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慢病毒dUTPase结构与功能的研究进展
dUTPase是生物体遗传和基因复制的重要水解酶,它可以防止dUTP在DNA合成中的插入和错配,维持DNA复制的保真性和降低生物体发生突变的频率;同时还为DNA的合成提供必需的原料.对于慢性病毒来说,它还是构成病毒毒力及病毒高效复制的因素.因此,dUTPase可用于抗肿瘤细胞和抗病毒药物的筛选.本文对dUTPase的分布和进化关系、结构与功能的研究进展进行了概述.
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多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究
目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属β-内酰胺酶(IMP、VIM)、KPC酶、OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用.方法 采用Whonet 5.4软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物.结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%.结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因.
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肝硬化患者的血浆胆碱酯酶与腺苷脱氢酶临床分析
血浆胆碱酯酶(CHE)是由肝脏合成后进入血液的水解酶,它和血浆白蛋白(Alb)一样是肝脏合成功能的指标.血浆腺苷脱氢酶(ADA)在肝内主要分布于细胞质水溶相,肝脏受损时该酶释放到血浆中,是反映肝细胞损害的标志物[1].本试验通过对肝硬化患者及健康人血浆中的CHE、ADA及CHE/ADA的测定结果与肝脏合成功能的主要标志物Alb及临床常规生化的白蛋白与球蛋白比值(A/G)的结果分析,从实验室方法学和临床诊治角度探讨其应用价值.
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甲状腺激素释放相关水解酶基因在H22肝癌小鼠早期不同证候中的表达特征
目的:研究甲状腺激素释放相关主要水解酶基因在H22肝癌小鼠早期不同证候中的表达特征。方法采用标准化诊法技术筛选出早期邪毒证、气虚证H22肿瘤小鼠,先采用Affeymetrix基因芯片技术,初步获得甲状腺球蛋白(Tg),即甲状腺激素前体蛋白,及其相关的水解酶基因表达特征,并筛选主要差异表达基因;进而重复实验,RT-PCR检测主要差异表达基因的变化,同时ELISA检测血清甲状腺激素T3和T4水平。结果①初次实验芯片结果,Tg及其释放相关重要的水解酶:组织蛋白酶B(Ctsb)、组织蛋白酶D(Ctsd)、组织蛋白酶l(Ctsl)、天冬氨酸肽酶(Napsa)、三肽酶I (Tpp1)在肝癌小鼠早期邪毒证、气虚证呈下调趋势[Tg(邪毒0.77、气虚0.84)、Ctsb(邪毒0.83、气虚0.91)、Ctsd(邪毒0.79、气虚0.95)、Ctsl(邪毒0.95、气虚0.65)、Napsa(邪毒0.78、1.05)、Tpp1(邪毒0.75、0.94)],以邪毒证下降尤甚。②酶联免疫吸附试验(ELISA)表明,在邪毒证[T3为(1.519±0.162)ng/ml、T4为(2.194±0.305)μg/dl]和气虚证[T4为(4.366±0.727)μg/dl]均出现下调,且邪毒证尤甚(P<0.01),与两批次Tg转录水平的变化相一致;③对Ctsb等基因的RT-PCR检测结果表明,Tg(邪毒0.22、气虚0.38)、Ctsb(邪毒0.31、气虚0.55)、Ctsd(邪毒0.36、气虚0.78)、Napsa(邪毒0.24、气虚0.59)基本一致,Ctsl(邪毒1.24、气虚2.11)和Tpp1(邪毒2.85、气虚0.85)虽趋势相同,但在气虚证表达量大于同期邪毒证上则始终一致。结论综合不同批次实验结果,H22肝癌小鼠早期甲状腺功能受到抑制,且邪毒证抑制程度更重。
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人参生长季茎中几种水解酶的活力变化
目的:研究人参在生长季的不同时期茎中几种水解酶的活力变化.方法:以不同生长时期5年生人参茎为试验材料,采用中性磷酸缓冲溶液提取粗酶液,应用紫外分光光度法测定不同生长时期人参茎中淀粉酶(AMY)、酯酶(EST)、酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)和植酸酶(PHY)5种水解酶的活力.结果:人参茎中AMY活力在人参展叶期和开花期出现活力高峰,其他时期无明显变化;EST活力在人参展叶期、开花期和结果期出现活力高峰,果后参根生长期活力降低;ACP和ALP活力在人参生长季的每一时期均出现活力高峰;PHY活力在人参结果期出现活力高峰.结论:在人参不同生长时期茎中5种水解酶活力有其各自的变化特点,与人参的物质代谢、生长质量密切相关.
