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1800 MHz长期电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响
目的 探讨长期1800 MHz电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响.方法 采用1800MHz电磁辐射,SAR值2 W/kg,间断暴露方式(5 min on/10 min off),5 h/d.对暴露60 d和138 d的细胞,进行平板克隆和软琼脂克隆实验,并采用ELISA法检测端粒酶的表达.结果 平板克隆实验中,60 d暴露组细胞的克隆形成率显著低于假暴露组(P<0.05),而138 d暴露组细胞的克隆形成率与假暴露组无明显差异.软琼脂克隆实验中,60 d暴露组和假暴露组细胞均未见克隆形成,而138 d暴露组克隆形成率显著高于假暴露细胞.端粒酶检测结果,60 d暴露组细胞的端粒酶表达量与假暴露组无显著差异,而138 d暴露组细胞的端粒酶表达量显著高于假暴露组(P<0.05).结论 1800 MHz电磁辐射长期暴露至60 d,有损NIH/3T3细胞的增殖能力,而更长期的暴露后(138 d)细胞转化增殖能力增强.
关键词: 细胞增殖 细胞克隆 1800 MHz电磁辐射 NIH/3T3细胞 端粒酶 -
泛素C-末端水解酶-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达
肿瘤转移机制及防治已成为当今肿瘤研究领域的热点.高淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)、低淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-P)是由大连医科大学病理教研室自行建立的肿瘤转移机制实验模型.它们是一对高度同源的来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆,经615小鼠局部皮下注射后,特异地向引流淋巴结转移.
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CDR3谱型分析在肿瘤研究中的应用进展
肿瘤特异性T细胞通过其表面T细胞受体(Tcell receptor,TCR)识别肿瘤,进而杀伤肿瘤细胞,其所介导的细胞免疫在机体抗肿瘤免疫应答中发挥极其重要的作用.寻找肿瘤特异性T细胞克隆是当前肿瘤研究领域的热点,而应用广泛、灵敏地寻找肿瘤特异性T细胞的方法是通过基因扫描(Ge-neScan)对TCR互补决定区3(complementary deter-mining region 3,CDR3)谱型进行分析.
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单克隆抗体及基因工程抗体在医学诊断上的应用
一、传统的单克隆抗体及其应用1975年德国学者Kohler和美国学者Milstein将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞在体外进行两种细胞融合,形成的部分杂交瘤细胞(hybridoma),既具有大量无限生长的特性,又具有合成和分泌抗体的能力.它们是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体,称为单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAb),从而开创了抗体技术的新纪元,被称为第二代抗体.它的特点是特异性针对单一抗原决定簇,理化性状高度均一、生物活性单一,与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质量控制,并且来源容易.这些优点使它一问世便受到高度重视,并广泛应用于生物学和医学研究领域.
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急性乙型肝炎HBcAg特异性CTL克隆建立及初步分析
目的 建立急性乙型肝炎(乙肝)患者的HBcAg特异性CD8+T细胞克隆.方法 一例急性乙肝患者经用序列特异引物聚合酶链反应分型技术,测得其人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-A基因型为1 101,其外周血单个核细胞采用重组HBeAg和合成的HIA-A*1101限制性表位肽(HBV croe 88-96)刺激,并以有限稀释法对活化的T细胞进行克隆化,建立HBcAg特异性的CD8+T细胞克降.用免疫荧光染色、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验鉴定所获克隆.结果 获得13株HBcAg特异性CD8+T细胞克隆(6株为Tc1,3株为Tc2,4株为Tc0).其中12株具有明显的特异性细胞毒活性(37.5%~85.5%,效/靶比为2.5:1),1株(A10株,Tc0)细胞毒活性仪为10.2%.结论 应用HLA-A*1101限制性表位肽(HBV croe 88-96)刺激急性乙肝患者的外周血单个核细胞,建立了13株肽表位特芹性的CD8+T细胞克降,为进一步研究打下基础.
