免疫性疾病亦可累及全身多个系统。 Fabry病属于少见病,部分病例临床表现隐匿,在我国的误诊率和漏诊率均较高,与SLE合并存在更是极为罕见,并且大大增加了疾病诊断的复杂性。近,我科确诊了1例Fabry病合并Ⅱ型狼疮性肾炎的病例。本文通过对其临床特征及肾组织病理学特点进行分析并复习相关文献,探讨两者之间的可能联系。
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尿酶在新生儿窒息中的临床意义
新生儿窒息是一种可以造成多个系统损害的严重疾病,有报道窒息后肾脏的损害率高达57%.目前通过测定尿量、血肌酐、尿素氮判断肾损伤不够灵敏,早期发现轻微的肾损害较困难.本文通过对窒息新生儿尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG),β-半乳糖苷酶(GAL)的测定了解窒息后新生儿尿酶的改变,以期探索新生儿肾脏损害的早期诊断.
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一株乳杆菌的鉴定及其乳糖酶活力测定
酸奶是一种高营养的发酵奶制品,具有减轻乳糖不耐受症等多种保健作用[1].研究表明,酸奶之所以具有此种功效,就在于其中含有的活菌,尤其是保加利亚乳杆菌,更确切地说是保加利亚乳杆菌中的内源性高活力β-半乳糖苷酶.在发酵奶的过程中β-半乳糖苷酶能将奶中的乳糖分解为半乳糖和葡萄糖,降低牛奶中的的乳糖含量,从而减轻乳糖不耐受[2].本文随机抽取市售酸奶,采用MRS培养基,随机从中分离纯化出1株乳杆菌,对其进行鉴定并测定其β-半乳糖苷酶活性,以期从酶的角度了解普通市售酸奶对乳糖不耐受的作用,并探讨从酸奶中筛选高产β-半乳糖苷酶菌株的可行性.
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造血干细胞衰老模型的建立及其评价
造血干细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径,目前可通过体内和体外两种途径实现.体内衰老模型可通过供体造血干细胞在受体内连续性移植建立,体外衰老模型可通过白消安、三丁基过氧化氢等致衰老药物和电离辐射等方法建立.造血干细胞衰老模型建立后,可通过其自我更新和多向分化能力检测、细胞周期分析、β-半乳糖苷酶染色等方法检测和评价造血干细胞的衰老变化,并应用Southern bloting,Western bloting,RT-PCR等方法检测造血干细胞衰老相关基因和蛋白变化.本文就造血干细胞衰老模型的建立以及评价方法综述如下.
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NAG、GAL对糖尿病肾病诊断价值
尿液中N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)和β-D半乳糖苷酶(GAL)主要来源于肾脏,以近曲小管含量高,当其细胞破坏、脱落、甚至细胞膜通透性增加,NAG便明显升高,肾损伤修复时GAL升高,因此,尿中NAG、GAL升高的情况可直接反映肾脏受损的程度,特别对肾脏的早期损伤更有诊断价值.我们收集60例糖尿病患者尿液进行尿常规10项,NAG和GAL测定,为便于分析比较选择36例正常人用终点法确定本文的参考值,其参考范围取95百分位数上限NAG,GAL分别为25.2u/g.cr,9.1U/g.cr.
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大豆及其制品中大豆低聚糖的测定方法
大豆低聚糖为功能性低聚糖,广泛存在于各类植物中,以豆科植物含量居多.大豆低聚糖主要成分为棉籽糖、水苏糖和蔗糖.棉籽糖、水苏糖都是由半乳糖、葡萄糖和果糖组成的支链杂低聚糖.由于人体内缺乏水解棉籽糖和水苏糖的水解酶-α-D-半乳糖苷酶,所以它们不被消化吸收直接进入大肠,为对双岐杆菌所利用.棉籽糖、水苏糖可替代蔗糖应用于食品工业中,是一种安全无毒的天然产品.为充分认识大豆的特殊成分,合理开发利用我国这一丰富的物产资源,故制定此方法.