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人参不同生长时期根中5种水解酶的活力变化研究
目的:研究人参在生长季的不同时期根中5种水解酶的活力变化规律.方法:以5年生人参为研究对象,采用中性磷酸缓冲溶液提取粗酶液.应用紫外分光光度法分别测定淀粉酶(AMY)、酯酶(EST)、酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)和植酸酶(PHY)的活力.结果:AMY、ACP和ALP在展叶期、开花期和果后参根生长期活力高;EST在果实形成初期平均活力较高;PHY在展叶期末期和开花期前期活力明显升高.结论:人参根中5种水解酶对人参各器官的形成具有重要作用.
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不同生长时期人参叶中几种水解酶的活力变化研究
目的:研究人参在生长季的不同时期叶中几种水解酶的活性变化.方法:以5年生人参叶为供试材料,采用中性磷酸缓冲溶液提取粗酶液.应用紫外分光光度法分别测定淀粉酶(AMY)、酯酶(EST)、酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)和植酸酶(PHY)的活力.结果:人参叶中AMY和EST活力在展叶期和结果期出现活力峰值,以展叶期活力高;ACP、ALP和PHY活力以先上升后下降的趋势呈3个周期规律性变化,活力峰值分别出现在展叶期、结果期、果后参根生长期,其中ACP和ALP活力以展叶期活力高,PHY以结果期活力高.结论:在不同生长发育时期人参叶中的5种水解酶活力变化表现出阶段的特异性.
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在石蜡切片上显示水解酶的方法探讨
恒冷箱冰冻切片,冰冻替代法及冰冻干燥切片能显示组织中的水解酶,且各具优点与特色,但均需一定的设备,一定的条件,在基层或现场检测有关酶活性尚有困难.为了使石蜡切片显示水解酶达到令人满意的结果,我们对不同的固定液、不同处理方法进行了探讨,旨在推荐一个能被广泛采用的简便、稳定的制片方法.
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在小鼠中抑制可溶性表氧化物水解酶(sEH)可以促进胆固醇逆向转运和斑块逆转
目前已经知道脂肪细胞通过 ABCA1将胆固醇转运到胞外 apoA-I,且这个过程能促进血浆 HDL 增加,有利于保护心血管。而 sEH 是一种代谢内源性环氧二十碳三烯酸(EETs)的胞浆酶,EETs 在脂肪细胞中表达很丰富。作者的团队之前发现脂肪细胞中 sEH 的抑制剂 t-AUCB 能增加 ABCA1的水平,本文便研究内源性 sEH 的抑制对心血管系统的保护机制。
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工程酵母细胞高压破碎、蛋白低温保藏和去糖基化处理对7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-2活性的影响
紫杉醇主要来源于红豆杉,作为一种“重磅炸弹”式的抗肿瘤药物,自1992年12月被美国 FDA批准上市以来,一直是销售额大的植物抗肿瘤药。但由于紫杉醇的天然含量极低,约占含量高的树皮部位的万分之二,加之红豆杉生长缓慢,早期从野生红豆杉中获取紫杉醇曾给红豆杉资源造成毁灭性破坏。目前主要依靠化学半合成或苗圃栽培手段制取。苗圃栽培虽然对保护野生红豆杉资源具有积极意义,但栽培红豆杉中紫杉醇含量低微的本质没有发生改变。另一方面,红豆杉中存在着大量的紫杉醇结构类似物,其中包括含量数十倍于紫杉醇的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇,而后者在脱除木糖基之后形成的10-去乙酰紫杉醇仅需在 C10位乙酰化即可产生紫杉醇[1]。如能将这类副产物转变成紫杉醇,不仅可以减少其对环境的污染,还可以“变废为宝”,大大提高红豆杉资源的利用率。脱除木糖基可用化学法或生物酶法来完成,其中后者的专一性强、环境友好。但由于天然细胞中β-木糖苷酶的酶量普遍偏低,用筛选得到的微生物直接进行转化效率不高[2-3],本实验室已尝试用基因工程方法解决这一问题。我们已从具有转化7-木糖-10-去乙酰紫杉醇为10-去乙酰紫杉醇能力的真菌香菇中克隆得到了7-木糖紫杉烷糖基水解酶 LXYL-P1-2,该酶隶属于糖基水解酶的第3家族,是一种全新的和双功能的β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,能高效且专一性地水解包括7-木糖-10-去乙酰紫杉醇在内的7-木糖紫杉烷的木糖基,生成相应的7-羟基紫杉烷。已对该酶及其重组菌开展了酶的表征、高密度发酵与生物催化等研究[4-6]。本文报告工程酵母细胞高压破碎条件、蛋白低温保藏和去糖基化处理对 LXYL-P1-2酶活性的影响,为利用纯化的重组酶进行酶结构与功能关系等的研究提供保障。
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影响细胞分化相关基因NDRG1作用的相关因素研究进展
N-myc下游调节基因( N-myc downstream regulated gene , NDRG)1属于NDRG家族,α/β水解酶超家族,但没有水解酶催化位点[1]。初是在N-myc敲除的小鼠胚胎组织中发现的,受 N-myc 的抑制而得名。 NDRG1位于人类染色体8q24,全长约60 kb,包括16个外显子和15个内含子,含有一个与第1外显子和第1内含子5′端重叠的CpG岛,C末端包含有3段特有的10个亲水性氨基酸残基( GTRSRSHTSE )串联重复序列。 NDRG1含有磷酸泛酰巯基乙胺序列,在一些多酶复合物中,该序列提供辅基酰基载体蛋白,作为“摆动臂”活化氨基酸和脂肪酸[2]。
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泛素C-末端水解酶-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达
肿瘤转移机制及防治已成为当今肿瘤研究领域的热点.高淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)、低淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-P)是由大连医科大学病理教研室自行建立的肿瘤转移机制实验模型.它们是一对高度同源的来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆,经615小鼠局部皮下注射后,特异地向引流淋巴结转移.