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"胰岛代理细胞"的构建:在HepG2细胞中获得胰岛素分泌
目的:利用转基因技术将HepG2细胞改建为具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞".方法:以携葡萄糖激酶(glucokinase,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染肝母细胞瘤细胞系HepG2,G418选择培养基挑选抗性细胞集落,放免法、SDSPAGE、Western-blot及反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HepG2细胞中两个目的基因的转录及表达;选取联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.结果:在G418选择培养基中3 wk获阳性细胞克隆,采用放免法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,其中1株2个目的基因表达均较强,命名为细胞克隆"β";经RT-PCR检测证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录.在细胞"β"中,葡萄糖浓度为0.5 mmol/L和0.75 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);葡萄糖浓度为2.0 mmol/L,3.0 mmol/L,4.0 mmol/L,5.0 mmol/L,及6.0 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);其余葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌差异均有显著性意义(P<0.05).在单独表达胰岛素的HepG2细胞中,各葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌均无显著性差异(P>0.05).说明在细胞"β"中获得了葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75-2 mmol/L时出现胰岛素分泌高峰.结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的:建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法:采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果:分离获得的HSC约为2X107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2 wk后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论:已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞增生及DNA合成的影响
目的:探讨抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞的抑制作用.方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/MycHis(+)C-p27Kip1基因导入肝癌细胞株HHCC细胞中,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,用MTT、3H-TdR掺入法和克隆形成实验观察抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞增生及DNA合成的影响,电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1抑制肝癌细胞生长的可能机制.结果:抑癌基因p27Kip1对肝癌细胞增生及DNA合成均有明显抑制作用,抑制率达56%(P<0.01 vs 转染空载体组),电镜结果显示肝癌细胞发生凋亡.结论:抑癌基因p27Kip1可能通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长.
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双功能融合基因在肝癌细胞中的表达与作用
目的:构建含有融合基因FCUl的自杀基因系统,观察其对体外培养肝癌细胞的杀伤效应.方法:将FCUl基因亚克隆于pEGFP-C1载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子转染肝癌细胞HepG2,绿色荧光蛋白检测FCUl的表达,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验,观察旁观者效应.结果:FCUl基因正确插入到pEGFP-C1中,pEGFP-FCUl转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,在5-FC作用下细胞的生长抑制率明显高于未转染细胞,且旁观者效应显著.结论:本基因治疗体系具有很好的体外杀肿瘤效果,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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丙型肝炎病毒锤头结构核酶的细胞内免疫
目的:探讨预先转染丙型肝炎病毒(HCV)核酶(Rz213)的人肝癌细胞对HCV再转染的抑制作用.方法:应用从前构建的HCV锤头结构Rz(Rz213),通过脂质体介导的基因转染方法,转染人肝癌细胞(HHCC),经G418筛选转染Rz213的基因克隆,应用luc报告基因的表达活性,观察该细胞克隆对靶基因(pCMVNCRluc)转染的抑制作用.结果:G418 筛选能使 Rz213 在转染细胞内有效表达 RzRNA,转染Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染.结论:我们构建的Rz213真核表达载体能在HHCC细胞内有效表达,预先转染发挥细胞内免疫作用,可防止HCV感染.
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X射线反复照射后肺癌D6细胞系对放射和化学治疗的敏感性研究
放射治疗(简称放疗)及化学治疗(简称化疗)是肺癌非手术治疗的重要手段.我们以非小细胞肺癌(NSCLC)D6细胞系为对象,在体外对其进行反复照射,观察存活细胞克隆对射线及化疗药物敏感性的变化.
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高表达垂体瘤转化基因通过p21抑制A549肺癌细胞的生长
垂体瘤转化基因(PTTG)是从大鼠垂体瘤GH4细胞克隆出的一种肿瘤基因.PTTG在垂体泌乳素瘤的表达受雌激素的调控,其致肿瘤作用可能与刺激成纤维细胞生长因子(FGF)和激活C-Myc有关[1].此外,PTTG与抑制姐妹染色单体分离的securin序列一致[2].PTTG mRNA和蛋白质的表达水平呈细胞周期依赖性[3].因此,我们推测高表达PTTG有可能抑制某些肿瘤细胞的生长.
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内脂素研究进展
内脂素初是在有活性的外周血淋巴细胞互补DNA文库中分离出来的一种蛋白质,由于其在干细胞因子和IL-7的存在下可以促进前B细胞的克隆形成[1],所以被命名为前B细胞克隆增强因子(pre-B-cell colony-enhancing factor,PBEF).
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炎症与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)发病机制的研究已经经历了一个多世纪,主要围绕4种学说:脂肪浸润学说、血小板聚集和血栓形成学说、平滑肌细胞克隆学说和损伤反应学说.近年来研究者发现,动脉粥样硬化的病理表现具有炎症病理的基本表现形式:变质、渗出和增生.其形成过程中也会出现类似类风湿性关节炎、慢性胰腺炎和肝硬化等慢性炎症性疾病的细胞间相互作用.随着炎症细胞和炎症介质的不断检出,动脉粥样硬化不再被认为是单纯的动脉壁脂质堆积的疾病,而是进展性炎症反应,符合炎症表现的普遍规律.因此,Ross教授在其损伤反应学说的基础上,明确提出"动脉粥样硬化是一种炎症性疾病".