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乌司他丁对严重创伤患者凝血功能的影响
乌司他丁是从男性尿液中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂,除对多种蛋白酶、糖和脂水解酶有抑制作用外,还能延长部分活化凝血酶原时间和凝血酶时间,有抗纤溶作用[1-2].目前临床上主要用于急性胰腺炎的治疗[3-4].本研究旨在探讨乌司他丁对严重创伤患者凝血功能的影响.
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乌司他丁的药理及临床应用
乌司他丁又称尿抑制素,自1909年被Beuer等首次报道以来,许多学者对其进行了多方面的研究.20世纪80年代初,日本科学家对其进行了生化、药理、提纯、临床应用等多领域的研究,并于1985年正式上市应用于临床.乌司他丁是一种广谱的蛋白酶抑制剂(UTI),其分解形成的低分子成分也具有很强的抑制水解酶的作用[1];临床上主要用于治疗急性胰腺炎、急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以及全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)等.笔者就乌司他丁的药理作用和临床应用作一综述.
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基质金属蛋白酶与损伤后血管再狭窄
支架植入与经皮球囊血管成形术可以迅速扩张血管、改善缺血症状,但术后再狭窄的发生严重影响了手术效果。再狭窄是血管损伤后内膜增生和血管重塑的过程,其中血管平滑肌细胞的迁移、增殖和细胞外基质的重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因。金属基质蛋白( MMPs ),作为重要的细胞外基质水解酶[1-2],广泛参与调节血管重塑和细胞迁移过程,抑制MMPs活性可以显著抑制再狭窄的发生。
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溶酶体贮积病累及心脏的临床表现
溶酶体是一种细胞器,其内含有60多种酸性水解酶,这些酶发生数量或功能异常时就会导致特定生物分子不能被正常降解,从而贮积在组织细胞内,引发一系列疾病统称为溶酶体贮积症(lysosomal storage disease,LSD)[1]。 LSD 的心脏受累比较常见,对患者预后有重要影响,本文将对几种主要累及心脏的LSD的临床特点进行总结,提高对这些疾病的认识。
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肝硬化患者血清胆碱酯酶临床研究
血浆胆碱酯酶(CHE)是肝实质细胞合成而分泌入血的水解酶,它和血浆白蛋白(Alb)一样,是肝合成蛋白功能的指标,并和白蛋白的合成代谢相平行.其不同之一是血浆中白蛋白的半衰期是15~19 d,血浆胆碱酯酶的半衰期短.本试验通过肝硬化患者血清中的胆碱酯酶和白蛋白测定的结果,从实验室方法学和临床诊治角度进行对比分析,研究其内在的诊断价值,现介绍如下.
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临床酶学展望与标准化
20世纪50年代前,酶的测定只占生化测定很小一部分,这是由于方法(只能用固定时间法)和仪器(如Warburg仪)的限制.当时临床实验室只测一些水解酶,如淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP).
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细胞色素CYPⅡE1与肝脏疾病关系的研究进展
在肝细胞微粒体内有1个氧化还原酶系统,由多种水解酶和结合酶组成.这个酶系统在生理情况下,可以促进生理活性物质的灭活和排泄,另一方面也可以促进药物代谢,所以又叫药酶.
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老年2型糖尿病病人的脂蛋白脂酶和肝内皮细胞脂酶的活性变化
脂蛋白脂酶(LPL)是一种甘油三酯(TG)水解酶,在极低密度脂蛋白和乳糜微粒的分解代谢和高密度脂蛋白(HDL)形成中起关键作用[1],而肝内皮细胞脂酶(HEL)则促进HDL分解代谢,使其水平降低[2].因此,LPL和HEL活性改变可引起脂蛋白代谢异常,并可能在动脉粥样硬化的发生发展方面起重要作用[3].本研究旨在对老年2型糖尿病(T2DM)病人LPL和HEL的活性变化,及其与TG及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的关系进行探讨.