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子宫内膜干细胞研究进展
子宫内膜由功能层和基底层组成,其功能层随卵巢激素而发生周期性变化,在女性生育期可发生超过400次的增生、分化及脱落,显现出活跃、强大的再生能力.早在上世纪七十年代,Prianishnik-ov[1]就提出了子宫内膜干细胞的假说,认为参与子宫内膜功能层增生修复的是一类具有高度增殖、自我更新和分化潜能的内膜干细胞.目前随着于细胞研究的发展,通过细胞克隆、干细胞分离鉴定、诱导分化等研究证实在于宫内膜、蜕膜及月经血中均存在于细胞,研究表明内膜干细胞在子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫内膜癌等内膜相关疾病发生发展中发挥作用,此外,子宫内膜干细胞也为再生医学提供了重要的细胞来源.现对子宫内膜干细胞的研究状况以及应用前景进行综述.
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SDF-1/CXCR4生物轴与儿童恶性肿瘤的转移
基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1,又名CXCL12)属于趋化因子中的CXC亚族,有同基因编码两种异构体SDF1α和SDF1β,其分子结构为N端两个半胱氨酸(CC)之间被另外一个氨基酸残基(X)所分隔.这种因子初是从骨髓基质细胞克隆,具有诱导前B细胞分化和增殖的作用.
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pREP8和pREP4质粒对HEK293细胞β2-肾上腺素受体的表达及其介导cAMP蓄积的影响
以质粒携带某一亚型受体的cDNA转染细胞株,通过亚细胞克隆得到稳定表达某亚型受体的亚克隆细胞株,是肾上腺素受体(AR)研究中常用的方法.我们近的研究发现,α1A-、α1B-和α1D-AR全长cDNA分别由pREP8、pREP4和pREP9质粒携带 (pREP8/α1A 、pREP4/α1B、pREP9/α1D),转入人胚肾(HEK293)细胞并稳定表达后,均显著增加原先细胞天然β2-AR的表达量及其介导的cAMP蓄积大效应.本研究拟排除上述作用是由于携带外源cDNA的质粒本身带来的影响,而非转入α1-AR的影响.
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HLA-A·02/24限制的HBcAg表位特异性细胞毒T细胞克隆的建立及分析
目的 建立HLA-A·0201/2403限制的HBcAg表位特异性CTL细胞克隆.方法 HLA-A·0201/2403阳性HBV感染者的外周血单个核细胞(PBMC)分别用限制性表位肽HBc18~27和HBc117~125刺激,并以有限稀释法进行克隆化,期间单独使用植物血凝素(PHA)及联合使用表位肽刺激.用免疫荧光、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验对所获克隆进行鉴定.结果 从HBc18~27活化的细胞中获得29株细胞克隆,其中28株为CD8+T克隆,均具有特异性细胞毒活性.从HBc117~125激活的细胞中获得12株CD8+T克隆,其中9株有明显的细胞毒活性,另3株细胞毒活性则显著低下.克隆化过程中单独使用PHA及联合使用表位肽,克隆形成率分别为15.62%和14.58%.结论 分别用表位肽HBc18~27和HBc117~125,能激活HLA-A· 0201/2403阳性HBV感染者的CD8+T细胞.建立CD8+T克隆过程中,表位肽的使用不能提高克隆形成率.
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休眠脑细胞的激活及重组重建神经系统功能的实验研究
本研究课题分为以下两个子课题:《大鼠胚胎神经干细胞定位及干细胞克隆的实验研究》和《胚胎大鼠神经干细胞体外黑质细胞定向诱导的实验研究》.
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真性红细胞增多症合并溶血1例报告并文献复习
真性红细胞增多症是由于多能造血干细胞克隆异常,导致红细胞异常增殖为主的慢性骨髓增殖性肿瘤.临床表现为多血质、高血压、脾脏肿大、血栓形成及出血倾向.早期不易发现,以溶血为初发症状的较为罕见,现报告我院近期收治的1例真性红细胞增多症合并溶血患者的临床资料,并复习相关资料予以讨论.